まず、各マウスの体重を記録し、安楽死させたマウスを仰向けの向きに置き、手足をテープで固定します。70%イソプロピルアルコールを使用して、手術部位を滅菌します。次に、中腹部から前頸部にかけて皮膚を正中線切開します。
気管にアクセスするには、脂肪パッドを慎重に引っ込め、ストラップの筋肉を横方向に動かし、気管を周囲の結合組織から分離します。鉗子を使用して、気管と食道の間にスペースを作ります。次に、剣状骨を持ち上げて横隔膜を切断します。
止血を挿入して胸骨を上げ、胸骨から首の領域まで遮るもののない経路にします。両側の胸郭を固定し、首の筋肉を貫通する胸骨を切断します。次に、胸腺と気管を塞いでいる脂肪や筋肉を取り除き、気管分岐部を露出させます。
主気管支を切り、気道を食道から慎重に分離します。その後、喉頭を切って取り除きます。解剖した気管に滅菌生理食塩水または保存液をスプレーします。
滅菌生理食塩水または保存液に浸した滅菌ガーゼを使用し、生存率を維持するために氷の上に置きます。マウスと誘導室に軽く麻酔をかけた後、キシラジンとケタミンからなるカクテルを腹腔内に注射する。マウスを2〜3%のイソフルランを維持した状態で誘導チャンバーに戻します。
次に、手術部位の毛を剃ります。口腔気管挿管の前に、つま先のつまみに対する反射反応がないことを確認します。20ゲージの静脈内カテーテルを使用して、マウスを口腔気管に挿管し、50%酸素と2%イソフルランで人工呼吸器に接続します。
次に、加熱パッドをアクティブにし、マウスをパッドの右側に置き、頭を外科医から離し、尾を外科医に向けます。次に、手足をテープで固定します。麻酔中の乾燥を防ぐために、動物用軟膏を目に塗ります。
最初に7.5ポビドンヨード、次に70%イソプロピルアルコール、最後に10%ポビドンヨードで手術部位をこすります。この間、ドナーの気管を16ゲージの静脈内カテーテルにロードします。レシピエントの皮膚を切開した後、筋肉と結合組織を焼灼します。
2つのリトラクターを使用して、5番目または6番目の肋間腔を開き、胸郭を開いたままにします。次に、綿棒とハサミを使用して、下肺靭帯を解剖します。ドナー気管の経路の作成をシミュレートします。
人工呼吸器の流出チューブを固定するには、左肺の膨張を促進するために三方活栓で部分的に閉塞します。左肺に20ゲージの針を刺して経路を作ります。次に、16ゲージの静脈内カテーテルを左肺に挿入し、ドナー気管を押し出します。
気管同種移植片を挿入した後、三方活栓を解放して、排出チューブを通る呼気の流れを妨げないようにします。胸膜注射部位を閉じるには、クリップの端を肺の縁の輪郭に合わせ、クリップを穿刺部位に正確に配置します。次に、胸腔を生理食塩水で満たし、生理食塩水をガーゼで吸収します。
左肺を再び膨らませ、ランニング縫合糸を使用して肋骨を閉じます。断続的な縫合糸で筋肉と皮膚を閉じます。次に、イソフルランをオフにし、手術の最後にメロキシカム鎮痛剤を皮下投与します。
受信者のマウスが目覚めるまで観察します。次に、気管チューブを取り外し、レシピエントマウスをケージに入れます。気管同種移植片は線維芽細胞組織で完全な閉塞を示し、上皮細胞は目に見えて破壊されました。
逆に、気管アイソグラフトは特許のままであり、上皮細胞は保存されました。リンパ凝集体は、移植された気管同種移植片で肺に観察されました。
