まず、マウス後肢外植片の48時間デキサメタゾン前処理が完了する間、十分な量の滅菌培地を予熱します。前処理が終了したら、前処理した外植片をバイオセーフティキャビネットに移します。荷を下ろしたグループについては、前処理培地を吸引し、外植片を新鮮なペトリ皿に移します。
インキュベーターに戻す前に、各皿に70ミリリットルの培地を加えます。ベースライン張力と静電気衝突グループ用に外植片プラットフォームを準備するには、グリッププラテンのサイズに合わせてサンドペーパーをカットします。静的インピンジメントグループの場合、編み込みラインのピースを切り取り、ラインの長さの半分で緩いオーバーハンドノットを結びます。
アルミホイルをちぎって各アクリル浴を覆い、70%エタノールをスプレーします。準備した部品をバイオセーフティキャビネットに移します。アクリルバス、ベース、減容インサート、クリップ、グリップなどのコンポーネントを配置して、プラットフォームを組み立てます。
プラットフォームコンポーネントは、培地の漏れの可能性を封じ込めるのに十分な容量の二次容器内に配置してください。容器を少なくとも10%漂白剤の溶液に最低1時間浸します。漂白剤溶液を水道水ですすいでください。
すすぎ取った部品をバイオセーフティキャビネットに移した後、M3ネジと圧縮スプリングを使用してプラテンをグリップに固定します。M5ネジを使用してグリップをベースにしっかりと取り付け、プラテンに接触するまでM6ネジを挿入します。両面テープでサンドペーパーを貼り、プラテンの機能を高めます。
グリップを閉じて、サンドペーパーがプラテンに接着しやすくします。プラットフォームに負荷をかけるには、グリップを完全に開き、鉗子を使用して上肢と膝をプラテンの間に慎重に配置します。グリップをそっと閉じて、手足を所定の位置に保持します。
鉗子を使用して露出した大腿骨頭または足をつかみ、膝の屈曲角度を調整しながら、鉗子を徐々に閉じて所定の位置に固定します。ベースラインテンショングループでは、グリップを閉じながら膝関節を伸ばします。静的インピンジメントグループの場合は、グリップを閉じながら膝関節を曲げます。
静的インピンジメントグループの場合は、ストリングのオーバーハンドノットを遠位足の周りに置き、しっかりと締めます。外植片の下のベースのスロットに弦を通し、クリップ穴に通します。ベースをアクリルバスに入れ、クリップをバスの上端に固定します。
足を背屈させるには、脛骨に対して少なくとも110度に達するまで紐を引っ張ります。油性マーカーを使用して、クリップから出るストリングに印を付けます。背屈角度の将来の定量化のために、この背屈位置で外植片の写真をキャプチャします。
セットアップからベースを取り外し、ボリュームリダクションインサートをベースのトラックに沿ってスライドさせて取り付けます。ベースをアクリルバスに戻し、クリップの上端の位置を変えます。マークされた文字列をガイドとして使用します。
引っ張って足を元の背屈角度に戻し、テープで紐を浴槽の外側に固定し、背屈姿勢を固定します。ベースライン張力グループの場合、外植片がグリップの間に配置されたら、写真を撮って背屈角度を定量化します。次に、減容インサートをベースにスライドさせ、アクリルバスに入れます。
125ミリリットルの予熱した培地を各プラットフォームに加え、外植片を沈めます。浴槽の上部をアルミホイルで覆った後、セットアップ全体を二次容器に入れます。二次容器をインキュベーターに移し、7日間培養します。
