Isolation of Extracellular Vesicle (EV)-Rich Plasma from Human Blood and Detection of Activated Clotting Time

まず、ヒトの血液を室温で120gで20分間遠心分離し、血球を除去します。次に、上清の上半分を新しいチューブに移します。次に、多血小板血漿を遠心分離して血小板を除去し、上清の上半分を新しいチューブに移します。

次に、血小板を 13 、 000 G で 2 分間血漿に遠心分離することにより、細胞の破片を除去します。上澄みの上半分を新しいチューブに移します。血栓分析装置の電源を入れて細胞外小胞またはEV活性化凝固時間を検出し、装置を摂氏37度に予熱します。

使い捨てプローブとテストカップを取り付けます。次に、機械の品質管理手順を開始します。品質管理の実行後、サンプル情報をシステムに入力します。

次に、200マイクロリットルのEVリッチ血漿をテストカップに加え、続いて20ミリモル、170マイクロリットルの塩化カルシウムを加えます。スタートボタンをクリックし、カバーを閉じて、プローブがサンプル抵抗の変化を検出できるようにします。不適格なEVサンプルは、対照的に、EV.In ゲート付近で粒子径がわずかに大きい明確なクラスターを示し、適格なEVリッチサンプルは、EVのゲート内のほとんどのシグナルを単一のグループとして示しました。

EV濃度の上昇はEV活性化凝固時間を短縮し、EV濃度の減少はEV活性化凝固時間を延長した。子癇前症、大腿骨頸部骨折、肺がんの患者から採取したEVに富む血漿サンプルは、健康なボランティアと比較して、EV活性化凝固時間が有意に短かった。