神経膠芽腫モデルマウスにおける2光子生体内顕微鏡

まず、C6神経膠腫細胞をマウスの表在性脳領域に注入して、神経膠芽腫のマウスモデルを作成します。次に、頭蓋窓にヘッドバーを固定し、マウスが回復するのを待ちます。その後、蛍光標識ナノ粒子をマウスに静脈内注入し、脳内で2光子イメージングを行います。

すぐにTi:sapphireレーザーとメインシステムスイッチをオンにします。次に、プレーリービューソフトウェアを起動します。次に、カスタムステージの2光子顕微鏡の下でマウスを固定します。

動物を加熱パッドの上にうつ伏せの位置に置き、胸部を収縮させないようにテープで固定します。頭蓋窓に水滴を加え、焦点を調整します。動物の心拍数と血中酸素濃度を監視するには、センサーを後足に置きます。

ヘッドの位置を調整します。RFPフィルターを使用して、目的のイメージングフィールドを見つけます。サンプルの向きと視野が決まったら、顕微鏡を広視野モードから光走査型顕微鏡モードに切り替えます。

Ti:サファイアレーザーが920ナノメートルでモードロックされていることを確認し、すべてのシャッターを開きます。あえぎPMT電圧を500〜600ボルトに調整します。ソフトウェアでライブ画像を押すと、イメージングが開始されます。

鮮明な画像が得られたら、ソフトウェアと電動ステージを使用して、ソフトウェアで画像スタックの上下を設定します。ポッケルまたはPMTゲインをゆっくりと増やして、深度が上がるにつれて暗闇を補正します。保存パスを設定し、Zシリーズを起動します。

スタックが完成したら、再生を使用してスタックの品質を確認します。イメージングが終了したら、動物を回収ケージに移動します。プレーリービューを終了し、すべてのデータが保存および転送されていることを確認してから、コンピューターとすべてのハードウェアをシャットダウンします。

限られた数の粒子が血管外に漏出し、ナノ粒子投与の10分後に腫瘍細胞の近傍に見えます。しかし、ナノ粒子投与の24時間後には、膠芽腫に豊富な粒子が見られ、血管外漏出が示唆される。