硬いヤシの種子の画像取得とMALDI-IMS解析

まず、マトリックスを堆積させたシードスライスを含むスライドを質量分析計に入れます。サンプル画像を読み込み、修正ペンマークを使用して、参照先のソフトウェアにティーチングポイントを設定します。次に、99%のデータ削減係数を設定し、事後データキャリブレーション用のFIDファイルを保存し、メソッドを保存します。

質量分析計ソフトウェアの add polygon measurement region ツールを使用して、分析する領域を区切ります。ラスターの幅を 100 マイクロメートルに設定します。保存したメソッドを示す測定領域パラメータを編集し、イメージングランを保存します。

次に、画像取得を開始します。マトリックスクラスターと既知の汚染物質を使用して、ソフトウェアのキャリブラントタブの質量リストを作成します。次に、キャリブレーションタブで、作成した質量リストを開きます。

右クリックしてダイアログボックスを開き、[質量ロックを設定]オプションを選択します。0.5 ガウスの拡幅と 3.5 の線の拡幅のガウス ウィンドウ モードを選択します。オンラインキャリブレーションはオフのままにします。

modeをsingleに、thresholdを1000に、mass toleranceを5 PPMに設定します。プロセスでデータをキャリブレーションし、2D シリアル データセット ツールを保存します。キャリブレーション後、互換性のあるソフトウェアでドットMISファイルを開き、正規化をノーマルからRMSまたはTICに変更します。

editタブをクリックし、automatic mass filteringを選択します。開始質量と終了質量に、関心のある閾値でのダルトンの最小数と最大数を入力し、OKアイコンをクリックします。ダルトンの注目質量値に対応する数値で生成された、フィルタリングされたリストで強調表示された注目ピークを選択します。

パーセンテージを変更して、対象領域を見やすくします。強度スケールバーとカラーマップアイコンをクリックします。画像領域をクリックし、マウスをドラッグしてスライドさせ、関心のある領域を配置します。

透明度のパーセンテージを変更して、スキャン セクションの画像を背景にマージされた信号画像を生成します。マッピングする分析対象物がわかっている場合は、各分析対象物について各 M x Z 値をプロットし、生成された画像とスペクトル平均プロットを保存します。MALDI IMSで得られたEuterpe precatoriaおよびEuterpe edulis種子組織のマススペクトルをポジティブモードでここに示します。

この E.precatoria 種子の MALDI IMS 分析では、マトリックスに塩を添加することなく、ヘキソースオリゴマーの付加物を表すピークが示されました。ヘキソース二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、および最大14個の単位オリゴマーが同定されました。E.edulis種子組織についても同じ結果が得られました。

両方のサンプルの箱ひげ図は、種子胚乳に見られる各ヘキソースオリゴマーのピーク強度を示しており、それらの分布と、オリゴマーの高度重合の含有量がわずかに高いことを示しています。