蛍光活性化細胞選別および線維脂肪原性前駆細胞(FAP)の培養のためのマウス骨格筋および心筋の消化

まず、マウスの心臓組織が入った5ミリリットルの輸送バイアルに2ミリリットルの消化緩衝液を加え、マウスの骨格組織が入った15ミリリットルの遠心チューブに4ミリリットルの消化緩衝液を加えます。とげのあるマウスから分離した心臓と大腿四頭筋の筋肉組織をペトリ皿の蓋に置きます。ティッシュハサミで、1立方ミリメートルより小さい部分に刻みます。

ミンチした組織をそれぞれの消化チューブに移します。チューブの内容物を低速で2秒間ボルテックスします。20分後、ローテーターからチューブを取り外します。

ティッシュピースが落ち着くのを待ちます。P 1000ピペットを使用して上清を吸引します。上清を、20ミリリットルの氷冷FACS緩衝液を含む50ミリリットルの遠心分離管に移します。

分解チューブにそれぞれの量の分解バッファーを補充します。それらを再びローテーターでインキュベートします。筋肉を別の消化にさらした後、氷のように冷たいFACSバッファーを加えて消化を急冷します。

50ミリリットルの遠心分離管の上に40マイクロメートルのセルストレーナーを置きます。消化懸濁液をろ過し、ストレーナーを介して ?? 下します。.細胞懸濁液を500Gで4°Cで8分間遠心分離します。

上清を除去した後、ペレットに3ミリリットルのACK溶解バッファーを加え、再懸濁します。懸濁液を氷上で5分間インキュベートします。FACSバッファーで容量を40ミリリットルに補充します。

サンプルを再度500 Gで4°Cで5分間遠心分離します。上清をデカントした後、ペレットを0.5ミリリットルのFACS緩衝液に再懸濁します。最後に、5ミリリットルのポリスチレン丸底チューブに置いた40マイクロメートルのセルストレーナーキャップで懸濁液をろ過します。