まず、オートクレーブ処理された手術器具を手術台に置きます。麻酔をかけたラットの腹部を剃り、ラットを手術ボードの仰臥位に置きます。ポビドンヨードと70%エタノールで腹部を洗浄します。
乾燥を防ぐために、ラットの目の下に眼科用軟膏を置きます。.ラットを手術用ボードの所定の位置に固定します。データ集録ソフトウェアを起動し、記録を開始します。
1キログラムあたり4ミリリットルで人工呼吸器をオンにし、呼気終末陽圧が約2センチメートルの水であることを確認します。はさみを使用して、剣状突起から恥骨結合までの正中開腹術を行います。次に、鈍器の助けを借りて、内側外側内臓回転を行い、下大静脈下を視覚化します。
20ゲージの針で下大静脈にヘパリンを注入します。はさみを使用して、胸骨のノッチから下顎骨の角度のすぐ下まで皮膚を切り取り、気管に向かって解剖を開始します。次に、気管を露出させるために必要なストラップの筋肉を単刀直入に解剖します。
軟骨輪の間の前気管を横切開し、気管の後部を切開しないようにします。気管の周りに5-0シルク縫合糸を配置します。気管内チューブを軟骨リングに挿入し、5-0シルク縫合糸で固定します。
気管内チューブを人工呼吸器に接続し、適切な胸部上昇を確認します。はさみを使用して、胸骨正中切開術を行い、胸腔に入ります。胸壁リトラクターを心臓と肺が露出するように配置し、肺の不注意な操作を避けます。
鋭い解剖と鈍い解剖の組み合わせで、前縦隔から胸腺を切除します。肺動脈を特定し、その周りに5-0シルク縫合糸を配置してカニューレ挿入の準備をします。ハサミを使用して右心室流出路に2〜3ミリメートルの切開を行い、動脈カニューレを肺動脈内に配置して、5-0縫合糸で固定します。
ラットを安楽死させた後、空気を抜いた肺保存液を動脈カニューレにすばやく接続して、肺を重力洗浄します。動脈カニューレをEVLP回路に接続します。ローラーポンプをオンにし、少量の灌流液が肺を通って左心室から胸腔に流れ込むのを待ちます。
灌流液が左心房から流れ出始めたら、ローラーポンプの電源を切ります。次に、左心室に小さな鉗子を置き、僧帽弁輪をそっと伸ばします。5-0のシルクネクタイを心臓の周りに置き、ゆるく結びます。
左心房カニューレを左心室に挿入し、心房内に見えるようになるまでカニューレを進めます。左心房を事前に結んだ5-0縫合糸で固定します。食道を特定し、横隔膜のできるだけ近くで止血器で固定します。
次に、止血器の下の食道を切断します。脊椎をガイドとして使用して、心肺ブロックを周囲の構造に接続するすべての靭帯アタッチメントをはさみで切断します。次に、首から気管を解剖し、気管内チューブの上の気管を切開して、心肺ブロックを解放します。
心肺ブロックをEVLP回路内の胸部ジャケットに移動し、左心房カニューレを回路に取り付けます。ローラーポンプをオンにし、ベンチレーターモニターを接続します。バブルトラップをチェックして、システムに空気塞栓が導入されていないことを確認します。
最初の15分間で、換気と灌流の設定を希望の実験レベルにゆっくりと変更します。さらに、灌流流量を希望の速度と圧力まで増やします。指定された時間に、灌流ガスレベルと肺機能検査を確認してください。
試験したすべての灌流液は、左心房の酸素分圧がわずかに低下し、RBCベースの灌流液は1時間で有意に減少したことを示しました。次の数時間、polyhHBと対照灌流の両方の左心房酸素分圧が安定していました。酸素のデルタ分圧は、RBC灌流群では1時間で有意に低下しましたが、polyhHBおよび対照灌流群では安定しており、有意な傾向はありませんでした。
二酸化炭素の左心房分圧は、最初の1時間後にpolyhHBと比較して、RBCおよびコントロール灌流液で有意に低かった、そしてこの傾向はその後の数時間にわたって続きます。二酸化炭素のデルタ分圧は、1時間後にRBC灌流液で大幅に上昇し、その後はpolyhHBとコントロール灌流の両方で安定していました。リアルタイムの肺生理学的データは、RBC灌流液が最初の1時間以内に肺血管抵抗を有意に増加させたことを示しています。
polyhHBと対照の灌流液はどちらも、この期間にわたって低く安定した肺血管抵抗を維持しましたが、肺重量の変化は当初RBC灌流液で有意であり、すべての灌流剤で継続的に増加し、polyhHBではわずかに増加しました。コンプライアンスは、最初の1時間以内にRBC灌流液で大幅に低下しましたが、他の灌流剤では有意に減少しませんでした。PolyhHBは、4時間後に最高のコンプライアンスを示しました。
