麻酔をかけたマウスを定位固定装置フレームに配置します。ブレグマとラムダを識別し、2つのランドマーク間の高さ差が100マイクロメートルを超えないようにします。計算された座標を見つけて、滅菌鉛筆で頭蓋骨に印を付けます。
座標の周囲に、2 mm x 2 mm の開頭手術ウィンドウのアウトラインを作成します。麻酔の深さを確認した後、高速ドリルを使用して2ミリメートル×2ミリメートルの開頭窓を作成します。脳表面が乾燥するのを防ぐために、0.5〜1ミリリットルの通常の生理食塩水を適用します。
シリンジ針と細い鉗子を使用して硬膜を取り除きます。次に、高速ドリルを使用して、シリコンプローブの参照電極用に、通常は頭蓋窓から1〜2ミリメートルのところに別のバリ穴を作成します。頭蓋骨に0.2ミリリットルの低毒性シリコン接着剤を塗布して、開頭術を完全に密閉します。
ヘッドプレートとネジを使用して、マウスのヘッドを電気生理学記録リグに固定します。次に、シリコンプローブシャンクを蛍光染料でコーティングして、実験後にプローブの軌道を再構築できるようにします。その後、プローブをマニピュレーターに取り付け、希望の角度を設定します。
記録プローブを頭蓋窓の中心内の脳表面まで下げるには、プローブを約300マイクロメートルの深さまで手動で挿入します。この深さまで挿入したら、組織の損傷を最小限に抑えるために、プローブを目標の深さまで毎分200マイクロメートルまでゆっくりと下げます。最後に、開頭術の窓の中の脳表面にミネラルオイルを塗布して、乾燥を防ぎます。
次に、Intan記録コントローラーを使用して、シリコンプローブとECOGからのデータを30キロヘルツで記録します。記録されたほとんどのニューロンは、セボフルラン麻酔中に発火を減少させました。VLPAGの発火は、ベースラインからセボフルラン投与中まで有意に減少しました。.
この減少は、すべてのVLPAGニューロンで一貫していました。
