蛍光In Situハイブリダイゼーション(FISH)を用いた蛍光色素で標識されたオリゴヌクレオチドプローブによる細菌細胞のハイブリダイゼーション

まず、パラホルムアルデヒドに固定された細菌細胞を取ります。細胞を14, 000 x gで10分間遠心分離します。次に、上清を取り除きます。

ペレットを100マイクロリットルの96%分析グレードのエタノールに再懸濁し、室温で1分間インキュベートします。遠心分離を5分間繰り返してから、エタノールを除去し、細胞ペレットを風乾します。次に、蛍光標識されたオリゴヌクレオチドを含む溶液で細胞を46°Cで3時間ハイブリダイズします。

ハイブリダイゼーションの直後に、摂氏46度に予熱したローターでサンプルを最高許容温度で15分間遠心分離します。次に、適切なストリンジェンシーの緩衝液でサンプルを48°Cで15分間洗浄します。サンプルを遠心分離した後、もう一度、500マイクロリットルの氷冷PBSで細胞を洗浄します。

それらを20マイクロリットルのPBSに再懸濁し、さらに使用するまで摂氏4度で保管します。