著者は、技術の開発の手助けのためにリンジーナッシュに感謝します。この作品は、ALF、ピッツバーグ大学からピッツバーグOAIC（AG024827）、およびシード資金の大学からのパイロットプロジェクトの助成にNIHの助成金AG028977によって賄われていた。

<ol>
	<li>Mello, C., Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+transformation.">DNA transformation.</a> Methods Cell Biol. 48, 451-482 (1995).</li><li>Zhang, Y., Nash, L., Fisher, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified,+robust,+and+streamlined+procedure+for+the+production+of+C.+elegans+transgenes+via+recombineering.">A simplified, robust, and streamlined procedure for the production of C. elegans transgenes via recombineering.</a> BMC Dev Biol. 8, 119-119 (2008).</li><li>Antebi, A., Yeh, W. H., Tait, D., Hedgecock, E. M., Riddle, D. 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J., Nash, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+K10C2.4+Gene+Encodes+a+Member+of+the+Fumarylacetoacetate+Hydrolase+Family.+A+CAENORHABDITIS+ELEGANS+MODEL+OF+TYPE+I+TYROSINEMIA.">The Caenorhabditis elegans K10C2.4 Gene Encodes a Member of the Fumarylacetoacetate Hydrolase Family. A CAENORHABDITIS ELEGANS MODEL OF TYPE I TYROSINEMIA.</a> J Biol.Chem. 283, 9127-9135 (2008).</li><li>Wightman, B., Ha, I., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posttranscriptional+regulation+of+the+heterochronic+gene+lin-14+by+lin-4+mediates+temporal+pattern+formation+in+C.+elegans.">Posttranscriptional regulation of the heterochronic gene lin-14 by lin-4 mediates temporal pattern formation in C. elegans.</a> Cell. 75, 855-862 (1993).</li><li>Lehrbach, N. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+gene+expression+pattern+analysis,+in+situ,+in+Caenorhabditis+elegans.">Large-scale gene expression pattern analysis, in situ, in Caenorhabditis elegans.</a> Brief. Funct. Genomic. Proteomic. , (2008).</li><li>Dolphin, C. T., Hope, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+reporter+fusion+genes+generated+by+seamless+modification+of+large+genomic+DNA+clones.">Caenorhabditis elegans reporter fusion genes generated by seamless modification of large genomic DNA clones.</a> Nucleic Acids Res. 34, e72-e72 (2006).</li><li>Sarov, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+recombineering+pipeline+for+functional+genomics+applied+to+Caenorhabditis+elegans.">A recombineering pipeline for functional genomics applied to Caenorhabditis elegans.</a> Nat. Methods. 3, 839-844 (2006).</li><li>Yang, X. W., Model, P., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homologous+recombination+based+modification+in+Escherichia+coli+and+germline+transmission+in+transgenic+mice+of+a+bacterial+artificial+chromosome.">Homologous recombination based modification in Escherichia coli and germline transmission in transgenic mice of a bacterial artificial chromosome.</a> Nat Biotechnol. 15, 859-865 (1997).</li><li>Court, D. L., Sawitzke, J. A., Thomason, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+engineering+using+homologous+recombination.">Genetic engineering using homologous recombination.</a> Annu.Rev.Genet. 36, 361-388 (2002).</li><li>Westenberg, M., Bamps, S., Soedling, H., Hope, I. A., Dolphin, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escherichia+coli+MW005:+lambda+Red-mediated+recombineering+and+copy-number+induction+of+oriV-equipped+constructs+in+a+single+host.">Escherichia coli MW005: lambda Red-mediated recombineering and copy-number induction of oriV-equipped constructs in a single host.</a> BMC Biotechnol. 10, 27-27 (2010).</li><li>Warming, S., Costantino, N., Court, D. L., Jenkins, N. A., Copeland, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+highly+efficient+BAC+recombineering+using+galK+selection.">Simple and highly efficient BAC recombineering using galK selection.</a> Nucleic Acids Res. 33, e36-e36 (2005).</li><li>Penfold, R. J., Pemberton, J. 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M., Nance, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PAR-3+mediates+the+initial+clustering+and+apical+localization+of+junction+and+polarity+proteins+during+C.+elegans+intestinal+epithelial+cell+polarization.">PAR-3 mediates the initial clustering and apical localization of junction and polarity proteins during C. elegans intestinal epithelial cell polarization.</a> Development. 137, 1833-1842 (2010).</li><li>Maduro, M., Pilgrim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+cloning+of+unc-119,+a+gene+expressed+in+the+Caenorhabditis+elegans+nervous+system.">Identification and cloning of unc-119, a gene expressed in the Caenorhabditis elegans nervous system.</a> Genetics. 141, 977-988 (1995).</li></ol>

利害の衝突は宣言されません。

fosmidsから導入遺伝子の世代は、ネイティブなプロモーターエレメント、スプライシング変異体、および3&#39;UTR調節要素のすべてを保持することの利点を提供しています。これは、ネイティブの発現パターン、または他のアプローチは5失敗した機能的な導入遺伝子の構造をより反映し、導入遺伝子の構築につながることができます。その結果導入遺伝子は、GFPまたはTAPのタグを含む?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>FosmidMAX kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Epicentre</td>
<td>FMAX046</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GoTaq</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Promega</td>
<td>M7122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MOPS Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Teknova</td>
<td>M2120</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.132 M Potassium phosphate solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Teknova</td>
<td>M2102</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>D-galactose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G0750</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2-deoxygalactose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D4407</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>B4639</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Leucine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>L8000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NH4Cl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A9434</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phusion DNA polymerase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NEB</td>
<td>F-530S</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MacConkey agar base</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickinson</td>
<td>281810</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Arabinose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A3131</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chloramphenicol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C1919</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium phosphate dibasic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S5136</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium phosphate monobasic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P5655</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S5886</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycerol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G2025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bacto Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickinson</td>
<td>214010</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

the production of c. elegans transgenes via recombineering with the galk selectable marker

トランスジェニック動物の作成 ​​が広く、Cで利用されている興味またはタンデムアフィニティー精製の ​​世代の遺伝子の調節と発現パターンを研究するためにGFPの融合タンパク質の使用を含む線虫の研究（TAP）その精製を容易にするために特定の遺伝子のタグ付きバージョン。一般的に導入遺伝子はGFPレポーター遺伝子または目的のcDNAの上流にプロモーターを配置することで生成され、これはしばしば代表的発現パターンを生成します。しかし、このような3&#39;非翻訳領域または別のプロモーターの制御要素として遺伝子調節の重要な要素は、このアプローチによって検出し損ねる可能性がある。さらに、単一のスプライスバリアントは、通常はこの方法で研究することができる。対照的に、フォスミドDNAクローンによって運ばの使用ワームのゲノムDNAは、おそらくほとんどの場合ではない本物の発現パターンとタイミングをキャプチャする大きな能力を許可する生体内で遺伝子の調節に関与するすべての要素が含まれています。フォスミドDNAを用いて導入遺伝子の生成を容易にするために、我々はE.を説明大腸菌は遺伝子の任意の場所にGFP、TAP -タグ、または興味の他の配列を挿入するrecombineering手順をベースに。手順は、高効率で目的の変更を取得、その結果recombineeringで正と負の選択の手順の両方のための選択マーカーとしてgalK遺伝子を使用しています。さらに、一般的に使用されるGFPとTAPの融合遺伝子に相同性ア ​​ームに挟まれたgalKの遺伝子を含むプラスミドは、GFPまたはTAP融合タンパク質を生成する際に50％のオリゴのコストを減少する可能です。これらのプラスミドは、豊富なPCR産物の精製の必要性を排除R6Kの複製起点を使います。最後に、我々はまた、フォスミドを直接注入またはトランスジェニック動物を生成するためにワームに砲撃できるようにするフォスミドバックボーンへのUNC - 119マーカーを統合する手法を示す。このビデオでは、このメソッドを使用してrecombineeringを経由して導入遺伝子の生成に関わる手順を示しています。

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The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

のために導入遺伝子を産生する能力<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em&gt;ネイティブ調節要素のすべてが保持されるようにfosmidsによって運ばれるゲノムDNAを使うことが特に魅力的です。説明でrecombineering経由導入遺伝子の生産のためのシンプルで堅牢な手続きです。<em&gt; galK</em&gt;選択可能なマーカー。

の生産 C.エレガンス</emとRecombineering経由>トランスジーン galK選択可能なマーカー

The creation of transgenic animals is widely utilized in C. elegans research including the use of GFP fusion proteins to study the regulation and ...

the-production-c-elegans-transgenes-via-recombineering-with-galk

Research

JoVE Journal

Biology

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

14.5K ビュー.  Beth Israel Deaconess Medical Center, Harvard Medical School. のために導入遺伝子を産生する能力線虫（Caenorhabditis elegans）ネイティブ調節要素のすべてが保持されるようにfosmidsによって運ばれるゲノムDNAを使うことが特に魅力的です。説明でrecombineering経由導入遺伝子の生産のためのシンプルで堅牢な手続きです。 galK選択可能なマーカー。

の生産 C.エレガンストランスジーン galK選択可能なマーカー