この作品は、R01 AI32556（NIAID、国立衛生研究所）によってサポートされていました。この作品は、評議のルイジアナ州会主催の感染症研究のためのルイジアナ州ワクチンセンターと南部ルイジアナ研究所によって部分的にサポートされていました。

1。 カンジダアルビカンスによる膣接種<ol><li>前の接種から3日後、腹部を露出するために動物を抑制しつつ、下腹部の皮下にβ-エストラジオールの0.1から0.5 mgを含むごま油の100μlを注入する。注射部位からの漏れを最小限に抑えるために皮膚に横5〜10ミリメートル程度の針を進める。 下腹部におけるエストロゲンの皮下投与は生殖器に近接のため、このモデルに最適です。有効用量は、マウスの系統、年齢またはエストロゲン誘導体によって異なる場合があります。 CBA - J（H - 2κ）、C3H/HeN（H - 2κ）、C57BL / 6（H - 2 b）に、をBalb / c（H - 2 d）を用いてこれまでの研究では、DBA / 2（H -年齢の6-8週で2 D）、SJL（H - 2 S）マウス、0.1 mg/100μlの膣壁の肥厚により証明される効果的な発見した、膣粘液を減少させ、上皮細胞の脱落が増加した。上記のこの濃度でエストロゲンを投与したマウスはカンジダで一貫性のある膣の植民地化を示す。他の株と年齢のマウスでの接種の場合は、パイロットスタディは、修正された条件下でのエストロゲンの実効性を確保し、必要に応じてエストロゲンの用量を増やすことをお勧めします。 エストロゲンのソリューションは、注射の日のたびに新鮮な準備する必要があります。ごま油でエストロゲンの完全な溶解性を確保するために、徹底的に37℃、断続的にボルテックスミキサーと熱を使用して溶液を混合℃に研究期間を通して週1回の注射を繰り返します。 </li><li>接種を準備するには、Cの白金耳を追加0.1％グルコースを添加したPhytone -ペプトンブロス10mlにサブロー-ブドウ糖寒天（SDA）に関する最近のサブカルチャーの準備からalbicansの blastoconidia。 25℃で18時間固定相へのブロス培養液を振盪水浴中でC。 </li><li>インキュベーションの後、目を集めるeのブロス培養5分、800 × gで15 mlコニカルチューブと遠心分離機に。滅菌PBSで2回ペレットを洗浄します。 </li><li>トリパンブルー色素排除によって血球計数器で生きていけるblastoconidiaを列挙する。滅菌PBSで× 10 6個 / ml（または希望の接種濃度に）2.5に細胞濃度を調整します。 </li><li>マウスを安定させるために、二本指で尾の付け根をホールドし、上向きので、膣の開口部は（図1A）に向かって直面しているヒップを持ち上げます。マウスがマウスに尾の拘束に対する耐性を提供できるように平らなおろし表面（例えば、ケージの上部）に配置されている場合、それが理想的です。 </li><li>膣内腔（図1B）の奥深くに約5mmピペットの先端を挿入することにより接種懸濁液をピペットで20μlの（または20μlを超えないように、目的のボリューム）。マウスの苦痛を最小限に抑えるため、できるだけ迅速かつ静かに、このステップを完了してください。 </li></ol> 2。膣lavages <ol><li>以下の安楽死（または麻酔）、H膣の開口部が露出になるように2本の指で尾の付け根から下に古いマウス。 </li><li>ピペットチップで繰り返し誤嚥と攪拌しながら滅菌PBSを100μlを導入することにより、膣腔を肺胞。ピペットの先端は、細胞が詰まっになることがあります。この問題が発生した場合、閉塞細胞を分注し、膣内に残っているPBSでlavaging続けます。マイクロ遠心チューブに洗浄液を収集する。 </li><li>また、膣lavages、イソフルラン吸入麻酔で麻酔したマウスで行うことができます。このため、彼らは完全に（〜30秒。）鎮静されるまで、イソフルランを気化するためにマウスを公開。尾の付け根で下方へマウスを持って、静かに滅菌PBS50μlを使用して膣内腔を洗浄。この手順の実行中に膣への外傷を最小限に抑えるためにピペットチップで過酷な攪拌を避けるようにしてください。鎮静マウスは、周囲の空気への暴露の30秒内で麻酔から回復する必要があります。 イソフルレンイソフルラン気化器とO 2（優先）または標準的なドロップシステム気化器系（呼吸困難を避けるために鎮静しながら動物の綿密なモニタリングを必要とする）ことなく、麻酔チャンバーを閉じてを使用して蒸発させることができます。 麻酔したマウスで膣lavagesは、同じマウスの上に長手方向の洗浄試料のための選択の方法でなければなりません。連続したlavagingは時間41以上の真菌負担の評価には影響しません。 </li><li>ウェットマウント標本の場合は、スライドガラス上に洗浄液の10μlを転送し、光学顕微鏡により400 - 1000Xの倍率で観察します。また、洗浄液の細胞分画を細胞と核の形態を調べるために染色することができます。塗抹標本の場合は、スライドガラス上に洗浄液の10μlを転送し、ピペットチップの外側の壁を使って感染を広げます。 CytoPrepの固定液でスミア試料を保持し、標準的なパパニコロー法による染色（パパニコロウ塗抹）。光学顕微鏡で400倍の倍率で観察。 </li></ol> 3。膣真菌負担の定量化<ol><li> 96ウェル丸底プレートでは、一番上の行とその列の次の5つのウェル（プレート下）に滅菌PBS 180μLの1つのウェルに洗浄液を転送する。 </li><li>列内の次のウェルに流体の20μlを転送することにより、膣洗浄液の1:10希釈系列を作る。それぞれの転送の前に繰り返し吸引して完全に混和。 12洗浄サンプル（つの完全な水平方向の行）までの連続希釈物を、12チャンネルピペットを用いて同時に行うことができます。 </li><li>最も低い希釈で始まる、サブロー - デキストロース寒天（SDA）にサンプル10μlを転送する。最大36サンプルのメッキは、グリッドや調節可能な間隔のマルチチャンネルピペットを用いて正方形のペトリ皿に準備SDAを使用して、1プレートで行うことができます。 </li><li> 34でインキュベーション後にコロニー形成単位（外装フィルム）を列挙° C Fまたは48時間</li></ol> 4。膣組織の抽出<ol><li>膣洗浄の手順に従って、その背中に安楽死させたマウスを置くと、70％エタノールで鼠径部を飽和させる。ピンセットを使用して、上方に膣の開口部が露出になるよう尿オリフィスを持ち上げます。 </li><li>膣の内腔に曲がったピンセットを挿入し、子宮頸部を探します。鉗子でしっかりしたグリップを維持しながら、膣腔（図2A - C）を介して子宮頸部を抽出する。 </li><li>膣開口部の基部に膣消費税とし外科ハサミで膣から子宮頸部を取り除く。膣組織が渦巻き状のであることを忘れないでください（膣の上皮側の内側が外側に露出している）。組織は、いずれかの横方向に膣の元の方向を維持するために反転または横方向の切開を行うことによってシート状に開くことができます。 切り出した膣の組織は、1）リンパ球抽出は、次のコラージュに使用することができます。組織学的分析25 naseの消化（〜1 × 10 4 /マウス）40、2）上皮細胞の単離後ディスパーゼ消化（〜5 × 10 4 /マウス）28、3）凍結またはパラフィン包埋準備。 </li></ol> 5。腰部リンパ節切除<ol><li>膣洗浄の手順に従って、その背中に安楽死させたマウスを置くと70％エタノールで腹部を飽和させる。下腹部から胸に出発横切開を行い、内臓を公開。両手でピンセットを用いて、中央の血管が見えるようになるように上向きに腸を動かす。 </li><li>下大静脈と腹部大動脈を見つけます。通常は、腰リンパ節のペアは、腎臓および腸骨動脈39の原点間のほぼ中間に位置する、腹部大動脈に隣接して識別することができます。これらのリンパ節が視覚的に弾性テクスチャによって脂肪組織と区別することができます。と脂肪組織（図3）に比べて色が薄く、より不透明です。これらのリンパ節は、未接種の動物と比較して著しく感染した動物がより大きくなるからです。 </li><li>ノードの下にmicroforcepsを配置し、周囲組織から分離するために軽くプルアップにより、消費税リンパ節。 </li></ol> 6。単細胞懸濁液中のリンパ系細胞の分離<ol><li>ハンクス平衡塩類溶液の約10ミリリットル（HBSS）（図4）を含む滅菌ガラスのペトリ皿の中に置か滅菌ワイヤーメッシュスクリーン（サイズは約3 × 3 cm 2）の上のリンパ節を転送します。 </li><li>わずかに傾斜したペトリ皿に、シリンジのプランジャーヘッドと画面に対するリンパ節を押してください。ノードの非細胞成分（すなわち、膜、角膜実質、脂肪）が画面上に残っている間は、ノードの細胞の内容が画面を通過するように、すべてのリンパ節を分割することを確認してください。 </li><li>同じプランジャーとシリンジ、吸引tを使用する彼は、それを含む細胞をHBSS。 〜5mlのHBSSで画面を洗い、15 mlコニカルチューブに残った液を集める。 </li><li> 10分、800 × gで遠心する。液体廃棄の前にピペットで液体の上部に任意の脂肪性沈着物を吸引除去する。 HBSSで細胞ペレット3回洗浄する。トリパンブルー色素排除によってHBSSおよび列挙する生細胞を1mlでペレットを再懸濁する。 </li></ol> 7。代表的な結果： &gt; 4日間接種したマウスから膣洗浄液の細胞分画は、通常、 カンジダ 、上皮細胞と細胞の浸潤（図5）で構成されています。ウェットマウント顕微鏡によって、 カンジダは、視覚的に菌糸の存在だけでなく、酵母（図5A）で識別できます 。膣洗浄液の塗抹標本の調製物は、主要な細胞は、トリ- nucleによって識別される好中球であるの上皮細胞および浸潤白血球を、調べるためにパパニコロー法により染色することができますARローブ（図5B）。非常に少数の好中球は、もしあれば、41未接種マウス（図5C）で検出されています。 膣真菌負担の例を図6に示されています。特定の時点で収集された膣洗浄液は、CFUの列挙（図6A）のために培養されています。 カンジダは、非エストロゲン処理接種したマウス（図6C）で膣植民地化の確立に失敗しながら、カンジダによる膣の植民地化/感染症は、エストロゲン投与接種したマウス（図6B）の週間持続する。エストロゲン投与未接種のマウスは（データは示さず）の時間を通して、カンジダは陰性のまま。さらに、膣lavagesは、各時点または縦方向に麻酔下で同じマウスで別のマウスのいずれかの時間を行うことができます。 腰リンパ節には生殖器と膣の課題に対する全身免疫応答のために評価するために最も関連性の高いサイトの主要なリンパ節です。 N彼らは通常、未接種マウスでは非常に小さく表示しながら、これらのリンパ節が接種されたマウスで拡大になる可能性があることOTE。白血球細胞の回収率は一般的に8 × 10 5 / 5〜未接種のマウス× 10 6 /接種マウスの範囲。腰リンパ節に加えて、鼠径部、膝窩および腸間膜リンパ節を使用することもできます。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig1.jpg" /> 図1。 カンジダとプッシー接種。 A）マウスは、接種のために拘束。マウスは、ワイヤーケージのインサート上に配置され、足を持ち上げ、膣開口を公開するために、やや上向きに、尾の基部によって保持される。それは尾の拘束に抵抗しようとするとマウスのヒップは同じ手で安定化することができます。膣腔へ接種のB）の紹介。ピペットの先端を穏やかに膣腔への深い5mm程度挿入されます。サスペンションの接種材料は、蒸着される。 図2。プッシー組織抽出。 AB）子宮頸部の抽出。子宮頸部は、湾曲鉗子で位置しており、膣腔を介して外側に露出している。一度外膣腔から、子宮頸部がさらに完全に膣を露出する外側に引っ張られている。膣のC）抽出。膣は、はさみと外陰部から切り出されている。一度切り離された、膣から子宮頸部を削除します。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig3.jpg" /> 図3。腰リンパ節の同定。骨盤付近の周囲の臓器/血管の中で腰リンパ節の位置が示されます。 、腹部大動脈。 B、​​膀胱。 C、総腸骨動脈。私、腸。 L、肝臓。 R、直腸。 S、脾臓。 U、子宮。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig4.jpg" /> 図4。ワイヤーメッシュスクリーン上に配置腰リンパ節。リンパ節は、HBSSでペトリ皿に置かれたスクリーン上にプールされます。リンパ節は、単細胞懸濁液のリンパ球様細胞を得るために注射器のプランジャーで画面に押し付けています。 <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig5.jpg" /> 図5。接種したマウスから膣洗浄液の細胞分画。膣洗浄サンプルの）ウェットマウントおよびB）パパニコロウ塗抹標本は、未接種のマウスから）4日後に接種し、Cを集めた。画像は1000 ×（）または400 ×（B、C）の倍率で表示されます。 Bのインサートは、1000 ×で膣好中球の核形態を示しています。 カンジダ酵母（Y）と菌糸（H）、上皮細胞（EC）とneutrohils（N）が示されている。 <img alt="図6" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig6.jpg" /> 図6。検出膣真菌負担のイオン。 A）SDAプレート上に成長した代表C. albicansのコロニーが。 6種類の異なる接種したマウス（一番上の行）からニート（N）洗浄のサンプルを連続希釈し、CFUの列挙のために培養した。膣真菌エストロゲン治療の負担とCのB）定量）非エストロゲンで処置したマウス。接種したマウスから肺胞洗浄液のCFU/100μlを指示された時点で評価した。

<ol>
	<li>Abraham, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+immunity+to+Trichomonas+vaginalis+in+a+mouse+model+of+vaginal+infection.">Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection.</a> Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).</li><li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+histocompatibility+haplotype+does+not+impact+the+course+of+experimentally+induced+murine+vaginal+candidiasis.">Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis.</a> Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).</li><li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+neutropenia+decreases+inflammation+associated+with+murine+vaginal+candidiasis+but+has+no+effect+on+the+course+of+infection.">Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection.</a> Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).</li><li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+severity+of+Candida+vaginitis+in+BALB/c+nu/nu+mice+versus+the+parent+strain+is+not+abrogated+by+adoptive+transfer+of+T+cell+enriched+lymphocytes.">Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes.</a> J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).</li><li>Buchannan, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+stromal+and+epithelial+estrogen+receptors+in+vaginal+epithelial+proliferation,+stratification,+and+cornification.">Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification.</a> Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).</li><li>Clemons, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+susceptibility+of+mice+to+Candida+albicans+vaginitis+correlates+with+host+estrogen+sensitivity.">Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity.</a> Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).</li><li>Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+the+type+I+interferon+pathway+increases+vulnerability+of+mice+to+genital+Herpes+simplex+virus+2+infection.">Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection.</a> J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).</li><li>Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+estromal-epithelial+interaction+in+hormonal+responses.">Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses.</a> Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).</li><li>Enjalbert, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multifunctional,+synthetic+Caussia+princeps+luciferase+reporter+for+live+imaging+of+Candida+albicans+infections.">A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections.</a> 77 (11), 4847-4847 (2009).</li><li>Feinen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+Th17+responses+in+a+murine+model+of+Neisseria+gonorrhoeae+genital+infection.">Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection.</a> Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).</li><li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+protective+host+defenses+against+oral+and+vaginal+candidiasis.">Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis.</a> Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).</li><li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intravaginal+live+Candida+challenge+in+humans+leads+to+new+hypotheses+for+the+immunopathogenesis+of+vulvovaginal+candidiasis.">An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).</li><li>Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+D0870+treatment+of+experimental+Candida+vaginitis.">Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis.</a> Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).</li><li>Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Reproductive+hormones+on+experimental+vaginal+candidiasis.">Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).</li><li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+Candida+glabrata+vaginitis.">A murine model of Candida glabrata vaginitis.</a> J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).</li><li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+vaginal+cell+populations+during+experimental+vaginal+candidiasis.">Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis.</a> Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).</li><li>Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida-specific+cell-mediated+immunity+is+demonstrable+in+mice+with+experimental+vaginal+candidiasis.">Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).</li><li>Fidel, P. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunopathogenesis+of+recurrent+vulvovaginal+candidiasis.">Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 9. 9, 335-335 (1996).</li><li>Fidel, P. L., Sobel, J. D., Zak, O., Sande, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy. , 741-748 (1999).</li><li>Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+glabrata:+Review+of+epidemiology,+pathogenesis,+and+clinical+disease+with+comparison+to+C.+albicans.">Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans.</a> Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).</li><li>Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+depletion+increases+susceptibility+to+systemic+and+vaginal+candidiasis+in+mice,+and+reveals+differences+between+brain+and+kidney+in+mechanisms+of+host+resistance.">Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance.</a> Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).</li><li>Gill, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NK+cells+require+type+I+IFN+receptor+for+antiviral+responses+during+genital+HSV-2+infection.">NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection.</a> Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).</li><li>Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-dependent+induction+of+persistent+vaginal+candidosis+in+naive+mice.">Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice.</a> Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).</li><li>Hamad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+the+oestrogen-dependent+vaginal+candidosis+murine+model+in+evaluating+the+efficacy+of+various+therapies+against+vaginal+Candida+albicans+infection.">Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection.</a> Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).</li><li>LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+dendritic+cells+in+immunoregulation+during+experimental+vaginal+candidiasis.">A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).</li><li>McGrory, T., Garber, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+intravaginal+infection+with+Trichomonas+vaginalis+and+role+of+Lactobacillus+acidophilus+in+sustaining+infection.">Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection.</a> Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).</li><li>Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+mucosal+Candida+infection.">Animal models of mucosal Candida infection.</a> FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).</li><li>Nomanbhoy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaginal+and+oral+epithelial+cell+anti-Candida+activity.">Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity.</a> Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).</li><li>Pietrella, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+beta-glucan-conjugate+vaccine+and+anti-beta-glucan+antibodies+are+effective+against+murine+vaginal+candidiasis+as+assessed+by+a+novel+in+vivo+imaging+technique.">A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique.</a> Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).</li><li>Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+role+of+Lactobacilli+in+the+control+and+maintenance+of+the+vaginal+bacterial+microflora.">Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora.</a> Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).</li><li>Saavedra, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+production+of+chemokines+during+experimental+vaginal+candidiasis.">Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis.</a> Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).</li><li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+epidemiology+of+vulvovaginal+candidiasis.">Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).</li><li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+treatment+of+recurrent+vulvovaginal+candidiasis.">Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis.</a> Clin. Infect. Dis. 14, S148-S153 (1992).</li><li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vulvovaginal+candidiasis:+Epidemiologic,+diagnostic,+and+therapeutic+considerations.">Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).</li><li>Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+humoral+immune+responses+against+primary+and+repeat+Neisseria+gonorrhoeae+genital+tract+infections+of+17&#946;-estradiol-treated+mice.">Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17&#946;-estradiol-treated mice.</a> Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).</li><li>Taylor, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+virulence+of+Candida+albicans+isolates+causing+mucosal+infections+in+people+infected+with+the+human+immunodeficiency+virus.">In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus.</a> J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).</li><li>Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+Th1/Th2+cytokine+production+during+experimental+vaginal+candidiasis.">Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis.</a> Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).</li><li>Tirabassi, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mucosal+vaccination+approach+for+herpes+simplex+virus+type+2.">A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2.</a> Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).</li><li>Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+nomenclature+of+murine+lymph+nodes:+descriptive+and+nomenclatory+standardization+in+BALB/cAnNCrl+mice.">Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice.</a> J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).</li><li>Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+molecule+and+lymphocyte+activation+marker+expression+during+experimental+vaginal+candidiasis.">Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis.</a> J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).</li><li>Yano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell-derived+S100+calcium-binding+proteins+as+key+mediators+in+the+hallmark+acute+neutrophil+response+during+Candida+vaginitis.">Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis.</a> Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).</li></ol>

利害の衝突は宣言されません。

カンジダ膣炎の実験的マウスモデルが確立され、歴史的に3,4,11,13,16,17,19,21,24抗真菌治療をテストするためだけでなく、 カンジダの粘膜ホストの応答を研究するために過去数十年のために使用されています25,37。プロトコルは、これまでに説明した効率的で手間のかかる方法を取り入れて、 カンジダ膣炎の最も最適化されたモデルシステムの一つ?...

<table border="1"><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>雌のCBA / Jマウス</td><td>チャールズリバー研究所</td><td> 01C38 </td><td>生後5-6週間</td></tr><tr><td> カンジダアルビカンス （3153A） </td><td>病原真菌のナショナルコレクション、英国</td><td> NCPF3153 </td><td></td></tr><tr><td>ごま油</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> S3547 </td><td>使用前にあらかじめ滅菌する必要はありません。 </td></tr><tr><td> Β-エストラジオール17 -吉草酸</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> E1631 </td><td>ごま油で0.1 - 0.5mg </td></tr><tr><td> Phytoneペプトン</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 211906 </td><td> 0.1％グルコースで補足</td></tr><tr><td>トリパンブルー溶液</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> T8154 </td><td></td></tr><tr><td>サブローデキストロース寒天</td><td>ベクトンディックinson </td><td> 211584 </td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼIV型</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> C5138 </td><td> 0.25パーセント</td></tr><tr><td>ディスパーゼ</td><td>インビトロジェン</td><td> 17105-041 </td><td> 1.7 U / mlの</td></tr><tr><td>ワイヤーメッシュスクリーン</td><td> TWP </td><td> 060X060S0065W36T </td><td> No.60メッシュ、ステンレス</td></tr><tr><td>ハンクス平衡塩類溶液</td><td>インビトロジェン</td><td> 24020-117 </td><td></td></tr><tr><td> CytoPrep固定液</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 12-570-10 </td><td>スミアスライドを保持</td></tr><tr><td>パパニコローは、EA - 65染色</td><td> EMDケミカルズ</td><td> 7054X - 85 </td><td></td></tr><tr><td>パパニコローは、OG - 6染色</td><td> EMDケミカルズ</td><td> 7052X - 85 </td><td></td></tr><tr><td>ハリス&quot;ミョウバンヘマトキシリン</td><td> EMDケミカルズ</td><td> 638A - 85 </td><td></td></tr><tr><td>イソフルレン</td><td>バクスターヘルスケア</td><td> NDC 10019-773-60 </td><td>イソフルラン気化器、またはドロップシステムで使用される麻酔薬室は閉鎖</td></tr></table>

protocols for vaginal inoculation and sample collection in the experimental mouse model of candida vaginitis

カンジダ種に起因する外陰膣カンジダ症（VVC）は、、彼らの生殖年齢18,32-34中にそれ以外の場合は健康な女性の約75％に影響を与える低く、女性生殖器の真菌感染症です。素因は、抗生物質の使用、妊娠に起因する生殖ホルモンレベルのコントロール不良の糖尿病と障害、経口避妊薬またはホルモン補充療法33,34を含む。年ごとに3つ以上のエピソードのように定義再発VVC（RVVC）は、、ない素因33で女性の8％に独立した5影響を与えます。 VVCの実験的マウスモデルを確立し、病因とカンジダ 3,4,11,16,17,19,21,25,37の粘膜ホストの応答を研究するために使用されています。このモデルはまた、in vivoで 13,24 の潜在的な抗真菌治療法をテストするために採用されている。モデルでは、動物がoptのpseudoestrusの状態に維持されている必要がありますimal カンジダの保菌/感染6,14,23。このような条件下では、接種した動物は数週間から数カ月のための膣真菌負担を検出可能なことになります。過去の研究は、免疫学的及び生理学的性質を3,16,21の相対動物モデルとヒトへの感染の間に極めて高い並列を示す。違いは、しかし、正常な膣内細菌叢とマウスの中性の膣のpHとしてカンジダの欠如などがあります。 ここでは、膣接種、膣標本の迅速な収集、膣真菌負担の評価、及び細胞の抽出/分離のための組織の準備を含むマウス膣炎モデルにおける重要な一連のメソッドを示しています。これは、膣洗浄液、真菌の負担、および流入領域リンパ節の白血球の利回りの構成要素のための代表的な結果が続いている。麻酔剤の使用で、洗浄のサンプルは、の経時的評価のための同じマウスで複数のタイムポイントで収集することができます感染症/植民地化。さらに、このモデルは、定義されたホストの条件の下で免疫学的研究を可能にする、感染を開始するためには免疫抑制剤を必要としません。最後に、モデルとここで紹介した各手法は、潜在的に低い女性の生殖器（ウイルス、寄生虫、細菌）と、それぞれの局所的または全身的な宿主防御の他の感染症を調べるために方法論の使用を生じさせることができる。

Watch this Scientific Journal Video about Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis at JoVE.com

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

の評価に使用するキー技術<em&gt;カンジダ</em実験動物モデルでの&gt;膣炎が説明されています。メソッドは、腰リンパ節を排出するから膣標本とリンパ球の迅速な収集が可能になります。これらの技術は、女性の下部生殖管の他の疾患のマウスモデルを生じさせることができる。

の実験的マウスモデルにおけるプッシー接種とサンプル採取のためのプロトコルカンジダ膣炎

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

protocols-for-vaginal-inoculation-sample-collection-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

32.8K ビュー.  Louisiana State University Health Sciences Center. の評価に使用するキー技術カンジダ膣炎が説明されています。メソッドは、腰リンパ節を排出するから膣標本とリンパ球の迅速な収集が可能になります。これらの技術は、女性の下部生殖管の他の疾患のマウスモデルを生じさせることができる。

ビデオ: Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into mouse tail veins and colonize in the lungs, thereby, resembling the last steps of tumor cell spontaneous metastasis: survival in the circulation, extravasation and colonization in the distal organs. From a therapeutic point of view, the experimental metastasis model is the simplest and ideal model since the target of therapies is often the end point of metastasis: established metastatic tumor in the distal organ. In this model, tumor cells are injected i.v into mouse tail veins and allowed to colonize and grow in the lungs. Tumor-specific CTLs are then injected i.v into the metastases-bearing mouse. The number and size of the lung metastases can be controlled by the number of tumor cells to be injected and the time of tumor growth. Therefore, various stages of metastasis, from minimal metastasis to extensive metastasis, can be modeled. Lung metastases are analyzed by inflation with ink, thus allowing easier visual observation and quantification.

An experimental lung metastasis and CTL immunotherapy mouse model for analysis of tumor cells-T cell interaction in vivo.

実験的転移とCTLの養子移入免疫療法のマウスモデル

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

免疫・感染学

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1. It has traditionally been considered a rare disease but reporting has increased markedly in recent years. Hypophysitis, in fact, develops not uncommonly as a "side effect" in cancer patients treated with antibodies that block inhibitory receptors expressed on T lymphocytes, such as CTLA-42 and PD-1 receptors. Autoimmune hypophysitis can be induced experimentally by injecting mice with pituitary proteins mixed with an adjuvant3. In this video article we demonstrate how to extract proteins from mouse pituitary glands and how to prepare them in a form suitable for inducing autoimmune hypophysitis in SJL mice.

Autoimmune hypophysitis can be reproduced in mice by injecting an extract of mouse pituitary proteins.

実験的自己免疫性下垂体炎の誘導のためのマウス下垂体免疫原の調製

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of 10 - 30% of adults. In immune-compromised individuals, including neonates, pregnant women, and the elderly, GBS may switch to an invasive pathogen causing sepsis, arthritis, pneumonia, and meningitis. Because GBS is a leading bacterial pathogen of neonates, current prophylaxis is comprised of late gestation screening for GBS vaginal colonization and subsequent peripartum antibiotic treatment of GBS-positive mothers. Heavy GBS vaginal burden is a risk factor for both neonatal disease and colonization. Unfortunately, little is known about the host and bacterial factors that promote or permit GBS vaginal colonization. This protocol describes a technique for establishing persistent GBS vaginal colonization using a single &#946;-estradiol pre-treatment and daily sampling to determine bacterial load. It further details methods to administer additional therapies or reagents of interest and to collect vaginal lavage fluid and reproductive tract tissues. This mouse model will further the understanding of the GBS-host interaction within the vaginal environment, which will lead to potential therapeutic targets to control maternal vaginal colonization during pregnancy and to prevent transmission to the vulnerable newborn. It will also be of interest to increase our understanding of general bacterial-host interactions in the female vaginal tract.

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

The purpose of this protocol is to imitate human group B Streptococcus (GBS) vaginal colonization in a murine model. This method may be used to investigate host immune responses and bacterial factors contributing to GBS vaginal persistence, as well as to test therapeutic strategies.

グループBのマウスモデル<em&gt;連鎖球菌</em&gt;膣植民地化

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the development and persistence of many health related infections. One of the most well described and studied biofilms in human disease occurs in chronic pulmonary infection of cystic fibrosis patients. When studying biofilms in the context of the host, many factors can impact biofilm formation and development. In order to identify how host factors may affect biofilm formation and development, we used a static chambered coverglass method to grow biofilms in the presence of host-derived factors in the form of sputum supernatants. Bacteria are seeded into chambers and exposed to sputum filtrates. Following 48 hr of growth, biofilms are stained with a commercial biofilm viability kit prior to confocal microscopy and analysis. Following image acquisition, biofilm properties can be assessed using different software platforms. This method allows us to visualize key properties of biofilm growth in presence of different substances including antibiotics.

This protocol describes the visualization of biofilm development following exposure to host-factors using a slide chamber model. This model allows for direct visualization of biofilm development as well as analysis of biofilm parameters using computer software programs.

チェンカバーガラスモデルを用いたバイオフィルム開発に関する痰の効果を可視化

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of their morbidity. The liver immunopathology caused by HIV-1 remains elusive. Small xenograft animal models with human hepatocytes and human immune system can recapitulate the human biology of the disease&#39;s pathogenesis. Herein, a protocol is described to establish a dual humanized mouse model through human hepatocytes and CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells (HSPCs) transplantation, to study liver immunopathology as observed in HIV-infected patients. To achieve dual reconstitution, male TK-NOG (NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug Tg(Alb-TK)7-2/ShiJic) mice are intraperitoneally injected with ganciclovir (GCV) doses to eliminate mouse transgenic liver cells, and with treosulfan for nonmyeloablative conditioning, both of which facilitate human hepatocyte (HEP) engraftment and human immune system (HIS) development. Human albumin (ALB) levels are evaluated for liver engraftment, and the presence of human immune cells in blood detected by flow cytometry confirms the establishment of human immune system. The model developed using the protocol described here resembles multiple components of liver damage from HIV-1 infection. Its establishment could prove to be essential for studies of hepatitis virus co-infection and for the evaluation of antiviral and antiretroviral drugs.

This protocol provides a reliable method to establish humanized mice with both human immune system and liver cells. Dual reconstituted immunodeficient mice achieved via intrasplenic injection of human hepatocytes and CD34+ hematopoietic stem cells are susceptible to human immunodeficiency virus-1 infection and recapitulate liver damage as observed in HIV-infected patients.

HIV関連肝病因に対する二重ヒト化TK-NOGマウスモデルの確立

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight loss, depreciation of the animals&#39; leather and also can act as a vector of several pathogens. Due to the exorbitant costs to control these parasites, damage to the environment caused by the inappropriate use of chemical acaricides, and the increased resistance against traditional parasiticides, alternative control of ticks, by the use of entomopathogenic fungi, for example, has been considered an interesting approach. Nevertheless, few studies have demonstrated how the tick&#39;s immune system acts to fight these entomopathogens. Therefore, this protocol demonstrates two methods used for entomopathogen inoculation into engorged females and two techniques used for hemolymph collection and hemocytes harvesting. Inoculation of pathogens at the leg insertion in the tick female&#39;s body allows evaluation of females biologic parameters unlike the inoculation between the scutum and capitulum, which frequently damages Gen&#233;&#39;s organ. Dorsal hemolymph collection yielded a higher volume recovery than collection through the legs. Some limitations of tick hemolymph collection and processing include i) high rates of hemocytes&#39; disruption, ii) hemolymph contamination with disrupted midgut, and iii) low hemolymph volume recovery. When hemolymph is collected through the leg cutting, the hemolymph takes time to accumulate at the leg opening, favoring the clotting process. In addition, fewer hemocytes are obtained in the collection through the leg compared to the dorsal collection, even though the first method is considered easier to be performed. Understanding the immune response in ticks mediated by entomopathogenic agents helps to unveil their pathogenesis and develop new targets for tick control. The inoculation processes described here require very low technological resources and can be used not only to expose ticks to pathogenic microorganisms. Similarly, the collection of tick hemolymph may represent the first step for many physiological studies.

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Analysis of tick hemolymph represents an important source of information on how some pathogens cause disease and how ticks immunologically respond to this infection. The present study demonstrates how to inoculate fungal propagules and collect hemolymph from Rhipicephalus microplus engorged females.

無脊椎動物の病理学研究に向けた Hemolymph のMetarhizium Blastospores の収集とRhipicephalus Microplusダニへの接種の開示

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight ...

Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus infection in mice. As alphaherpesviruses are main invaders of the peripheral nervous system (PNS), this model is suitable to characterize the kinetics of viral replication, its spread from the PNS to CNS, and associated neuroinflammatory responses. The footpad inoculation model allows virus particles to spread from a primary infection site in the footpad epidermis to sensory and sympathetic nerve fibers that innervate the epidermis, sweat glands, and dermis. The infection spreads via the sciatic nerve to the dorsal root ganglia (DRG) and ultimately through the spinal cord to the brain. Here, a mouse footpad is inoculated with pseudorabies virus (PRV), an alphaherpesvirus closely related to herpes simplex virus (HSV) and varicella-zoster virus (VZV). This model demonstrates that PRV infection induces severe inflammation, characterized by neutrophil infiltration in the footpad and DRG. High concentrations of inflammatory cytokines are subsequently detected in homogenized tissues by ELISA. In addition, a strong correlation is observed between PRV gene and protein expression (via qPCR and IF staining) in DRG and the production of pro-inflammatory cytokines. Therefore, the footpad inoculation model provides a better understanding of the processes underlying alphaherpesvirus-induced neuropathies and may lead to the development of innovative therapeutic strategies. In addition, the model can guide research on peripheral neuropathies, such as multiple sclerosis and associated viral-induced damage to the PNS. Ultimately, it can serve as a cost-effective in vivo tool for drug development.

The footpad inoculation model is a valuable tool for characterizing viral-induced neuroinflammatory responses in vivo. In particular, it provides a clear assessment of viral kinetics and associated immunopathological processes initiated in the peripheral nervous system.

ウイルス誘導神経炎症反応を研究するマウスフットパッド接種モデル

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus ...

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular inflammatory disease model recapitulate the clinical phenotype of posterior uveitis affecting humans. EAU has been used reliably to study the efficacy of novel inflammatory therapeutics, their mode of action and to further investigate the mechanisms that underpin disease progression of intraocular disorders. Here, we provide a detailed protocol on EAU induction in the C57BL/6J mouse - the most widely used model organism with susceptibility to this disease. Clinical assessment of disease severity and progression will be demonstrated using fundoscopy, histological examination and fluorescein angiography. The induction procedure involves subcutaneous&#160;injection of an emulsion containing a peptide (IRBP1-20) from the ocular protein interphotoreceptor retinoid binding protein (also known as retinol binding protein 3), Complete Freund&#39;s Adjuvant (CFA) and supplemented with killed Mycobacterium tuberculosis. Injection of this viscous emulsion on the back of the neck is followed by a single intraperitoneal injection of Bordetella pertussis toxin. At the onset of symptoms (day 12-14) and under general anesthesia, fundoscopic images are taken to assess disease progression through clinical examination. These data can be directly compared with those at later timepoints and peak disease (day 20-22) with differences analyzed. At the same time, this protocol allows the investigator to assess potential differences in vessel permeability and damage using fluorescein angiography. EAU can be induced in other mouse strains - both wildtype or genetically modified - and combined with novel therapies offering flexibility for studying drug efficacy and/or disease mechanisms.

In this report we present a protocol that allows the investigator to generate a mouse model of intraocular uveitis. More commonly referred to as experimental autoimmune uveitis (EAU), this established model captures many aspects of human disease. Herein, we will describe how to induce and monitor disease progression using several readouts.

実験的自己免疫性ブドウ膜炎:眼内炎症性マウスモデル

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

A Mouse Model of Chronic Liver Fibrosis for the Study of Biliary Atresia

Biliary atresia (BA) is a fatal disease involving obstructive jaundice, and it is the most common indication for liver transplantation in children. Due to the complex etiology and unknown pathogenesis, there are still no effective drug treatments. At present, the classic BA mouse model induced by rhesus rotavirus (RRV) is the most commonly used model for studying the pathogenesis of BA. This model is characterized by growth retardation, jaundice of the skin and mucosa, clay stools, and dark yellow urine. The histopathology shows severe liver inflammation and obstruction of the intrahepatic and extrahepatic bile ducts, which are similar to the symptoms of human BA. However, the livers of end-stage mice in this model lack fibrosis and cannot fully simulate the characteristics of liver fibrosis in clinical BA. The presented study developed a novel BA mouse model of chronic liver fibrosis by injecting 5-10 &#181;g of anti-Ly6G antibody four times, with gaps of 2 days after each injection. The results showed that some of the mice successfully formed chronic BA with typical fibrosis after the time lapse, meaning these mice represent a suitable animal model for the virus-induced liver fibrosis mechanistic study of BA and a platform for developing future BA treatments.

We established a mouse model of chronic liver fibrosis, which provides a suitable animal model for the virus-induced liver fibrosis mechanistic study of biliary atresia (BA) and a platform for future BA treatments.

胆道閉鎖症研究のための慢性肝線維症のマウスモデル

Biliary atresia (BA) is a fatal disease involving obstructive jaundice, and it is the most common indication for liver transplantation in children. Due to ...

Candida albicansバイオフィルム関連PJIのマウスモデルの確立

A Periprosthetic Joint Candida albicans Infection Model in Mouse

Periprosthetic joint infection (PJI) is one of the common infections caused by Candida albicans (C. albicans), which increasingly concerns surgeons and scientists. Generally, biofilms that can shield C. albicans from antibiotics and immune clearance are formed at the infection site. Surgery involving the removal of the infected implant, debridement, antimicrobial treatment, and reimplantation is the gold standard for the treatment of PJI. Thus, establishing animal PJI models is of great significance for the research and development of new drugs or therapeutics for PJI. In this study, a smooth nickel-titanium alloy wire, a widely used implant in orthopedic clinics, was inserted into the femoral joint of a C57BL/6 mouse before the C. albicans were inoculated into the articular cavity along the wire. After 14 days, mature and thick biofilms were observed on the surface of implants under a scanning electronic microscope (SEM). A significantly reduced bone trabecula was found in the H&amp;E staining of the infected joint specimens. To sum up, a mouse PJI model with the advantages of easy operation, high successful rate, high repeatability, and high clinical correlation was established. This is expected to be an important model for clinical studies of C. albicans biofilm-related PJI prevention.

著者スポットライト:カンジダ・アルビカンスのバイオフィルム関連補綴関節感染症に関する研究の進展 

Periprosthetic joint infection (PJI) caused by dangerous pathogens is common in clinical orthopedics. Existing animal models cannot accurately simulate the actual situation of PJI. Here, we established a Candida albicans biofilm-associated PJI mouse model to research and develop new therapeutics for PJI.

マウスにおける人工関節周囲カン ジダ・アルビカンス 感染モデル

Periprosthetic joint infection (PJI) is one of the common infections caused by Candida albicans (C. albicans), which increasingly concerns surgeons and ...