이 작품은 R01 AI32556 (NIAID, 건강의 국립 연구소)에 의해 지원되었다. 이 작품은 또한 루이지애나 백신 센터와 Regents의 루이지애나위원회 주최 감염증 연구 남부 루이지애나 연구소에 의해 부분적으로 지원되었다.

1. 칸디다 albicans와 질 접종 <ol><li> 이전 접종에 사흘은 복부를 노출하기 위해 동물을 억제하면서, 낮은 복부에 subcutaneously β - estradiol의 0.1-0.5 MG를 포함 참기름 100 μl를 주입. 사출 사이트에서 누출을 최소화하기 위해 피부에 측면 5-10mm에 대한 바늘을 전진. 아래 복부에있는 에스 트로겐의 피하 행정부는 성기 요로에 근접으로 인해이 모델에 최적입니다. 효과적인 복용이 마우스 변종, 연령 또는 에스 트로겐 유도체에 따라 다를 수 있습니다. CBA - J (H - 2 κ), C3H/HeN (H - 2 κ), C57BL / 6 (H - 2 B), Balb / C (H - 2 D)를 사용하여 이전 연구에서, DBA / 2 (H - 이 D), 연령 6-8 주가 SJL (H - 2의) 마우스가 0.1 mg/100 μl가 효과가 있던 질 벽 농화에 의해 입증, 질 점액 및 감소상피 세포 sloughing 증가했습니다. 이상이 농도에서 에스 트로겐과 치료를 마우스는 칸디다와 일치하는 질 식민지를 나타냅니다. 다른 변종과 연령대의 생쥐에 접종 들어, 파일럿 연구는 수정된 조건에서 에스 트로겐의 효과를 보장하고 필요한 경우 에스 트로겐 복용을 증가하는 것이 좋습니다. 에스 트로겐 솔루션은 주입 당일에 매번 신선한 준비되어야합니다. 참기름에 에스 트로겐의 완전한 용해도를 보장하기 위해 철저하게 37 간헐적으로 소용돌이 믹서 및 열을 사용하여 솔루션을 믹스 ° C. 연구 기간에 걸쳐 매주 주사를 반복합니다. </li><li> inoculum를 준비하려면, C.의 loopful을 추가 0.1 %의 포도당과 보충 Phytone - 펩톤의 국물의 10 ML에 Sabouraud - 덱스 트로 오스 한천 (SDA)에 최근 subculture 준비에서 albicans blastoconidia. 25 ° 흔들어 물을 욕조에서 C 18 H에 대한 고정 단계로 국물 문화를 품어. </li><li> 부화 후, 일를 수집5 분 800 XG에 15 ML 원뿔 튜브와 원심 분리기로 전자 국물 문화. 멸균 PBS로 두 번 펠렛 씻으십시오. </li><li> trypan 청색 색소 제외하여 hemocytometer에서 가능한 blastoconidia를 열거합니다. 2.5 세포 농도를 조절 X 10 멸균 PBS로 6 / ML (또는 원하는 inoculum의 농도). </li><li> 마우스를 안정화하기 위해, 두 손가락으로 꼬리의 기반을 잡고 위쪽으로하므로 질구가 (그림 1A) 방향으로 얼굴을 그 엉덩이를 리프트. 마우스가 마우스의 꼬리 구속에 대한 저항을 제공할 수 있도록 평평한 grated 표면 (예 : 케이지 상단)에 위치하는 경우 그것은 이상적입니다. </li><li> 질 루멘 (그림 1B)에 깊이 5mm에 대한 피펫 팁을 삽입하여 inoculum 서스펜션의 피펫 20 μl (20 μl을 초과하지 않는 원하는 볼륨). 마우스의 고통을 최소화하는 등 신속하고 부드럽게 가능한이 단계를 완료하십시오. </li></ol> 2. 질 lavages <ol><li> 다음 안락사 (또는 마취), H질구가 노출 될 수 있도록 두 손가락으로 꼬리의 기지에 의해 아래로 오래된 마우스. </li><li> 피펫 팁과 반복 열망과 동요와 함께 멸균 PBS 100 μl을 도입하여 질 루멘을 세척. 피펫 팁은 세포들로 가득 찼어 될 수 있습니다. 이 문제가 발생하면, 방해 세포를 분배하고 질에 남아 PBS와 lavaging 계속 진행합니다. microcentrifuge 튜브로 세척 유체를 수집합니다. </li><li> 또한, 질 lavages는 isoflurane 흡입 마취와 anesthetized 생쥐에서 수행할 수 있습니다. 이를 위해, 그들은 완전히 (~ 30 초). 회복될 때까지 isoflurane을 증발에 쥐를 노출. 꼬리의 기지에 의해 아래쪽으로 마우스를 잡고 부드럽게 멸균 PBS의 50 μl를 사용하여 질 루멘을 세척. 이 절차를 수행하는 동안 음부에 외상을 최소화하기 위해 피펫 팁과 거친 동요를 방지해야합니다. 진정 마우스는 주위 공기에 노출을 30 초 이내에 마취에서 회복해야합니다. Isofluraneisoflurane 기화기와 O 2 (선호) 또는 표준 드롭 시스템 기화기 시스템 (호흡 곤란을 피하기 위해 진정제 동안 동물의 가까이 모니터링 필요)하지 않고 마취 챔버를 폐쇄를 사용하여 증발 수 있습니다. anesthetized 생쥐에 대한 질 lavages 같은 생쥐에 세로 세척 샘플 선택하는 방법해야합니다. 연속 lavaging 시간이 41여 곰팡이 부담의 평가에 영향을 미치지 않습니다. </li><li> 축축한 마운트 준비 들어, 유리 슬라이드에 세척 유체의 10 μl를 전송 가벼운 현미경으로 400 배율 1000x에서 관찰합니다. 또한, 세척 유체의 세포 분수는 세포와 핵 morphologies를 검토 스테인드 수 있습니다. 비방 준비 들어, 유리 슬라이드에 세척 유체의 10 μl를 전송하고 부드럽게 피펫 팁의 외벽을 사용하여 확산. CytoPrep의 정착액으로 얼룩 샘플을 보존 및 표준 Papanicolaou 기술에 의해 착색 (자궁 세포진 검사). 가벼운 현미경으로 400 × 확대 관찰. </li></ol> 3. 질 곰팡이 부담 부량 <ol><li> 96 잘 둥근 바닥 판, 그 칼럼의 다음과 같은 다섯 우물 (접시 아래)에 맨 윗줄과 멸균 PBS 180 μl 잘 하나에 세척 유체를 전송합니다. </li><li> 열에있는 다음 잘하는 유체의 20 μl를 전송하여 질 세척 유체의 1시 10분 시리얼 dilutions하십시오. 각 전송 전에 반복 흡인에 의해 철저히 섞는다. 12 세척 샘플 (한 전체 가로 행)까지 직렬 dilutions은 12 채널 피펫을 사용하여 동시에 수행할 수 있습니다. </li><li> 가장 낮은 희석부터 Sabouraud - 덱스 트로 오스 한천 (SDA)에 샘플 10 μl를 전송합니다. 최대 36 샘플의 도금은 격자 및 조정 간격 멀티채널 피펫과 사각형 배양 접시에 준비 SDA를 사용하여 한 접시에 수행할 수 있습니다. </li><li> 34에서 배양 후 콜로니 형성 단위 (CFUs)를 열거 ° C F또는 48 H. </li></ol> 4. 질 조직 추출 <ol><li> 질 세척 절차에 따라, 그 뒷면에있는 euthanized 마우스를 틀어서 70 % 에탄올로 사타구니 영역을 포화. 포셉 한 켤레를 사용하여 상승하므로 질구가 노출되는 것을 요도 구멍 리프트. </li><li> 질 루멘으로 휘어져 포셉 한 켤레를 삽입하여 자궁 경부를 찾습니다. 포셉와 확고한 그립을 유지하면서, 질 캐비티 (그림 2A - C)를 통해 자궁 경부의 압축을 풉니다. </li><li> 질구의 기지에서 다음 소비세 질은 수술 가위로 질에서 자궁 경부를 제거합니다. 질 조직 (질 상피 쪽 내부 외부 노출) involuted는 것을 염두에 두십시오. 조직은 어느 측면 질의 원래 방향을 유지하기 위해 거꾸로 또는 측면 절개하여 시트에 열 수 있습니다. Excised 질 조직은 1) 사용할 수 있습니다 림프구 추출 다음의 합성histological 분석 25 nase의 소화 (~ 1 × 10 4 / 마우스) 40, 2) 상피 세포 절연 다음 dispase의 소화 (~ 5 × 10 4 / 마우스) 28, 3) 냉동 또는 파라핀 - 임베디드 준비. </li></ol> 5. 허리 림프절의 절단 <ol><li> 질 세척 절차에 따라, 그 뒷면에있는 euthanized 마우스를 틀어서 70 % 에탄올로 복부를 포화. 아래 복부에서 가슴에 시작 가로 절개를 만들고 내부 장기 노출. 양손의 집게 한 켤레를 사용하여 상승하므로 중앙 혈관이 표시되고 그 창자를 이동합니다. </li><li> 하부 대정 맥과 복부 대동맥을 찾습니다. 일반적으로 요추 림프절 한 쌍의는 복부 대동맥에 인접한 식별에 대한 중간 신장 및 일반 장골의 동맥에 39의 기원 사이에 위치해 있습니다. 이러한 림프절은 시각 탄성 질감에 의해 지방 조직에서 구분할 수및 지방 조직 (그림 3)에 비해 컬러로 가볍고 더 불투명하고 있습니다. 이러한 림프절은 uninoculated 동물에 비해 감염된 동물에서 눈에 띄게 큰 있습니다. </li><li> 절제 후 임파선 노드에서 microforceps을 배치하여 노드 및 조직을 주변에서 분리 부드럽게 올려. </li></ol> 6. 단일 셀 정지에 림프 세포의 분리 <ol><li> 행크스 &#39;균형 소금 솔루션 ~ 10 ML (HBSS) (그림 4)를 포함하는 살균 유리 페트리 접시 내에 살균 철망 화면 (크기 약 3 X 3cm 2)로 림프절을 전송합니다. </li><li> 약간 경사 페트리 접시로, 주사기의 플런저 머리가 화면에 대한 림프절을 누르십시오. 노드의 비 세포 구성 요소 (즉, 세포막, 기질, 지방)가 화면에 남아있는 동안 노드의 휴대폰 내용이 화면에 통과되도록 모든 림프절을 휴식해야합니다. </li><li> 같은 플런저와 주사기, 기음 t를 사용그는 포함하는 세포를 HBSS. ~ 5 ML의 HBSS와 함께 화면을 씻고 15 ML 원뿔 관에 남아있는 유체를 수집합니다. </li><li> 10 분 800 XG에 원심 분리기. 유체 폐기하기 전에 피펫으로 유체의 상단에있는 지방 예금 기음. HBSS와 세포 펠렛을 세 번 씻으십시오. trypan 청색 색소 제외 의해 HBSS하고 열거 가능한 세포의 1 ML에 펠렛을 Resuspend. </li></ol> 7. 대표 결과 : &gt; 4 일 주사 생쥐에서 질 세척 유체의 세포 분수는 일반적으로 칸디다, 상피 세포 및 세포 infiltrates (그림 5)로 이루어져 있습니다. 축축한 마운트 현미경으로, 칸디다는 시각 균사의 존재뿐만 아니라 효모 (그림 5A)로 확인할 수 있습니다. 질 세척 유체의 비방 준비가 주요 세포 트라이 nucle 식별 neutrophils되어있는 상피 세포 침투 leukocytes을 검사 Papanicolaou 기술로 물들일 수있다AR 돌출부 (그림 5B). 거의 neutrophils가있는 경우, 41 uninoculated 생쥐 (그림 5C)에 감지됩니다. 질 곰팡이 부담의 예제는 그림 6에 표시됩니다. 특정 시간 지점에서 수집된 질​​ 세척 유체는 CFU 열거 (그림 6A)에 대한 양식입니다. 칸디다가 아닌 에스 트로겐 - 대우 주사 생쥐 (그림 6C)의 질 식민지를 확립하는 데 실패하면서 칸디다와 질 식민지 / 감염, 에스 트로겐 - 치료 주사 생쥐 (그림 6B)의 주간 지속. 에스 트로겐 - 처리 uninoculated 생쥐는 시간 (데이터가 표시되지 않음)을 통해 칸디다에 대한 부정적 남아있다. 또한, 질 lavages는 각 시점 또는 길이 방향 마취하에 동일한 생쥐에서 별도의 생쥐에 중 한 번만 수행할 수 있습니다. 허리 임파선은 성기 요로와 질 도전하는 체계 면역 응답을 평가할 수있는 가장 관련성이 높은 사이트의 기본 배수 림프절입니다. N그들은 일반적으로 uninoculated 생쥐에서 매우 작은 나타나는 반면 이러한 림프절은 주사 생쥐에 확대 될 수 ote. 백혈구 세포 recoveries는 일반적으로 8 일부터 다양한 × 10 5 / uninoculated 마우스로 5 × 10 6 / 주사를 마우스. 허리 림프절 이외에도, 사타구니와 오금 mesenteric 림프절도 사용할 수 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig1.jpg" /> 그림 1. 칸디다와 질 접종. A) 마우스 접종에 감금. 마우스는 와이어 케이지 삽입에 위치하고 약간 위쪽 다리를 들고와 질구를 노출, 꼬리의 기지에 의해 개최됩니다. 그것은 꼬리 구속에 저항하는 시도로 마우스의 엉덩이는 같은 손으로 안정 수 있습니다. 질 루멘에 inoculum의 B) 소개. 피펫 팁은 부드럽게 질 루멘에 깊이 5mm에 대한 삽입됩니다. 서스펜션 inoculum 그러면 입금됩니다. 그림 2. 질 조직 추출. 자궁 경부의 AB) 추출. 자궁 경부는 곡선 집게와 함께 위치하고 질 캐비티를 통해 밖으로 노출됩니다. 일단 밖으로 질 구멍의 자궁 경부가 더욱 완벽하게 음부 노출 밖으로 뽑아입니다. 질 C) 추출. 질은 가위로 외음부에서 excised 수 있습니다. 일단 분리된, 음부에서 자궁 경부를 제거합니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig3.jpg" /> 그림 3. 요추 림프절의 식별. 골반 주변에 주변 장기 / 혈관 중에서 요추 림프절의 위치가 표시됩니다. A, 복부 대동맥. B, 방광. C, 공통 장골의 동맥. 난 장의. L, 간. R, 직장. S, 비장. U, Uteri. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig4.jpg" /> 그림 4. 와이어 메쉬 화면에 배치 허리 림프절. 림프절은 HBSS있는 페트리 접시에 배치 화면에 풀링하고 있습니다. 림프절은 단일 셀 정지에 림프 세포를 얻기 위해 주사기의 플런저와 함께 화면에 대해 누르면됩니다. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig5.jpg" /> 그림 5. 주사 생쥐에서 질 세척 유체의 세포 분수. 질 세척 샘플) 습식 마운트 및 B) 자궁 세포진 검사의 준비는 uninoculated 생쥐에서) 사일 포스트 접종 및 C를 수집. 이미지는 1,000 × (A) 또는 400 × 표시됩니다 (B, C) 확대. B의 삽입은 1000 ×의 질 neutrophils의 핵 형태를 보여줍니다. 칸디다 효모 (Y)와 균사 (H), 상피 세포 (EC)와 neutrohils (N)이 표시됩니다. <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig6.jpg" /> 그림 6. 감지질 곰팡이 부담의 이온. A) C. albicans 대표의 식민지가 SDA의 접시에 성장. 여섯 가지 주사 생쥐 (맨 윗줄)에서 스트레이트 (N) 세척 샘플은 순차적으로 희석하여 CFU 열거를위한 교양되었습니다. B)에서 질 곰팡이 부담 부량 에스 트로겐 - 취급 C) 비 에스 트로겐 - 처리 쥐. 주사 생쥐에서 세척 유체의 CFU/100 μl는 지정된 시간 포인트에서 평가되었다.

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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+dendritic+cells+in+immunoregulation+during+experimental+vaginal+candidiasis.">A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).</li><li>McGrory, T., Garber, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+intravaginal+infection+with+Trichomonas+vaginalis+and+role+of+Lactobacillus+acidophilus+in+sustaining+infection.">Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection.</a> Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).</li><li>Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+mucosal+Candida+infection.">Animal models of mucosal Candida infection.</a> FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).</li><li>Nomanbhoy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaginal+and+oral+epithelial+cell+anti-Candida+activity.">Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity.</a> Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).</li><li>Pietrella, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+beta-glucan-conjugate+vaccine+and+anti-beta-glucan+antibodies+are+effective+against+murine+vaginal+candidiasis+as+assessed+by+a+novel+in+vivo+imaging+technique.">A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique.</a> Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).</li><li>Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+role+of+Lactobacilli+in+the+control+and+maintenance+of+the+vaginal+bacterial+microflora.">Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora.</a> Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).</li><li>Saavedra, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+production+of+chemokines+during+experimental+vaginal+candidiasis.">Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis.</a> Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).</li><li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+epidemiology+of+vulvovaginal+candidiasis.">Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).</li><li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+treatment+of+recurrent+vulvovaginal+candidiasis.">Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis.</a> Clin. Infect. Dis. 14, S148-S153 (1992).</li><li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vulvovaginal+candidiasis:+Epidemiologic,+diagnostic,+and+therapeutic+considerations.">Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).</li><li>Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+humoral+immune+responses+against+primary+and+repeat+Neisseria+gonorrhoeae+genital+tract+infections+of+17&#946;-estradiol-treated+mice.">Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17&#946;-estradiol-treated mice.</a> Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).</li><li>Taylor, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+virulence+of+Candida+albicans+isolates+causing+mucosal+infections+in+people+infected+with+the+human+immunodeficiency+virus.">In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus.</a> J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).</li><li>Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+Th1/Th2+cytokine+production+during+experimental+vaginal+candidiasis.">Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis.</a> Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).</li><li>Tirabassi, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mucosal+vaccination+approach+for+herpes+simplex+virus+type+2.">A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2.</a> Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).</li><li>Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+nomenclature+of+murine+lymph+nodes:+descriptive+and+nomenclatory+standardization+in+BALB/cAnNCrl+mice.">Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice.</a> J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).</li><li>Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+molecule+and+lymphocyte+activation+marker+expression+during+experimental+vaginal+candidiasis.">Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis.</a> J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).</li><li>Yano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell-derived+S100+calcium-binding+proteins+as+key+mediators+in+the+hallmark+acute+neutrophil+response+during+Candida+vaginitis.">Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis.</a> Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

칸디다 질염의 실험 마우스 모델, 설립 역사적 3,4,11,13,16,17,19,21,24 antifungal 요법을 테스트뿐만 아니라 칸디다에 점막 호스트 응답을 연구하기 위해 지난 몇 십년에 사용되고 있습니다 25,37. 프로토콜은 여기 효율적이고 덜 노동 집약적인 방법 통합, 그리고 칸디다 질염의 가장 최적화된 모델 시스템 중 하나가 날짜 설명한 것으로 나타날 제시. 이 기술은...

<table border="1"><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 여자 CBA / J 마우스 </td><td> 찰스 리버 연구소 </td><td> 01C38 </td><td> 나이 5-6주 </td></tr><tr><td> 칸디다 albicans (3153A) </td><td> 병원성 곰팡이 국립 수집, 영국 </td><td> NCPF3153 </td><td></td></tr><tr><td> 향유 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> S3547 </td><td> 사용하기 전에 미리 소독을 할 필요가 없다 </td></tr><tr><td> Β - estradiol 17 - valerate </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> E1631 </td><td> 참깨 기름에 0.1 - 0.5mg </td></tr><tr><td> Phytone 펩톤 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 211,906 </td><td> 0.1 % 포도당과 보충 </td></tr><tr><td> Trypan 푸른 솔루션 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> T8154 </td><td></td></tr><tr><td> 덱스 트로 오스 Sabouraud 한천 </td><td> Becton 딕inson </td><td> 211,584 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase 유형 IV </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> C5138 </td><td> 0.25 % </td></tr><tr><td> Dispase </td><td> Invitrogen </td><td> 17105-041 </td><td> 1.7 U / ML </td></tr><tr><td> 와이어 메쉬 스크린 </td><td> TWP </td><td> 060X060S0065W36T </td><td> 번호 60 메쉬, 스테인레스 </td></tr><tr><td> 행크스 &#39;균형 소금 솔루션 </td><td> Invitrogen </td><td> 24020-117 </td><td></td></tr><tr><td> CytoPrep 정착액 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 12-570-10 </td><td> 얼룩 슬라이드를 보존 </td></tr><tr><td> Papanicolaou는 EA - 65 얼룩 </td><td> EMD 화학 </td><td> 7054X 85 </td><td></td></tr><tr><td> Papanicolaou는 OG - 6 얼룩 </td><td> EMD 화학 </td><td> 7052X 85 </td><td></td></tr><tr><td> 해리스 &#39;명반의 hematoxylin </td><td> EMD 화학 </td><td> 638A - 85 </td><td></td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> 박스터 헬스케어 </td><td> NDC 10019-773-60 </td><td> isoflurane 기화기 또는 드롭 시스템에서 사용되는 마취 챔버 폐쇄 </td></tr></table>

protocols for vaginal inoculation and sample collection in the experimental mouse model of candida vaginitis

칸디다 종에 의한 Vulvovaginal 칸디다 증 (VVC)은, 그들의 생식 년 18,32-34 동안 달리 건강한 여성의 약 75 %에 영향을 미치는 낮은 여성의 성기 요로의 곰팡이 감염입니다. Predisposing 요인 항생제 사용, 통제 당뇨병 방해 생식 호르몬 수준에 임신으로 인해, 경구 피임약이나 호르몬 대체 요법 33,34을 포함합니다. 연간 세 개 이상의 에피소드로 정의된 재발성 VVC (RVVC)는없고 predisposing 요인 33 여성의 8 %를 별도의 다섯 영향을 미칩니다. VVC의 실험 마우스 모델은 설립 pathogenesis과 칸디다 3,4,11,16,17,19,21,25,37에 점막 호스트 응답을 연구하는 데 사용되었습니다. 이 모델은 또한 생체내 13,24 잠재적인 antifungal 치료를 테스트하기 위해 고용되었습니다. 모델 동물에 대한 선택 pseudoestrus의 상태로 유지합니다imal 칸디다 식민 / 감염 6,14,23. 이러한 조건에서, 주사 동물 개월 주 동안 질 곰팡이 부담을 감지합니다. 과거 연구는 면역 및 생리 특성 3,16,21에 상대적인 동물 모델과 인간 사이의 감염이 매우 높은 병렬을 보여줍니다. 차이점은, 그러나, 정상적인 질 식물로 칸디다의 부족과 생쥐의 중립 질 산도를 포함합니다. 여기에서 우리는 질 접종, 질 표본의 신속한 수집, 질 곰팡이 부담 평가 및 세포 추출 / 격리에 대한 조직 준비를 포함하는 마우스 질염 모델의 주요 방법의 일련 보여줍니다. 이것은 질 세척 유체, 곰팡이 부담, 그리고 배수 림프절의 백혈구의 수율의 성분에 대한 대표적인 결과는 다음입니다. anesthetics의 사용으로 세척 샘플의 길이 평가를 위해 같은 생쥐에 여러 시간 지점에서 수령 가능감염 / 식민지. 또한,이 모델은 정의된 호스트 조건 하에서 면역 연구를 허용, 감염을 시작하는 데 아무런 immunosuppressive 요원을 필요하지 않습니다. 마지막으로, 모델 및 각 기술은 여기에 잠재적으로 낮은 여성의 성기 요로 (바이러스성, 기생, 세균)과 각 지역 또는 체계 호스트 방어의 다른 감염증을 조사하는 방법론의 사용에 상승을 줄 수 소개했다.

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Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

평가에 사용되는 주요 기술<em&gt; 칸디다</em실험 동물 모델에서&gt; 질염이 설명되어 있습니다. 방법은 허리 림프절을 배수의 질 표본 및 lymphocytes의 급속한 컬렉션을하실 수 있습니다. 이 기술은 여성의 낮은 성기 요로에있는 다른 질병의 마우스 모델에 상승을 줄 수 있습니다.

의 실험 마우스 모델에서 질 접종 및 샘플 수집을위한 프로토콜 칸디다 질염

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

protocols-for-vaginal-inoculation-sample-collection-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

32.7K 조회수.  Louisiana State University Health Sciences Center. 평가에 사용되는 주요 기술 칸디다 질염이 설명되어 있습니다. 방법은 허리 림프절을 배수의 질 표본 및 lymphocytes의 급속한 컬렉션을하실 수 있습니다. 이 기술은 여성의 낮은 성기 요로에있는 다른 질병의 마우스 모델에 상승을 줄 수 있습니다.

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Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into mouse tail veins and colonize in the lungs, thereby, resembling the last steps of tumor cell spontaneous metastasis: survival in the circulation, extravasation and colonization in the distal organs. From a therapeutic point of view, the experimental metastasis model is the simplest and ideal model since the target of therapies is often the end point of metastasis: established metastatic tumor in the distal organ. In this model, tumor cells are injected i.v into mouse tail veins and allowed to colonize and grow in the lungs. Tumor-specific CTLs are then injected i.v into the metastases-bearing mouse. The number and size of the lung metastases can be controlled by the number of tumor cells to be injected and the time of tumor growth. Therefore, various stages of metastasis, from minimal metastasis to extensive metastasis, can be modeled. Lung metastases are analyzed by inflation with ink, thus allowing easier visual observation and quantification.

An experimental lung metastasis and CTL immunotherapy mouse model for analysis of tumor cells-T cell interaction in vivo.

실험 전이 및 CTL 입양 전송 Immunotherapy 마우스 모델

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

연구

면역학 및 감염병학

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1. It has traditionally been considered a rare disease but reporting has increased markedly in recent years. Hypophysitis, in fact, develops not uncommonly as a "side effect" in cancer patients treated with antibodies that block inhibitory receptors expressed on T lymphocytes, such as CTLA-42 and PD-1 receptors. Autoimmune hypophysitis can be induced experimentally by injecting mice with pituitary proteins mixed with an adjuvant3. In this video article we demonstrate how to extract proteins from mouse pituitary glands and how to prepare them in a form suitable for inducing autoimmune hypophysitis in SJL mice.

Autoimmune hypophysitis can be reproduced in mice by injecting an extract of mouse pituitary proteins.

실험 면역 Hypophysitis의 유도를위한 마우스 뇌하수체 Immunogen의 준비

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of 10 - 30% of adults. In immune-compromised individuals, including neonates, pregnant women, and the elderly, GBS may switch to an invasive pathogen causing sepsis, arthritis, pneumonia, and meningitis. Because GBS is a leading bacterial pathogen of neonates, current prophylaxis is comprised of late gestation screening for GBS vaginal colonization and subsequent peripartum antibiotic treatment of GBS-positive mothers. Heavy GBS vaginal burden is a risk factor for both neonatal disease and colonization. Unfortunately, little is known about the host and bacterial factors that promote or permit GBS vaginal colonization. This protocol describes a technique for establishing persistent GBS vaginal colonization using a single &#946;-estradiol pre-treatment and daily sampling to determine bacterial load. It further details methods to administer additional therapies or reagents of interest and to collect vaginal lavage fluid and reproductive tract tissues. This mouse model will further the understanding of the GBS-host interaction within the vaginal environment, which will lead to potential therapeutic targets to control maternal vaginal colonization during pregnancy and to prevent transmission to the vulnerable newborn. It will also be of interest to increase our understanding of general bacterial-host interactions in the female vaginal tract.

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

The purpose of this protocol is to imitate human group B Streptococcus (GBS) vaginal colonization in a murine model. This method may be used to investigate host immune responses and bacterial factors contributing to GBS vaginal persistence, as well as to test therapeutic strategies.

그룹 B의 쥐 모델<em&gt; 연쇄상 구균</em&gt; 질 식민

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the development and persistence of many health related infections. One of the most well described and studied biofilms in human disease occurs in chronic pulmonary infection of cystic fibrosis patients. When studying biofilms in the context of the host, many factors can impact biofilm formation and development. In order to identify how host factors may affect biofilm formation and development, we used a static chambered coverglass method to grow biofilms in the presence of host-derived factors in the form of sputum supernatants. Bacteria are seeded into chambers and exposed to sputum filtrates. Following 48 hr of growth, biofilms are stained with a commercial biofilm viability kit prior to confocal microscopy and analysis. Following image acquisition, biofilm properties can be assessed using different software platforms. This method allows us to visualize key properties of biofilm growth in presence of different substances including antibiotics.

This protocol describes the visualization of biofilm development following exposure to host-factors using a slide chamber model. This model allows for direct visualization of biofilm development as well as analysis of biofilm parameters using computer software programs.

챔버의 coverglass 모델을 사용하여 바이오 필름 개발에 객담의 효과를 시각화

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of their morbidity. The liver immunopathology caused by HIV-1 remains elusive. Small xenograft animal models with human hepatocytes and human immune system can recapitulate the human biology of the disease&#39;s pathogenesis. Herein, a protocol is described to establish a dual humanized mouse model through human hepatocytes and CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells (HSPCs) transplantation, to study liver immunopathology as observed in HIV-infected patients. To achieve dual reconstitution, male TK-NOG (NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug Tg(Alb-TK)7-2/ShiJic) mice are intraperitoneally injected with ganciclovir (GCV) doses to eliminate mouse transgenic liver cells, and with treosulfan for nonmyeloablative conditioning, both of which facilitate human hepatocyte (HEP) engraftment and human immune system (HIS) development. Human albumin (ALB) levels are evaluated for liver engraftment, and the presence of human immune cells in blood detected by flow cytometry confirms the establishment of human immune system. The model developed using the protocol described here resembles multiple components of liver damage from HIV-1 infection. Its establishment could prove to be essential for studies of hepatitis virus co-infection and for the evaluation of antiviral and antiretroviral drugs.

This protocol provides a reliable method to establish humanized mice with both human immune system and liver cells. Dual reconstituted immunodeficient mice achieved via intrasplenic injection of human hepatocytes and CD34+ hematopoietic stem cells are susceptible to human immunodeficiency virus-1 infection and recapitulate liver damage as observed in HIV-infected patients.

HIV 관련 간 병인을 위한 이중 인간화 TK-NOG 마우스 모델 구축

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight loss, depreciation of the animals&#39; leather and also can act as a vector of several pathogens. Due to the exorbitant costs to control these parasites, damage to the environment caused by the inappropriate use of chemical acaricides, and the increased resistance against traditional parasiticides, alternative control of ticks, by the use of entomopathogenic fungi, for example, has been considered an interesting approach. Nevertheless, few studies have demonstrated how the tick&#39;s immune system acts to fight these entomopathogens. Therefore, this protocol demonstrates two methods used for entomopathogen inoculation into engorged females and two techniques used for hemolymph collection and hemocytes harvesting. Inoculation of pathogens at the leg insertion in the tick female&#39;s body allows evaluation of females biologic parameters unlike the inoculation between the scutum and capitulum, which frequently damages Gen&#233;&#39;s organ. Dorsal hemolymph collection yielded a higher volume recovery than collection through the legs. Some limitations of tick hemolymph collection and processing include i) high rates of hemocytes&#39; disruption, ii) hemolymph contamination with disrupted midgut, and iii) low hemolymph volume recovery. When hemolymph is collected through the leg cutting, the hemolymph takes time to accumulate at the leg opening, favoring the clotting process. In addition, fewer hemocytes are obtained in the collection through the leg compared to the dorsal collection, even though the first method is considered easier to be performed. Understanding the immune response in ticks mediated by entomopathogenic agents helps to unveil their pathogenesis and develop new targets for tick control. The inoculation processes described here require very low technological resources and can be used not only to expose ticks to pathogenic microorganisms. Similarly, the collection of tick hemolymph may represent the first step for many physiological studies.

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Analysis of tick hemolymph represents an important source of information on how some pathogens cause disease and how ticks immunologically respond to this infection. The present study demonstrates how to inoculate fungal propagules and collect hemolymph from Rhipicephalus microplus engorged females.

무척 추 병리학 연구를 향한 Rhipicephalus 마이크로 플러스 진드기에 Metarhizium 발 파 포자의 혈 림프 수집 및 접종을 공개

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight ...

Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus infection in mice. As alphaherpesviruses are main invaders of the peripheral nervous system (PNS), this model is suitable to characterize the kinetics of viral replication, its spread from the PNS to CNS, and associated neuroinflammatory responses. The footpad inoculation model allows virus particles to spread from a primary infection site in the footpad epidermis to sensory and sympathetic nerve fibers that innervate the epidermis, sweat glands, and dermis. The infection spreads via the sciatic nerve to the dorsal root ganglia (DRG) and ultimately through the spinal cord to the brain. Here, a mouse footpad is inoculated with pseudorabies virus (PRV), an alphaherpesvirus closely related to herpes simplex virus (HSV) and varicella-zoster virus (VZV). This model demonstrates that PRV infection induces severe inflammation, characterized by neutrophil infiltration in the footpad and DRG. High concentrations of inflammatory cytokines are subsequently detected in homogenized tissues by ELISA. In addition, a strong correlation is observed between PRV gene and protein expression (via qPCR and IF staining) in DRG and the production of pro-inflammatory cytokines. Therefore, the footpad inoculation model provides a better understanding of the processes underlying alphaherpesvirus-induced neuropathies and may lead to the development of innovative therapeutic strategies. In addition, the model can guide research on peripheral neuropathies, such as multiple sclerosis and associated viral-induced damage to the PNS. Ultimately, it can serve as a cost-effective in vivo tool for drug development.

The footpad inoculation model is a valuable tool for characterizing viral-induced neuroinflammatory responses in vivo. In particular, it provides a clear assessment of viral kinetics and associated immunopathological processes initiated in the peripheral nervous system.

바이러스 유발 신경 염증 반응을 연구하는 마우스 풋패드 접종 모델

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus ...

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular inflammatory disease model recapitulate the clinical phenotype of posterior uveitis affecting humans. EAU has been used reliably to study the efficacy of novel inflammatory therapeutics, their mode of action and to further investigate the mechanisms that underpin disease progression of intraocular disorders. Here, we provide a detailed protocol on EAU induction in the C57BL/6J mouse - the most widely used model organism with susceptibility to this disease. Clinical assessment of disease severity and progression will be demonstrated using fundoscopy, histological examination and fluorescein angiography. The induction procedure involves subcutaneous&#160;injection of an emulsion containing a peptide (IRBP1-20) from the ocular protein interphotoreceptor retinoid binding protein (also known as retinol binding protein 3), Complete Freund&#39;s Adjuvant (CFA) and supplemented with killed Mycobacterium tuberculosis. Injection of this viscous emulsion on the back of the neck is followed by a single intraperitoneal injection of Bordetella pertussis toxin. At the onset of symptoms (day 12-14) and under general anesthesia, fundoscopic images are taken to assess disease progression through clinical examination. These data can be directly compared with those at later timepoints and peak disease (day 20-22) with differences analyzed. At the same time, this protocol allows the investigator to assess potential differences in vessel permeability and damage using fluorescein angiography. EAU can be induced in other mouse strains - both wildtype or genetically modified - and combined with novel therapies offering flexibility for studying drug efficacy and/or disease mechanisms.

In this report we present a protocol that allows the investigator to generate a mouse model of intraocular uveitis. More commonly referred to as experimental autoimmune uveitis (EAU), this established model captures many aspects of human disease. Herein, we will describe how to induce and monitor disease progression using several readouts.

실험적 자가면역 포도막염: 안구내 염증성 마우스 모델

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

A Mouse Model of Chronic Liver Fibrosis for the Study of Biliary Atresia

Biliary atresia (BA) is a fatal disease involving obstructive jaundice, and it is the most common indication for liver transplantation in children. Due to the complex etiology and unknown pathogenesis, there are still no effective drug treatments. At present, the classic BA mouse model induced by rhesus rotavirus (RRV) is the most commonly used model for studying the pathogenesis of BA. This model is characterized by growth retardation, jaundice of the skin and mucosa, clay stools, and dark yellow urine. The histopathology shows severe liver inflammation and obstruction of the intrahepatic and extrahepatic bile ducts, which are similar to the symptoms of human BA. However, the livers of end-stage mice in this model lack fibrosis and cannot fully simulate the characteristics of liver fibrosis in clinical BA. The presented study developed a novel BA mouse model of chronic liver fibrosis by injecting 5-10 &#181;g of anti-Ly6G antibody four times, with gaps of 2 days after each injection. The results showed that some of the mice successfully formed chronic BA with typical fibrosis after the time lapse, meaning these mice represent a suitable animal model for the virus-induced liver fibrosis mechanistic study of BA and a platform for developing future BA treatments.

We established a mouse model of chronic liver fibrosis, which provides a suitable animal model for the virus-induced liver fibrosis mechanistic study of biliary atresia (BA) and a platform for future BA treatments.

담도 폐쇄증 연구를 위한 만성 간 섬유증의 마우스 모델

Biliary atresia (BA) is a fatal disease involving obstructive jaundice, and it is the most common indication for liver transplantation in children. Due to ...

Procedure for Swine Burn Wounding, Burn Wound Imaging, Wound Inoculation, and Biopsy Collection

To begin the procedure inside the properly arranged surgery room, place the anesthetized pig in the sternal recumbency position, and ensure all the connected lines and tubes are secured. Remove any residual hairs from the shaved area designated for wounding using hair removal cream. After sterilizing the wound sites, mark the area using a sterile burn template and a surgical skin marker.Set the burner by adjusting the set point on the control unit to 150 degrees celsius. The low set point to 145 degrees Celsius and the high set point to 155 degrees Celsius. Using a heated stainless steel blocks connected to the burn device, create a full thickness burn wound by placing the blocks on the skin for 60 seconds.Take a digital photo of the whole back of the pig, including a placard with the pig's identification time point and date. Then separately take images for each wound along with a ruler and a placard displaying the pig ID, wound ID and time point. To assess the wound microvascular perfusion in real time using laser speckle imaging or LSI, image all the wounds in a single recording using a LASCA blood perfusion imager.To measure trans epidermal water loss or TEWL, place a clean probe cover over the TEWL probe tip, which will be in contact with the wound tissue. Measure each wound five times, first in the center, followed by each corner. Then export all the readings to a spreadsheet.Perform a harmonic ultrasound or HUSD mapping by scanning the wound with an ultrasound probe from the midline or vertebral column, starting from normal skin and moving towards the lateral side of the pig over the wounds until the normal skin is again reached. Follow the scanning pattern for each wound in both B mode and tissue elastography mode. Change the annotation after each wound is imaged in both B mode and elasto mode, which is two recordings per wound.Once all the imaging is complete, cover the burn wounds individually with transparent film dressings or the test dressing. Then place a larger transparent film dressing over the entire wound area. Apply a second layer of roll gauze loosely around the entire trunk of the pig to absorb any fluid exuding from the wounds.Cover the gauze loosely with a layer of flexible elastic bandage. Cover the elastic bandage with a final layer of four inch elastic tape. After discontinuing the anesthetic gas upon completion of the bandaging, allow the pig to remain on oxygen for at least five minutes.To inoculate the burn wounds on day three post burn, disperse the inoculum across the surface of the exposed wounds using a pipette, and spread it evenly using a disposable spreader. To collect the tissue biopsies for analysis following imaging, infiltrate the area around the wound with 0.5%bupivacaine. Using a disposable scalpel with a size 10 blade, cut a 3-4 millimeter wide strip from one edge of the wound to the other, keeping small margins of normal skin on both sides.Cut a 6 millimeter punch biopsy from the wound either from the wound bed or wound edge. Achieve hemostasis after the samples are collected by gently pressing the wound with a sterile gauze. Cover the wound with a non-adherent dressing and bandage it as demonstrated previously.Analysis of the biopsy sample by hematoxylin and Eosin staining showed distortion and necrosis of all the histological skin layers. The established biofilm was further validated at day seven post inoculation by colony forming unit. Scan the electron microscopy imaging, and immunofluorescence staining.The burn wounds showed a thick biogenic membrane on the wound surface by day seven post inoculation, confirming the infection and establishment of biofilm. The wound area started to shrink by day 14, but incomplete healing to about 25%of the original wound size was observed by day 56 indicating wound chronicity. Wound chronicity and impaired wound healing were further confirmed by the TEWL showing high trans epidermal water loss at all measured time points.This was also confirmed by the suppression of the tight junctional proteins, ZO-1 and 2, and the impaired restoration of skin barrier function.