この作品は、米国糖尿病協会（ADA）、グラントJF1-10-14（MDiF）によって資金を供給された。我々はWSUでの動物資源学研究室の職員に感謝します。作者は感謝してニール·ペイトンは、博士からのデータの統計分析と支援を認める

マウスとラットのTNTsは、増分ホットプレート鎮痛メーター[iHPAM、IITC株式会社ライフサイエンス（ウッドランドヒルズ、カリフォルニア州）]を使用することによって決定されます。上記の下に暖房システムのアルミプレート（10×20 cm）とプレキシグラス観測室、熱制御部、データ集録（IITCパーツ＃ソフトシリーズ8）のソフトウェア、（個人PC：装置は、複数のコンポーネントで構成されコンピューター）とリモートスタートのフットスイッチは、ユニットの制御を停止したり、リセットします。加熱システムは、機器の前面のキーパッドを使用して手動で加熱プロセスの起動/停止/リセットできます。 iHPAMは、様々な加熱速度、スタンバイ/オフ温度に設定することができます。 1。機器のセットアップ<ol><li>動物をテストする前に、視覚的に選択された昇温速度（ 例えば 、6°C /分）、最初のスタンバイと最後のカットオフ温度（ 例えば 、28°Cと55それぞれ°C）、確証するためにユニットを点検します。 </li><li>すべての接続を確認します。結果の電子コピーを維持するために、ユニットがソフトウェアシリーズ8を実行しているコンピュータに接続する必要があります。また、結果のハードコピーは、ユニットのシリアルポートを介して印刷することができます。 </li><li>機器をテストします。最初のスタンバイ、最後のカット​​温度とカットオフ温度に到達するために必要な時間（秒単位）：ソフトウェアシリーズ8レコードがデータを確認するために一度フットスイッチを押してください。 </li><li>さらに、対照試験として、実験に関わる研究者は自分自身でデバイスを経験する必要があります。痛み知覚の瞬間（46-48℃）で金属板から手を撤回することも肌に害を及ぼさないも、それ以降の不快感を生成する必要があります。 </li><li>ユニットがセットされ、ステップ1.3と1.4の結果が記録されていたら、それらを比較することができます。これは、ユニットの使用を無効にする可能性のある潜在的な問題を検出すると便利です。例えば、最初の最後のスタンバイ/カットオフテンペの間の不一致raturesと実際のユニットの読み取り、および/またはユニットと手撤退に必要な実際のプレート温度で表示される温度の違い。 </li></ol> 2。正常な動物のテスト任意の遺伝的背景や性別のいずれか若い大人Wistarラット[産後（P）年齢21から25日間]、またはマウス（P21-25）を使用することができる。私たちの実験で用いたマウスは、ひずみC57BL/6Jのものです。 <ol><li>実験を実行する前の晩、iHPAMが配置されているベンチに彼らのケージを置くことによって、動物を順応させる。テストを実行する前に2時間、ユニットのバックグラウンドノイズを持つ動物を理解するためにiHPAMをオンにします。この時点で、iHPAMを設定し、（ステップ1を参照 ）、適切な機能を検証するためにテストすることができます。食料と水は、動物（ステップ2.1 参照 ）の観測室にある場合を除いて、試験全体で広告を自由に提供されています。 注：IMPで行動実験における実験条件は、デフォルトで制御されていることを前提としないortant。特別な注意が行動の研究（7日 ）の結果に影響を与える可能性がある遺伝的要因と環境要因に支払わなければなりません。 </li><li>静かに装置の加熱板の上にプレキシガラス観測室における通常のマウス/ラットを配置します。動物が快適な動作が表示されるまで動物が温め表面温度（℃28℃設定）に順応することができます。 注：この条件下では正常成体ラットのスニッフィングながら、時折観察チャンバーの蓋に向かって立って、最初の探索行動を示しています。数分後、ラットは、グルーミングのカジュアルな発作とリラックスした挙動を示す可能性があります。さりげなく周囲を嗅ぎながら、時には、ラットはリラックスした身体の姿勢（しやすい拡張子）で横たわっていた。通常のマウスには、通常のラットよりもアクティブになっています。しかし、マウスは、私が数分後にリラックスした探索行動を示す観察室をnである。エスケープ行動（ 例えば 、観察室から脱出しようとすると、ジャンプ）や守備的な態度（ 例えば 、キーンという音）のいずれかを観察するために非常に稀である。マウスは、マウスを一回から別の8に痛みを伝えることができることに注意することも重要です。したがって、それは別のケージに置かれたマウスをテストすることが重要かもしれません。 </li><li>すべての角度で観測を可能にするために、観測室の後ろにミラーを配置します。デジタルビデオカメラを保持している三脚はnocifensive（痛みは避けること）の動作が発生したときの正確な瞬間を決定する助けになるかもしれません。 </li><li>一度動物がフットスイッチを押すことによって、プレート上の観測室の熱で快適です。プレートの温度が6℃/分の速度でヒートアップする場合は、通常の動物は、いずれかの後肢足を含むnocifensive挙動を示す46から48°C 3,5,9,10に荒れ狂う*通常の温度。したがって、動物はobserv典型的な削除フォームです。約3分後にation室。 注：振とうしながら、舐める後肢足、ラットやマウス、すなわち典型的なnocifensive応答を観察し、そして/またはリフトは、熱刺激を終了するのに十分です。これは、フットスイッチを押すことによって達成されます。この時点で、ソフトウェアは、プレートの温度を記録し、プレートはすぐにスタンバイ温度（28℃）まで冷却する（〜0.5分）に達しています。この温度すなわち 、任意のnocifensive反応を呼び起こすものが通常の（コントロール）動物の有害な熱のしきい値（TNT）と見なされます。 *場合によっては、特にマウスでは、有害な温度にnocifensive動作は最初の1つまたは両方の前足（ 例えば 、座って舐める）で観察することができ、数秒後肢足前。しかし、フォア足舐めはグルーミング行動の正常なコンポーネントです。したがって、唯一の後肢足反応が評価されています。機会マウスだけでなく彼らの後肢足をグルーミング可能性があります。しかし、通常のグルーミングは、nを行う数秒以上続くOT、なめて集中的に関与しないと、通常、その爪を洗浄した後終了します。 </li><li>静かにプレートから動物を削除し、それぞれのケージに入れてください。熱のしきい値の測定は、他のコントロール（正常な）動物に対して繰り返されます。 注：TNTsは観察室から動物を削除せずに1〜2分間隔で単一の動物で決定することができます。ラットやマウスでTNTの決定は、数日中に数回繰り返すことができます。これは、個々の動物と同様に年齢とともに、その変動の平均TNTを決定する場合に特に便利です。 </li><li>対照動物のTNTは、3つ以上のしきい値の平均±SEMとして表されます。 </li><li>得られたデータの統計分析は、マウスやラットの異なる治療群を比較するために実行されます。データが正規分布している場所と治療群ではホモどこ分散分析を含むパラメトリック手順が適切に使用することができskedastic、これらの条件は、次のアプローチを適用することができ満足しています。複数の測定、すなわちの違いを検出するために、ニューマン·クールズ検定に続く分散分析は、治療せずに、または別の時点（ 例えば、 図3のデータ）で/で個々のTNTsを繰り返した。ペアスチューデント t-検定は、2つのデータグループ、すなわち 、薬物治療後の対前TNTsを比較するために使用されるかもしれません。t-検定対は、車両処理動物（ 例えば対薬物治療におけるTNTの変化の違いを決定するために用いることができる、 図4のデータ）。 </li></ol> 3。糖尿病動物のテストストレプトゾトシン（STZ）誘発糖尿病ラットでは、PDNのメカニズムを研究し、鎮痛薬や治療法11,12を評価する最も一般的に使用される動物モデルである。ラットはSTZの単回腹腔内投与（60 mg / kg）の缶bによって糖尿病を作ったeは、糖尿病11の発症後第3週の間に熱痛覚過敏のためにテストされています。すべての糖尿病ラットはPDNを開発することに注意することは重要です。しかし、痛覚過敏を（〜50％）を開発しない動物が容易に識別することができます。確かに、彼らのTNTsは、通常の*よりも低い。 * 15の開始プレートの温度をSTZ-糖尿病ラットのTNTsを判別するには°Cの代わりに、28°Cが使用されます。これらの変更の理由は、PDNで最も糖尿病の動物は2,11痛覚過敏になると予想されます。したがって、彼らは通常の有害な熱のしきい値より低くなければなりません（ 例えば、&lt;45°C）。 <ol><li>糖尿病ラットは、試験装置の上に観測室に配置されます。動物は、動物が快適な動作が表示されるまでプレートの表面に順応するために許可されています。 注：通常、糖尿病ラットは正常な動作の多くが表示されません。糖尿病ラットでは、無気力、通常減弱であり、頻繁に表示制限された動きをゆっくりとグルーミング。それは、観測室の蓋に向かって順位を観察することは稀である。数分後に、糖尿病ラットは冷静にカジュアルな周囲のスニッフィングと室の隅に残ることがあります。 </li><li>糖尿病の動物が観察室で快適になると糖尿病ラットは後肢/フォア·足のいずれかを含むnocifensive現象が発生することがありますステップ2.3のように、プレートは加熱されています。これは通常、非有害なプレート温度（ 例えば 、&lt;45°C）において、または6℃/ minで温度上昇したチャンバー内では5分後に発生します。 注：若い成人の糖尿病ラットのnocifensive応答は正常ラットのそれとは異なることはありません。しかし、このような行動を喚起する最低温度が著しく低下します。 </li><li>ステップ2.4​​を参照してください。 </li><li>実験の日以上の3つのしきい値の平均値は°C±SEMはdiabetiの有害な熱のしきい値とみなされますように表さcの動物。 注：同様のパラダイム正常または糖尿病ラットで説明したものには、熱しきい値の鎮痛剤の熱反nocifensive効果を決定するために追跡することができる。 </li></ol> 4。テスト鎮痛薬の抗侵害受容特性（ 例えば、鎮痛薬）と同様に、最小有効用量として薬理学的パラメータの決定が容易に上述した手順を使用して取得することができます。それはラット/マウスに投与した鎮痛薬の適切な用量が大幅にTNTsを増加させるだろうと予測されています。これは、温熱性痛覚過敏3動物に特に敏感である。しかし、結果の解釈にバイアスを避けるために、動物の群の行動観察に関わる研究者は知っているかに注意して動物が扱われていた場合、またはしないことはできません。さらに、観察者によって注入する薬剤は、他の研究者によって準備され、標識されていてもよいA、B、Cなど投与量は同定され、動物ごとに個々の用量を一覧表示、プリントアウトで提供されています。 テストされている薬剤に応じて、潜在的な鎮痛剤の異なる投与量が正常または糖尿病の動物は5-15分前に行動テストに投与することができる。適切なコントロールが含まれている（ すなわち、スタンドアロン、および/ ​​または糖尿病ラットPDNせずに車両を注入した年齢をマッチさせた動物）と（ 例えば、プレートと同じ開始温度）は、同じ条件を用いてテストする必要があります。薬の慢性影響も同様にテストすることができます。 5。代表的な結果若い成人の正常な非投与ラットやマウスの後肢足のいずれかでnocifensive反応を喚起最低プレート温度は、ステップ2-1〜2-6を決定した。 図1に示すように、通常の若い成人ラットとマウスのTNTは47.2であった±0.2℃、47.5±0.5℃であった。 我々はOBSEを持っている個人のTNTs（ 図2A）も同じ年齢の個体（ 図2B）の間でTNTsの重要な変更のrvedも重要な日常の変化。性別によるTNTの違い（ 図示せず ）が観察されなかった。 ヤングアダルトSTZ-糖尿病ラットのTNTsは、正常ラット（ステップ3.1から3.3）のと同様の方法で測定した。しかし、出発プレートの温度は15℃に設定したCの代わりに28℃のSTZ-糖尿病ラットのnocifensive動作は、個々に及び11日後にSTZ注射を開始し、毎日のファッションに少なくとも3回を評価した。 図3に示すように、STZ-糖尿病ラットのTNTの大幅な低下（p &lt;0.01）が明らかに二週間後のSTZ注射になります。 STZ-糖尿病ラットのTNTは45.6±0.1°C（N = 16、14から23日からプールされた値）であったことを意味。 ノーマよりも有意に低いTNTを示す糖尿病ラットlはPDNを持っていると考えられた。これらのラットは、鎮痛剤の急性抗侵害受容特性（化合物）をテストするために使用された。 TNTs 5分のテストの前に単独化合物又は車両の単回投与のいずれかを注入し、正常および糖尿病ラットで測定した。車両単独（45.6°C 対 47.6°C、それぞれ）を投与したラットと比較した場合、 図4に示すように、化合物の単一の腹腔内投与量は有意に糖尿病ラットのTNTsを増加させた。化合物の抗nocifensive効果は、正常ラットで観察された;有意（p &lt;0.01）、それはあまり顕著（47.4°C 対 48.0°C、それぞれ）であったものの、 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig1.jpg" /> 図1。正常な若年成人のラットまたはマウスのTNTsの決定：若年成人ラット（P21-24）またはマウスのTNTs（P20-21）はABO概説した手順に従ってiHPAMで試験したVE。 12匹と25匹のマウスの合計がテストされました。測定は数日中に実行し、その結果をプールした。結果は平均値±SEMとして表されます。これらのラットに記録されている最小値と最大TNTの値は46.2°Cと48.6°Cそれぞれであった。マウスの場合には、記録された最大値と最小TNT値は、それぞれ、48.8°Cと44.9°Cであった。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig2.jpg" /> 図2。ラットおよびマウスのTNTsの年齢依存性：）プロットは5日の間に少なくとも1日3回決定21日齢の4正常ラット（n = 4）でのTNTsあるB）マウスのTNTsが示された時に一度決定同腹。年齢。各測定点の上に数字が使用される同腹子の数を表します。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig3.jpg" /> 図3。糖尿病ラットでは、我々は痛覚過敏3になる糖尿病の発症後EKS：6（n = 6）の時代にマッチヤングアダルトSTZ-糖尿病ラットのTNTsは11日、糖尿病の誘導後出発毎日測定した。示すように毎日のTNTの平均値（平均±SEM）である。 11から13日後のSTZ注射の間で決定糖尿病TNTsは正常範囲（赤線）内であった。 STZ注入TNTsは45.1に有意に減少した二週間後に±0.4°C、（P &lt;0.05）。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig4.jpg" /> 図4。 STZ-糖尿病ラットにおける化合物Bの急性抗nocifensive効果。若年成人正常ラット（青群n = 12）と、年齢はSTZ-糖尿病痛覚過敏ラット（グリーングループはn = 6）車両の腹腔内注射した後iHPAMでテストされたマッチ（暗いバー）または化合物（ライトバー）。それぞれの治療（車両制御または化合物処理）の平均TNT±SEMを示す。アスタリスク（*）は、統計的な差異を示すた（p &lt;0.05）。

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我々は、これらの実験で使用した鎮痛薬の身元を開示しないことを決めた。ここに示されている結果の一部は、米国糖尿病学会（サンディエゴCA）と糖尿病の研究のためのヨーロッパ協会の第 47 回年次総会（リスボン、ポルトガル）の71 世紀の科学セッションで発表されています。

同様に、熱痛覚過敏4,13を定量化するための典型的なホットプレート試験に、ここで説明する痛覚のアッセイは、ラットおよびマウスのnocifensive挙動を定量化するための高速かつ信頼性の高い方法を可能にします。しかし、古典的なテストに反し、増分ホットプレート法は、非侵襲的、実質的にストレスフリーです。いくつかの抑制（ すなわち 、動物は観察室である必?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 名 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>増分ホットプレート鎮痛メーター</td><td> IITC（株）ライフサイエンス</td><td>パーツ＃PE34 </td></tr><tr><td>ソフトシリーズ8 </td><td> IITC（株）ライフサイエンス</td><td>パーツ＃Series8 </td></tr><tr><td>ストレプトゾトシン</td><td>カルビオケム</td><td> 572201 </td></tr></tbody></table>

rapid determination of the thermal nociceptive threshold in diabetic rats

痛みを伴う糖尿病性神経障害（PDN）は、通常無害な刺激を1に痛覚過敏すなわち 、有害な刺激に対する感受性の増加、および異痛症、すなわち過敏症によって特徴付けられる。痛覚過敏とアロディニアは、糖尿病2のさまざまな齧歯類モデルで研究されている。しかし、Bölcskei ら 、動物モデルでの&quot; 痛み &quot;の決定で述べたように、その主観的性質3のために挑戦されています。また、有害な熱刺激に対する行動反応を決定するために使用される伝統的な方法は、通常、再現性および薬理学的感度3を欠いている。例えば、Ankier 4のホットプレート法を用いて、尻込み、引きこもり、そして/または、どちら後肢および/ ​​またはフォア足の舐めは、一定の高い熱刺激（52から55℃）で反射潜時のように定量化されます。しかし、熱刺激に対する痛覚過敏な動物では、再現性の違いを再表示されませんそれらの閾上温度3,5を使用してFlexの待ち時間。 Bölcskei らの最近記載の方法。6として、手順はここで説明したマウスとラットの熱侵害受容閾値（TNTs）の迅速、高感度で再現性の測定を可能にします。メソッドは、マウス/ラットの足底表面の皮膚に主に適用され徐々に増加し熱刺激を使用しています。メソッドは、PDNとして痛覚過敏状態の間、抗侵害受容を研究するために特に敏感である。怒鳴る説明する手順は、Almási ら 5Bölcskei ら 3で詳細に公開されたものに基づいています。ここで説明する手順は、実験動物のケアを承認し、委員会（LACUC）、ライト州立大学を使用しています。

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Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

ここでは、ラットやマウスはnocifensive動作を示している最低温度を決定するための迅速な信頼性と簡単な手順を説明し、<em&gt;つまり、</em&gt;<em&gt;熱侵害受容閾値</em&gt;（TNT）。このメソッドは、動物への最低限のがあれば、ストレスTNTsの正確で再現性の推定を可能に徐々に増加し熱刺激を適用します。

糖尿病ラットの熱侵害受容閾値の迅速定量

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity ...

rapid-determination-thermal-nociceptive-threshold-diabetic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

27.4K ビュー.  Wright State University. ここでは、ラットやマウスはnocifensive動作を示している最低温度を決定するための迅速な信頼性と簡単な手順を説明し、つまり、熱侵害受容閾値（TNT）。このメソッドは、動物への最低限のがあれば、ストレスTNTsの正確で再現性の推定を可能に徐々に増加し熱刺激を適用します。

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A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

ラットのショ糖の渇望のインキュベーションを評価するための一般的な方法

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

神経科学

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of thermal nociceptors1,2 while the second involves a wholesale (global) activation of most or all such neurons3. Together, these techniques allow visualization and quantification of the behavioral functions of Drosophila nociceptive sensory neurons.
The Drosophila larva is an established model system to study thermal nociception, a sensory response to potentially harmful temperatures that is evolutionarily conserved across species1,2. The advantages of Drosophila for such studies are the relative simplicity of its nervous system and the sophistication of the genetic techniques that can be used to dissect the molecular basis of the underlying biology4-6 In Drosophila, as in all metazoans, the response to noxious thermal stimuli generally involves a "nocifensive" aversive withdrawal to the presented stimulus7. Such stimuli are detected through free nerve endings or nociceptors and the amplitude of the organismal response depends on the number of nociceptors receiving the noxious stimulus8. In Drosophila, it is the class IV dendritic arborization sensory neurons that detect noxious thermal and mechanical stimuli9 in addition to their recently discovered role as photoreceptors10. These neurons, which have been very well studied at the developmental level, arborize over the barrier epidermal sheet and make contacts with nearly all epidermal cells11,12. The single axon of each class IV neuron projects into the ventral nerve cord of the central nervous system11 where they may connect to second-order neurons that project to the brain.
Under baseline conditions, nociceptive sensory neurons will not fire until a relatively high threshold is reached. The assays described here allow the investigator to quantify baseline behavioral responses or, presumably, the sensitization that ensues following tissue damage. Each assay provokes distinct but related locomotory behavioral responses to noxious thermal stimuli and permits the researcher to visualize and quantify various aspects of thermal nociception in Drosophila larvae. The assays can be applied to larvae of desired genotypes or to larvae raised under different environmental conditions that might impact nociception. Since thermal nociception is conserved across species, the findings gleaned from genetic dissection in Drosophila will likely inform our understanding of thermal nociception in other species, including vertebrates.

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of thermal nociceptors1,2 while the second involves a wholesale (global) activation of most or all such neurons3. Together, these techniques allow visualization and quantification of the behavioral functions of Drosophila nociceptive sensory neurons.

に温痛覚を評価するためのローカルおよびグローバルメソッド<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;幼虫

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of ...

Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular mechanisms underlying both phenomena are not well understood and their elucidation should benefit from the study of animal models and from the design of appropriate experimental protocols. 
We describe here a methodological approach for inducing, recording and quantifying morphine-induced hyperalgesia as well as for evidencing analgesic tolerance, using the tail-immersion and tail pressure tests in wild-type mice. As shown in the video, the protocol is divided into five sequential steps. Handling and habituation phases allow a safe determination of the basal nociceptive response of the animals. Chronic morphine administration induces significant hyperalgesia as shown by an increase in both thermal and mechanical sensitivity, whereas the comparison of analgesia time-courses after acute or repeated morphine treatment clearly indicates the development of tolerance manifested by a decline in analgesic response amplitude. This protocol may be similarly adapted to genetically modified mice in order to evaluate the role of individual genes in the modulation of nociception and morphine analgesia. It also provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to improve opiate analgesic efficacy.

We describe a protocol to examine the development of opioid-induced hyperalgesia and tolerance in mice. Based on the measurement of thermal and mechanical nociceptive responses of na&#239;ve and morphine-treated animals, it allows to quantify the increase in pain sensitivity (hyperalgesia) and decrease in analgesia (tolerance) associated with chronic opiate administration.

熱的·機械的侵害受容性モダリティを用いて、マウスにおけるモルヒネ誘発痛覚過敏および鎮痛耐性の評価

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

における自発運動量の測定<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin (5-hydroxytryptamine; 5-HT) syndrome. This hypothesis can be tested using in situ hybridization to detect the serotonin 5-HT2A receptor gene htr2a. In the past, such procedures, utilizing radioactive riboprobe, were difficult because of the complicated workflow that needs several days to perform and the added difficulty that the technique required the use of fresh frozen tissues maintained in an RNase-free environment. Recently, the development of short oligonucleotide probes has simplified in situ hybridization procedures and allowed the use of paraformaldehyde-prefixed brain sections, which are more widely available in laboratories. Here, we describe a detailed protocol using non-radioactive oligonucleotide probes on the prefixed brain tissues. Hybridization probes used for this study include dapB (a bacterial gene coding for dihydrodipicolinate reductase), ppiB (a housekeeping gene coding for peptidylprolyl isomerase B), and htr2a (a serotonin gene coding for 5-HT2A receptors). This method is relatively simply, cheap, reproducible and requires less than two days to complete.

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

This protocol describes a rapid and simplified in situ hybridization method ideal forparaformaldehyde-prefixed brain, thus reducing the need for prolonged complex steps while using fresh frozen tissues. The method is validated using the identification of the serotonin 5-HT2A receptor gene htr2a in rats.

ラピッド<em&gt;その場で</emセロトニン症候群のラットのパラホルムアルデヒド接頭辞脳にオリゴヌクレオチドプローブを使用して&gt;ハイブリダイゼーション

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin ...

Measurement &amp; Analysis of the Temporal Discrimination Threshold Applied to Cervical Dystonia

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being asynchronous (typically 30-50 ms). It has been shown to be abnormal (prolonged) in neurological disorders, including cervical dystonia, a phenotype of adult onset idiopathic isolated focal dystonia. The TDT is a quantitative measure of the ability to perceive rapid changes in the environment and is considered indicative of the behavior of the visual neurons in the superior colliculus, a key node in covert attentional orienting. This article sets out methods for measuring the TDT (including two hardware options and two modes of stimuli presentation). We also explore two approaches of data analysis and TDT calculation. The application of the assessment of temporal discrimination to the understanding of the pathogenesis of cervical dystonia and adult onset idiopathic isolated focal dystonia is also discussed.

Methods for the measurement and analysis of the temporal discrimination threshold are presented, and its application to the study of the pathogenesis of cervical dystonia are discussed.

測定・頸部ジストニアに適用される時間の弁別閾値の解析

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being ...

Rapid and Specific Immunomagnetic Isolation of Mouse Primary Oligodendrocytes

The efficient and robust isolation and culture of primary oligodendrocytes (OLs) is a valuable tool for the in vitro study of the development of oligodendroglia as well as the biology of demyelinating diseases such as multiple sclerosis and Pelizaeus-Merzbacher-like disease (PMLD). Here, we present a simple and efficient selection method for the immunomagnetic isolation of stage three O4+ preoligodendrocytes cells from neonatal mice pups. Since immature OL constitute more than 80% of the rodent-brain white matter at postnatal day 7 (P7) this isolation method not only ensures high cellular yield, but also the specific isolation of OLs already committed to the oligodendroglial lineage, decreasing the possibility of isolating contaminating cells such as astrocytes and other cells from the mouse brain. This method is a modification of the techniques reported previously, and provides oligodendrocyte preparation purity above 80% in about 4 h.

We describe the immunomagnetic isolation of primary mouse oligodendrocytes, which allows the rapid and specific isolation of the cells for in vitro culture.

マウスの主なオリゴデンドロ サイトの特異的・迅速免疫分離

The efficient and robust isolation and culture of primary oligodendrocytes (OLs) is a valuable tool for the in vitro study of the development of ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided here is a protocol for successfully establishing a rat model of acute pontine infarction. Rats weighing about 250 g are used, and a probe with an insulated sheath is injected into the pons using a stereotaxic apparatus. A lesion is produced by the electrical stimulation with a single pulse. The Longa score, Berderson score, and beam balance test are used to assess neurological deficits. Additionally, the adhesive-removal somatosensory test is used to determine sensorimotor function, and the limb placement test is used to evaluate proprioception. MRI scans are then used to assess the infarction in vivo, and TTC staining is used to confirm the infarction in vitro. Here, a successful infarction is identified that is located in the anterolateral basis of the rostral pons. In conclusion, a new method is described to establish an acute pontine infarction rat model.

Presented here is a protocol for establishing acute pontine infarction in a rat model via electrical stimulation with a single pulse.

電気刺激によるラットにおける急性ポンチン梗塞の確立

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) occlusion of the middle cerebral artery (MCA) using a catheter. This generally accepted technique, however, has some limitations, thereby limiting its extensive use. Stroke induction by this method is often characterized by high variability in the localization and size of the ischemic area, periodical occurrences of hemorrhage, and high death rates. Also, the successful completion of any of the transient or permanent procedures requires expertise and often lasts for about 30 minutes. In this protocol, a laser irradiation technique is presented that can serve as an alternative method for inducing and studying brain injury in rodent models.
When compared to rats in the control and MCAO groups, the brain injury by laser induction showed reduced variability in body temperature, infarct volume, brain edema, intracranial hemorrhage, and mortality. Furthermore, the use of a laser-induced injury caused damage to the brain tissues only in the motor cortex unlike in the MCAO experiments where destruction of both the motor cortex and striatal tissues is observed.
Findings from this investigation suggest that laser irradiation could serve as an alternative and effective technique for inducing brain injury in the motor cortex. The method also shortens the time for completing the procedure and does not require expert handlers.

The protocol presented here shows a technique to create a rodent model of brain injury. The method described here uses laser irradiation and targets motor cortex.

ラットの運動皮質におけるレーザー誘発脳損傷

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Induction of Diffuse Axonal Brain Injury in Rats Based on Rotational Acceleration

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability. Diffuse axonal injury (DAI) is the predominant mechanism of injury in a large percentage of TBI patients requiring hospitalization. DAI involves widespread axonal damage from shaking, rotation or blast injury, leading to rapid axonal stretch injury and secondary axonal changes that are associated with a long-lasting impact on functional recovery. Historically, experimental models of DAI without focal injury have been difficult to design. Here we validate a simple, reproducible and reliable rodent model of DAI that causes widespread white matter damage without skull fractures or contusions.

This protocol validates a reliable, easy-to-perform and reproducible rodent model of brain diffuse axonal injury (DAI) that induces widespread white matter damage without skull fractures or contusions.

回転加速度に基づくラットにおけるびまん軸索脳損傷の誘導

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability. Diffuse axonal injury (DAI) is the predominant mechanism of injury in a large ...