この作品は、F共に葬り去ると退役軍人局（TSブラックウェル）に授与NIHの助成金CA113734によって賄われていた。

全ての動物実験は、バンダービルト大学機関動物実験委員会によって承認された。 1。トランスジェニックマウスを準備<ol><li> NGL（N F-κBG FP-L uciferase）レポーター遺伝子（以前に1に記載）陽性雌マウスは、この手順のために使用されます。女性は年齢の少なくとも6週間である場合、FVB野生型の雄でそれらを交配。繁殖は（1男性とケージ内の最大4匹）に使用されるかもしれませんハーレム。 （ご注意：FVB株マウスは現在の研究のために使用されたようなC57BL6と暗く系統マウスを用いてもよいが、これらのマウスは、前イメージングに剃らなければなりません。） </li><li> 15日後に交配から始まり、妊娠の兆候（大突出胴回り）を定期的にメスを確認してください。それぞれの女性は一度妊娠区切らなければなりませんし、最後の女性が妊娠したらオスは繁殖ケージから取り外す。 </li><li>分離された女性を見守るDごみが表示される誕生日をメモしておきます。少なくとも6仔のごみは、適切な授乳のために必要です。ごみの誕生8日後には、プロトコル（タイムラインの概略図は図1を参照）に進みます。 </li></ol> 2。注射用製剤<ol><li> 大腸菌を溶解0.1μg/μLのの最終濃度にPBS中大腸菌 LPS。この溶液に、または5μgの合計50μlを、乳腺に注入される。制御インジェクションに使用するPBS単独の第二の管を準備します。 </li><li>解剖の範囲及びイソフルラン麻酔機器をセットアップします。ノーズコーン装置は、マウスが置かれる解剖スコープのステージに固定する必要があります。良い光源は、スコープ自体から、または余分なスポットライトからかどうかも準備する必要があります。 </li><li>セットアップが完了すると、イソフルランマシンと空気の流れを開始する。 </li></ol> 3。 LPSの管内注射<ol><li> LPS溶液50μlと短い針の注射器をロードします。さておき、これを設定してください。 </li><li>呼吸が遅くれた後に、マウスが最初にイソフルラン埋めボックスに女性を配置することによって、注入する麻酔と、ステージ上に彼女を移動させ、ノーズコーン内に彼女の鼻を配置します。マウスは完全に麻酔であることを確認するつま先のピンチを使用しています。手順全体を通してマウスの呼吸を監視し、それに応じてイソフルランレベルを調整します。ダムは手続き後に返されるようになるまで女性をから取られていることを子犬のくずを含むケージは慎重に取っておくべきである。 </li><li>コー​​トは平らにすると、マウスの下腹部の上で右第4鼠径乳腺に添付ニップルを視覚化するために70％エタノールの小滴を使用しています。 </li><li>ニップルの最適なビューのための解剖スコープを当てる。慎重にさらに皮膚から離れて乳首を引き出すために細かい鉗子のセットを使用しますが、どのような方法でニップルを穴をあけたり、けがをしないでください。ザ鉗子はしっかり組織を操作するときに一緒にクランプされていませんが、乳首へのストレスを最小量を必要とする光ホールドと一緒に使用すべきではない。 </li><li>穏やかな場所に乳首を保持するために左手に鉗子を使用しています。徐々に右手を使用して、ビューのフィールドにプリロード注射器を持って来る。シリンジがないポジショニングが内容を注入するために発生することがありませんように保持されるべきである。 </li><li>シリンジがビューに追加されると、乳首の中心内小腺管開口部を慎重に目指し、注射器を挿入します。 </li><li>手の位置を変えずに、注射器の内容物を注入し、乳首から針を外します。 </li><li>対照注射用をPBS50μlの2番目の注射器をロードします。ステージ上で、マウスの下腹部の反対側の左第4鼠径部乳腺乳頭の最高の眺めのためのマウスの位置を変更します。 PBS-充填した注射器を使って手順3.4から3.7を繰り返します。 </li><li>両方の注射はCOMPLになったら、ETE麻酔を中止し、回復ケージにマウスを移動します。彼女は5分以内に携帯になることを保証するために女性を監視します。マウスは1時間回復ケージのままにします。回復の1時間後、仔の彼女のごみとケージに雌の背面に配置します。マウスは、定期的に画像に進む前に、6時間後に注射を監視する必要があります。我々の経験では、有害な結果は、注射とイメージングの間の期間に女性または子犬のいずれかで認められなかった。苦痛の兆候が（かむや注射部位、一般的な無気力の警護、 例えば猫背の姿勢）または仔（動かない、皮膚の青みがかった色）の雌で認められた場合しかし、実験は中止すべきである。 </li></ol> 4。 NF-κBの活性を可視化するための生物発光イメージング<ol><li>一度マウスを画像化施設に輸送されており、ソフトウェアを起動し、マシンを初期化することにより、撮影手順を開始します。でオンにしますofluraneマシンと空気の流れ、麻酔ボックスとイメージング室の両方に流れていることを確実にする。 </li><li>明確な麻酔ボックスにイソフルラン麻酔下でマウスを置きます。呼吸が鈍化していると、マウスが完全に麻酔であることを確認するつま先のピンチを使用しています。その後、無菌の注射器を用いて眼窩注射5でマウスにルシフェリン基質100μlを注入します。 </li><li>直ちにイメージング室にマウスを移すと、そこにあるイソフルランノーズコーンの下で彼女の鼻を配置します。マウスは仰臥位でなければならない。テープでステージにそれぞれの足を固定します。 </li><li> IVISソフトウェアへの入力が適切な設定を白色光写真画像と生物活動のイメージの両方を取る。露光時間は10秒である必要があります。画像を取得する。 </li><li>一度画像が取得された、マウスが回復することを可能にしてから、彼女の子犬とケージに彼女の背中を配置し、定期的に監視します。 </li><li>写真および発光画像を自動的に重ね合わせて図2のように、画面に表示されます。マウスの下腹部の両側（PBS注入腺上の1とLPS注入腺上の1）の上に関心領域または等しいサイズの &quot;ROI&quot;の円を配置することによって取得された画像を分析します。光子に読み出し設定します。数（ 図2Bを参照）、各ROI内で検出された発光を示すメッセージが表示されるべきである。統計分析で、この番号を使用します。 </li><li>最適な画像を表示するには、さらに表示された信号のしきい値を調整します。これは、総発光を読み取るアウト改変することはありませんが、あなたがバックグラウンド信号を除去し、制御およびLPS処理腺の違いを視覚化することができます。 PBSを注入腺がバックグラウンド信号から外れるまでに示す発光量を減らします。これは、 図2に示すように画像でまだ見かけLPS処理腺における増加した信号を残す必要があります。 </li><li> Additionaタンパク質およびRNAアッセイを含むリットル分析は、6事後女性から採取した乳腺組織で完了することができる。 </li></ol> 5。代表的な結果これらのメソッドから解釈可能な結果を​​得るために、LPSは（またはPBS）隣接組織はそのままにしておいて、唯一の乳管に注入しなけ​​ればなりません。乳首を囲む皮下組織に注射ではなくシミュレー感染より傷害に起因する炎症になります。技術を学習するときにPBSで希釈し、トリパンブルー色素の注入に便利です。 図3Aは、PBS中でトリパンブルー液100μlを注入に成功注入腺を示しています。示されているように、唯一の管木が注入された溶液で満たされるべきであり、注射部位全くボーラスがあってはならない。この文脈での &quot;ボーラス&quot;は乳首で乳管またはツリーに注入することなく、乳首の周りの組織で注入された液体の蓄積である。これはshです図3Bの独自の。 図3に示すように練習注射は授乳21日目に女性に完成しましたのでご了承ください。授乳の高さ（一日8月10日、LPSは現在のプロトコルを使用して注入された段階）の間に、牛乳は豊富であり、それはダクトを視覚化し、注射が正しく完了したかどうかを判断することは困難である。そのため、授乳の後の時間のポイント、練習注入に優れています。 内乳管の結果へのLPSの成功注入は腺内のNF-κBの活性を増加させた。これは、IVISイメージング時のレポーターマウスで明らかにする必要があり、LPSを注入腺は（平均して、 図2に示すように、PBSを注射した腺よりも実質的に高いルシフェラーゼ活性を（光子計数により測定）を有するべきであると、LPS腺を読み取りPBSの制御信号の200％）。 compとしてLPS処理腺内の発光の統計的に有意な増加反対側の制御にaredは4匹の4群の完成にもかかわらず達成された。つの追加の研究は 、Eのいずれかの管内乳腺注射を利用しているNF-κBレポーター遺伝子組み換えに大腸菌またはLPS。私たち自身の仕事と同様に、これらの著者は、6時間後に、E.レポーター活性の有意な増加が見られました大腸菌注入2。 撮像されたときに脳や他の腹部臓器内での恒常的NF-κB活性のために、注意してください、私たちのレポーターマウスの頭部と腹部は一貫して前の任意の操作にさえ、ベースライン時、信号を示しています。したがって、この信号は、この実験に関して無視されるべきである。明らかな信号は、画像の読み出しをPBS腺でバックグラウンド発光を最小限に抑えるように調整された後、LPS注入乳腺内にとどまるべきである。 図2は、バックグラウンドが低減した画像を示しています。 腺の失敗の注入は意志乳首への損傷が起こる可能性が最も高い。これは、撮像時は明らかであろう指摘し、皮膚レベルの炎症の原因となります。負傷信号のこのタイプは、ダクトに成功したLPS注射後に見られるように、腺を通して発散しない、非常に強く、被害が発生した乳頭部に限定されます。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/4030/4030fig1.jpg" /> 図1。手順の概略。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/4030/4030fig2.jpg" /> 図2。 IVIS生物発光イメージングからの代表的な結果。（）バックグラウンドで画像を取得したがLPSを注射した腺の増加ルシフェラーゼ活性を明らかに減少させた。 （B）からのイメージ関心数量化の領域が追加された。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4030/4030fig2large.jpg" target="_blank">拡大図を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img alトン= &quot;図3は&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/4030/4030fig3.jpg&quot; /&gt; 図3練習注入：。乳腺は乳管内注射を介して色素を注入したニップルを介した配信の精度をテストするには、授乳21日目のマウスは、PBSで希釈したトリパンブルー色素の100μlを注入した。犠牲に続いて、腺は可視化のために露出した。 （A）が成功した噴射と乳首の色素（B）のボーラス。

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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+levels+of+LPS-binding+protein+in+bovine+blood+and+milk+following+bacterial+lipopolysaccharide+challenge.">Increased levels of LPS-binding protein in bovine blood and milk following bacterial lipopolysaccharide challenge.</a> Journal of Dairy Science. 86, 3128-3137 (2003).</li><li>Gonen, E., Vallon-Eberhard, A., Elazar, S., Harmelin, A., Brenner, O., Rosenshine, I., Jung, S., Shpigel, N. 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特別な利害関係は宣言されません。

ここでは、トランスジェニック、NF-κBレポーターマウスとモデル乳腺炎に最適化された注入技術を利用し、乳房組織の炎症は、最も一般的に細菌感染によって引き起こされる。この手順の中で最も重要なステップは、管内注射そのものです。 実際には、膵管内注入が成功したかどうか通常は明らかである。薬剤の注入（LPSまたはPBS）は、流体に感じるはずと注射器が空?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td> 大腸菌由来のリポ多糖 （LPS） </td><td>シグマ</td><td> L 2880 </td><td> 055血清型：B5 </td></tr><tr><td> PBS </td><td>メディアテック株式会社</td><td> 46から013-CM </td><td></td></tr><tr><td> 31ゲージインスリン注射器</td><td>ベクトン·ディッキンソン</td><td> 328438 </td><td>短い針</td></tr><tr><td>鉗子</td><td>ワールド·精密機器</td><td> 15908 </td><td></td></tr><tr><td>解剖スコープ</td><td>ライカ</td><td> M3Z </td><td></td></tr><tr><td>テレルイソフルラン、USP </td><td> RxのエリートのためにMINRAD INC。 </td><td> NDC 66794-011-25 </td><td></td></tr><tr><td> IVIS 200イメージングシステム&lt;/ TD&gt; <td>キャリパー（旧Xenogen） </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td>ルシフェリン注射用シリンジ</td><td>ベクトン·ディッキンソン</td><td> 309597 </td><td> 1cc; 26G5 / 8 </td></tr><tr><td> D-ルシフェリンホタル、ナトリウム塩一水和物 （ルシフェリン基質） </td><td> Biosynth化学と生物学</td><td> L-8240 </td><td> 10 mg / mlに希釈し</td></tr></tbody></table>

intraductal injection of lps as a mouse model of mastitis: signaling visualized via an nf-&kappa;b reporter transgenic

前臨床モデルでは介入をテストするようなヒト疾患の動物モデルは、究極的には厳密に病気の進行と関連機構のステージを勉強するために必要である、と。これらの方法では、リポ多糖が（LPS）は腺の乳頭、効果的にモデリング乳腺炎、または炎症を介して授乳マウス乳腺に注入する手法を説明します。増加核因子κB（NF-κB）シグナル伝達において、このシミュレートされた感染症の結果は、NF-κBルシフェラーゼレポーターマウス1の生物発光イメージングを通して可視化した。 これらの方法を開発する上で私たちの究極の目標は、しばしば赤みを含む乳腺における乳腺炎、腫れ、免疫細胞浸潤2,3に関連する炎症を勉強することでした。そこで我々は、LPSを切開または皮膚損傷の任意のタイプ、ニップル、またはグランドを導入するために、と痛感でしたでしたアプローチは、おそらく炎症の読み出しを混同するから我々の方法で利用することはありません。我々はまた、特別に作られた手描きのピペットまたは代わりにこれらの特殊なツールを保持するために、マイクロマニピュレーターを使用する必要はありませんでしたストレートフォワード方式を希望する。従って、我々は市販のインスリン注射器を使用するとそのまま乳首の乳管に薬剤を注入することを決定した。この方法は成功したと私たちは注射のプロセスによってオーバーレイの追加効果なしLPS注射に関連する炎症を勉強することができました。さらに、この方法はまた、視覚的かつ定量的NF-κB活性は、LPSを注射した腺4内シグナル伝達の増加表示し、NF-κBルシフェラーゼレポータートランスジェニックマウスおよび生物発光イメージング技術を利用した。 これらの方法は、最終的に、授乳中の乳腺内の疾患をモデル化したい多くの分野の研究者が関心を持つ技術であるここで説明する多くの物質を注入するために利用することができ、LPSのみに限定されない。

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Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&amp;kappa;B Reporter Transgenic

ここで説明する乳腺炎をシミュレートするために、ニップルを介して、授乳中のマウス乳腺に注入されるリポ多糖体で技術は、一般的に細菌感染によって引き起こされる症状である。増加した核因子κB（NF-κB）シグナル伝達におけるリポ多糖注射の結果は、NF-κBルシフェラーゼレポーターマウスの生物発光イメージングを通して可視化した。

乳腺炎のモデルマウスとしてのLPS管内注入：シグナリングは、NF-κBレポータートランスジェニックを介して可視化

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as ...

intraductal-injection-lps-as-mouse-model-mastitis-signaling

Research

JoVE Journal

Medicine

Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&kappa;B Reporter Transgenic

19.1K ビュー.  Vanderbilt University Medical Center. ここで説明する乳腺炎をシミュレートするために、ニップルを介して、授乳中のマウス乳腺に注入されるリポ多糖体で技術は、一般的に細菌感染によって引き起こされる症状である。増加した核因子κB（NF-κB）シグナル伝達におけるリポ多糖注射の結果は、NF-κBルシフェラーゼレポーターマウスの生物発光イメージングを通して可視化した。

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Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. Before starting injections, the surgical area must be cleaned with soap and water and antiseptic solution. Surgical equipment must be sterilized before use and between each animal. Each mouse is placed under inhaled isoflurane anesthesia (2-5% for induction, 1-3% for maintenance) and its bladder exposed by making a midline abdominal incision with scissors. If the bladder is full, it is partially decompressed by gentle squeezing between two fingers. The cell suspension of interest is intramurally injected into the wall of the bladder dome using a 29 or 30 gauge needle and 1 cc or smaller syringe. The wound is then closed using wound clips and the mouse allowed to recover on a warming pad. Bladder wall injection is a delicate microsurgical technique that can be mastered with practice.

Mouse bladder wall injection is a useful approach to orthotopically study bladder stem cell and cancer biology. This delicate microsurgical method can be mastered with careful technique and practice.

マウスの膀胱壁インジェクション

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

医学

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in exponential tumor growth and metastasis to distal tissues and the collapse of anti-tumor immunity. Many useful animal models exist to study breast cancer, but none completely recapitulate the disease progression that occurs in humans. In order to gain a better understanding of the cellular interactions that result in the formation of latent metastasis and decreased survival, we have generated an inducible transgenic mouse model of YFP-expressing ductal carcinoma that develops after sexual maturity in immune-competent mice and is driven by consistent, endocrine-independent oncogene expression. Activation of YFP, ablation of p53, and expression of an oncogenic form of K-ras was achieved by the delivery of an adenovirus expressing Cre-recombinase into the mammary duct of sexually mature, virgin female mice. Tumors begin to appear 6 weeks after the initiation of oncogenic events. After tumors become apparent, they progress slowly for approximately two weeks before they begin to grow exponentially. After 7-8 weeks post-adenovirus injection, vasculature is observed connecting the tumor mass to distal lymph nodes, with eventual lymphovascular invasion of YFP+ tumor cells to the distal axillary lymph nodes. Infiltrating leukocyte populations are similar to those found in human breast carcinomas, including the presence of &#945;&#946; and &#947;&#948; T cells, macrophages and MDSCs. This unique model will facilitate the study of cellular and immunological mechanisms involved in latent metastasis and dormancy in addition to being useful for designing novel immunotherapeutic interventions to treat invasive breast cancer.

Activation of latent mutations with adenovirus-Cre into the mammary ductal system results in a clinically relevant metastatic breast cancer. Incorporation of a YFP promoter allows tracking of distal metastatic tumor cells. This model is useful to study latent metastasis, anti-tumor immunity, and for designing novel immunotherapies to treat breast cancer.

乳癌の新規トランスジェニックマウスモデル：アデノ-Creを持つ乳管上皮の標的とすることにより、転移性乳癌の開始

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

脳Microslicesの興奮毒性刺激<em&gt;インビトロ</em&gt;脳卒中のモデル

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on animal models. The identification of PD-associated genes has led to the development of genetic PD models. Most transgenic &#945;-SYN mouse models develop gradual &#945;-SYN pathology but fail to display clear dopaminergic cell loss and dopamine-dependent behavioral deficits. This hurdle was overcome by direct targeting of the substantia nigra with viral vectors overexpressing PD-associated genes. Local gene delivery using viral vectors provides an attractive way to express transgenes in the central nervous system. Specific brain regions can be targeted (e.g. the substantia nigra), expression can be induced in the adult setting and high expression levels can be achieved. Further, different vector systems based on various viruses can be used. The protocol outlines all crucial steps to perform a viral vector injection in the substantia nigra of the rat to develop a viral vector-based alpha-synuclein animal model for Parkinson&#39;s disease.

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson&#039;s Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

This manuscript describes how viral vector-mediated local gene delivery provides an attractive way to express transgenes in the central nervous system. The protocol outlines all crucial steps to perform a viral vector injection in the substantia nigra of the rat to develop a viral vector-based animal model for Parkinson's disease.

組換えアデノ随伴ウイルスベクターの定位注射を介して、パーキンソン病のα-シヌクレインベースのラットモデルの開発

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have been established by tamoxifen induced deletion of Ccm genes in postnatal animals. These mouse models provide invaluable tools to investigate molecular mechanism and therapeutic approaches for CCM disease. An accurate and quantitative method to assess lesion burden and progression is essential to harness the full value of these animal models. Here, we demonstrate the induction of CCM disease in a mouse model and the use of the contrast enhanced X-ray micro computed tomography (micro-CT) method to measure CCM lesion burden in mouse brains. At postnatal day 1 (P1), we used 4-hydroxytamoxifen (4HT) to activate Cre recombinase activity from the Cdh5-CreErt2 transgene to cleave the floxed allele of Ccm2. CCM lesions in mouse brains were analyzed at P8. For micro-CT, iodine based Lugol&#39;s solution was used to enhance contrast in brain tissue. We have optimized the scan parameters and utilized a voxel dimension of 9.5 &#181;m, which lead to a minimum feature size of approximately 25 &#181;m. This resolution is sufficient to measure CCM lesion volume and number globally and accurately, and provide high-quality 3-D mapping of CCM lesions in mouse brains. This method enhances the value of the established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for CCM and other cerebrovascular diseases.

This protocol demonstrates the induction of cerebral cavernous malformation disease in a mouse model and uses contrast enhanced micro computed tomography to measure lesion burden. This method enhances the value of established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for cerebral cavernous malformation and other cerebrovascular diseases.

誘導およびマウス モデルにおける脳海綿静脈奇形のマイクロ CT イメージング

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

虹彩ルベオーシスのマウス モデルとして虹彩新生血管を穿刺誘発

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Oleic Acid-Injection in Pigs As a Model for Acute Respiratory Distress Syndrome

The acute respiratory distress syndrome is a relevant intensive care disease with an incidence ranging between 2.2% and 19% of intensive care unit patients. Despite treatment advances over the last decades, ARDS patients still suffer mortality rates between 35 and 40%. There is still a need for further research to improve the outcome of patients suffering from ARDS. One problem is that no single animal model can mimic the complex pathomechanism of the acute respiratory distress syndrome, but several models exist to study different parts of it. Oleic acid injection (OAI)-induced lung injury is a well-established model for studying ventilation strategies, lung mechanics and ventilation/perfusion distribution in animals. OAI leads to severely impaired gas exchange, deterioration of lung mechanics and disruption of the alveolo-capillary barrier. The disadvantage of this model is the controversial mechanistic relevance of this model and the necessity for central venous access, which is challenging especially in smaller animal models. In summary, OAI-induced lung injury leads to reproducible results in small and large animals and hence represents a well-suited model for studying ARDS. Nevertheless, further research is necessary to find a model that mimics all parts of ARDS and lacks the problems associated with the different models existing today.

In this article, we present a protocol to induce acute lung injury in pigs by central-venous injection of oleic acid. This is an established animal model for studying the acute respiratory distress syndrome (ARDS).

急性呼吸窮迫症候群のためのモデルとして豚のオレイン酸注入

The acute respiratory distress syndrome is a relevant intensive care disease with an incidence ranging between 2.2% and 19% of intensive care unit ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

肝臓生物学のEx Vivoモデルとしてのマウス精密カット肝臓スライス

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

胆管TNBS輸液による慢性膵炎のマウスモデル

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...