慢性膵炎は、膵炎、線維症、腹痛、その他の症状を伴う複雑な疾患です。胆管TNBS注入モデルは慢性膵炎患者で観察される神経因性疼痛を複製する。この胆管TNBS注入プロトコルは、マウスの慢性膵炎モデルの生成を誘導するために最適化されています。
マウスの胆管薬物融合は技術的に困難であるため、その視覚化は、この方法に新しい研究者に役立ちます。手術の前と2週間と3週間後に、フォン・フレイのモノフィラメントを使用して、生後8〜10週のC57ブラックシックスマウスの上腹部に異なるレベルの力を加え、1回1〜2秒間10回適用します。肯定的な応答として腹部の退位または舐めを上げることを検討してください。
次に、新たに調製した0.75%TNBS溶液の50マイクロリットルを備えた31ゲージ針を装備したインスリン注射器をロードする。車両制御として生理食塩水に50マイクロリットルのエタノールを含む2番目の注射器をロードし、両方の注射器を光から保護された氷の上に置きます。ペダル反射に対する応答の欠如を確認した後、剃毛または脱毛クリームを塗布することによって麻酔マウスの腹部領域から毛髪を取り除き、解剖顕微鏡の下で加熱された外科パッドの上にマウスを置きます。
各眼に獣医軟膏を塗布し、3つの連続した2%のヨウ素と3つの70パーセントのエタノールワイプで外科部位を消毒し、マイクロハサミを使用して1回の連続運動で0.5〜1センチメートルの切開を行い、綿棒を使用して十二指腸を穏やかに露出させ、共通の胆管を見つけます。肝臓と胆嚢への治療の流れを防ぐために、顕微鏡を使用して近位共通の管の上にまっすぐなマイクロヘモクリップを配置し、TNBSに装填された注射器の針を膵管にバターの乳頭を通して挿入する。湾曲したマイクロヘモクリップを使用して針を固定し、1分間にわたって溶液を膵管に注入します。
すべての溶液が届いた時、慎重にマイクロクランプを取り外し、十二指腸が元の位置に戻っていることを確認します。腹腔の閉鎖前に、十二指腸が元の位置に戻るのを助け、蠕動の回復を助けるために36〜37°Cの無菌生理食塩水の500マイクロリットルを加える。5-Oステッチで連続縫合糸を使用して筋肉層の切開を閉じ、4-Oステッチで中断された縫合糸を使用して皮膚を閉じます。
その後、完全な再実行まで監視と加熱パッド上の回復ケージにマウスを置きます。手術後の最初の週にマウスの健康と行動を毎日監視し、発声、腰の姿勢、移動を減らし、1日おきに体重を測定するなど、苦痛の兆候を確認します。観察されるように、50マイクロリットルのインクの注入が示されるように、膵臓全体の浸潤をもたらし、より均質な疾患表現型の誘導を可能にする。
この代表的な分析では、手術後の最初の3日間で、対照群のマウスは元の体重の約6%を失い、21日目までに徐々に回復し、元の体重の100%以上を得た。対照的に、TNBSを受けたマウスは、手術後の最初の5日間に元の体重の約15%を失い、21日目までに元の体重の100%弱を取り戻しました。対照マウスと比較して、TNBS注射動物は手術後2週目と3週目に腹部の機械的過敏症の増加を示した。
膵臓の体重当たりの大きさおよび重量は、対照動物から採取された膵臓と比較してTNBSマウスで有意に減少した、重篤で長期にわたる慢性膵炎を有するヒトにおける知見と一致するTNBS処置動物における顕著な膵萎縮を示唆した。対照エタノール処理マウスからの膵組織切片の組織学的分析は正常な形態を示し、TNBS処置マウスの組織切片は脂肪細胞浸潤および線維化に置き換えられたアシナル細胞の大量喪失で空虚な実現を示した。注射されたTNBSがgal膀胱に入るのを防ぐことは、TNBSが組織に有害な影響を及ぼすので重要である。
注入中は、その胆管の穿刺作用を避けるために、手をできるだけ安定に保ちます。慢性膵炎の発症を誘発することに加えて、この胆管注入マウスは、他の膵病モデルの開発に使用することができる。このTNBS慢性膵炎マウスモデルは、慢性膵炎の病態と治療、ならびに他の膵臓疾患の両方を研究するために使用することができる。
