この論文に含まれている作品は、アメリカの健康支援財団（XL）、失明を防止するための研究からウィリアム＆メアリーグレーヴェ特別奨学生賞（XL）、から緑内障研究博士ダグラス·H.ジョンソン賞によってサポートされています失明予防のためのイリノイ州協会（HC）とNIH助成R01EY019034（XL）。

手順 C57BL/6Jマウス（ジャクソン研究所、バーハーバー、ME）は、ノースウェスタン大学のアニマルケア施設で発生します。すべての動物は、ノースウェスタン大学制度動物実験委員会およびNIHから神経科学研究における動物の使用に関するガイドラインに準拠することによって承認されたプロトコールに従って使用しています。 1。レーザー光凝固術レーザー光凝固の手順5-7以前に公表されたプロトコルから変更されている。 <ol><li>ケタミン（100 mg / kgで、バトラーシャインアニマルヘルス、OH）およびキシラジン（10 mg / kgで、アイオワ州、シェナンドーのロイド社、IA）の腹腔内注射することによって40〜60日齢のマウスを麻酔。 </li><li> 1％硫酸アトロピン溶液の1つまたは2つの滴（アルコン研究所社、フォートワース、テキサス州）で局所処置により実験動物の右眼の瞳孔を拡張させる。 </li><li>散瞳後、平らにレーザー誘導6を強化するnterior室。前房内の流体を排出するスリットランプ下前歯スペース（SL-3E、トプコン、オークランド、ニュージャージー州）に鋭い先端（世界プレシジョンインスツルメンツ、サラソタ、フロリダ州）のガラスマイクロピペットを挿入します。 </li><li>プラスチックコーンホルダー（トリーサイエンス社、MA）でマウスを抑制し（ 図1A参照 ）自家製プラットフォームに縛ら。拘束とマウスを持ち、スリットランプの後ろに光源にマウスの右目を公開します。スリットランプの下で麻酔したマウスの右眼の位置を合わせます。 </li><li>両手でマウスの拘束を保持しながら、アルゴンレーザー（ウルティマ2000SE、コヒーレント、サンタクララ、CA）を使用して、角膜輪部にレーザー照射を適用します。小柱網の周囲に垂直に80-100レーザスポット（514 nmで、100 mWで、50ミリ秒パルス、および200μmのスポット）について配信します。 C57BL / 6マウスは、任意のpに対する障壁として機能する着色された虹彩を有するotential漂遊エネルギー7。 </li><li>痛みを和らげるために局所0.5％のレーザー処理面積を消毒するための眼表面上のモキシフロキサシン（アルコンラボ社、フォートワース、テキサス州）と0.5％プロパラカイン（ボシュロム、ロチェスター、NY）を植え付ける。 </li><li>それは完全に目を覚ましになるまで時間程度回復のための加熱パッド（サンビームプロダクト株式会社、ボカラトン、フロリダ州）の動物を保管してください。 </li><li>左目は、コントロールとして機能するように未処理である。 </li></ol> 2。 IOP測定<ol><li>プラスチックコーンホルダーにロードしてから、（ 図2A参照 ）プラットフォーム上でそれを抑制するためのチューブに目を覚まして、マウスを置きます。 </li><li>マウスホルダー位置に適応し得るように5〜10分待ちます。プローブ先端が離れて角膜14の表面2〜3ミリメートルになるまでマウスの目にリバウンド眼圧計（TonoLab、コロニアルメディカルサプライ、フランコニア、ニューハンプシャー州）に近づく。 </li><li>プローブ先端が中心面を打つように、測定ボタンを押すと、静かに角膜の。同じ目のIOPの6測定の3つの連続した​​セットが目のIOPとして取得し、平均化されます。未処理の対照の眼は、常に次の測定されレーザー治療目のベースライン値を得るために最初に測定されます。 </li></ol> 3。微細運動テスト視力とコントラスト感度は、14,15をテストされます。個々のマウスの両眼は、漂流格子方向を反転させることにより別々に検討されている。時計回りに漂流格子が左眼と右眼16についての反時計回りに漂流格子の視覚機能を識別するために使用され、即ち 。各テストは約15分かかり、独立して、二人の観察者によって繰り返される。 <ol><li>マウスを置き、マウスは、4つのコンピュータのモニタ（ 図3A-B）に囲まれた高架プラットフォーム上で自由に移動することができます。 </li><li>彼らは水平正弦​​漂流表示されるようにモニターを設定39 CD / m 2での平均輝度の視覚刺激として格子。格子の移動方向が交互べき 連続して右回りと左回りの間。 </li><li>動物の動きを分析します。視覚刺激がオンになった後、徐々に増加した後、漂流格子と、コンサートでは、動物の動きを15秒以内 &quot;ポジティブ&quot;とみなされます。最高応答惹起する視覚刺激は、動物の視力17として定義されています。 </li><li> 0.075、0.16、そして1度当たり0.3サイクル（CPD）：3つの事前選択された空間周波数でのコントラスト感度を調べます。各眼用コントラスト閾値は、予め固定周波数での視覚的応答を誘発する最も低いコントラストとして定義される。コントラスト感度は、しきい値17の逆数である。 </li></ol>

<ol>
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F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy.">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J. Glaucoma. 16, 483-505 (2007).</li><li>Levkovitch-Verbin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translimbal+laser+photocoagulation+to+the+trabecular+meshwork+as+a+model+of+glaucoma+in+rats.">Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 43, 402-410 (2002).</li><li>Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. 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R., Garcia-Valenzuela, E., Salierno, A., Walsh, J., Sharma, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+ocular+hypertension+following+episcleral+venous+occlusion+in+rats.">Chronic ocular hypertension following episcleral venous occlusion in rats.</a> Experimental Eye Research. 61, 379-382 (1995).</li><li>Chiu, K., Chang, R., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-induced+chronic+ocular+hypertension+model+on+SD+rats.">Laser-induced chronic ocular hypertension model on SD rats.</a> J. Vis. Exp. (10), e549 (2007).</li><li>Fu, C. T., Sretavan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-induced+ocular+hypertension+in+albino+CD-1+mice.">Laser-induced ocular hypertension in albino CD-1 mice.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 51, 980-990 (2010).</li><li>Rangarajan, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+visual+deficits+in+aging+DBA/2J+mice+by+two+behavioral+assays.">Detection of visual deficits in aging DBA/2J mice by two behavioral assays.</a> Curr. Eye Res. 36, 481-491 (2011).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direction-specific+disruption+of+subcortical+visual+behavior+and+receptive+fields+in+mice+lacking+the+beta2+subunit+of+nicotinic+acetylcholine+receptor.">Direction-specific disruption of subcortical visual behavior and receptive fields in mice lacking the beta2 subunit of nicotinic acetylcholine receptor.</a> J. Neurosci. 29, 12909-12918 (2009).</li><li>Douglas, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+visual+threshold+measurements+in+the+two+eyes+of+freely+moving+rats+and+mice+using+a+virtual-reality+optokinetic+system.">Independent visual threshold measurements in the two eyes of freely moving rats and mice using a virtual-reality optokinetic system.</a> Visual Neuroscience. 22, 677-684 (2005).</li><li>Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+quantification+of+adult+and+developing+mouse+spatial+vision+using+a+virtual+optomotor+system.">Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45, 4611-4616 (2004).</li><li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage.">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Experimental Eye Research. 64, 85-96 (1997).</li><li>Cone, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+anesthesia,+mouse+strain+and+age+on+intraocular+pressure+and+an+improved+murine+model+of+experimental+glaucoma.">The effects of anesthesia, mouse strain and age on intraocular pressure and an improved murine model of experimental glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 99, 27-35 (2012).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+and+TrkB+modulate+visual+experience-dependent+refinement+of+neuronal+pathways+in+retina.">Brain-derived neurotrophic factor and TrkB modulate visual experience-dependent refinement of neuronal pathways in retina.</a> J. Neurosci. 27, 7256-7267 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+neonatal+development+of+retinal+ganglion+cell+dendrites+by+neurotrophin-3+overexpression.">Regulation of neonatal development of retinal ganglion cell dendrites by neurotrophin-3 overexpression.</a> The Journal of Comparative Neurology. 514, 449-458 (2009).</li><li>Sun, W., Li, N., He, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+morphological+survey+of+mouse+retinal+ganglion+cells.">Large-scale morphological survey of mouse retinal ganglion cells.</a> The Journal of Comparative Neurology. 451, 115-126 (2002).</li><li>Feng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+Ocular+Hypertension+Induces+Dendritic+Degeneration+of+Mouse+Retinal+Ganglion+Cells+that+Depends+on+Cell-type+and+Location.">Sustained Ocular Hypertension Induces Dendritic Degeneration of Mouse Retinal Ganglion Cells that Depends on Cell-type and Location.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. , (2013).</li></ol>

著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。 著者は、ノースウェスタン大学のフルタイムの従業員です。 著者は、この記事で使用する試薬や楽器を生み出す企業によって提供されたNOの資金を受け取っていません。

我々は、持続的な高眼圧症上記のレポートは、マウスの目にレーザー照射によって誘導することができる。生理食塩水の注入モデル18および広範顕微スキルを必要とする、どちらも静脈焼灼モデル11に比べて、レーザー照射は、実行するために、比較的シンプルで簡単です。通常、私たちは2〜3時間で4-6マウス用レーザー照射を行うことができます。持続的な眼圧上昇を達成す...

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Reagent</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>moxifloxacin</td>
 <td>Alcon Labs, Inc.</td>
 <td>NDC 0065-4013-03</td>
 <td>0.5 %, Rx only</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Proparacaine Hydrochloride</td>
 <td>Bausch &amp; Lomb</td>
 <td>NDC 24208-730-06</td>
 <td>0.5 %, Rx only</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ophthalmic Solution USP</td>
 <td>Bausch &amp; Lomb</td>
 <td>NDC 24208-730-06</td>
 <td>.5 %, Rx only</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ketamine</td>
 <td>Butler Schein Animal Health</td>
 <td>NDC 11695-0550-1</td>
 <td>100 mg / kg </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>xylazine</td>
 <td>LLOYD Inc. of Iowa</td>
 <td>NADA 139-236</td>
 <td>10 mg / kg </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>atropine sulfate solution</td>
 <td>Alcon Labs, Inc.</td>
 <td>NDC 61314-303-02</td>
 <td>1 %, Rx only</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Slit Lamp, TOPCON </td>
 <td>Visual Systems Inc</td>
 <td>SL-3E</td>
 <td>powered by PS-30A</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>OptoMotry 1.8.0 virtual</td>
 <td>CerebralMechanics Inc.</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>opto-kinetic testing system</td>
 <td>CerebralMechanics Inc.</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tonometer, TonoLab, for mice</td>
 <td>Colonial Medical Supply</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heating pad</td>
 <td>Sunbeam Products Inc</td>
 <td>722-810</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Argon laser </td>
 <td>Coherent Inc</td>
 <td>Ultima 2000SE</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DECAPICONE Plastic cone holder </td>
 <td>Braintree Sci Inc.</td>
 <td>MDC-200</td>
 <td>for mouse</td>
 </tr>
 </tbody>
 </table>

a laser-induced mouse model of chronic ocular hypertension to characterize visual defects

頻繁に上昇した眼圧（IOP）に関連付けられている緑内障は、失明の主要な原因の一つである。我々は、ヒトの高張力緑内障を模倣する高眼圧症のマウスモデルを確立しようとした。ここで、レーザ照射角度を閉塞を誘発する、房水流出をphotocoagulateする角膜輪部に印加される。 IOPの変化はレーザー治療前と後のリバウンド眼圧計を使用して監視している。微細運動行動試験は、視覚能力の対応する変化を測定するために使用される。レーザー照射後に持続IOP上昇を開発1マウスの代表の結果が示されています。視力低下やコントラスト感度は、この眼高血圧マウスにおいて観察される。一緒に、我々の研究では、緑内障マウスで神経変性基礎となる分子メカニズムを調査するために貴重なモデルシステムを導入しています。

の手順で説明するように、レーザー照明は角度の閉鎖（ 図1）を誘導、房水流出をphotocoagulateに輪部地域における小柱網を目指している。ほとんどのレーザ書込み目は以前の所見6と一致し、有意な物理的な損傷、顔料剥離や感染症を示さなかった。マウスの小グループ（すべてのレーザ書込み動物の5％未満）などの収縮眼球、重度の白内障、大幅な顔料剥離や出血などの...

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A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

慢性高眼圧症は、マウスの目に小柱網のレーザー光凝固を使用して誘導される。眼圧（IOP）は、レーザー治療後数ヶ月上昇する。視力と実験動物のコントラスト感度の低下は微細運動テストを使用して監視している。

ビジュアル欠陥を特徴づけるために慢性高眼圧症のレーザー誘起マウスモデル

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

a-laser-induced-mouse-model-chronic-ocular-hypertension-to

Research

JoVE Journal

Medicine

12.9K ビュー.  Northwestern University. 慢性高眼圧症は、マウスの目に小柱網のレーザー光凝固を使用して誘導される。眼圧（IOP）は、レーザー治療後数ヶ月上昇する。視力と実験動物のコントラスト感度の低下は微細運動テストを使用して監視している。