我々は、重要な見直しの彼女のサポートのためにウェンディチャオに感謝します。この作品は、失明財団（DGV）ライオンズ·アイ·リサーチ·ファンド（DGV）、およびYeattsファミリー（JWMの寛大な寄付を防止するためにボシュロム硝子体網膜フェローシップ（HM）​​、国立眼研究所の助成EY014104（JWM）、研究によってサポートされていましたとDGV）。

動物実験はすべてビジョンの研究のための協会に従って実行し、眼科と視覚研究における動物の使用に関する眼科声明、およびマサチューセッツの目と耳診療所の動物管理委員会が定めた指針や規制された。 1。前処理<ol><li> 60 mg / kgのケタミンおよび6 mg / kgのキシラジンの混合物の腹腔内注射で8週齢のマウスを麻酔。 </li><li>ウィスカーをカットします。彼らは視覚化および機器の配置と干渉しないために行います。 </li><li> 5％フェニレフリンと0.5％トロピカミドで瞳孔を拡張する。 </li><li>繊毛をカットします。彼らは視覚化および機器の配置に干渉しているためこれも行われます。 </li><li>局所麻酔（0.5％プロパラカイン塩酸塩点眼液）を適用します。 </li></ol> 2。顕微鏡下手術<ol><li>横POSでマウスを設定する外科医に向かって鼻でition。つま先のピンチは、外科麻酔を確認するために行われ、滅菌手袋は、手術前の出発に着用されている。 </li><li>後部角膜輪部に一時的な結膜を切開し、強膜から結膜を分離する。強膜を貫通しないようにします。このステップの後、目を制御するために、ピンセットで角膜輪部で結膜を把握する。 </li><li>ベベルアップ指摘して30gの針の先端を使ってセルフシール強膜切開する。強膜を通して強膜トンネルを作り、脈絡膜（ 図1）に、強膜に浸透。網膜を貫通しないようにします。脈絡膜出血が発生し、強膜創を通して出てきた場合は、出血が停止するまで、外科槍で圧迫止血を行う。この強膜傷が自己密封し、眼圧となります。 </li><li>眼内圧を減少させるために30 G針で角膜を穿刺する。 E中に虹彩とレンズが負傷を避けるために、アイリスに針を平行に使用前房内ntry。眼圧は、セルフシールに傷の原因となります。 </li><li>ベベルと網膜下腔にハミルトン10μLシリンジに接続されている33gの針を挿入します（内側の目に向かって）下に向け、基礎となるRPEから神経感覚網膜を分離するためにゆっくりと3.5μlのヒアルロン酸ナトリウムを注入する。網膜が貫通されている場合、ヒアルロン酸ナトリウムは、ガラス質の空間ではなく、網膜下腔に入りますので、33gの針で網膜を貫通しないようにします。また、それは口頭涙が作成されますので、迅速な注入を回避し、ヒアルロン酸ナトリウムは、前房内にリークします。 </li><li>房水は眼圧を調整する鉗子で角膜穿刺を中心に角膜を押すことで、角膜穿刺から流出してみましょう。 </li><li>外科槍を使用して強膜創からの漏れがないことを確認してください。 </li><li>ヒアルロン酸ナトリウム漏洩のリスクを低減するために、シアノアクリレート手術用接着剤上に配置強膜創。 </li><li>シアノアクリレート外科接着剤を使用して元の位置に結膜を再接続します。これはさらに、ヒアルロン酸ナトリウム漏洩のリスクを低減する。 </li><li>カバーガラスを使用して眼底をチェックして、網膜下出血なしに水疱性のRDの作成を確認。 </li></ol> 3。後の処理<ol><li>感染のリスクを低減するために眼にバシトラシンの抗生物質軟膏を適用する。 </li><li>低血圧後の低体温を引き起こす麻酔（ケタミンおよびキシラジンの混合物）を防止するために加温パッド上にマウスを保つ。 </li><li>彼らは麻酔から目覚めた後に戻って動物用ケージにマウスを置きます。合併症のために毎日マウスを監視します。合併症が発生した場合、後述するように、マウスを安楽死させる。 </li></ol> 4。犠牲<ol><li> 100 mg / kgのペントバルビタールナトリウム、およびenucleaの腹腔内注射後に頸椎脱臼によりマウスを安楽死させる各実験のための適切な時点で目をTE（図示せず）。ヒアルロン酸ナトリウムが漏れ可能性があるため、摘出時に目の上に圧力をかけることは避けてください。水疱RDSは、少なくとも14日間、永続的である必要があります。 </li></ol>

<ol>
	<li>Anderson, D. H., Guerin, C. J., Erickson, P. A., Stern, W. H., Fisher, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+recovery+in+the+reattached+retina.">Morphological recovery in the reattached retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 168-183 (1986).</li><li>Cook, B., Lewis, G. P., Fisher, S. K., Adler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+photoreceptor+degeneration+in+experimental+retinal+detachment.">Apoptotic photoreceptor degeneration in experimental retinal detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 990-996 (1995).</li><li>Zacks, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+Activation+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Caspase Activation in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 1262-1267 (2003).</li><li>Zacks, D. N., Han, Y., Zeng, Y., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Signaling+Pathways+and+Stress-Response+Genes+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Activation of Signaling Pathways and Stress-Response Genes in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 1691-1695 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cytokine+responses+to+retinal+detachment+in+rats.">Characterization of cytokine responses to retinal detachment in rats.</a> Mol. Vis. 12, 867-878 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Necrosis+Factor-Mediates+Photoreceptor+Death+in+a+Rodent+Model+of+Retinal+Detachment.">Tumor Necrosis Factor-Mediates Photoreceptor Death in a Rodent Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1384-1391 (2011).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relocalization+of+apoptosis-inducing+factor+in+photoreceptor+apoptosis+induced+by+retinal+detachment+in+vivo.">Relocalization of apoptosis-inducing factor in photoreceptor apoptosis induced by retinal detachment in vivo.</a> Am. J. Pathol. 158, 1271-1278 (2001).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+photoreceptor+apoptosis+in+functional+damage+after+retinal+detachment.">Critical role of photoreceptor apoptosis in functional damage after retinal detachment.</a> Curr. Eye Res. 24, 161-172 (2002).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+chemoattractant+protein+1+mediates+retinal+detachment-induced+photoreceptor+apoptosis.">Monocyte chemoattractant protein 1 mediates retinal detachment-induced photoreceptor apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 104, 2425-2430 (2007).</li><li>Trichonas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+interacting+protein+kinases+mediate+retinal+detachment-induced+photoreceptor+necrosis+and+compensate+for+inhibition+of+apoptosis.">Receptor interacting protein kinases mediate retinal detachment-induced photoreceptor necrosis and compensate for inhibition of apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 107, 21695-21700 (2010).</li><li>Roh, M. I., Murakami, Y., Thanos, A., Vavvas, D. G., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Edaravone,+an+ROS+Scavenger,+Ameliorates+Photoreceptor+Cell+Death+after+Experimental+Retinal+Detachment.">Edaravone, an ROS Scavenger, Ameliorates Photoreceptor Cell Death after Experimental Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3825-3831 (2011).</li><li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tauroursodeoxycholic+acid+(TUDCA)+protects+photoreceptors+from+cell+death+after+experimental+retinal+detachment.">Tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) protects photoreceptors from cell death after experimental retinal detachment.</a> PLoS One. 6, e24245 (2011).</li><li>Yang, L., Bula, D., Arroyo, J. G., Chen, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+retinal+detachment-associated+photoreceptor+cell+loss+in+Bax-deficient+mice.">Preventing retinal detachment-associated photoreceptor cell loss in Bax-deficient mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 648-654 (2004).</li><li>Cebulla, C. M., Ruggeri, M., Murray, T. G., Feuer, W. J., Hernandez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+murine+retinal+detachment+model.">Spectral domain optical coherence tomography in a murine retinal detachment model.</a> Exp. Eye Res. 90, 521-527 (2010).</li><li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundus+Autofluorescence+Findings+in+a+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment.">Fundus Autofluorescence Findings in a Mouse Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li><li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina.">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am. J. Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li><li>Ross, W., Lavina, A., Russell, M., Maberley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+correlation+between+height+of+macular+detachment+and+visual+outcome+in+macula-off+retinal+detachments+of+&lt;+or+=+7+days'+duration.">The correlation between height of macular detachment and visual outcome in macula-off retinal detachments of &lt; or = 7 days' duration.</a> Ophthalmology. 112, 1213-1217 (2005).</li><li>Glatt, H., Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+subretinal+hemorrhage+in+rabbits.">Experimental subretinal hemorrhage in rabbits.</a> Am. J. Ophthalmol. 94, 762-773 (1982).</li><li>Toth, C. A., Morse, L. S., Hjelmeland, L. M., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+directs+early+retinal+damage+after+experimental+subretinal+hemorrhage.">Fibrin directs early retinal damage after experimental subretinal hemorrhage.</a> Arch. Ophthalmol. 109, 723-729 (1991).</li><li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration.">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. , 101-672 (1994).</li><li>Bhisitkul, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effect+of+intravitreal+triamcinolone+acetonide+against+photoreceptor+apoptosis+in+a+rabbit+model+of+subretinal+hemorrhage.">Neuroprotective effect of intravitreal triamcinolone acetonide against photoreceptor apoptosis in a rabbit model of subretinal hemorrhage.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 4071-4077 (2008).</li><li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Experimental+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment:+Complete+Functional+and+Histologic+Recovery+of+the+Retina.">A Novel Experimental Mouse Model of Retinal Detachment: Complete Functional and Histologic Recovery of the Retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li><li>Leon, S., Yin, Y., Nguyen, J., Irwin, N., Benowitz, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lens+injury+stimulates+axon+regeneration+in+the+mature+rat+optic+nerve.">Lens injury stimulates axon regeneration in the mature rat optic nerve.</a> J. Neurosci. 20, 4615-4626 (2000).</li><li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+choroidal+neovascularization+via+brief+subretinal+exposure+to+a+newly+developed+lentiviral+vector+pseudotyped+with+Sendai+viral+envelope+proteins.">Inhibition of choroidal neovascularization via brief subretinal exposure to a newly developed lentiviral vector pseudotyped with Sendai viral envelope proteins.</a> Hum. Gene Ther. 21, 199-209 (2010).</li><li>Kong, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-complementary+AAV5+vector+facilitates+quicker+transgene+expression+in+photoreceptor+and+retinal+pigment+epithelial+cells+of+normal+mouse.">Self-complementary AAV5 vector facilitates quicker transgene expression in photoreceptor and retinal pigment epithelial cells of normal mouse.</a> Exp. Eye Res. 90, 546-554 (2010).</li></ol>

マサチューセッツ州目と耳の診療所は、ベルテポルフィンの使用を対象とする3つの米国特許における持分を持っています。また、マサチューセッツ州目と耳の診療所は、黄斑変性症や他の疾患の治療のための網膜下脈絡膜新生血管を選択的に破壊に向け、特定の特許出願中の所有権を持っています。マサチューセッツ州目と耳の診療所では、これらの特許および特許出願の結果としてロイヤルティを受け取り、ミラー博士は、ロイヤリティ共有する条項が含まれていマサチューセッツ目と耳診療所の制度的特許方針と手順に従って同じのシェアを受け取る。著者は、博士ジョアンW. Millerは、過去のボードメンバーとアルコン社の元株主であり、現在はアルコンのコンサルタントとして機能します。Imagenとバイオテック社、ISIS医薬品、Kalvista医薬品、リジェネロン株式会社とONL治療、LLC。博士ディミトリオスG. Vavvasは提供していますロシュ、ジェネンテック、カラ医薬品のコンサルタントとして。

げっ歯類の目には、RDモデルを確立するためのいくつかの方法が3月15日、22を報告されている。それは一般的に、ヒトにおける眼内手術中に使用される粘性物質であり、それは、任意の公知の眼毒性1-15に関連付けられていないため、それらのほとんどは、ヒアルロン酸ナトリウムの網膜下注射を利用する。むしろ生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（PBS）よりもヒアルロン酸ナトリウムは、RDの持続時間を増加させる。 transvitrealアプローチ3-6または経強膜アプローチ7月15日 ：ヒアルロン酸ナトリウムの網膜下注入のための方法には、2つのアプローチのいずれかを使用します。どちらの方法も、眼底の観察を用いて実施する。 transvitrealアプローチでは、網膜下注入器は、網膜切開が周辺網膜に作成され、硝子体腔に導入され、ヒアルロン酸ナトリウムは、網膜下腔に注入される。この方法では、2つの網膜裂傷、網膜の危険性を増大させる、製造される網膜下腔に入るかもしれませリットル出血。また、網膜切開が作成され、レンズ損傷の危険性がある。経強膜アプローチにはいくつか修正された方法があります。これらの方法7-12のほとんどにおいては、前房の穿刺を有する眼内圧を減少させた後、ヒアルロン酸ナトリウムを充填したシリンジに接続された30 G針が直接結膜、強膜、脈絡膜およびRPEを介して網膜下腔に挿入される。ヒアルロン酸ナトリウムは、その後、網膜下腔に注入される。この経強膜法を用いて網膜裂傷、レンズ損傷の危険性がtransvitrealアプローチを用いるよりも小さい。しかしながら、30 G針によって強膜に形成された孔は、特にマウスの眼のために、大きく、網膜下腔に注入ヒアルロン酸ナトリウムを容易に強膜を介して眼の創傷漏出。これが低いほど、より少ない永続RDおよび複数の可変光受容体細胞死につながる。また、脈絡膜出血が発生した場合眼圧の前網膜下ヒアルロン酸注射に還元されているので、強膜穿孔工程は、出血は、網膜下の空間に広がる。 いくつかの因子が網膜下出血および高さとRD 16-21の永続性の両方を含む、網膜剥離でRDの効果に影響を与えることができる。増加のRD 16、17の高さ、視細胞障害を持つ光受容体細胞死が増加しているため、酸素と浅いRDに比べて高いRDと脈絡から必須栄養素の減少拡散のより広範な場合があります。網膜下出血も、視細胞18〜21のために有毒である。網膜剥離は、この毒性の可能性のあるメカニズムは、低酸素症および網膜下出血による代謝混乱拡散障壁として、および（鉄など）の血液成分によって誘発される直接的な神経毒性が含まれています。をretiに対する保護効果を有することが報告されているレンズの損傷、内部神経節細胞23は 、また、RDの誘導後に感光体細胞死に影響を及ぼし得る。入口創傷部位が密封されていない場合も、ヒアルロン酸ナトリウムは、除核の間に眼の操作に漏れることができる。これは、次に、結果の解釈に影響を与え得る、浅いRDの誤分類につながり得る。 我々のRDの再現性を高め、網膜下出血の速度を減少させるためにヒアルロン酸ナトリウムの網膜下注射用経強方法を変更した。このプロトコルの重要なステップは、注射後ヒアルロン酸ナトリウムの漏れを防止する30 G針を使用して、自己シール強膜切開を作成している。大きな関心が強膜創傷に支払われるように、従来の方法とは異なり、このプロトコルは、眼底の観察なしに実行される。接着剤の適用はまた、眼から漏れるのヒアルロン酸ナトリウムを防止する。我々の経験では、このプロトコルワットで、網膜下出血の割合他のプロトコルと比べて有意に少ない。脈絡膜出血が強膜切開ステップ中に発生した場合は、このステップは、眼圧を低下させる前に行われるので、強膜創を通して眼が終了します。脈絡膜出血が眼圧および感覚神経網膜剥離の還元後に発生した場合、血液が網膜下腔に解剖します。これは他の技術と約10〜20％とは対照的に、症例の約5％で起こることがわかった。これらの動物は、分析から除外されるべきである。 この技術は、光受容体またはRPE細胞24を標的とするベクター媒介遺伝子導入、25の網膜下注射のために使用することができる。これらの注入のための典型的な媒体（PBS、生理食塩水）、ヒアルロン酸ナトリウムよりも大幅に低粘度であるため、標準的な技術は、より多くのリークに悩まされている。本明細書に記載の技術は、このリスクを低減することにより、ベクター導入実験は、より再現性のあることができる信頼できる。

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

光受容体は、基礎となる網膜色素上皮から分離されたとき光受容体細胞死とその後の視覚的な減少が起こる。 （ すなわち、網膜の中断によって引き起こされる）、加齢性黄斑変性症（AMD）を含む様々な網膜疾患に見られる光受容体の物理的分離、中心性漿液性脈絡網膜症、糖尿病性網膜症および未熟児網膜症、ならびに裂孔原性網膜剥離（ RD）。ヒアルロン酸ナトリウムの網膜下注射は光受容体変性1-15の病態生理への洞察を提供し、光受容体細胞死に至るRDを作成するための広く受け入れられているモデルである。 、2001年7で導入ヒアルロン酸ナトリウム網膜下注射により誘導される光受容体の変性は、（数日から数週間）合理的な時間経過の利点を有する。しかし、アニマに動物からの光受容体細胞損失の大幅な変動性を持つことができます1）高さと、RDの期間、網膜下出血の2）の発生：原因RD後の光受容体細胞死に影響を与える二つの大きな要因にL。両方の要因に貢献する方法に急な技術的な学習曲線があります。 RDの高さが光受容体細胞の変性が増加し、網膜色素上皮との間の距離（RPE）層及び光受容体が16-17を増加させるように。これらの報告と一致して、我々の以前の実験は浅いのRDよりも水疱、RDSの詳細光受容体の死を示した。また、網膜下出血、感光体細胞に対して毒性であり、光受容体細胞死18-21に影響を与えることが報告されている。同様に、私たちは、網膜下出血のないのRDよりも網膜下出血、RDS内より光受容体の死を観察した。したがって、変動性を最小限にする技術が網膜下出血を回避しながら、RDの一貫した高さを達成することに焦点を当てる必要があります。 中の我々の変法ducing RDは網膜下出血のまれな出来事で、目の同じ位置に再現性の水疱性と永続RDを行うことができます。我々は、それが他のサイトに比べて、広い術野を達成することが容易であるため、時間的なアプローチを用いて手術を行った。結膜切開の後、自己シール強膜切開は30 G針を用いて行われる。強膜トンネルは、脈絡膜に強膜の浸透が続き、作成されます。脈絡膜出血が、この工程で発生した場合、出血は強膜創を通して眼を終了し、出血は、手術槍で圧迫止血することにより停止することができます。前房の穿刺は、次いで眼内圧を減少させるために角膜から行われる。一人で網膜下注入が生じた網膜動脈閉塞と内側の網膜の虚血で、眼圧の上昇につながるため、これは重要なステップです。ハミルトン10μLシリンジに接続されている33gの針は、その後、網膜下腔に挿入し、3.5μされる;リットルのヒアルロン酸ナトリウムを穏やかに基礎となるRPEからの神経感覚網膜を分離するために注入される。眼底観察下で実行されるRDを誘導する他の方法とは対照的に、この技術は直接観察下で行われる。強膜傷が自己シールなので、ヒアルロン酸ナトリウムは、注入後に漏れ出すことはありません。最後に、接着剤は、創傷強膜上に配置され、結膜は元の位置に再接続される。これらの手順はまた、ヒアルロン酸ナトリウム漏洩のリスクを低減続く。 3.5μlのヒアルロン酸ナトリウムの注入は、8週齢のマウスの目には再現性のRDS（網膜の50％）を作成します。それはこのように、再現性水疱性と永続RDSをも可能にする、目から漏れるの注入されたヒアルロン酸ナトリウムを防ぐため、自己密封傷口を作成すると、私たちの修正された手順の中で最も重要なステップです。

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketaject</td>
 <td>Phoenix</td>
 <td>2010025</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>AnaSed</td>
 <td>LLOYD</td>
 <td>4004821</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5% Phenylephrine / 0.5% Tropicamide</td>
 <td>Massachusetts Eye and Ear Pharmacy</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.5% Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution</td>
 <td>AKORN</td>
 <td>17478-263-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Provics</td>
 <td>Alcon</td>
 <td>8065183085</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Webglue</td>
 <td>Patterson Veterinary</td>
 <td>07-8566128</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MG90</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G1/2 PrecisionGlide Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Weck-Cel Eye Spears</td>
 <td>Beaver-Visitec</td>
 <td>0008685</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 Microliter Syringe</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7635-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>33 gauge, 0.5 inch needle</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7803-05</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18x18mm Cover Glass</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>18-548A</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate

ヒアルロン酸ナトリウムの網膜下注入は網膜剥離（RD）の誘導に広く受け入れられている方法である。ただし、RDまたは網膜下出血の発生の高さと持続時間は、網膜剥離に光受容体細胞死に影響を与えることができる。したがって、光受容体細胞死を評価するために、網膜下出血することなく、再現のRDを作成することが有利である。私たちは、網膜下出血のまれな出来事で再現性のある場所に水疱性と永続はRDSを作成するために、以前に報告された方法を変更しました。この修​​正された方法の重要なステップは、網膜下腔に注射した後、ヒアルロン酸ナトリウムの漏洩を防止することができますセルフシール強膜切開の作成です。セルフシール強膜切開を行うために、強膜トンネルは30 G針で脈絡膜強膜に浸透した後、作成されます。脈絡膜出血がこの工程の間に発生する可能性がありますが、外科槍で圧迫止血は脈絡膜裾の速度を低下させるorrhage。この方法は、裂孔原性RD、未熟児、糖尿病性網膜症、中心性漿液性脈絡網膜症、加齢性黄斑変性症（AMD）の網膜症などのRDを伴う疾患における光受容体の死のより再現性や信頼性モデルを可能にする。

このプロトコルによって行われたRDの持続性を評価するために、凍結切片を、3日目、7、及びRDの誘導後14日に行った。六つ目の各時点のために使用した。ヘマトキシリン​​およびエオシン（HE）染色切片を視覚化するために使用した。すべてのセクションでは、レンズに近づく水疱RD（ 図2）を示した。一つ目は、7日目に網膜下出血を示した。まだ目が感染またはレンズ損傷の兆候を示さなかった。 <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="図1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> 図1。セルフシール強膜切開を作成する。この図は、通常のマウスの眼の断面画像を示す。赤い線は、自己シール強膜切開を示している。 30 G針で脈絡膜強膜に浸透続く強膜トンネルは、セルフシール強膜切開が作成されます。この強膜創自己密封された網膜下腔に注射した後、ヒアルロン酸ナトリウムの漏洩を防止し、持続性の水疱性網膜剥離を達成することができます眼圧、とされます。 <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="図2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> 図2。網膜剥離の時間経過。この眼底写真は手術直後網膜下出血のない水疱性網膜剥離を示しています。少なくとも14日目を通して網膜下出血のないヘマトキシリン​​·エオジン（HE）染色を示し、永続水疱性網膜剥離と凍結切片。

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Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

剥離の再現性があり、持続的な高さが実験的網膜剥離を作成し、網膜下出血せずに、網膜疾患における光受容体細胞損失の病態生理を研究し、潜在的な治療的介入を評価するために重要である。ここでは詳細にこのような方法を報告している。

ヒアルロン酸ナトリウムの網膜下注入によるげっ歯類における網膜剥離モデル

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

20.6K ビュー.  Massachusetts Eye and Ear Infirmary, Harvard Medical School. 剥離の再現性があり、持続的な高さが実験的網膜剥離を作成し、網膜下出血せずに、網膜疾患における光受容体細胞損失の病態生理を研究し、潜在的な治療的介入を評価するために重要である。ここでは詳細にこのような方法を報告している。 

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Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

マウスの眼の中に遺伝子治療ベクターと幹細胞の網膜下注入

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

医学

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

懸濁液中の網膜色素上皮細胞を送達するげっ歯類における網膜下注射の実行

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

ウサギにおける網膜下手術のためのステッププロトコルによってステップ

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Studying Left Ventricular Reverse Remodeling by Aortic Debanding in Rodents

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, mice undergo RR upon removal of the aortic constriction. In this paper, we describe a step-by-step procedure to perform a minimally invasive surgical aortic debanding in mice. Echocardiography was subsequently used to assess the degree of cardiac hypertrophy and dysfunction during LV remodeling and RR and to determine the best timing for aortic debanding. At the end of the protocol, terminal hemodynamic evaluation of the cardiac function was conducted, and samples were collected for histological studies. We showed that debanding is associated with surgical survival rates of 70-80%. Moreover, two weeks after debanding, the significant reduction of ventricular afterload triggers the regression of ventricular hypertrophy (~20%) and fibrosis (~26%), recovery of diastolic dysfunction as assessed by the normalization of left ventricular filling and end-diastolic pressures (E/e&#39;&#160;and LVEDP). Aortic debanding is a useful experimental model to study LV RR in rodents. The extent of myocardial recovery is variable between subjects, therefore, mimicking the diversity of RR that occurs in the clinical context, such as aortic valve replacement. We conclude that the aortic banding/debanding model represents a valuable tool to unravel novel insights into the mechanisms of RR, namely the regression of cardiac hypertrophy and the recovery of diastolic dysfunction.

Here we describe a step-by-step protocol of surgical aorta debanding in the well-established mice model of aortic-constriction. This procedure not only allows studying the mechanisms underlying the left ventricular reverse remodeling and regression of hypertrophy but also to test novel therapeutic options that might accelerate myocardial recovery.

げっ歯類における大動脈デベンディングによる左心室逆改造の研究

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, ...

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the pathophysiological changes of human OA. However, as the main symptom in the late stage of OA, pain affects the patients&#39; daily life, and there are not many available models. The mono-iodoacetate (MIA)-induced model is the most widely used OA pain model, mainly used in rodents. MIA is an inhibitor of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, which causes chondrocyte death, cartilage degeneration, osteophyte, and measurable changes in animal behavior. Besides, expression changes of matrix metalloproteinase (MMP) and pro-inflammatory cytokines (IL1 &#946; and TNF &#945;) can be detected in the MIA-induced model. Those changes are consistent with OA pathophysiological conditions in humans, indicating that MIA can induce a measurable and successful OA pain model. This study aims to describe the methodology of intra-articular injection of MIA in rats and discuss the resulting pain-related behaviors and histopathological changes.

This study describes the method of intra-articular injection of mono-iodoacetate in rats and discusses the resulting pain-related behaviors and histopathological changes, which provide references for future applications.

ラットにおけるモノヨードアセテートの関節内注射により誘発される変形性関節症疼痛モデル

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

げっ歯類における虚血性網膜症の酸素誘導網膜症モデル

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. To investigate pathological mechanisms of retinal ischemia, relevant experimental models need to be developed. Anatomically, a main retinal blood supplying vessel is the ophthalmic artery (OpA) and OpA originates from the internal carotid artery of the common carotid artery (CCA). Thus, disruption of CCA could effectively cause retinal ischemia. Here, we established a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion (tBCCAO) to tie the right CCA with 6-0 silk sutures and to occlude the left CCA transiently for 2 seconds via a clamp, and showed that tBCCAO could induce acute retinal ischemia leading to retinal dysfunction. The current method reduces reliance on surgical instruments by only using surgical needles and a clamp, shortens occlusion time to minimize unexpected animal death, which is often seen in mouse models of middle cerebral artery occlusion, and maintains reproducibility of common retinal ischemic findings. The model can be utilized to investigate the pathophysiology of ischemic retinopathies in mice and further can be used for in vivo drug screening.

Here, we describe a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion using simple sutures and a clamp. This model can be useful for understanding the pathological mechanisms of retinal ischemia caused by cardiovascular abnormalities.

一過性両側性頸動脈閉塞による虚血性筋炎損傷のマウスモデル

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

ヒト以外の霊長類モデルにおける変性網膜疾患の網膜色素上皮移植

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of transplant with the potential to deliver durable heart valves capable of somatic growth with no requirement for anticoagulation. However, the immunobiology of heart valve transplants remains unexplored, highlighting the need for animal models to study this new type of transplant. Previous rat models for heterotopic aortic valve transplantation into the abdominal aorta have been described, though they are technically challenging and costly. For addressing this challenge, a renal subcapsular transplant model was developed in rodents as a practical and more straightforward method for studying heart valve transplant immunobiology. In this model, a single aortic valve leaflet is harvested and inserted into the renal subcapsular space. The kidney is easily accessible, and the transplanted tissue is securely contained in a subcapsular space that is well vascularized and can accommodate a variety of tissue sizes. Furthermore, because a single rat can provide three donor aortic leaflets and a single kidney can provide multiple sites for transplanted tissue, fewer rats are required for a given study. Here, the transplantation technique is described, providing a significant step forward in studying the transplant immunology of heart valve transplantation.

This protocol describes a simple and efficient method for the transplantation of aortic valve leaflets under the renal capsule to allow for the study of alloreactivity of heart valves.