אנו מודים וונדי צ&#39;או על תמיכתה בסקירה ביקורתית. עבודה זו נתמכה על ידי Bausch &amp; Lomb vitreoretinal מלגה (HM), EY014104 מענק National Eye Institute (JWM), מחקר למניעת עיוורון קרן (DGV), אריות העין קרן מחקר (DGV), ותרומתה נדיבה של משפחת Yeatts (JWM וDGV).

כל הניסויים בבעלי החיים בוצעו בהתאם לאגודה לחקר חזון והצהרת רפואת עיניים לשימוש בבעלים חיים ברפואת עיניים וחזון מחקר, וההנחיות והתקנות שנקבעו על ידי העין ואוזן מסצ&#39;וסטס ועדת טיפול בבעלי חיים חולה. 1. טיפול מקדים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכבר 8 שבועות בן עם זריקת intraperitoneal של תערובת של 60 מ&quot;ג / ק&quot;ג קטמין ו6 מ&quot;ג / קילוגרם xylazine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את השפם. זה נעשה משום שהם מפריעים להדמיה ומיקום מכשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרחיב את התלמיד עם phenylephrine 5% וtropicamide 0.5%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את הריסים. זה נעשה גם בגלל שהם מפריעים להדמיה ומיקום מכשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל הרדמה מקומית (פתרון עיני 0.5% hydrochloride proparacaine). </li></ol> 2. ניתוח תחת מיקרוסקופ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את העכבר בקופה לרוחבition עם האף כלפי המנתח. קמצוץ הבוהן מבוצע כדי לאשר הרדמה כירורגית, וכפפות סטריליות הם לבשו לפני תחילת ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את לחמית הזמנית בימבוס האחורי ולהפריד את הלחמית בלובן העין. הימנע חודרים בלובן העין. לאחר שלב זה, לתפוס את לחמית בימבוס עם מלקחיים כדי לשלוט על העין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך scleral עצמי איטום באמצעות קצה מחט G 30 עם השיפוע כלפי מעלה. הפוך מנהרת scleral דרך לובן העין ולחדור בלובן העין לדמה העין (איור 1). הימנע חודר הרשתית. אם דימום כורוידאלית מתרחש ויוצא דרך פצע scleral, לבצע astriction עם חנית כירורגית עד שהדימום ייפסק. פצע scleral זה יהיה עם לחץ התוך עיני חתום עצמי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקב את הקרנית עם מחט 30 G כדי להפחית את לחץ התוך עיני. השתמש במקביל המחט לאיריס כדי למנוע פציעה של הקשתית והעדשה בדוארntry ללשכה הקדמית. לחץ התוך עיני יגרום לפצע לחותם עצמי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מחט G 33 מחוברת למזרק המילטון 10 μl לחלל subretinal עם השיפוע הצביע כלפי מטה (לכיוון העין הפנימית), ולהזריק hyaluronate נתרן 3.5 μl בעדינות כדי לנתק את רשתית נוירו מהרשתית שבבסיס. הימנע חודר הרשתית עם מחט 33 G כי hyaluronate נתרן ייכנס לחלל הזגוגית אך לא את רווח subretinal אם הרשתית חדרה. כמו כן, יש להימנע מהזרקה מהירה משום שהיא תיצור מדמיע בעל פה, וhyaluronate נתרן ידלוף ללשכה הקדמית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו ההומור המימית לזרום החוצה מלנקב בקרנית על ידי לחיצה על הקרנית מסביב לחור בקרנית עם מלקחיים כדי להתאים את לחץ התוך עיני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר היעדרות של דליפה מפצע scleral באמצעות חנית כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפחית את הסיכון של דליפת hyaluronate נתרן, הנח דבק כירורגי cyanoacrylate עלפצע scleral. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר מחדש את הלחמית למיקום המקורי שלה באמצעות דבק כירורגי cyanoacrylate. זה יהיה עוד יותר להפחית את הסיכון של זליגת hyaluronate נתרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הקרקעית באמצעות מכסה זכוכית ולאשר את הקמתה של RD bullous ללא דימום subretinal. </li></ol> 3. לאחר טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל משחה אנטיביוטית הבסיטרצין לעין כדי להפחית את הסיכון לזיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על העכברים על כרית חימום כדי למנוע את ההרדמה (תערובת של קטמין ו xylazine) מגרימת טמפרטורת גוף נמוכה לאחר לחץ דם נמוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את העכברים חזרה לכלוב בעלי החיים אחרי שהם מתעוררים מהרדמה. לפקח על העכברים יומיים לסיבוכים. אם כל עניינים מסתבכים, להרדים את העכברים כמתואר להלן. </li></ol> 4. הקרבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברים על ידי נקע בצוואר הרחם לאחר הזרקת intraperitoneal של 100 מ&quot;ג / ק&quot;ג pentobarbital נתרן, וenucleate העיניים בנקודות זמן מתאימים לכל ניסוי (לא מוצג). הימנע מהפעלה לחץ על העין במהלך אנוקלאציה כי hyaluronate נתרן עלול לדלוף החוצה. RDS bullous צריך להיות עקבי לפחות 14 ימים. </li></ol>

<ol>
	<li>Anderson, D. H., Guerin, C. J., Erickson, P. A., Stern, W. H., Fisher, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+recovery+in+the+reattached+retina.">Morphological recovery in the reattached retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 168-183 (1986).</li><li>Cook, B., Lewis, G. P., Fisher, S. K., Adler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+photoreceptor+degeneration+in+experimental+retinal+detachment.">Apoptotic photoreceptor degeneration in experimental retinal detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 990-996 (1995).</li><li>Zacks, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+Activation+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Caspase Activation in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 1262-1267 (2003).</li><li>Zacks, D. N., Han, Y., Zeng, Y., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Signaling+Pathways+and+Stress-Response+Genes+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Activation of Signaling Pathways and Stress-Response Genes in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 1691-1695 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cytokine+responses+to+retinal+detachment+in+rats.">Characterization of cytokine responses to retinal detachment in rats.</a> Mol. Vis. 12, 867-878 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Necrosis+Factor-Mediates+Photoreceptor+Death+in+a+Rodent+Model+of+Retinal+Detachment.">Tumor Necrosis Factor-Mediates Photoreceptor Death in a Rodent Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1384-1391 (2011).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relocalization+of+apoptosis-inducing+factor+in+photoreceptor+apoptosis+induced+by+retinal+detachment+in+vivo.">Relocalization of apoptosis-inducing factor in photoreceptor apoptosis induced by retinal detachment in vivo.</a> Am. J. Pathol. 158, 1271-1278 (2001).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+photoreceptor+apoptosis+in+functional+damage+after+retinal+detachment.">Critical role of photoreceptor apoptosis in functional damage after retinal detachment.</a> Curr. Eye Res. 24, 161-172 (2002).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+chemoattractant+protein+1+mediates+retinal+detachment-induced+photoreceptor+apoptosis.">Monocyte chemoattractant protein 1 mediates retinal detachment-induced photoreceptor apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 104, 2425-2430 (2007).</li><li>Trichonas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+interacting+protein+kinases+mediate+retinal+detachment-induced+photoreceptor+necrosis+and+compensate+for+inhibition+of+apoptosis.">Receptor interacting protein kinases mediate retinal detachment-induced photoreceptor necrosis and compensate for inhibition of apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 107, 21695-21700 (2010).</li><li>Roh, M. I., Murakami, Y., Thanos, A., Vavvas, D. G., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Edaravone,+an+ROS+Scavenger,+Ameliorates+Photoreceptor+Cell+Death+after+Experimental+Retinal+Detachment.">Edaravone, an ROS Scavenger, Ameliorates Photoreceptor Cell Death after Experimental Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3825-3831 (2011).</li><li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tauroursodeoxycholic+acid+(TUDCA)+protects+photoreceptors+from+cell+death+after+experimental+retinal+detachment.">Tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) protects photoreceptors from cell death after experimental retinal detachment.</a> PLoS One. 6, e24245 (2011).</li><li>Yang, L., Bula, D., Arroyo, J. G., Chen, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+retinal+detachment-associated+photoreceptor+cell+loss+in+Bax-deficient+mice.">Preventing retinal detachment-associated photoreceptor cell loss in Bax-deficient mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 648-654 (2004).</li><li>Cebulla, C. M., Ruggeri, M., Murray, T. G., Feuer, W. J., Hernandez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+murine+retinal+detachment+model.">Spectral domain optical coherence tomography in a murine retinal detachment model.</a> Exp. Eye Res. 90, 521-527 (2010).</li><li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundus+Autofluorescence+Findings+in+a+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment.">Fundus Autofluorescence Findings in a Mouse Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li><li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina.">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am. J. Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li><li>Ross, W., Lavina, A., Russell, M., Maberley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+correlation+between+height+of+macular+detachment+and+visual+outcome+in+macula-off+retinal+detachments+of+&lt;+or+=+7+days'+duration.">The correlation between height of macular detachment and visual outcome in macula-off retinal detachments of &lt; or = 7 days' duration.</a> Ophthalmology. 112, 1213-1217 (2005).</li><li>Glatt, H., Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+subretinal+hemorrhage+in+rabbits.">Experimental subretinal hemorrhage in rabbits.</a> Am. J. Ophthalmol. 94, 762-773 (1982).</li><li>Toth, C. A., Morse, L. S., Hjelmeland, L. M., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+directs+early+retinal+damage+after+experimental+subretinal+hemorrhage.">Fibrin directs early retinal damage after experimental subretinal hemorrhage.</a> Arch. Ophthalmol. 109, 723-729 (1991).</li><li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration.">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. , 101-672 (1994).</li><li>Bhisitkul, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effect+of+intravitreal+triamcinolone+acetonide+against+photoreceptor+apoptosis+in+a+rabbit+model+of+subretinal+hemorrhage.">Neuroprotective effect of intravitreal triamcinolone acetonide against photoreceptor apoptosis in a rabbit model of subretinal hemorrhage.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 4071-4077 (2008).</li><li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Experimental+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment:+Complete+Functional+and+Histologic+Recovery+of+the+Retina.">A Novel Experimental Mouse Model of Retinal Detachment: Complete Functional and Histologic Recovery of the Retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li><li>Leon, S., Yin, Y., Nguyen, J., Irwin, N., Benowitz, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lens+injury+stimulates+axon+regeneration+in+the+mature+rat+optic+nerve.">Lens injury stimulates axon regeneration in the mature rat optic nerve.</a> J. Neurosci. 20, 4615-4626 (2000).</li><li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+choroidal+neovascularization+via+brief+subretinal+exposure+to+a+newly+developed+lentiviral+vector+pseudotyped+with+Sendai+viral+envelope+proteins.">Inhibition of choroidal neovascularization via brief subretinal exposure to a newly developed lentiviral vector pseudotyped with Sendai viral envelope proteins.</a> Hum. Gene Ther. 21, 199-209 (2010).</li><li>Kong, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-complementary+AAV5+vector+facilitates+quicker+transgene+expression+in+photoreceptor+and+retinal+pigment+epithelial+cells+of+normal+mouse.">Self-complementary AAV5 vector facilitates quicker transgene expression in photoreceptor and retinal pigment epithelial cells of normal mouse.</a> Exp. Eye Res. 90, 546-554 (2010).</li></ol>

יש העיניים מסצ&#39;וסטס ומרפאת אוזן זכות בעלות בשלושה פטנטים בארה&quot;ב מופנים לשימוש בverteporfin. בנוסף, יש לו את העיניים מסצ&#39;וסטס ומרפאת אוזן זכות בעלות בבקשות לפטנטים מסוימות מופנות להרס סלקטיבי של neovasculature כורוידאלית subretinal לטיפול בניוון מקולרי והפרעות אחרות. העיניים מסצ&#39;וסטס ומרפאת אוזן מקבלים תמלוגים כתוצאה מפטנטים אלו ובקשות לפטנטים, ד&quot;ר מילר מקבל חלק מאותו בהתאם לעיני מסצ&#39;וסטס ומדיניות של אוזן מרפאת המוסדית פטנטים ונהלים, הכוללת הוראות תמלוגים שיתוף. המחבר, ד&quot;ר ג&#39;ואן וו מילר, הוא חבר מועצה בעבר ובבעלי מניות לשעבר של Alcon, Inc, וכיום משמש כיועץ לאלקון; Imagen ביוטק, Inc; תרופות ISIS; תרופות Kalvista; Regeneron Pharmaceuticals, Inc ו ONL Therapeutics, LLC. ד&quot;ר Demetrios ג Vavvas משמשכיועץ לחברת רוש, ג&#39;ננטק, Kala תרופות.

מספר שיטות להקמת מודל RD בעיני מכרסמים דווחו 3-15, 22. רובם לנצל הזרקת subretinal של hyaluronate נתרן כי זה הוא חומר צמיג המשמש בדרך כלל במהלך הניתוח תוך עיני בבני אדם, וזה לא קשור עם כל רעילות עינית ידועה 1-15. hyaluronate נתרן, ולא יותר מהרגיל מלח או פוספט שנאגרו מלוח (PBS), מגדיל את משך הזמן של RD. השיטות להזרקת subretinal של hyaluronate נתרן להשתמש באחת משתי גישות: גישת transvitreal 3-6 או גישת transscleral 7-15. שני השיטות מבוצעות בהתבוננות בקרקעית העין. בגישת transvitreal, מזרק subretinal הוא הציג לתוך חלל הזגוגית, retinotomy נוצר ברשתית ההיקפית, וhyaluronate נתרן מוזרק לתוך חלל subretinal. בשיטה זו, שתי דמעות רשתית נעשות, מה שמגביר את הסיכון לרשתיתדימום ליטר שעשוי להיכנס למרחב subretinal. בנוסף, קיים סיכון של פגיעה בעדשה כאשר retinotomy נוצר. ישנן מספר שיטות שונה לגישת transscleral. ברוב השיטות האלה 7-12, לאחר הפחתת לחץ התוך עיני עם לנקב לשכה קדמית, מחט G 30 מחוברת למזרק מלא hyaluronate נתרן מוכנס ישירות לתוך חלל subretinal דרך הלחמית, לובן העין, דמית העין, והרשתית. Hyaluronate נתרן מוזרק לאחר מכן לחלל subretinal. הסיכון לפציעה מדמיע ועדשת רשתית בשיטה transscleral זה הוא פחות מזה בגישת transvitreal. עם זאת, החור שנעשה בלובן העין על ידי מחט 30 G הוא גדול, במיוחד לעיני עכבר, וhyaluronate נתרן מוזרק לתוך חלל subretinal קלות דליפות מהעין דרך פצע scleral. זה מוביל ל, RD פחות עיקש נמוך יותר ומוות של תאי קולטי אור משתנה יותר. יתר על כן, אם דימום כורוידאלית מתרחש בצעד ניקוב scleral, הדימום יתפשט לחלל subretinal כי לחץ התוך עיני הופחת לפני הזרקת hyaluronate subretinal. מספר גורמים יכולים להשפיע על ההשפעה של RD על הרשתית מנותקת, ובכלל זה גם דימום subretinal והגובה והתמדה של RD 16-21. עליות מוות של תאי קולטי אור בגובה הולך וגדל של RD 16, 17, ונזק לתאי קולטי אור עשויות להיות נרחבות יותר בגלל דיפוזיה מופחתת של חמצן וחומרים מזינים חיוניים מchoriocapillaris עם RD גבוה יותר בהשוואה לRD הרדוד. דימום subretinal הוא גם רעיל לתאי קולטי אור 18-21; מנגנונים אפשריים של רעילות זו ברשתית מנותקת כוללים היפוקסיה ושיבוש מטבולים על ידי דימום subretinal כמחסום דיפוזיה, ורעילות עצבית ישירה הנגרמת על ידי מרכיבי דם (כגון ברזל). פציעת עדשה, אשר כבר דווחה לנו השפעה מגינה על retiתאי הגנגליון nal 23, עשויים להשפיע גם על מוות של תאי קולטי אור אחרי הגיוס של RD. בנוסף, אם אתר פצע הכניסה אינו אטום, hyaluronate נתרן עלול לדלוף החוצה עם מניפולציה העין במהלך אנוקלאציה. זה עשוי להוביל לסיווג שגוי של RD הרדוד, שעשוי בתורו משפיע על הפרשנות של התוצאות. אנחנו שינינו את שיטת transscleral להזרקת subretinal של hyaluronate נתרן כדי להגדיל את שחזור של RDS ולהפחית את שיעור דימום subretinal. השלב הקריטי של פרוטוקול זה הוא יצירת חתך scleral עצמית איטום באמצעות מחט G 30, המונעת דליפה של hyaluronate נתרן לאחר הזרקה. בניגוד לשיטות קודמות, פרוטוקול זה מבוצע ללא התבוננות בקרקעית כך תשומת לב רבה יותר מוקדשת לפצע scleral. יישום של דבק גם מונע hyaluronate נתרן מ דולף החוצה של העין. מניסיוננו, השיעור של דימום subretinal עם פרוטוקול זה wכמשמעותי פחות מזה עם פרוטוקולים אחרים. אם דימום כורוידאלית מתרחש במהלך שלב חתך scleral, זה יהיה לצאת מהעין דרך פצע scleral כי צעד זה מתבצע לפני הפחתת לחץ התוך עיני. אם דימום כורוידאלית מתרחש לאחר ההפחתה של הלחץ וניתוק של רשתית נוירו התוך עיני, הדם יהיה לנתח לחלל subretinal. מצאנו שזה יקרה בכ -5% מהמקרים בניגוד לכ 10-20% עם טכניקות האחרות. צריכים להיות שלילי בעלי חיים אלה מניתוח. גם טכניקה זו יכולה לשמש להזרקת subretinal של העברת גנים בתיווך וקטור למקד תאי קולטי אור או הרשתית 24, 25. בגלל הרכב הטיפוסי (PBS, מלוח) לזריקות הללו הוא באופן משמעותי פחות צמיג מ hyaluronate נתרן, טכניקות סטנדרטיות הם הטרידו יותר הדלפות. הטכניקה המתוארת במסמך, על ידי צמצום סיכון זה, עושה ניסויי העברת וקטור יותר לשחזור ואמין.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

מוות של תאי קולטי אור והירידה חזותית הבאה מתרחש כאשר קולטני האור מופרד מאפיתל הפיגמנט ברשתית הבסיסי. הפרדה פיזית של קולטני אור שבמחל רשתית שונות, כוללים ניוון הקשור לגיל (AMD), chorioretinopathy הצפק המרכזי, רטינופתיה סוכרתית ורטינופתיה של פגות, כמו גם rhegmatogenous (הנגרם על ידי כלומר הפסקה ברשתית) היפרדות רשתית ( RD). הזרקת subretinal של hyaluronate נתרן היא מודל מקובל ליצירת RD שמוביל למותם של תאי קולטי אור, המספקים תובנה הפתופיזיולוגיה של ניוון קולטי האור 1-15. יש ניוון קולטי אור הנגרם על ידי הזרקת hyaluronate נתרן subretinal, הוצג לראשונה בשנת 2001 7, היתרון של קורס זמן סביר (ימים עד שבועות). עם זאת, זה יכול להיות שונה משמעותי של אובדן תאי קולטי אור מבעלי החיים להאנימהl בשל שני גורמים עיקריים המשפיעים על מוות של תאי קולטי אור לאחר RD: גובה 1) ומשך זמן של RD, ו -2) את המופע של דימום subretinal. יש עקומה למידה תלולה טכנית לשיטה שתורמת לשני הגורמים. עליות התנוונות תאי קולטי אור בגובה של RD, כמו המרחק בין אפיתל הפיגמנט ברשתית (RPE) שכבה וקולטנית אור מגבירים 16-17. עולה בקנה אחד עם דיווחים אלה, הניסויים הקודמים שלנו הראו יותר מות קולטי אור בRDS bullous מ RDS הרדוד. זה כבר דווח גם כי דימום subretinal הוא רעיל לתאי קולטי אור ומשפיע על תאי קולטי אור המוות 18-21. כמו כן, יש לנו ציינו עוד מות קולטי אור בRDS עם דימום subretinal מ RDS ללא דימום subretinal. לפיכך, טכניקות כדי למזער את השונות צריכים להתמקד בהשגת גבהים של RD עקביים, תוך הימנעות דימום subretinal. השיטה שונה שלנו של בducing RD יכול לעשות בולוס לשחזור וRD המתמשך על אותה העמדה של העין עם התרחשות נדירה של דימום subretinal. ביצענו ניתוח באמצעות גישה זמנית משום שהוא קל יותר להשגת שדה ניתוח רחב יותר בהשוואה לאתרים אחרים. לאחר החתך של הלחמית, חתך scleral עצמי איטום נעשה באמצעות מחט G 30. מנהרת scleral נוצר, ואחרי חדירת scleral לדמה העין. אם דימום כורוידאלית מתרחש בשלב זה, הדימום יהיה לצאת מהעין דרך פצע scleral, והדימום ניתן לעצור על ידי astriction עם חנית כירורגית. לנקב לשכה קדמית מבוצע לאחר מכן מהקרנית כדי להפחית את לחץ התוך עיני. זהו צעד חשוב, כי הזרקת subretinal לבד תוביל ללחץ התוך עיני מוגבר עם חסימת עורק רשתית כתוצאה ואיסכמיה של הרשתית הפנימית. מחט G 33 מחוברת למזרק μl המילטון 10 מוכנסת לאחר מכן לתוך חלל subretinal, ו3.5 μ; Hyaluronate נתרן ליטר מוזרק בעדינות כדי לנתק את רשתית נוירו מהרשתית שבבסיס. בניגוד לשיטות אחרות של RD גרימת המבוצעים תחת השגחה הפונדוס, טכניקה זו מבוצעת תחת השגחה ישירה. מאז פצע scleral הוא אטימה עצמית, hyaluronate נתרן לא ידלוף החוצה לאחר הזרקה. לבסוף, דבק הוא לשים על פצע scleral, והלחמית היא לחבר מחדש למקומו המקורי. אלה נמשכים צעדים גם להפחית את הסיכון של דליפת hyaluronate נתרן. ההזרקה של 3.5 hyaluronate נתרן μl יוצרת RDS לשעתק (50% מהרשתית) בעיניהם של עכברים 8 שבועות בן. יצירת הפצע העצמי איטום היא הצעד החשוב ביותר בהליך שונה שלנו משום שהוא מונע hyaluronate נתרן מוזרק מ דולף החוצה של העין, ובכך מאפשר בולוס לשחזור וRDS המתמשך.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketaject</td>
 <td>Phoenix</td>
 <td>2010025</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>AnaSed</td>
 <td>LLOYD</td>
 <td>4004821</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5% Phenylephrine / 0.5% Tropicamide</td>
 <td>Massachusetts Eye and Ear Pharmacy</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.5% Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution</td>
 <td>AKORN</td>
 <td>17478-263-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Provics</td>
 <td>Alcon</td>
 <td>8065183085</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Webglue</td>
 <td>Patterson Veterinary</td>
 <td>07-8566128</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MG90</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G1/2 PrecisionGlide Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Weck-Cel Eye Spears</td>
 <td>Beaver-Visitec</td>
 <td>0008685</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 Microliter Syringe</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7635-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>33 gauge, 0.5 inch needle</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7803-05</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18x18mm Cover Glass</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>18-548A</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate

הזרקת subretinal של hyaluronate נתרן היא שיטה מקובלת של גרימת היפרדות רשתית (RD). עם זאת, הגובה ומשך הזמן של RD או ההתרחשות של דימום subretinal יכולים להשפיע על המוות של תאי קולטי אור ברשתית מנותקת. מכאן, זה יתרון ליצור RDS לשעתק ללא דימום subretinal להערכת מוות של תאי קולטי אור. אנחנו שונה שיטה שדווחה בעבר כדי ליצור בולוס וRDS המתמשך במיקום שחזור עם התרחשות נדירה של דימום subretinal. השלב הקריטי של שיטה זו שונה הוא יצירת חתך scleral עצמית איטום, אשר יכול למנוע דליפה של hyaluronate נתרן לאחר ההזרקה לחלל subretinal. כדי להפוך את החתך העצמי איטום scleral, מנהרת scleral נוצר, ואחרי חדירת scleral לדמה עין עם מחט G 30. למרות דימום כורוידאלית עלול להתרחש במהלך שלב זה, astriction עם חנית כירורגית מפחית את השיעור של מכפלת כורוידאליתorrhage. שיטה זו מאפשרת מודל לשחזור יותר ואמין של מות קולטי אור במחלות שכרוכות RD כגון rhegmatogenous RD, רטינופתיה של פגות, רטינופתיה סוכרתית, chorioretinopathy הצפק המרכזי, וניוון הקשור לגיל (AMD).

כדי להעריך את ההתמדה של RD נעשה על ידי פרוטוקול זה, cryosections נעשה בימים 3, 7, ו14 לאחר הגיוס של RD. שש עיניים שימשו עבור כל נקודת זמן. מכתים Hematoxylin ו eosin (HE) שימש כדי להמחיש את החלקים. כל הסעיפים הראו RD bullous מתקרב לעדשה (איור 2). עין אחת הראתה דימום subretinal ביום 7. אין עיניים הראו כל סימנים של זיהום או פגיעה בעדשה. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="איור 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> איור 1. יצירת חתך scleral איטום עצמי. סכמטי זה מראה תמונת חתך של עין עכבר רגילה. קו אדום מציין את חתך scleral איטום העצמי. מנהרת scleral אחרי חדירת scleral לדמתה עין עם מחט G 30 יוצרת חתך scleral איטום עצמי. פצע scleral זהיהיה עם לחץ התוך עיני, שיכול למנוע דליפה של hyaluronate נתרן לאחר ההזרקה לחלל subretinal ולהשיג היפרדות רשתית bullous מתמשכת חתום עצמי. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="איור 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> איור 2. מהלך זמן של היפרדות רשתית. תמונה הפונדוס זה מראה היפרדות רשתית bullous ללא דימום subretinal מייד לאחר ניתוח. Cryosections עם hematoxylin ו eosin ניתוק (HE) מופע מכתים מתמשך bullous רשתית ללא דימום subretinal לפחות עד היום 14.

Watch this Scientific Journal Video about Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate at JoVE.com

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

יצירת הפרדות רשתית ניסיונית עם גובה לשעתק ומתמשך של ניתוק, וללא דימום subretinal, היא חשובה ללימוד הפתופיזיולוגיה של אובדן תאי קולטי אור ברשתית מחלה והערכה של התערבויות טיפוליות פוטנציאליות. כאן אנו מדווחים שיטה כזו בפירוט.

רשתית דגם ניתוק במכרסמים על ידי הזרקת subretinal של נתרן Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

retinal-detachment-model-rodents-subretinal-injection-sodium

Research

JoVE Journal

Medicine

20.6K Views.  Massachusetts Eye and Ear Infirmary, Harvard Medical School.  יצירת הפרדות רשתית ניסיונית עם גובה לשעתק ומתמשך של ניתוק, וללא דימום subretinal, היא חשובה ללימוד הפתופיזיולוגיה של אובדן תאי קולטי אור ברשתית מחלה והערכה של התערבויות טיפוליות פוטנציאליות. כאן אנו מדווחים שיטה כזו בפירוט. 

Video: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

הזרקת subretinal של וקטורי ריפוי גנטי ותאי גזע לעיניים המאוסות

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

ביצוע subretinal זריקות במכרסמים כדי לספק תאי הרשתית פיגמנט האפיתל בהשעיה

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

צעד אחר פרוטוקול שלב לכירורגיה subretinal בארנבונים

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Studying Left Ventricular Reverse Remodeling by Aortic Debanding in Rodents

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, mice undergo RR upon removal of the aortic constriction. In this paper, we describe a step-by-step procedure to perform a minimally invasive surgical aortic debanding in mice. Echocardiography was subsequently used to assess the degree of cardiac hypertrophy and dysfunction during LV remodeling and RR and to determine the best timing for aortic debanding. At the end of the protocol, terminal hemodynamic evaluation of the cardiac function was conducted, and samples were collected for histological studies. We showed that debanding is associated with surgical survival rates of 70-80%. Moreover, two weeks after debanding, the significant reduction of ventricular afterload triggers the regression of ventricular hypertrophy (~20%) and fibrosis (~26%), recovery of diastolic dysfunction as assessed by the normalization of left ventricular filling and end-diastolic pressures (E/e&#39;&#160;and LVEDP). Aortic debanding is a useful experimental model to study LV RR in rodents. The extent of myocardial recovery is variable between subjects, therefore, mimicking the diversity of RR that occurs in the clinical context, such as aortic valve replacement. We conclude that the aortic banding/debanding model represents a valuable tool to unravel novel insights into the mechanisms of RR, namely the regression of cardiac hypertrophy and the recovery of diastolic dysfunction.

Here we describe a step-by-step protocol of surgical aorta debanding in the well-established mice model of aortic-constriction. This procedure not only allows studying the mechanisms underlying the left ventricular reverse remodeling and regression of hypertrophy but also to test novel therapeutic options that might accelerate myocardial recovery.

לימוד שיפוץ הפוך חדרי שמאלי על ידי ניתוק האבניים במכרסמים

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, ...

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the pathophysiological changes of human OA. However, as the main symptom in the late stage of OA, pain affects the patients&#39; daily life, and there are not many available models. The mono-iodoacetate (MIA)-induced model is the most widely used OA pain model, mainly used in rodents. MIA is an inhibitor of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, which causes chondrocyte death, cartilage degeneration, osteophyte, and measurable changes in animal behavior. Besides, expression changes of matrix metalloproteinase (MMP) and pro-inflammatory cytokines (IL1 &#946; and TNF &#945;) can be detected in the MIA-induced model. Those changes are consistent with OA pathophysiological conditions in humans, indicating that MIA can induce a measurable and successful OA pain model. This study aims to describe the methodology of intra-articular injection of MIA in rats and discuss the resulting pain-related behaviors and histopathological changes.

This study describes the method of intra-articular injection of mono-iodoacetate in rats and discusses the resulting pain-related behaviors and histopathological changes, which provide references for future applications.

מודל כאב אוסטאוארתריטיס המושרה על ידי הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

מודל רטינופתיה הנגרמת על ידי חמצן למחלות רשתית איסכמיות במכרסמים

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. To investigate pathological mechanisms of retinal ischemia, relevant experimental models need to be developed. Anatomically, a main retinal blood supplying vessel is the ophthalmic artery (OpA) and OpA originates from the internal carotid artery of the common carotid artery (CCA). Thus, disruption of CCA could effectively cause retinal ischemia. Here, we established a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion (tBCCAO) to tie the right CCA with 6-0 silk sutures and to occlude the left CCA transiently for 2 seconds via a clamp, and showed that tBCCAO could induce acute retinal ischemia leading to retinal dysfunction. The current method reduces reliance on surgical instruments by only using surgical needles and a clamp, shortens occlusion time to minimize unexpected animal death, which is often seen in mouse models of middle cerebral artery occlusion, and maintains reproducibility of common retinal ischemic findings. The model can be utilized to investigate the pathophysiology of ischemic retinopathies in mice and further can be used for in vivo drug screening.

Here, we describe a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion using simple sutures and a clamp. This model can be useful for understanding the pathological mechanisms of retinal ischemia caused by cardiovascular abnormalities.

דגם מורין של פגיעה איסכמית ברשתית הנגרמת על ידי חסימת עורקים דו-צדדית משותפת חולפת

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

השתלת אפיתל פיגמנט רשתית במודל פרימטים לא אנושי למחלות רשתית ניוונית

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of transplant with the potential to deliver durable heart valves capable of somatic growth with no requirement for anticoagulation. However, the immunobiology of heart valve transplants remains unexplored, highlighting the need for animal models to study this new type of transplant. Previous rat models for heterotopic aortic valve transplantation into the abdominal aorta have been described, though they are technically challenging and costly. For addressing this challenge, a renal subcapsular transplant model was developed in rodents as a practical and more straightforward method for studying heart valve transplant immunobiology. In this model, a single aortic valve leaflet is harvested and inserted into the renal subcapsular space. The kidney is easily accessible, and the transplanted tissue is securely contained in a subcapsular space that is well vascularized and can accommodate a variety of tissue sizes. Furthermore, because a single rat can provide three donor aortic leaflets and a single kidney can provide multiple sites for transplanted tissue, fewer rats are required for a given study. Here, the transplantation technique is described, providing a significant step forward in studying the transplant immunology of heart valve transplantation.

This protocol describes a simple and efficient method for the transplantation of aortic valve leaflets under the renal capsule to allow for the study of alloreactivity of heart valves.