Agradecemos Wendy Chao, pelo seu apoio na revisão crítica. Este trabalho foi financiado pela Bausch &amp; Lomb Vitreoretinal Fellowship (HM), Instituto Nacional do Olho concessão EY014104 (JWM), Investigação para Prevenir Fundação Cegueira (DGV), Fundo de Investigação Eye Lions (DGV), e uma generosa doação da família Yeatts (JWM e DGV).

Todos os experimentos em animais foram realizados de acordo com a Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia Declaração para o uso de animais em Ophthalmic and Vision Research, e as diretrizes e regulamentos estabelecidos pelo Massachusetts Eye and Ear Infirmary Comitê Animal Care. 1. O pré-tratamento <ol><li> Anestesiar um rato com 8 semanas de idade, com uma injecção intraperitoneal de uma mistura de 60 mg / kg de cetamina e 6 mg / kg de xilazina. </li><li> Cortar os bigodes. Isso é feito porque eles interferem com a visualização e colocação de instrumentos. </li><li> Dilatar a pupila com 5% de fenilefrina e 0,5% tropicamide. </li><li> Corte os cílios. Isto também é feito porque interferem com a visualização e a colocação do instrumento. </li><li> Aplicar anestesia tópica (solução oftálmica de 0,5% de cloridrato de proparacaína). </li></ol> 2. Cirurgia Sob o Microscópio <ol><li> Coloque o mouse em uma pos lateraisition com o nariz para o cirurgião. Uma pitada dedo do pé é realizado para confirmar a anestesia cirúrgica e luvas estéreis são vestiu antes de iniciar a cirurgia. </li><li> Incisão na conjuntiva temporais no limbo posterior e separar a conjuntiva da esclera. Evitar a penetração da esclerótica. Após este passo, compreender a conjuntiva no limbo com fórceps para controlar o olho. </li><li> Fazer uma incisão escleral de auto-selagem, utilizando a ponta de uma agulha G 30 com o chanfro apontada para cima. Fazer um túnel na esclerótica através da esclera e penetrar na esclerótica na coróide (Figura 1). Não penetrar a retina. Se o sangramento ocorre coróide e sai através da ferida escleral, realizar uma astriction com uma lança cirúrgico até que o sangramento pare. Esta ferida escleral será auto-selado com pressão intra-ocular. </li><li> Perfurar a córnea com uma agulha de 30 G para reduzir a pressão intra-ocular. Use a agulha paralela à íris para evitar ferir a íris e lente durante entry para a câmara anterior. A pressão intra-ocular vai fazer com que a ferida para auto-selagem. </li><li> Inserir uma agulha G 33 conectado a um mL da seringa no espaço sub-retiniano Hamilton 10, com o bisel apontado para baixo (em direção ao olho interno) e injetar o hialuronato de sódio 3,5 mL com cuidado para retirar a retina neurossensorial do EPR subjacente. Evite penetrar a retina com a agulha 33 G, porque o hialuronato de sódio vai para o espaço vítreo, mas não o espaço sub-retiniano, se a retina é penetrada. Além disso, evitar injeção rápida porque vai criar uma lágrima oral, e hialuronato de sódio vai vazar para a câmara anterior. </li><li> Deixe o fluxo do humor aquoso para fora do punção da córnea, empurrando a córnea em torno do furo da córnea com uma pinça para ajustar a pressão intra-ocular. </li><li> Confirmar a ausência de fuga a partir da ferida escleral usando uma lança cirúrgico. </li><li> Para reduzir o risco de fuga de hialuronato de sódio, colocar cianoacrilato cola cirúrgicaa ferida escleral. </li><li> Recoloque a conjuntiva à sua posição original, utilizando cianoacrilato cola cirúrgica. Isto irá reduzir ainda mais o risco de fuga de hialuronato de sódio. </li><li> Verifique o fundo usando uma tampa de vidro e confirme a criação de uma RD bolhosa sem hemorragia sub-retiniana. </li></ol> 3. Após tratamento <ol><li> Aplicar uma pomada antibiótica ao olho bacitracina para reduzir o risco de infecção. </li><li> Mantenha os ratos em uma almofada de aquecimento para evitar a anestesia (mistura de cetamina e xilazina) de causar baixa temperatura do corpo posterior à pressão arterial baixa. </li><li> Coloque os ratos de volta para a jaula de animais depois que eles despertam da anestesia. Monitorar os ratos diárias para complicações. Se surgir alguma complicação, eutanásia os ratos, conforme descrito abaixo. </li></ol> 4. Sacrifício <ol><li> Eutanásia dos ratinhos por deslocamento cervical depois de injecção intraperitoneal de 100 mg / kg de pentobarbital de sódio, e enucleate os olhos em pontos de tempo apropriados para cada experiência (não mostrado). Evite aplicar pressão sobre o olho durante a enucleação porque o hialuronato de sódio pode vazar. RDs bolhosas deve ser persistente durante pelo menos 14 dias. </li></ol>

<ol>
	<li>Anderson, D. H., Guerin, C. J., Erickson, P. A., Stern, W. H., Fisher, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+recovery+in+the+reattached+retina.">Morphological recovery in the reattached retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 168-183 (1986).</li><li>Cook, B., Lewis, G. P., Fisher, S. K., Adler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+photoreceptor+degeneration+in+experimental+retinal+detachment.">Apoptotic photoreceptor degeneration in experimental retinal detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 990-996 (1995).</li><li>Zacks, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+Activation+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Caspase Activation in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 1262-1267 (2003).</li><li>Zacks, D. N., Han, Y., Zeng, Y., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Signaling+Pathways+and+Stress-Response+Genes+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Activation of Signaling Pathways and Stress-Response Genes in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 1691-1695 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cytokine+responses+to+retinal+detachment+in+rats.">Characterization of cytokine responses to retinal detachment in rats.</a> Mol. Vis. 12, 867-878 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Necrosis+Factor-Mediates+Photoreceptor+Death+in+a+Rodent+Model+of+Retinal+Detachment.">Tumor Necrosis Factor-Mediates Photoreceptor Death in a Rodent Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1384-1391 (2011).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relocalization+of+apoptosis-inducing+factor+in+photoreceptor+apoptosis+induced+by+retinal+detachment+in+vivo.">Relocalization of apoptosis-inducing factor in photoreceptor apoptosis induced by retinal detachment in vivo.</a> Am. J. Pathol. 158, 1271-1278 (2001).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+photoreceptor+apoptosis+in+functional+damage+after+retinal+detachment.">Critical role of photoreceptor apoptosis in functional damage after retinal detachment.</a> Curr. Eye Res. 24, 161-172 (2002).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+chemoattractant+protein+1+mediates+retinal+detachment-induced+photoreceptor+apoptosis.">Monocyte chemoattractant protein 1 mediates retinal detachment-induced photoreceptor apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 104, 2425-2430 (2007).</li><li>Trichonas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+interacting+protein+kinases+mediate+retinal+detachment-induced+photoreceptor+necrosis+and+compensate+for+inhibition+of+apoptosis.">Receptor interacting protein kinases mediate retinal detachment-induced photoreceptor necrosis and compensate for inhibition of apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 107, 21695-21700 (2010).</li><li>Roh, M. I., Murakami, Y., Thanos, A., Vavvas, D. G., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Edaravone,+an+ROS+Scavenger,+Ameliorates+Photoreceptor+Cell+Death+after+Experimental+Retinal+Detachment.">Edaravone, an ROS Scavenger, Ameliorates Photoreceptor Cell Death after Experimental Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3825-3831 (2011).</li><li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tauroursodeoxycholic+acid+(TUDCA)+protects+photoreceptors+from+cell+death+after+experimental+retinal+detachment.">Tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) protects photoreceptors from cell death after experimental retinal detachment.</a> PLoS One. 6, e24245 (2011).</li><li>Yang, L., Bula, D., Arroyo, J. G., Chen, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+retinal+detachment-associated+photoreceptor+cell+loss+in+Bax-deficient+mice.">Preventing retinal detachment-associated photoreceptor cell loss in Bax-deficient mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 648-654 (2004).</li><li>Cebulla, C. M., Ruggeri, M., Murray, T. G., Feuer, W. J., Hernandez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+murine+retinal+detachment+model.">Spectral domain optical coherence tomography in a murine retinal detachment model.</a> Exp. Eye Res. 90, 521-527 (2010).</li><li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundus+Autofluorescence+Findings+in+a+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment.">Fundus Autofluorescence Findings in a Mouse Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li><li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina.">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am. J. Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li><li>Ross, W., Lavina, A., Russell, M., Maberley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+correlation+between+height+of+macular+detachment+and+visual+outcome+in+macula-off+retinal+detachments+of+&lt;+or+=+7+days'+duration.">The correlation between height of macular detachment and visual outcome in macula-off retinal detachments of &lt; or = 7 days' duration.</a> Ophthalmology. 112, 1213-1217 (2005).</li><li>Glatt, H., Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+subretinal+hemorrhage+in+rabbits.">Experimental subretinal hemorrhage in rabbits.</a> Am. J. Ophthalmol. 94, 762-773 (1982).</li><li>Toth, C. A., Morse, L. S., Hjelmeland, L. M., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+directs+early+retinal+damage+after+experimental+subretinal+hemorrhage.">Fibrin directs early retinal damage after experimental subretinal hemorrhage.</a> Arch. Ophthalmol. 109, 723-729 (1991).</li><li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration.">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. , 101-672 (1994).</li><li>Bhisitkul, R. 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Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li><li>Leon, S., Yin, Y., Nguyen, J., Irwin, N., Benowitz, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lens+injury+stimulates+axon+regeneration+in+the+mature+rat+optic+nerve.">Lens injury stimulates axon regeneration in the mature rat optic nerve.</a> J. Neurosci. 20, 4615-4626 (2000).</li><li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+choroidal+neovascularization+via+brief+subretinal+exposure+to+a+newly+developed+lentiviral+vector+pseudotyped+with+Sendai+viral+envelope+proteins.">Inhibition of choroidal neovascularization via brief subretinal exposure to a newly developed lentiviral vector pseudotyped with Sendai viral envelope proteins.</a> Hum. Gene Ther. 21, 199-209 (2010).</li><li>Kong, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-complementary+AAV5+vector+facilitates+quicker+transgene+expression+in+photoreceptor+and+retinal+pigment+epithelial+cells+of+normal+mouse.">Self-complementary AAV5 vector facilitates quicker transgene expression in photoreceptor and retinal pigment epithelial cells of normal mouse.</a> Exp. Eye Res. 90, 546-554 (2010).</li></ol>

O Olho de Massachusetts e Ear Infirmary tem uma participação acionária em três patentes norte-americanas voltadas para o uso de verteporfin. Além disso, Massachusetts Eye e Ear Infirmary tem participação em certas aplicações de patentes dirigidas para a destruição selectiva de neovascularização coroidal sub-retiniana para o tratamento de degeneração macular e outras doenças. O Olho de Massachusetts e Ear Infirmary recebe royalties como resultado dessas patentes e pedidos de patentes e Dr. Miller recebe uma parte do mesmo, de acordo com o Massachusetts Eye e Política Ear Infirmary do institucional de Patentes e Procedimentos, que inclui disposições relativas à partilha de royalties. O autor, Dr. Joan W. Miller, é membro do conselho do passado e ex-acionista da Alcon, Inc., e atualmente atua como consultor da Alcon; Imagen Biotech, Inc.; Isis Pharmaceuticals; Kalvista Pharmaceuticals; Regeneron Pharmaceuticals, Inc. e ONL Therapeutics, LLC. Dr. Demetrios G. Vavvas servecomo consultor para a Roche, Genentech, Kala Pharmaceuticals.

Vários métodos para o estabelecimento de um modelo de RD em roedores olhos foram relatados 3-15 de 22. A maioria deles utilizam a injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio porque é um material viscoso, utilizado durante a cirurgia intra-ocular em seres humanos, e não está associada com qualquer conhecida toxicidade ocular 1-15. Hialuronato de sódio, em vez de solução salina normal tamponada com fosfato (PBS) ou solução salina, aumenta a duração da RD. Os métodos para a injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio usar uma das duas abordagens: uma abordagem transvitreal 3-6 ou uma abordagem escleral 7-15. Ambos os métodos são realizados com a observação do fundo. Na abordagem transvitreal, um injector sub-retiniana é introduzida na cavidade vítrea, uma retinotomia é criada na periferia da retina, e o hialuronato de sódio é injectado no espaço sub-retiniano. Neste método, duas rasgaduras da retina são feitos, o que aumenta o risco da retinal hemorragia que pode ir para o espaço sub-retiniano. Além disso, existe o risco de lesão de lentes quando o retinotomia é criado. Existem vários métodos modificados para a abordagem escleral. Na maior parte destes métodos de 7-12, após a redução da pressão intra-ocular com um punção da câmara anterior, uma agulha de 30 G ligada a uma seringa cheia com hialuronato de sódio está directamente inserida no espaço sub-retiniano através da conjuntiva, esclerótica, coróide e RPE. O hialuronato de sódio é então injectado no espaço sub-retiniano. O risco de desgaste e danos da retina lente usando este método escleral é menor do que utilizando a abordagem transvitreal. No entanto, o furo feito na esclerótica com uma agulha de 30 G é grande, especialmente para os olhos de rato, e o hialuronato de sódio injectado no espaço sub-retiniano facilmente fugas para fora do olho através da ferida escleral. Isto leva a uma RD inferior a menos persistente e a morte celular de fotorreceptores mais variável. Além disso, se a hemorragia ocorre na coróideo passo de perfuração de esclerótica, a hemorragia irá propagar-se no espaço sub-retiniano por causa da pressão intra-ocular tem sido reduzido antes da injecção sub-retiniana hialuronato. Vários fatores podem influenciar o efeito de RD no descolamento de retina, incluindo a hemorragia sub-retiniana ea altura e persistência da RD 16-21. Células fotorreceptoras de morte aumenta com o aumento da altura da RD 16, 17, e danos às células fotorreceptoras podem ser mais extensa, devido à redução de difusão de oxigênio e nutrientes essenciais dos coriocapilares com maior RD comparação com RD superficial. Hemorragia sub-retiniana também é tóxico para as células fotorreceptoras 18-21; possíveis mecanismos dessa toxicidade no descolamento de retina incluem hipoxia e perturbação metabólica, hemorragia sub-retiniana como uma barreira de difusão, e neurotoxicidade direta induzida por componentes do sangue (como o ferro). Lesão Lens, que tem sido relatado para ter um efeito protetor sobre a reticélulas ganglionares nal 23, também podem afetar a morte das células fotorreceptoras após a indução da RD. Além disso, se o local da ferida de entrada não é selado, o hialuronato de sódio pode sair com a manipulação de olho durante a enucleação. Isso pode levar à classificação errônea de um RD como superficial, o que por sua vez pode afetar a interpretação dos resultados. Nós modificámos o método escleral para injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio para aumentar a reprodutibilidade de TR e reduzir o índice de hemorragia sub-retinal. O passo fundamental deste protocolo é a criação de uma incisão escleral auto-selante usando uma agulha 30 G, o que impede o vazamento de hialuronato de sódio após a injeção. Ao contrário dos métodos anteriores, este protocolo é realizada sem a observação do fundo de olho para que maior atenção é dada à ferida escleral. Aplicação de cola também impede o hialuronato de sódio de vazar para fora do olho. Em nossa experiência, a taxa de hemorragia sub-retiniana com este protocolo wcomo significativamente menor do que com outros protocolos. Se o sangramento coróide ocorre durante a etapa de incisão da esclerótica, irá sair do olho através da ferida de esclerótica porque este passo é executado antes de reduzir a pressão intra-ocular. Se o sangramento coróide ocorra após a redução da pressão intra-ocular e descolamento da retina neurosensorial, sangue dissecar para o espaço sub-retiniano. Descobrimos que isso aconteça em cerca de 5% dos casos, em contraste com cerca de 10-20% com as outras técnicas. Estes animais devem ser excluídos da análise. Esta técnica também pode ser usada para a injecção sub-retiniana de transferência de genes mediada por vector para atingir as células fotorreceptoras ou RPE 24, 25. Porque o veículo típico (PBS, solução salina) para essas injeções é significativamente menos viscoso do que o hialuronato de sódio, técnicas padrão são atormentados por mais vazamentos. A técnica aqui descrita, reduzindo este risco, faz experiências de transferência de vector mais reprodutível efiável.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Fotorreceptores da morte celular e subsequente declínio visuais ocorre quando as células fotorreceptoras são separados a partir do epitélio pigmentar da retina subjacente. A separação física dos fotorreceptores é visto em várias doenças da retina, incluindo a degeneração macular relacionada com a idade (AMD), coriorretinopatia serosa central, retinopatia diabética e retinopatia de prematuridade, bem como regmatogéneo (isto é causado por uma ruptura na retina) descolamento da retina ( RD). Injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio é um modelo amplamente aceito para criar uma RD que leva à morte das células fotorreceptoras, fornecendo informações sobre a fisiopatologia da degeneração dos fotorreceptores 1-15. Degeneração de fotorreceptores induzida por injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio, introduzido pela primeira vez em 2001, 7, tem a vantagem de um campo de tempo razoável (dias ou semanas). No entanto, ele pode ter uma variabilidade significativa da perda de células fotorreceptoras do animal ao animal devido a dois principais fatores que afetam a morte das células fotorreceptoras após RD: 1) de altura e duração da RD, e 2) a ocorrência de hemorragia sub-retiniana. Há uma curva de aprendizagem técnica íngreme para o método que contribui para ambos os factores. Degeneração de células fotorreceptoras aumenta com a altura da RD, como a distância entre o epitélio pigmentado da retina (RPE) da camada e fotorreceptores aumenta 16-17. De acordo com esses relatórios, nossas experiências anteriores mostraram mais morte de fotorreceptores em RDs bolhosas que RDs rasas. Também tem sido relatado que a hemorragia sub-retiniana é tóxico para as células fotorreceptoras e afecta a morte celular de fotorreceptores 18-21. Da mesma forma, temos observado mais a morte de fotorreceptores em RDs com hemorragia sub-retiniana de DRs sem hemorragia sub-retiniana. Assim, as técnicas para minimizar a variabilidade tem de se concentrar em alcançar alturas consistentes de RD, evitando hemorragia sub-retiniana. O nosso método de modificação emdução RD pode fazer bolhosa reprodutível e RD persistente na mesma posição do olho com rara ocorrência de hemorragia sub-retiniana. Foi realizada a cirurgia através de uma abordagem temporal, porque é mais fácil de conseguir um campo operatório mais largo em comparação com outros sites. Depois da incisão da conjuntiva, uma incisão escleral auto-selagem é feita utilizando uma agulha G 30. Um túnel na esclerótica é criado, seguido pela penetração de esclerótica para a coróide. Se o sangramento coróide ocorre neste passo, a hemorragia irá sair do olho através da ferida escleral, e o sangramento pode ser interrompido por astriction com uma lança cirúrgico. Uma punção da câmara anterior é, então, realizada a partir da córnea para reduzir a pressão intra-ocular. Este é um passo importante, pois a injeção sub-retiniana só vai levar ao aumento da pressão intra-ocular com oclusão da artéria da retina resultante e isquemia da retina interna. Uma agulha 33 G ligada a uma seringa Hamilton de 10 ul é então inserida no espaço sub-retiniano, e 3,5 μ, Hialuronato de sódio l é suavemente injetado para descolar a retina neurossensorial do EPR subjacente. Em contraste com outros métodos de induzir RD que são realizados sob a observação de fundo de olho, esta técnica é realizada sob observação directa. Desde a ferida escleral é auto-selante, hialuronato de sódio não vai vazar para fora após a injeção. Finalmente, a cola é colocado sobre a ferida de esclerótica e a conjuntiva é recolocado na sua posição original. Estes passos dura também reduzir o risco de fuga de hialuronato de sódio. A injecção de 3,5 mL de hialuronato de sódio cria DRs reprodutíveis (50%) da retina nos olhos de ratinhos de 8 semanas de idade. Criando a ferida auto-selante é o passo mais importante no nosso procedimento modificado, pois evita que o hialuronato de sódio injetado vaze para fora do olho, permitindo assim bolhosa reprodutível e RDs persistentes.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketaject</td>
 <td>Phoenix</td>
 <td>2010025</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>AnaSed</td>
 <td>LLOYD</td>
 <td>4004821</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5% Phenylephrine / 0.5% Tropicamide</td>
 <td>Massachusetts Eye and Ear Pharmacy</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.5% Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution</td>
 <td>AKORN</td>
 <td>17478-263-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Provics</td>
 <td>Alcon</td>
 <td>8065183085</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Webglue</td>
 <td>Patterson Veterinary</td>
 <td>07-8566128</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MG90</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G1/2 PrecisionGlide Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Weck-Cel Eye Spears</td>
 <td>Beaver-Visitec</td>
 <td>0008685</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 Microliter Syringe</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7635-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>33 gauge, 0.5 inch needle</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7803-05</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18x18mm Cover Glass</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>18-548A</td>
 <td></td>
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retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate

Injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio é um método amplamente aceito de induzir o descolamento de retina (DR). No entanto, a altura e tempo de RD ou a ocorrência de hemorragia sub-retinal pode afectar a morte celular de fotorreceptores na retina descolada. Por isso, é vantajoso criar DRs reprodutíveis sem hemorragia sub-retiniana para avaliar a morte celular de fotorreceptores. Nós modificamos um método previamente relatado para criar bolhosa e RDs persistentes em um local reprodutível com rara ocorrência de hemorragia sub-retiniana. O passo crítico deste método modificado é a criação de uma incisão escleral auto-vedante, o que pode impedir a fuga de hialuronato de sódio, após injecção no espaço sub-retiniano. Para fazer a incisão escleral de auto-selagem, um túnel na esclerótica é criado, seguido pela penetração de esclerótica para a coróide, com uma agulha G 30. Apesar de hemorragia de coróide podem ocorrer durante esta etapa, astriction com uma lança cirúrgica reduz a taxa de hem coróideorrhage. Este método permite que um modelo mais reprodutível e fiável de morte de fotorreceptores em doenças que envolvem RD como regmatogéneo RD, retinopatia da prematuridade, retinopatia diabética, coriorretinopatia serosa central, e degeneração macular relacionada com a idade (AMD).

Para avaliar a persistência da RD feito por este protocolo, criosecções foram feitas nos dias 3, 7 e 14 após a indução da RD. Seis olhos foram utilizadas para cada ponto de tempo. Hematoxilina e eosina (HE) foi usado para visualizar as seções. Todas as secções mostraram uma RD bolhosa aproximando a lente (Figura 2). Um olho mostrou hemorragia sub-retiniana no dia 7. Não há olhos mostrou quaisquer sinais de infecção ou lesão lente. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> Figura 1. Criando uma incisão escleral de auto-selagem. Este esquema mostra uma imagem em corte transversal de um olho normal de rato. Linha vermelha indica a incisão escleral auto-selante. Um túnel na esclerótica, seguido pela penetração de esclerótica para a coróide, com uma agulha G 30, cria uma incisão escleral de auto-selagem. Esta ferida escleralvai ser auto-selado com pressão intra-ocular, o que pode impedir a fuga de hialuronato de sódio após a injecção para dentro do espaço sub-retinal e alcançar os descolamentos de retina bolhosas persistentes. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> Figura 2. Curso do tempo de descolamento de retina. Esta foto de fundo de olho mostra um descolamento de retina bolhosa sem hemorragia sub-retiniana imediatamente após a cirurgia. Criosecções com hematoxilina e eosina (HE) show de descolamento de retina bolhosa persistente sem hemorragia sub-retiniana por pelo menos 14 dias.

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Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Criação de descolamento de retina experimentais com uma altura reprodutível e sustentada de desapego, e sem hemorragia sub-retiniana, é importante para o estudo da fisiopatologia da perda de células fotorreceptoras da retina na doença e avaliar intervenções terapêuticas potenciais. Relatamos tal método em detalhes.

Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

retinal-detachment-model-rodents-subretinal-injection-sodium

Research

JoVE Journal

Medicine

20.6K visualizações.  Massachusetts Eye and Ear Infirmary, Harvard Medical School.  Criação de descolamento de retina experimentais com uma altura reprodutível e sustentada de desapego, e sem hemorragia sub-retiniana, é importante para o estudo da fisiopatologia da perda de células fotorreceptoras da retina na doença e avaliar intervenções terapêuticas potenciais. Relatamos tal método em detalhes. 