Name: studying microbial communities in vivo: a model of host-mediated interaction between candida albicans and pseudomonas aeruginosa in the airways
Uploaded: 2016-01-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways at JoVE.com

The authors would like to acknowledge the University of Lille and the Pasteur Institute of Lille, especially Thierry Chassat and Jean-Pierre Decavel, responsible for animal housing breeding safety and husbandry. This work was supported by the "Soci&#233;t&#233; de Pathologies Infectieuses de Langue Fran&#231;aise" (SPILF).

動物実験のための地域の倫理委員会は、地域の治験研究指針における国内および国際的な動物のケアと用途に応じて、この方法を承認しました。 1.サンプルの採取<ol><li>試料保存<ol><li>劣化を避けるために、冷凍保存まで20℃または氷上で - で保存してすぐにすべてのサンプルを収集し。気管支肺胞洗浄液（BAL）の性能を向上させるために、氷上で滅菌リン酸緩衝食塩水（PBS）を置きます。 </li></ol></li><li>手術<ol><li>オートクレーブを使用して、すべての手術用機器を滅菌します。 注：可能な場合は、交差汚染を避けるために、腹部と胸部のステップのための機器の二つの異なるセットを使用することをお勧めします。必要な解剖装置は、図4（a）に詳述されています</li></ol></li></ol> 2.マウス、細菌や酵母株<ol><li>再における動物の局所的な使用に準拠したハウスマウスバイオセーフティーレベル2微生物の使用にバイオセーフティーレベル2収容施設で、食料や水アドリブで、ケージあたり5匹を超えることなく換気ラック内検索委員会のガイドライン：P。緑膿菌とC.アルビカンス。 </li><li> 40％のグリセロール培地中で-80℃で細菌株を保管してください。 <ol><li> 10μlの接種ループを使用して滅菌LB培地の3ミリリットルを含む培養チューブに凍結ストックから直接細菌を追加します。軌道点眼前日（400 rpm）し振とうしながら37℃でN / Oのままにしておきます。 </li><li> 5分間2000×gで遠心分離することによって収穫細菌。 </li><li>適切なクローズドバイオハザード廃棄物処理に上清を吸引除去します。培養管の底に白い付着ペレットを観察します。 </li><li> 5mlのPBSを使用してペレットを洗浄し、一時停止。 </li><li>繰り返して、第二の洗浄を行うための第2の時間を2.2.3する2.2.2を繰り返します。 </li><li> 1mlのPBSを使用してペレット化した細菌を再懸濁し簡単なボルテックス。 </li><li>光学濃度計を用いて600nmでの光学濃度計を使用して、接種密度を決定します。 0.9の密度は、PAO1 10 9 CFU / mlに相当し、それに応じて希釈します。 注：この結果は、較正された接種物の連続希釈物の濃度を決定することによって、各使用した株について得られなければなりません。 </li><li>シリアル対数希釈液によって接種物を確認し、ブロモクレゾールパープル寒天（BCP）プレートとO / N培養上の各希釈液100μlをプレート。鼻腔内に1mlあたり1×10 8〜2×10 8 CFU（マウスあたり5×10 6〜1×10 7 CFU）を含む溶液50μlを各マウスを管理します。 </li></ol></li><li>使用C.参照株としてアルビカンス SC5314。 -80℃で40％グリセロール培地中で株を節約。 <ol><li> 0.015％のアミカシンとサプリメント酵母ペプトンデキストロースブロス細菌汚染を回避し、さらに数を容易にします。 </li><li>および10を使用して酵母を追加＃181; 37℃でアミカシン、O / Nで補充準備YPDブロスにリットル接種ループ。 </li><li> 5分間2000×gで遠心分離することによって収穫酵母。 </li><li>適切なbioharzardの廃棄物処理に上清を取り除きます。ホワイト付着ペレットは、培養管の底部に観察されるはずです。 </li><li>洗浄し、PBSと簡単なボルテックスの5ミリリットルを使用してペレット化した細菌を一時停止します。 </li><li>繰り返して、第二の洗浄を行うための第2の時間を2.2.3する2.2.2を繰り返します。 </li><li> PBSおよび簡単なボルテックスの1ミリリットルを使用してペレットを再懸濁。 </li><li> 40倍の倍率で、標準的な顕微鏡を用いてMallassezの血球にカウントすることにより、接種物のサイズを決定します。 注：（酵母の数×10 5）/（Mallassezの血球のカウントグリッド矩形の数）：（CFU / ml単位）の濃度は、以下の式を用いて得られます。 </li><li>そのソリューションが含まれているを確認するために10 -5、10 -6シリアル対数希釈することによって確認し、2×10 6 CFU / mlです。 </li><li> 0.015％のアミカシンを補ったYPD寒天プレート上にプレート。 </li></ol></li></ol> C. 3.航空植民地化アルビカンス 注：環境順応後、マウスを一日二回秤量します。 <ol><li>ヒュームフードの下では、4センチメートル×4センチガーゼ（オープン・ドロップ技法）14へのセボフルランの預金を500μl。 <ol><li>すぐに約750ミリリットル導入室の床の上にガーゼを置きます。すぐに動物とガーゼの間の直接接触を避けるために、ガーゼの上にメッシュ上げプラットフォームを配置します。 </li><li>気密蓋を閉じて、チャンバ内のセボフルランの拡散を可能にするために、1〜2分待ってください。 </li><li>プラットフォームと開閉蓋を噛み合うようにケージからマウスを転送します。保存された自発呼吸と軽い麻酔は30〜45秒で達成されるべきです。 </li><li>マウスをf除去することができる点で、正向反射の消失を観察することにより、低血圧を監視ボックスをROMや点眼。 </li></ol></li><li>鼻腔内点滴注入（訓練を受けたオペレータにより10秒で実行することができます）。 <ol><li>片手が（ 図4B）直立開催の背中に囲まれ、マウスを押したままにします。 </li><li>人差し指を使って、頭をサポートし、顎を維持するために親指を使用喀出（ 図4C）を回避するために、閉鎖しました。 </li><li>ステップ2.3.8で説明したように、準備されたCのことを確認してくださいアルビカンスソリューションは、ボリュームを点眼50μlのための1mlあたり2×10 6 CFUを含んでいます。 注：第2の臨界点は、点眼ボリュームです。ボリューム下の50μlを不十分植民地化や気道の不均一な点滴をもたらす可能性よりも、より大きなボリュームは溺死/窒息と死を誘導する可能性があります。 </li><li>鼻孔にピペットに接近することにより、マウスの鼻腔内を浸透さ。 </li><li>その後spontaneouslによって吸入鼻の溶液を含む泡を形成する50μlのドロップを、ピペットY呼吸マウス。 </li><li>リカバリ領域に入れマウス（例えば、オーバーヘッド加熱ランプを持つ大規模な、よく通気裸ケージ）。マウスは完全に覚醒するまで監視する必要があります。それは胸骨横臥し、立ち直り反射を維持するのに十分な意識を取り戻したまで無人の動物を放置しないでください。この時点で、マウスは、通常の住宅ケージに戻すことができます。 </li></ol></li></ol> 4. P.緑膿菌誘発性急性肺感染注：マウスは、4つの次の日中に秤量します。通常、マウスは 、Cの間に体重が増えますアルビカンス媒介気道コロニー形成（ 図2A）。 <ol><li> Pを含有する懸濁液を準備緑膿菌 O / Nの成長（2.2節）後の点滴の日。 </li><li>前述したように（セクション3.1）吸入セボフルランを使用して簡単に麻酔。 注：急性肺感染症を実行するために提案されている細菌負荷を推奨表1。 </li><li>ポスト点眼回復に特に注意して（セクション3.2）のようにマウスを浸透さ。 </li></ol>肺損傷指数の5測定<ol><li> FITC標識アルブミンを含む溶液を調製します。殺処分する前に、この溶液2時間を注入。 <ol><li>適切な機器とアルブミン-FITCの0.2 mgの計量。 </li><li> 1mlのPBSに0.2ミリグラムを追加します。簡単に言うと渦。すぐに使用しない場合は、周囲光への暴露を避けるために、ホイルにソリューションを配置します。 </li><li>各マウスにFITC標識アルブミン溶液の腹腔内に200μLを注入します。 </li></ol></li><li>安楽死<ol><li>最後の重量データのためのマウスを秤量します。 </li><li> 5.47パーセントのペントバルビタールを300μl：ペントバルビタールの致死過剰摂取の腹腔内注射を用いた研究委員会のガイドラインにおける動物の局所的な用途に応じて、単一のマウスを安楽死させます。 </li><li>ケージからマウスを削除し、Lを受け取りますオペレータによるethal注入。 </li><li>注入後、任意の他の動物から隠さ別のケージに単独でマウスを転送します。運動の不在になるまでマウスを観察します。死を確認して動き、特に呼吸運動、パルスの欠如が存在しないことです。 </li><li>したがって、麻酔薬や鎮痛剤なしで、死んだ動物のサンプルを外科的にコレクションを実行します。 </li></ol></li><li>外科サンプル収集：胸部ステージ。 注：無菌状態を維持するために、すべての手術は、バイオセーフティーレベル2環境で滅菌装置を用いて行われます。 <ol><li>皮膚にエタノールを適用します。ハサミで半ば腹部に胸骨から正中皮膚切開を行います。いずれかの側の胸郭に沿って正中切開から。胸郭を視覚化するために胸部の両側に皮を折り返します。 </li><li>どちらの側が船尾で全体の前部胸壁をリクライニングすることができるように、鎖骨に向かって行く上で胸郭の縦切開を行いますええと心臓や肺（ 図5A、5B）の完全な可視化を可能にします。 </li><li>心室間の動脈の隣に心穿刺によって事前にheparined注射器を用いて血液を採取します。プラズマの少なくとも100μLを得るために、500μlの最低を撤回。氷上で血液サンプルを置きます。 </li><li>気管（ 図5B及び5C）を可視化する正中頸部切開を行います。慎重に気管の周りの筋膜を切開します。気管（ 図5Cおよび5D）の背後に縫合糸を配置します。その後縫合糸は、適切な洗浄を確実にするためにカニューレ挿入針の周りに閉じられます。 </li><li> 20-Gを使用して気管をカテーテルを挿入強制経口投与針（ 図5Dおよび図4（a））を修正しました。以前に配置された縫合糸を挿管気管の周りに外科的な結び目を作ります。 </li><li>気管支肺胞洗浄（BAL）を実行するには、静かに徐々に肺からの/への氷冷PBSを500μlを注入し、描画します。私にサンプルを置き、細胞溶解を回避するために、CE。 </li><li> 2ミリリットル遠心管（ 図5E）に1,500μlのBAL液とプール洗浄試料の合計を取得するための手順を繰り返し5.3.6、3回。 </li><li>胸から肺を取り出します。 80°C - 1.5ミリリットル遠心管に（サイズが1肺またはローブの半分に対応する必要があります）とで急速に保存肺のセグメントを配置します。 </li><li>細菌負荷を決定し、氷の上に置くために、PBSを含む予め秤量した溶血チューブに肺のセグメントを配置します。 </li></ol></li><li>外科サンプル収集：腹部のステージ。 <ol><li>腹部の左側に別の切開を行います。腹膜を介して脾臓を守ってください。 </li><li>氷上で1mlのPBSと場所を含む第二の溶血管に脾臓と場所を削除します。 </li></ol></li><li>肺損傷指数 注：肺胞毛細血管膜透過性は、肺胞 - interstに血管区画からのFITC標識アルブミンの漏出を測定することによって評価されますitialコンパートメント。 <ol><li>遠心血液サンプルと1500×gで10分間のBAL液。新しい遠心チューブに上清を収集します。ペレットは、血漿またはBAL細胞を動員し、氷上に置かれるべきである対応します。 </li><li> 96ウェル透明板（300μlのウエル）に各血液上清（血漿、黄色）、またはBALの上清100μlを追加します。すぐに使用しない場合はプレートに箔を置きます。 </li><li>血漿中の蛍光レベルを測定し、BALは、蛍光マイクロプレートリーダー（励起、487 nmで、発光520 nm）を用いて上清。 </li><li>蛍光比を計算することにより、肺損傷指数を決定[（BAL上清/血液上清）×100]。 </li></ol></li><li>気管支肺胞洗浄（BAL）の細胞計数差動。 注：ステップ5.5.1でBAL液の遠心分離から得られた細胞ペレットを使用してください。 <ol><li>必要に応じて、赤血球溶解緩衝液を使用。セルを含む遠心管に赤血球溶解緩衝液500μlを加えますLペレット。簡単に言うとボルテックスし、氷上で10分のままにしておきます。赤血球の溶解を停止するために500μlのPBSを追加します。 </li><li> 1,500×gで10分間の遠心分離によって細胞を回収。上清を除去し、滅菌PBS 1 mlの中に細胞ペレットを中断。 Mallassezの血球の細胞を列挙します。セルをカウントする血球計算盤を使用しました。サイトスピンでスライド上の細胞を濃縮します。 </li><li>セル識別および計数（マクロファージ、リンパ球、好中球）を可能にする着色キットを用いて染色細胞。 </li></ol></li><li>肺細菌負荷および細菌普及 注：肺細菌負荷を評価するために、細菌の普及、肺および脾臓をそれぞれ1mlのPBS（ステップ5.3.9）を含む予め秤量した溶血チューブに収集し、保存しました。 <ol><li> 1mlのPBSおよび肺または脾臓のいずれかを含む溶血管を計量。肺ホモジネートおよび脾臓ホモジネートを得るために、組織ホモジナイザーを用いてサンプルを均質化します。 </li><li>デポジット組織ホモ100μlのシリアル対数希釈液を得るために、無菌のPBS 900μLを含む遠心チューブにgenates。 </li><li> Pの BCP寒天のいずれかのプレート2の最後の適切な希釈した試料（10 -3および10 -2） Cの 緑膿菌やYPD-アミカシン補充寒天アルビカンス肺および脾臓負担決意。 </li><li> 37℃でプレートO / Nインキュベートします。翌日、プレート上のコロニーを列挙。 </li><li>インデックス肺重量の結果は、肺のグラム当たりのCFUを得ました。肺サンプルサイズが同じではない、その結果、肺のグラム当たりのCFUで表現する必要があります。 インデックスの計算式は次のとおりです。[CFU]×[溶血管と肺の重量​​] - [溶血管の重量]。 </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Casadevall, A., Pirofski, L. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+damage-response+framework+of+microbial+pathogenesis.">The damage-response framework of microbial pathogenesis.</a> Nat. Rev. Micro. 1 (1), 17-24 (2003).</li><li>Eddens, T., Kolls, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+defenses+against+bacterial+lower+respiratory+tract+infection.">Host defenses against bacterial lower respiratory tract infection.</a> Curr. Opi. Immunol. , (2012).</li><li>Beck, J. M., Young, V. B., Huffnagle, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microbiome+of+the+lung.">The microbiome of the lung.</a> Translational research : J. Lab. Clin Med. 160 (4), 258-266 (2012).</li><li>Hogan, D. A., Kolter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas-Candida+interactions:+an+ecological+role+for+virulence+factors.">Pseudomonas-Candida interactions: an ecological role for virulence factors.</a> Science. 296 (5576), 2229-2232 (2002).</li><li>Nseir, S., Ader, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+and+Candida+albicans:+do+they+really+need+to+stick+together.">Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans: do they really need to stick together.</a> Crit. Care Med. 37 (3), 1164-1166 (2009).</li><li>Hibbing, M. E., Fuqua, C., Parsek, M. R., Peterson, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+competition:+surviving+and+thriving+in+the+microbial+jungle.">Bacterial competition: surviving and thriving in the microbial jungle.</a> Nat. Rev. Micro. 8 (1), 15-25 (2010).</li><li>Gibbons, D. L., Spencer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+and+human+intestinal+immunity:+same+ballpark,+different+players;+different+rules,+same+score.">Mouse and human intestinal immunity: same ballpark, different players; different rules, same score.</a> Mucosal Immunol. 4 (2), 148-157 (2011).</li><li>Ariffin, J. K., Sweet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+the+repertoire,+regulation+and+function+of+Toll-like+Receptors+and+inflammasome-forming+Nod-like+Receptors+between+human+and+mouse.">Differences in the repertoire, regulation and function of Toll-like Receptors and inflammasome-forming Nod-like Receptors between human and mouse.</a> Curr. Opi. Micro.. , (2013).</li><li>Slutsky, A. S., Ranieri, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilator-Induced+Lung+Injury.">Ventilator-Induced Lung Injury.</a> NEJM. 369 (22), 2126-2136 (2013).</li><li>Peleg, A. Y., Hogan, D. A., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medically+important+bacterial-fungal+interactions.">Medically important bacterial-fungal interactions.</a> Nat. Rev. Micro. 8 (5), 340-349 (2010).</li><li>Roux, D., Gaudry, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+impairs+macrophage+function+and+facilitates+Pseudomonas+aeruginosa+pneumonia+in+rat.">Candida albicans impairs macrophage function and facilitates Pseudomonas aeruginosa pneumonia in rat.</a> Crit. Care Med. 37 (3), 1062-1067 (2009).</li><li>Mear, J. B., Gosset, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+Airway+Exposure+Primes+the+Lung+Innate+Immune+Response+against+Pseudomonas+aeruginosa+Infection+through+Innate+Lymphoid+Cell+Recruitment+and+Interleukin-22-Associated+Mucosal+Response.">Candida albicans Airway Exposure Primes the Lung Innate Immune Response against Pseudomonas aeruginosa Infection through Innate Lymphoid Cell Recruitment and Interleukin-22-Associated Mucosal Response.</a> Infect. Immun. 82 (1), 306-315 (2013).</li><li>Ader, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+term+Candida+albicans+colonization+reduces+Pseudomonas+aeruginosa+load+and+lung+injury+in+a+mouse+model.">Short term Candida albicans colonization reduces Pseudomonas aeruginosa load and lung injury in a mouse model.</a> Crit. care. , 1-33 (2009).</li><li>Risling, T. E., Caulkett, N. A., Florence, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open-drop+anesthesia+for+small+laboratory+animals.">Open-drop anesthesia for small laboratory animals.</a> Can Vet J. 53 (3), 299-302 (2012).</li><li>Stover, C. K., Pham, X. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+genome+sequence+of+Pseudomonas+aeruginosa+PAO1,+an+opportunistic+pathogen.">Complete genome sequence of Pseudomonas aeruginosa PAO1, an opportunistic pathogen.</a> Nature. 406 (6799), 959-964 (2000).</li><li>Boutoille, D., Marechal, X., Pichenot, M., Chemani, C., Guery, B. P., Faure, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FITC-albumin+as+a+marker+for+assessment+of+endothelial+permeability+in+mice:+comparison+with+125I-albumin.">FITC-albumin as a marker for assessment of endothelial permeability in mice: comparison with 125I-albumin.</a> Exp. Lung Res. 35 (4), 263-271 (2009).</li><li>Faure, E., Mear, J. -. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+type-3+secretion+system+dampens+host+defense+by+exploiting+the+NLRC4-coupled+inflammasome.">Pseudomonas aeruginosa type-3 secretion system dampens host defense by exploiting the NLRC4-coupled inflammasome.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 189 (7), 799-811 (2014).</li><li>Peleg, A. Y., Hogan, D. A., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medically+important+bacterial-fungal+interactions.">Medically important bacterial-fungal interactions.</a> Nat. Rev. Micro. 8 (5), 340-349 (2010).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

動物モデル、特に哺乳動物は、免疫の分野における宿主 - 病原体相互作用の複雑なメカニズムを解明するのに有用です。もちろん、唯一の動物モデルから得られる情報の必要性が不可欠である必要があります。そうでなければ、動物の使用は 、in vitroモデルに置き換えなければなりません。この動物モデルは、病原体の間の相互作用が多成分宿主応答によって媒介されるので、唯一の?...

動物モデル、特にマウスは、広範囲の病原体に対する免疫応答を探索するために使用されています。自然免疫と獲得免疫は、げっ歯類およびヒト7との間で異なるが、繁殖の容易かつ多数の遺伝子のためのノックアウトの開発は、免疫応答8を研究するためにマウスに優れたモデルを作ります。免疫応答は複雑であり、病原体の相互作用の結果、常駐微生物叢およびいくつかの免疫（リンパ球、好中球、マクロファージ）および非免疫（上皮細胞、内皮細胞）細胞の種類は2。 インビトロ研究は、観察ができませんこれらの複雑な相互作用は、主にユニークな細胞 - 病原体相互作用に焦点を当てています。動物モデルは、注意して使用し、非常に具体的で関連の質問に限定されなければならないが、マウスモデルは 、in vivoでの哺乳類の免疫応答に優れた洞察力を提供し、重要な臨床的な質問7の一部に対処することができます。 6の多数を関連付ける複雑です。構成するもの &quot;通常の&quot;気道microbiomeが決定されていないものの、居住者のコミュニティは、しばしば複数菌であり、多様な生態系のソースに由来します。化膿性慢性肺疾患（嚢胞性線維症、bronchectasis）の患者や人工呼吸器患者が環境に獲得した微生物9による気道の植民地に特定の植物相を示す。 緑膿菌及びカンジダ・アルビカンスは、両方の問題が頻繁に気管支サンプルから一緒に分離され、5病原体であります、特に集中治療室（ICU）4で、これらの患者における重篤な日和見感染症の責任。 P.に対する抗微生物処理におけるICU結果に急性肺炎の間にこれらの微生物の単離緑膿菌 BUT酵母は通常、このサイト5で病原性とはみなされません。Pとの間の インビトロ相互作用を緑膿菌とC.アルビカンスは、広く報告され、これらの微生物が成長し、お互いの生存に影響を与えることができるが、研究は結論付けていないことを示したされている場合はCの存在アルビカンスは、有害なまたはホスト10のために有益です。マウスモデルは 、Pのこの関連性に対処するために開発されました緑膿菌とC. 生体内で アルビカンスが、微生物間の相互作用が重要なポイントではありませんでした。実際、このモデルはCの関与を評価するために設立されました宿主免疫応答、および結果でアルビカンス 。 ルーらによって確立された以前のモデルは、すでにCで初期定着を使用しましたPによって誘発される急性肺感染が続くアルビカンス 緑膿菌は。彼らのモデルを使用して、著者らは、pの有害な役割を発見しましたrior C.アルビカンスは 11コロニー形成します。しかしルーらは、C の高負荷を使用しました3日間連続2×10 6 CFU /マウスで彼らのモデルでアルビカンス 。我々は、Cの 4日間のモデルを確立しアルビカンスは、このモデルCに、肺損傷せずに植民地化、または少なくとも持続気道アルビカンスは、マウス （ 図2B）12,13あたり10 5 CFUの単一点眼後4日までに取得されました。 4日後、炎症細胞補充、炎症性サイトカインの産生も上皮損傷の証拠は観察されませんでした。 48時間、Cのピーク存在で- 24時、細胞およびサイトカイン先天性免疫応答が観察されたにもかかわらず、肺損傷の証拠はアルビカンスなかったです。驚くべきことに、マウスは、このようにCで植民地化前Pの鼻腔内点滴注入にアルビカンス 48時間緑膿菌は 、Pを用いたマウスに比べて感染を減弱していました単独の緑膿菌感染症 。私ndeed、マウスが少ない肺損傷を示し、細菌負荷12,13を減少させました 。 いくつかの仮説は、Cで前植民地のこの有益な効果を説明することができますP上 アルビカンス 緑膿菌は、急性肺感染症を媒介しました。まず、各微生物クオラムセンシングシステム、homoserinelactoneベースのPを含む種間のクロストーク緑膿菌システムとファルネソールベースC.アルビカンスシステムは 、評価しました。第二に、C。肺上皮細胞からの病原体を流用緑膿菌のための「おとり」のターゲットとして機能するアルビカンスを検討しました 。どちらの仮説は（未発表データ）無効化されました。第三の仮説は 、Cによって先天性免疫系の「プライミング」のそれでしたP.に対する強化された後続の生得的応答を担うアルビカンス 緑膿菌 。この最後の仮定が確認されました。実際、C。アルビカンスのコロニー形成は、先天性免疫のプライミングthrouにつながりましたGH IL-22は、主に増加した細菌のクリアランスをもたらす、先天性リンパ系細胞によって分泌され、肺損傷12を減少させました。 結論として、ホストは、自然免疫応答を調節し、種々の炎症性細胞型が関与する微生物との間の相互作用の中心的俳優です。これらの複合体の免疫相互作用がインビトロで切開することができるが、最初の仮説は、in vivoモデルで適切によって提供され得ます。以下のプロトコルは、他の微生物に適合させることができる宿主媒介病原体相互作用の in vivo研究の例を提供します。

<table><tbody><tr><td>Sevorane, Sevoflurane</td><td>Abott</td><td>05458-02</td><td>250 ml plastic bottle</td></tr><tr><td>Fluorescence Reader Mithras&amp;nbsp; LB940</td><td>Berthold Technologies</td><td>reference in first column</td><td>no comment</td></tr><tr><td>Bromo-cresol purple agar</td><td>Biomerieux</td><td>43021</td><td>20x per unit</td></tr><tr><td>Pentobarbital sodique 5.47%</td><td>CEVA</td><td>6742145</td><td>100 ml plastic bottle</td></tr><tr><td>2-headed valve&amp;nbsp;</td><td>Distrimed</td><td>92831</td><td>no comment</td></tr><tr><td>Sterile inoculation loop 10 &amp;micro;l</td><td>Dutscher</td><td>10175</td><td>x1,000 conditioning</td></tr><tr><td>Insuline syringes 1 ml</td><td>Dutscher</td><td>30003</td><td>per 100 conditioning</td></tr><tr><td>2 positions Culture tube 8 ml</td><td>Dutscher</td><td>64300</td><td>no comment</td></tr><tr><td>Ultrospec 10&amp;nbsp;</td><td>General Electric life sciences</td><td>80-2116-30</td><td>no comment</td></tr><tr><td>Hemolysis tubes 13 x 75 mm&amp;nbsp;</td><td>Gosselin</td><td>W1773X</td><td>per 100</td></tr><tr><td>PBS - Phosphate-Buffered Saline</td><td>Life technologies</td><td>10010023</td><td>packaged in 500 ml</td></tr><tr><td>amikacin 1 g</td><td>Mylan</td><td>62516778</td><td>per 10&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Heparin 10,000 UI in 2 ml</td><td>Pan pharma</td><td>9128701</td><td>10x per unit</td></tr><tr><td>RAL 555 coloration kit</td><td>RAL Diagnostics</td><td>361550</td><td>3 flacons of 100 mL</td></tr><tr><td>1.5 ml microcentrifuge tube</td><td>Sarstedt</td><td>55.526.006</td><td>x 1000</td></tr><tr><td>Transparent 300 &amp;micro;l 96-well plate</td><td>Sarstedt</td><td>82 1581500</td><td>no comment</td></tr><tr><td>Yest-peptone-Dextrose Broth</td><td>Sigma</td><td>95763</td><td>in powder</td></tr><tr><td>FITC-albumin</td><td>Sigma</td><td>A9771</td><td>in powder</td></tr><tr><td>Luria Bertani Broth</td><td>Sigma</td><td>L3022</td><td>in powder</td></tr><tr><td>25-gauge needle</td><td>Terumo or unisharp</td><td>A231</td><td>x 100 conditioning</td></tr><tr><td>Cytocentrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td>A78300003</td><td>no comment</td></tr></tbody></table>

studying microbial communities in vivo: a model of host-mediated interaction between candida albicans and pseudomonas aeruginosa in the airways

宿主 - 病原体相互作用を研究することは、微生物感染の間に病原性の根底にあるメカニズムを理解することを可能にしています。ホストの予後は、病原体1に対する適応免疫応答の関与に依存します。免疫応答は複雑であり、病原体およびいくつかの免疫または非免疫細胞型2との相互作用の結果である。in vitro試験は、これらの相互作用を特徴付けるおよび細胞-病原体相互作用に焦点を当てることはできません。また、特に化膿性慢性肺疾患を有するか、機械的に換気患者の患者における気道3に 、複数菌のコミュニティが存在しており、宿主-病原体相互作用を複雑にする。 緑膿菌及びカンジダ・アルビカンスは、両方の問題が頻繁に気管支サンプルから単離し、4病原体である、と特に集中治療部 5に、重症感染症に関連します。微生物の相互作用が持っていますin vitroでこれらの病原体の間で報告されたが、これらの相互作用の臨床的影響は不明6のままされて。 C。アルビカンスとPとの間の相互作用を研究するために、 緑膿菌 、CのマウスモデルP.続いアルビカンス気道の植民地化、 aeruginosa-媒介急性肺感染を行いました。

プロトコル記述中に以前に見られるように、実験は、（：実験のタイムライン図1）を完了するために5日必要があります。一人のオペレータは、実験の全実行中に募集され、最大10匹のマウスの最大のプロセスを処理することができます。多くの動物が必要な場合は、二人は、特に外科用サンプル採取のために必要とされます。実際、すべてのサンプルは、最後のマウスでのFITC標...

Watch this Scientific Journal Video about Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways at JoVE.com

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

微生物群集を学びます<em&gt;インビボ</em&gt;：ホスト間の媒介の相互作用のモデル<em&gt;カンジダ</em&gt;と<em&gt;緑膿菌</em&gt;航空で

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

studying-microbial-communities-vivo-model-host-mediated-interaction

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

8.5K ビュー.  Université Lille. While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

ビデオ: Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living surfaces. In this paper, we describe protocols for forming Pseudomonas aeruginosa biofilms on human airway epithelial cells (CFBE cells) grown in culture. In the first method (termed the Static Co-culture Biofilm Model), P. aeruginosa is incubated with CFBE cells grown as confluent monolayers on standard tissue culture plates. Although the bacterium is quite toxic to epithelial cells, the addition of arginine delays the destruction of the monolayer long enough for biofilms to form on the CFBE cells. The second method (termed the Flow Cell Co-culture Biofilm Model), involves adaptation of a biofilm flow cell apparatus, which is often used in biofilm research, to accommodate a glass coverslip supporting a confluent monolayer of CFBE cells. This monolayer is inoculated with P. aeruginosa and a peristaltic pump then flows fresh medium across the cells. In both systems, bacterial biofilms form within 6-8 hours after inoculation. Visualization of the biofilm is enhanced by the use of P. aeruginosa strains constitutively expressing green fluorescent protein (GFP). The Static and Flow Cell Co-culture Biofilm assays are model systems for early P. aeruginosa infection of the Cystic Fibrosis (CF) lung, and these techniques allow different aspects of P. aeruginosa biofilm formation and virulence to be studied, including biofilm cytotoxicity, measurement of biofilm CFU, and staining and visualizing the biofilm.

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

This paper describes different methods of growing Pseudomonas aeruginosa biofilms on cultured human airway epithelial cells. These protocols can be adapted to study different aspects of biofilm formation, including visualization of the biofilm, staining of the biofilm, measuring the colony forming units (CFU) of the biofilm, and studying biofilm cytotoxicity.

共培養モデルの緑膿菌</emライブヒト気道細胞上に成長した>バイオフィルム

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

免疫・感染学

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

There is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from cystic fibrosis (CF) patients. Existing methods rely on single or a few isolates grown aerobically and planktonically. Predetermined cut-offs are used to define whether the bacteria are sensitive or resistant to any given antibiotic1. However, during chronic lung infections in CF, P. aeruginosa populations exist in biofilms and there is evidence that the environment is largely microaerophilic2. The stark difference in conditions between bacteria in the lung and those during diagnostic testing has called into question the reliability and even relevance of these tests3.
 Artificial sputum medium (ASM) is a culture medium containing the components of CF patient sputum, including amino acids, mucin and free DNA. P. aeruginosa growth in ASM mimics growth during CF infections, with the formation of self-aggregating biofilm structures and population divergence4,5,6. The aim of this study was to develop a microtitre-plate assay to study antimicrobial susceptibility of P. aeruginosa based on growth in ASM, which is applicable to both microaerophilic and aerobic conditions.
 An ASM assay was developed in a microtitre plate format. P. aeruginosa biofilms were allowed to develop for 3 days prior to incubation with antimicrobial agents at different concentrations for 24 hours. After biofilm disruption, cell viability was measured by staining with resazurin. This assay was used to ascertain the sessile cell minimum inhibitory concentration (SMIC) of tobramycin for 15 different P. aeruginosa isolates under aerobic and microaerophilic conditions and SMIC values were compared to those obtained with standard broth growth. Whilst there was some evidence for increased MIC values for isolates grown in ASM when compared to their planktonic counterparts, the biggest differences were found with bacteria tested in microaerophilic conditions, which showed a much increased resistance up to a &gt;128 fold, towards tobramycin in the ASM system when compared to assays carried out in aerobic conditions.
 The lack of association between current susceptibility testing methods and clinical outcome has questioned the validity of current methods3. Several in vitro models have been used previously to study P. aeruginosa biofilms7, 8. However, these methods rely on surface attached biofilms, whereas the ASM biofilms resemble those observed in the CF lung9 . In addition, reduced oxygen concentration in the mucus has been shown to alter the behavior of P. aeruginosa2 and affect antibiotic susceptibility10. Therefore using ASM under microaerophilic conditions may provide a more realistic environment in which to study antimicrobial susceptibility.

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Current diagnostic antimicrobial susceptibility testing relies on the planktonic growth of isolates in nutrient rich, aerobic conditions. Here, we employ an alternative artificial sputum medium to study antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa biofilms under both aerobic and microaerophilic conditions more representative of the cystic fibrosis lung.

に対する抗生物質の有効性をテストするための人工痰培地の使用<em&gt;緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）</em&gt;肺嚢胞性線維症へのより適切な条件で

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model itself. Early phases of inflammation and infection have been widely studied by using the Pseudomonas aeruginosa agar-beads mouse model, while only few reports have focused on the long-term chronic infection in vivo. The main challenge for long term chronic infection remains the low bacterial burden by P. aeruginosa and the low percentage of infected mice weeks after challenge, indicating that bacterial cells are progressively cleared by the host.
This paper presents a method for obtaining efficient long-term chronic infection in mice. This method is based on the embedding of the P. aeruginosa clinical strains in the agar-beads in vitro, followed by intratracheal instillation in C57Bl/6NCrl mice. Bilateral lung infection is associated with several measurable read-outs including weight loss, mortality, chronic infection, and inflammatory response. The P. aeruginosa RP73 clinical strain was preferred over the PAO1 reference laboratory strain since it resulted in a comparatively lower mortality, more severe lesions, and higher chronic infection. P. aeruginosa colonization may persist in the lung for over three months. Murine lung pathology resembles that of CF patients with advanced chronic pulmonary disease.
This murine model most closely mimics the course of the human disease and can be used both for studies on the pathogenesis and for the evaluation of novel therapies.

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

We describe the agar-beads method to establish persistent long-term chronic Pseudomonas aeruginosa airway infection in the mouse model.

長期的な慢性<em&gt;緑膿菌</emマウスにおける&gt;気道感染

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their intercommunication, are paramount for the protection against infections. The interactions of epithelial and innate immune cells with a pathogen are best investigated in vivo, where complex behavior unfolds over time and space. However, existing models do not allow for easy spatio-temporal imaging of the battle with pathogens at the mucosal level.
The model developed here creates a mucosal infection by direct injection of the fungal pathogen, Candida albicans, into the swimbladder of juvenile zebrafish. The resulting infection enables high-resolution imaging of epithelial and innate immune cell behavior throughout the development of mucosal disease. The versatility of this method allows for interrogation of the host to probe the detailed sequence of immune events leading to phagocyte recruitment and to examine the roles of particular cell types and molecular pathways in protection. In addition, the behavior of the pathogen as a function of immune attack can be imaged simultaneously by using fluorescent protein-expressing C. albicans. Increased spatial resolution of the host-pathogen interaction is also possible using the described rapid swimbladder dissection technique.
The mucosal infection model described here is straightforward and highly reproducible, making it a valuable tool for the study of mucosal candidiasis. This system may also be broadly translatable to other mucosal pathogens such as mycobacterial, bacterial or viral microbes that normally infect through epithelial surfaces.

In vivo spatio-temporal interactions of pathogen and immune defenses at the mucosal level are not easily imaged in existing vertebrate hosts. The method presented here describes a versatile platform to study mucosal candidiasis in live vertebrates using the swimbladder of the juvenile zebrafish as an infection site.

浮袋注入による幼虫ゼブラフィッシュにおける粘膜カンジダ症のモデル化

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of bacteria in lung models can re-adapt epithelial arrangement, while immune cells coordinate an inflammatory response against the bacteria in the microenvironment. While in vivo models have been the choice for testing new anti-infectives in the context of cystic fibrosis, they still do not accurately mimic the in vivo conditions of such diseases in humans and the treatment outcomes. Complex in vitro models of the infected airways based on human cells (bronchial epithelial and macrophages) and relevant pathogens could bridge this gap and facilitate the translation of new anti-infectives into the clinic. For such purposes, a co-culture model of the human cystic fibrosis bronchial epithelial cell line CFBE41o- and THP-1 monocyte-derived macrophages has been established, mimicking an infection of the human bronchial mucosa by P. aeruginosa at air-liquid interface (ALI) conditions. This model is set up in seven days, and the following parameters are simultaneously assessed: epithelial barrier integrity, macrophage transmigration, bacterial survival, and inflammation. The present protocol describes a robust and reproducible system for evaluating drug efficacy and host responses that could be relevant for discovering new anti-infectives and optimizing their aerosol delivery to the lungs.

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

We describe a protocol for a three-dimensional co-culture model of infected airways, using CFBE41o- cells, THP-1 macrophages, and Pseudomonas aeruginosa, established at the air-liquid interface. This model provides a new platform to simultaneously test antibiotic efficacy, epithelial barrier function, and inflammatory markers.

P. アフルギノーサ 抗感染性の前臨床評価のための空気・液体界面における気管支上皮細胞とマクロファージの感染3Dコカルチャー

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of ...

Visualization of Pseudomonas aeruginosa within the Sputum of Cystic Fibrosis Patients

Early detection and eradication of Pseudomonas aeruginosa within the lungs of cystic fibrosis patients can reduce the chance of developing chronic infection. The development of chronic P. aeruginosa infections is associated with a decline in lung function and increased morbidity. Therefore, there is a great interest in elucidating the reasons for the failure to eradicate P. aeruginosa with antibiotic therapy which occurs in approximately 10-40% of pediatric patients. One of many factors that can affect host clearance of P. aeruginosa and antibiotic susceptibility is variations in spatial organization (such as aggregation or biofilm formation) and polysaccharide production. Therefore, we were interested in visualizing the in situ characteristics of P. aeruginosa within the sputum of CF patients. A tissue clearing technique was applied to sputum samples after embedding the samples into a hydrogel matrix to retain the 3D structures relative to host cells. After tissue clearing, fluorescent labels and dyes were added to allow visualization. Fluorescence in situ hybridization was performed for the visualization of bacterial cells, binding of fluorescently labeled anti-Psl-antibodies for the visualization of the exopolysaccharide and DAPI staining to stain host cells to obtain structural insight. These methods allowed for the high-resolution imaging of P. aeruginosa within the sputum of CF patients via confocal laser scanning microscopy.

Visualization of Pseudomonas aeruginosa within the Sputum of Cystic Fibrosis Patients

This protocol provides methods for visualization of bacterial cells and polysaccharide synthesis locus (Psl) polysaccharide within the sputum of cystic fibrosis patients.

嚢胞性線維症患者の喀痰中の 緑膿菌 の可視化

Early detection and eradication of Pseudomonas aeruginosa within the lungs of cystic fibrosis patients can reduce the chance of developing chronic ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a large proportion of the infecting bacteria form biofilms within airway sputum. Pa biofilms isolated from CF sputum have been shown to grow in small, dense aggregates of ~10-1,000 cells that are spatially organized and exhibit clinically relevant phenotypes such as antimicrobial tolerance. One of the biggest challenges to studying how Pa aggregates respond to the changing sputum environment is the lack of nutritionally relevant and robust systems that promote aggregate formation. Using a synthetic CF sputum medium (SCFM2), the life history of Pa aggregates can be observed using confocal laser scanning microscopy (CLSM) and image analysis at the resolution of a single cell. This in vitro system allows the observation of thousands of aggregates of varying size in real time, three dimensions, and at the micron scale. At the individual and population levels, having the ability to group aggregates by phenotype and position facilitates the observation of aggregates at different developmental stages and their response to changes in the microenvironment, such as antibiotic treatment, to be differentiated with precision.

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Synthetic cystic fibrosis sputum medium (SCFM2) can be utilized in combination with both confocal laser scanning microscopy and fluorescence-activated cell sorting to observe bacterial aggregates at high resolution. This paper details methods to assess aggregate populations during antimicrobial treatment as a platform for future studies.

緑膿菌感染モデルのリアルタイム評価ツール

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...

カンジダ・アルビカンス関連カテーテル関連感染症のマウスモデルの確立

A Catheter-Related Candida albicans Infection Model in Mouse

Catheter-related infection (CRI) is a common nosocomial infection caused by candida albicans during catheter implantation. Typically, biofilms are formed on the outer surface of the catheter and lead to disseminated infections, which are fatal to patients. There are no effective prevention and treatment management in clinics. Therefore, it is urgent to establish an animal model of CRI for the preclinical screening of new strategies for its prevention and treatment. In this study, a polyethylene catheter, a widely used medical catheter, was inserted into the back of the BALB/c mice after hair removal. Candida albicans ATCC MYA-2876 (SC5314) expressing enhanced green fluorescent protein was subsequently inoculated on the skin's surface along the catheter. Intense fluorescence was observed on the surface of the catheter under a fluorescent microscope 3 days later. Mature and thick biofilms were found on the surface of the catheter via scanning electron microscopy. These results indicated the adhesion, colonization, and biofilm formation of candida albicans on the surface of the catheter. The hyperplasia of the epidermis and the infiltration of inflammatory cells in the skin specimens indicated the histopathological changes of the CRI-associated skin. To sum up, a mouse CRI model was successfully established. This model is expected to be helpful in the research and development of therapeutic management for candida albicans associated CRI.

著者スポットライト:蛍光タンパク質標識を使用したカテーテル感染症におけるカンジダ・アルビカンス検出の強化 

We establish a mouse model of C.albicans-associated catheter-related infection (CRI), in which biofilm forms on the catheter, and the interaction between C.albicans and host correlates well with the clinical CRI. This model helps screen therapies for C.albicans biofilm-associated CRI, laying a foundation for clinical transformation.

マウスにおけるカテーテル関連 カンジダ・アルビカンス 感染モデル

Catheter-related infection (CRI) is a common nosocomial infection caused by candida albicans during catheter implantation. Typically, biofilms are formed ...

微生物群集を学びます

要約

さらに動画を探す

この動画の章

共培養モデルの緑膿菌バイオフィルム

に対する抗生物質の有効性をテストするための人工痰培地の使用

長期的な慢性

浮袋注入による幼虫ゼブラフィッシュにおける粘膜カンジダ症のモデル化

P. アフルギノーサ抗感染性の前臨床評価のための空気・液体界面における気管支上皮細胞とマクロファージの感染3Dコカルチャー

嚢胞性線維症患者の喀痰中の緑膿菌の可視化

緑膿菌感染モデルのリアルタイム評価ツール

マウスにおけるカテーテル関連カンジダ・アルビカンス感染モデル

マウスにおけるカテーテル関連カンジダ・アルビカンス感染モデル

マウスにおけるカテーテル関連カンジダ・アルビカンス感染モデル

微生物群集を学びます

要約

さらに動画を探す

この動画の章

共培養モデルの緑膿菌バイオフィルム

に対する抗生物質の有効性をテストするための人工痰培地の使用

長期的な慢性

浮袋注入による幼虫ゼブラフィッシュにおける粘膜カンジダ症のモデル化

P. アフルギノーサ 抗感染性の前臨床評価のための空気・液体界面における気管支上皮細胞とマクロファージの感染3Dコカルチャー

嚢胞性線維症患者の喀痰中の 緑膿菌 の可視化

緑膿菌感染モデルのリアルタイム評価ツール

マウスにおけるカテーテル関連 カンジダ・アルビカンス 感染モデル

マウスにおけるカテーテル関連 カンジダ・アルビカンス 感染モデル

マウスにおけるカテーテル関連 カンジダ・アルビカンス 感染モデル

P. アフルギノーサ抗感染性の前臨床評価のための空気・液体界面における気管支上皮細胞とマクロファージの感染3Dコカルチャー

嚢胞性線維症患者の喀痰中の緑膿菌の可視化

マウスにおけるカテーテル関連カンジダ・アルビカンス感染モデル

マウスにおけるカテーテル関連カンジダ・アルビカンス感染モデル

マウスにおけるカテーテル関連カンジダ・アルビカンス感染モデル