Najie朱とLiqun白が、この作品にも同様に貢献しました。この作品は、財政的に公共の福祉における林業科学研究のための特別基金（201204501）と中国の国家自然科学基金（31170604、31270688、および31570638）によってサポートされていました。私たちは英語の書き込みに自分の役立つ提案のために博士Holighausヘリット・博士ダニエルHickfordに感謝します。

ヴァージンアダルト線虫の1買収<ol><li> マツ材線虫の分離株と培養条件 注：B.センチュウ Nxy61はもともと中国の浙江省の寧波領域の病気の馬尾から抽出された隔離。 <ol><li>ポテトデキストロース寒天（PDAを、 材料の表を参照してください）準備成長灰色かび病菌のためのプレート。 </li><li>接種のために、B.シネレアマットから直径10mmの真菌マットの一部をパンチして、新しいPDAプレートの真ん中にそれを置きます。文化暗所で25℃で5日間B.シネレア 。 </li><li>文化暗所で25℃においてB.シネレアを含む準備されたペトリ皿中のマツ材線虫。 </li></ol></li><li> B.センチュウ卵の取得 <ol><li>漏斗の下にクランプされたゴムチューブを配置し、組み立てるためのラックに準備された漏斗を開催Baermannロート装置。漏斗の口の中でろ紙の代わりにガーゼの二つの層を配置します。 </li><li>漏斗のセットアップに真菌培養液を移し、真菌のマットが浸漬さまで水を追加します。 2時間待ってから、線虫は、真菌培養から出てくるろ紙を横断し、Baermannロートの最下部に落ち着くだろう。 </li><li> 15 mLのチューブにチューブの底からの水の滴の最初のカップルを収集し、ゆっくりとチューブにクランプを解放することによって線虫を集めます。 </li><li>室温で2分間、3,000×gで、上記のコレクションを遠心。 </li><li>ピペットで水の上層を削除し、滅菌蒸留（DD）の1mLのH 2 Oでそれを再懸濁</li><li>ピペットを用いて、新しいガラスシャーレ（直径6cm）に上記の再懸濁を移します。線虫が自由に泳ぐことができることを保証するために、ペトリ皿に無菌のdd H 2 Oの3ミリリットルを追加します。 </li><li> GLASで線虫を保ちます暗所で25℃で10分間、ペトリ皿は、S。卵は妊娠した雌によって敷設されます。そのため、それらの糖タンパク質表面の、卵は、ガラスペトリ皿の底に固執します。 </li><li>卵を乱すことなく、慎重に水やワームを削除します。乾燥から卵を防ぐために、すぐにガラスシャーレに無菌のdd H 2 Oの3ミリリットルを追加します。 </li><li>すべての幼虫と成虫を除去し、純粋な卵を得るための手順を繰り返し1.2.8 3倍。ペトリ皿に無菌のdd H 2 Oの余分な2 mLの（合計で5ミリリットル）を追加します。 </li></ol></li><li> 4段目の少年の取得（J4幼虫） <ol><li>ハッチ25℃の暗所で24時間採取した卵は、J2の幼虫を得ることができます。 </li><li> 、15 mLのチューブにピペットでJ2の幼虫を移し2分間、3000×gで遠心分離し、水の上層を除去します。 </li><li>無菌のdd H 2 Oの200μLとJ2の幼虫を再懸濁し、その後に転送B.シネレアを含むPDAプレート。 </li><li>文化暗所で25℃で52時間、J2の幼虫。この時点で、ほとんどのJ2幼虫はJ4幼虫の初期段階へと発展してきます。 </li></ol></li><li> 処女大人の線虫の取得 <ol><li>アルコールバーナーの上に加熱した後、ガラスキャピラリーを描画することによって線虫を拾うための針を準備します。 注：これは、単一の線虫をピックアップするためのツールとして使用することができるように、このキャピラリ針の先端は、通常、直径が50ミクロン、成体線虫の略車体幅である必要があります。 </li><li> Baermannロートを組み立て、ステップ1.2.1で説明したように、2時間の真菌の培養物から線虫を抽出 - 1.2.3。 </li><li>きれいなペトリ皿に水でJ4を転送します。 </li><li> （ 図1実体顕微鏡下で線虫を観察し、間宮と清原8で説明したように、生殖器の形態によって、男性と女性を区別</stronグラム&gt;）。準備されたキャピラリ針を希望する性別の線虫をピックアップし、男性または女性のための適切な真菌培養プレートに移します。 注： - 70％、男性よりも女性が60の雌の割合であります。女性の外陰部は明らかに男性の骨片は異なっています。大人に比べて、初期段階のJ4で骨片や外陰部は小さいですが、彼らはまだ容易に見ると区別することができます。線虫は、常に時には、男性と女性を区別することの困難を増大させ、水、に移動しています。 </li><li>文化暗所で25℃でさらに24時間J4幼虫。 注：すべての線虫は成虫に開発する必要がありますが、彼らは嵌合解除されているので、それらは処女大人とみなされます。 </li><li> Baermannは、ファンネル2を組み立て、ステップ1.2.1で説明したように、2時間の真菌培養物から処女大人を抽出 - 1.2.3、および2つの独立した、きれいなペトリ皿に処女成人男性と女性を転送します。 </li></oL&gt; </li></ol> 2.観察と交尾行動のビデオ録画<ol><li>いくつかの凹面のスライドを準備し、それらの各ウェルに無菌のdd H 2 Oの200μLを追加します。 </li><li>キャピラリ針を用いて調製バージン成人男性やと女性をピックアップし、各凹形スライドの水の中に一つだけの線虫を置きます。 </li><li>彼らは新たな水環境に適応させるために1時間だけでなく内部の処女大人にしてください。 </li><li>ピペットを使用して、別の1つのウェルからそれらのいずれかを転送することにより、処女オスとメスをペア。 </li><li>実体顕微鏡下に凹のスライドで1♀+1♂組み合わせの交尾行動を観察します。 </li><li>バージン成人の接合効率を分析するために、それらの交配成功率（R）を計算し、ランダムに選択された大人のペアのそれとを比較します。交尾を検討複製の総数に比べて観察された複製の割合としてRを計算します。 </li><li&gt;、交配の選択とintrasexual競争を調査グループおよび2つの異なる組み合わせの処女線虫を観察するには、次の1♀+3♂と3♀+1♂。 </li><li>定性および定量分析のためのデータを収集するために、ビデオ顕微鏡を使用して、交尾行動をフィルム。通常、全体の交配プロセスは、彼らは交尾後に離れて移動したときに線虫が瞬間に凹形スライドのウェル内に配置された時点から、2時間以内に完了する。従って、一つの複製、少なくとも2時間、連続的に交配処理を記録します。組合せごとに合計で少なくとも30の反復を完了します。 注：記録プロセスの間の蒸発を補償するウェルに（通常は50μL）2 O毎に0.5時間をより無菌のdd Hを追加します。 </li></ol> 3.データ収集<ol><li>コンピュータの画面上で、慎重にすべての動画と定性的サブ行動を特徴づけます。 </li><li>目を使用して、相手の持続時間を測定しますビデオレコーダーの電子フレーム単位で機能。手動でエンドポイントから開始時間を引きます。 </li><li> 1♀+1♂組み合わせについては、それぞれのビデオ録画を分析し、次のイベントの継続時間を測定します： <ol><li>検索の所要時間を測定します（ つまり、女性と男性は、彼らが遭遇した瞬間に凹形スライドのウェルに導入し、互いに接触しているときからの時間）。 </li><li>接触の持続時間を測定する（ すなわち 、男性が正確に最初の交尾のために女性の外陰部に位置している瞬間の最初の接触からの時間）。 </li><li> （彼は射精後の女性の体から滑り落ちるまで男性が正確に女性の外陰部に位置しているときから、 すなわち時間）交尾の持続時間を測定します。注：一部の線虫を2時間に数回交尾することができます。このような場合には、ラスの端部に第一の交尾から交尾の継続時間を測定します間の時間を含むトン1、。 </li><li>余韻の長さを測定する（ すなわち 、男性と女性の水泳まで互いに離れる交尾後の期間と線虫の体の長さ（通常は1ミリメートル）以上の距離で分離されています）。 </li></ol></li><li>交尾頻度とすべての交尾の期間と異なる組み合わせのそれぞれについて、2時間内のすべてのcopulationsの平均期間をカウントする（ すなわち、1♀+1♂、3♀+1♂、および1♀+3♂）。 </li><li>すぐに任意の休憩なしで行われた第1の接触、後の交尾の成功率など、さまざまな組み合わせのための最初の接点（P）用の交尾成功率を計算します。接触させる段階では、いくつかの連絡先は、実際の交尾の前に観察されることがあります。 <ol><li> 2人の間の距離は、本体の長さ以上である場合には、以上のことを一つの接点を考えます。 1複製、レコードP 100％と交尾iについてsがブレークすることなく、最初に接触した後すぐに観察、または0.00パーセント全く交尾が観察されなかった場合や交尾が、2つ以上の接点の後があった場合。 注：ここで説明する組み合わせごとに30の複製がありました。 </li></ol></li></ol>

<ol><li>Tokushige, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursaphelenchus+sp.+in+the+wood+of+dead+pine+trees%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Jap.+For.+Soc%22%5BJournal%5D)">Bursaphelenchus sp. in the wood of dead pine trees.</a> J. Jap. For. Soc. 51, 193-195 (1969).</li>
<li>Sun, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursaphelenchus+xylophilus+was+discovered+in+Sun+Yet-sen%27s+mausoleum+in+Nanjing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Jiangsu+Fore.+Sci.+Tech.+%28in+Chinese%29%22%5BJournal%5D)">Bursaphelenchus xylophilus was discovered in Sun Yet-sen's mausoleum in Nanjing.</a> J. Jiangsu Fore. Sci. Tech. (in Chinese). 4, 47(1982).</li>
<li>Mota, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+report+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+Portugal+and+in+Europe%5BTitle%5D)+AND+%22Nematology%22%5BJournal%5D)">First report of Bursaphelenchus xylophilus in Portugal and in Europe.</a> Nematology. 1, 727-734 (1999).</li>
<li>Robertson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+the+pine+wood+nematode+Bursaphelenchus+xylophlius+Steiner+%26+Buhrer%2C+1934+%28Nickle%2C+1970%29+in+Spain%5BTitle%5D)+AND+%22Nematology%22%5BJournal%5D)">Incidence of the pine wood nematode Bursaphelenchus xylophlius Steiner & Buhrer, 1934 (Nickle, 1970) in Spain.</a> Nematology. 13, 755-757 (2011).</li>
<li>Vicente, C., Espada, M., Vieira, P., Mota, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pine+wilt+disease%3A+a+threat+to+European+forestry%5BTitle%5D)+AND+%22Euro.+J.+Plant+Path%22%5BJournal%5D)">Pine wilt disease: a threat to European forestry.</a> Euro. J. Plant Path. 133, 89-99 (2012).</li>
<li>Jones, J. T., Moens, M., Mota, M., Li, H., Kikuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursaphelenchus+xylophilus%3A+opportunities+in+comparative+genomics+and+molecular+host-parasite+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Plant.+Path%22%5BJournal%5D)">Bursaphelenchus xylophilus: opportunities in comparative genomics and molecular host-parasite interactions.</a> Mol. Plant. Path. 9, 357-368 (2008).</li>
<li>Mamiya, Y., Furukawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fecundity+and+reproduction+of+Bursaphelenchus+lignicolus%5BTitle%5D)+AND+%22Jap.+J.+Nemat%22%5BJournal%5D)">Fecundity and reproduction of Bursaphelenchus lignicolus.</a> Jap. J. Nemat. 7, 6-9 (1977).</li>
<li>Mamiya, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Description+of+Bursaphelenchus+lignicolus.+n.+sp.+%28Nematoda%3A+Aphelenchoididae%29+from+pine+wood+and+histophathology+of+nematode-infested+trees%5BTitle%5D)+AND+%22Nematologica%22%5BJournal%5D)">Description of Bursaphelenchus lignicolus. n. sp. (Nematoda: Aphelenchoididae) from pine wood and histophathology of nematode-infested trees.</a> Nematologica. 18, 120-124 (1972).</li>
<li>Liu, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+features+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+the+mating+process%5BTitle%5D)+AND+%22Nematology%22%5BJournal%5D)">Behavioural features of Bursaphelenchus xylophilus in the mating process.</a> Nematology. 16, 895-902 (2014).</li>
<li>Simon, J. M., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+a+mate+finding+cue+in+the+hermaphrodite+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Evidence of a mate finding cue in the hermaphrodite nematode Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 1598-1603 (2002).</li>
<li>Barr, M. M., Garcia, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mating+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22The+C.+elegans+Research+Community+Wormbook%22%5BJournal%5D)">Male mating behaviour.</a> The C. elegans Research Community Wormbook. , (2006).</li>
<li>Shinya, R., Chen, A., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+attraction+and+mating+in+Bursaphelenchus+okinawaensis+and+B.+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nematol%22%5BJournal%5D)">Sex attraction and mating in Bursaphelenchus okinawaensis and B. xylophilus.</a> J. Nematol. 47 (3), 176-183 (2015).</li>
</ol>

The authors have nothing to disclose.

行動試験は、化学生態学、神経生物学、分子生物学、遺伝学の基本的な側面です。線虫、特にC.エレガンスは 、広くこれらの分野での研究のために使用されています。 線虫の交尾行動は、以前10-11検討されています。しかし、B.のセンチュウは gonochoristicと雌雄同体C.エレガンスとは異なり、その嵌合プロセスは、異なる行動機能9を有しています。?...

The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, is one of the most destructive invasive species, causing the wilting and eventual death of pine trees. This pathogenic nematode is believed to be native to the USA, but it was transported to several countries, including China, Japan, South Korea, and Portugal. Recently, it has also been reported in Spain, killing millions of pine trees at huge economic losses and threatening forest production and ecological stability1-5.
Once a host pine tree is infected by pinewood nematodes, thousands of millions of offspring are propagated rapidly within the trunk. This causes xylem dysfunction, resulting in wilting and eventually in the death of the host tree6. However, there is currently no efficient way to control this disease. Mating behavior might play an important role in the high fecundity of this nematode7. We therefore investigated the mating behavior of B. xylophilus in the laboratory, trying to find an effective way of disturbing its mating and decreasing its fecundity. 
This protocol is intended to introduce the detailed methods of how to obtain the virgin adults of B. xylophilus and how to observe and analyze the mating behavior using a video recorder and a stereomicroscope. This protocol can also be used as a reference for behavioral studies of other nematodes.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;B. xylophilus&lt;/em&gt; isolate &lt;em&gt;Nxy61&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td>Extracted from &lt;em&gt;Pinus massoniana&lt;/em&gt; in Ningbo area of China</td></tr><tr><td>Grey mold strain</td><td></td><td></td><td>Obtained from Forestry Academy of China</td></tr><tr><td>Baermann funnels</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>falcon tubes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>centrifuge</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pipette</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sterile dd H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td>Sterilized by high pressure of steam at 121 &amp;deg;C for 30 min.</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDA medium</td><td>Huankai Bio.</td><td>021050</td><td></td></tr><tr><td>incubator</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar flow</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>glass capillary</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Leica</td><td>LED5000 RL</td><td></td></tr><tr><td>inverted stereo microscope</td><td>Zeiss</td><td>A1</td><td></td></tr><tr><td>concave slides</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

observation and quantification of mating behavior in the pinewood nematode, bursaphelenchus xylophilus

マツ材線虫の交尾行動を観察し、定量化するための方法は、 マツノザイセンチュウは 、実体顕微鏡下で設立されました。 B.センチュウの交配効率を向上させると相手観察の機会を増加させるために、処女大人培養し、調査のために使用されます。卵を、水で線虫を維持し、女性は10分間産卵させることにより得ました。第二段目の少年（J2）は、暗所で25℃で24時間の卵をインキュベートすることによって同期化され、初期のJ4は、別の52時間、灰色カビ、 ボトリチス・シネレア（Botrytis cinerea）とJ2を培養することによって得ました。この時点で、ほとんどのJ4線虫は彼らの生殖器の形態を使用して、男性または女性であるとして明確に区別することができました。男性と女性のJ4を回収し、バージン成体線虫を得るために、24時間に2つの異なるペトリ皿中で別々に培養しました。処女男性と処女雌はワットの低下に対になりました凹形スライドのウェル内の小胞体。交尾行動は、実体顕微鏡下でのビデオレコーダーで撮影されました。交配プロセスの全期間は82.8±3.91分（平均±SE）であったと4つの異なる段階に分けることができます、と連絡交尾、と余韻、検索。期間の平均分はそれぞれ、21.8±2.0、±1.9 28.0、25.8±0.7および7.2±0.5でした。イレブンサブ挙動が記載された：、クルージング近づいて、遭遇し、触れる、掛け、位置、取り付け、射精、分離、静止状態、およびローミング。一人の女性が3人の男性または女性3と1人の男性とグループ化されたときに興味深いことに、明らかなイントラ性的競争が観察されました。このプロトコルは、Bセンチュウの交尾行動を調査する中で、だけでなく、他の線虫の行動学的研究のための基準として機能するだけでなく、有用かつ貴重なものです。

バージン成人の交配成功率（R）は、ランダムに選択された成人のものよりも有意に高かった、平均で86.67％であった：13.33±4.65％（F = 1301.71、DF = 1、P = 0.0001）（ 図2）。この知見は、ランダムに選択された大人と比べ処女大人とB.センチュウの交尾行動を観察することが容易であることを示唆しています。 <p class="jove_content" fo:keep-toge...

Watch this Scientific Journal Video about Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus at JoVE.com

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

パインウッドセンチュウの交配挙動の観察と定量化、<em&gt;マツノザイセンチュウ</em

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. ...

observation-quantification-mating-behavior-pinewood-nematode

Research

JoVE Journal

Biology

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

9.4K ビュー.  Zhejiang Agricultural & Forestry University. A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

ビデオ: Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms. Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear young, feed, or hide from natural enemies or harsh environmental conditions outside of the tree. Organisms that persist within the phloem habitat are difficult to observe given their location under bark. We provide a technique to preserve intact phloem and prepare it for experimentation with invertebrates and microorganisms. The apparatus is called a &#8216;phloem sandwich&#8217; and allows for the introduction and observation of arthropods, microbes, and other organisms. This technique has resulted in a better understanding of the feeding behaviors, life-history traits, reproduction, development, and interactions of organisms within tree phloem. The strengths of this technique include the use of inexpensive materials, variability in sandwich size, flexibility to re-open the sandwich or introduce multiple organisms through drilled holes, and the preservation and maintenance of phloem integrity. The phloem sandwich is an excellent educational tool for scientific discovery in both K-12 science courses and university research laboratories.

We provide a technique to preserve intact tree phloem and prepare it for observation. We create an apparatus called a phloem sandwich that allows for the introduction and observation of arthropods, microbes, and other organisms that inhabit phloem tissues.

ツリー組織内節足動物と微生物群集を研究するための技術

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

環境学

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including Pristionchus pacificus display complex behaviors, the most striking of which is the predation of other nematode larvae. However, as these behaviors are absent in the model organism Caenorhabditis elegans, they have thus far only recently been described in detail along with the development of reliable behavioral assays 1. These predatory behaviors are dependent upon phenotypically plastic but fixed mouth morphs making the correct identification and categorization of these animals essential. In P. pacificus there are two mouth types, the stenostomatous and eurystomatous morphs 2, with only the wide mouthed eurystomatous containing an extra tooth and being capable of killing other nematode larvae. Through the isolation of an abundance of size matched prey larvae and subsequent exposure to predatory nematodes, assays including both "corpse assays" and "bite assays" on correctly identified mouth morph nematodes are possible. These assays provide a means to rapidly quantify predation success rates and provide a detailed behavioral analysis of individual nematodes engaged in predatory feeding activities. In addition, with the use of a high-speed camera, visualization of changes in pharyngeal activity including tooth and pumping dynamics are also possible.

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

Behavioral assays provide powerful tools for understanding neuronal function. Here we present several protocols for quantifying predatory feeding behavior found in the model nematode Pristionchus pacificus and its relatives. Additionally, we provide methods for analyzing predatory feeding adaptations including mouth structures and teeth.

で捕食摂食行動を分析します<em&gt; Pristionchus</em&gt;およびその他の線虫

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including ...

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model organism. However, little is known about the sex-determination mechanisms found in other non-model hymenopteran taxa, such as ants. Because of the complex nature of the life cycles that have evolved in hymenopteran species, it is difficult to maintain and conduct experimental crosses between these organisms in the laboratory. Here, we describe the methods for conducting inbreeding crosses and for evaluating the success of those crosses in ant Vollenhovia emeryi. Inducing inbreeding in the laboratory using V. emeryi, is relatively simple because of the unique biology of the species. Specifically, this species produces androgenetic males, and female reproductives exhibit wing polymorphism, which simplifies identification of the phenotypes in genetic crosses. In addition, evaluating the success of inbreeding is straightforward as males can be produced continuously by inbreeding crosses, while normal males only appear during a well-defined reproductive season in the field. Our protocol allow for using V. emeryi as a model to investigate the genetic and molecular basis of the sex determination system in ant species.

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

In this protocol, methods for conducting inbreeding crosses, and for evaluating the success of those crosses, are described for the ant Vollenhovia emeryi. These protocols are important for experiments aimed at understanding the genetic basis of sex determination systems in Hymenoptera.

誘導と近親交配アリ、 Vollenhovia Emeryiを使用しての評価

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model ...

遺伝学

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

環境内の交信が交配行動に及ぼす影響を調べる方法<em&gt;ショウジョウバエmelanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

行動学

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a potential mate to form a pair. While this phenomenon has attracted interest of researchers, methods for its analysis have not been well described. Here we describe procedures for: 1) individual culturing and staging of Tigriopus juveniles and adults, and 2) video-based analysis of their mate-guarding behavior. The culturing method enables experimental control of paring experience of animals as well as the ability to track their development before behavioral tests. The analysis method allows quantitative evaluation of several aspects of the mate-guarding behavior, including capturing attempts by males and swimming trajectory of mate-guarding pairs. Although these methods were originally established for ethological studies on Tigriopus, with proper modifications they can also be applied to studies of other zooplankton in different research fields, such as physiology, toxicology, and ecological genetics.

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Mate-guarding behavior plays an important role in reproduction of intertidal copepods of the genus Tigriopus. However, methods for studying this behavior have not been well described. Here we describe methods for: 1) individual culture of virgin Tigriopus animals, and 2) quantitative analysis of their mate-guarding behavior.

Tigriopusカイアシ類と仲間を守る行動の定量分析の個別培養

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a ...

Rapid Isolation of Wild Nematodes by Baermann Funnel

Beyond being robust experimental model organisms, Caenorhabditis elegans and its relatives are also real animals that live in nature. Studies of wild nematodes in their natural environments are valuable for understanding many aspects of biology, including the selective regimes in which distinctive genomic and phenotypic characters evolve, the genetic basis for complex trait variation, and the natural genetic diversity fundamental to all animal populations. This manuscript describes a simple and efficient method for extracting nematodes from their natural substrates, including rotting fruits, flowers, fungi, leaf litter, and soil. The Baermann funnel method, a classical nematology technique, selectively isolates active nematodes from their substrates. Because it recovers nearly all active worms from the sample, the Baermann funnel technique allows for the recovery of rare and slow-growing genotypes that co-occur with abundant and fast-growing genotypes, which might be missed in extraction methods that involve multiple generations of reproduction. The technique is also well suited to addressing metagenetic, population-genetic, and ecological questions. It captures the entire population in a sample simultaneously, allowing an unbiased view of the natural distribution of ages, sexes, and genotypes. The protocol allows for deployment at scale in the field, rapidly converting substrates into worm plates, and the authors have validated it through fieldwork on multiple continents.

This protocol outlines a method for efficiently extracting live nematodes from natural substrates in the field.

ベアマン・ファネルによる野生の線虫の迅速な分離

Beyond being robust experimental model organisms, Caenorhabditis elegans and its relatives are also real animals that live in nature. Studies of wild ...

<meta charset="utf8"></head><body>C. elegansにおける揮発性性フェロモン応答の抽出と定量化

Volatile Sex Pheromone Extraction and Chemoattraction Assay in Caenorhabditis elegans

Chemical communication is vital in organismal health, reproduction, and overall well-being. Understanding the molecular pathways, neural processes, and computations governing these signals remains an active area of research. The nematode Caenorhabditis elegans provides a powerful model for studying these processes as it produces a volatile sex pheromone. This pheromone is synthesized by virgin females or sperm-depleted hermaphrodites and serves as an attractant for males.
This protocol describes a detailed method for isolating the volatile sex pheromone from several C. elegans strains (WT strain N2, daf-22, and fog-2) and C. remanei. We also provide a protocol for quantifying the male chemotaxis response to the volatile sex pheromone. Our analysis utilizes measurements such as chemotaxis index (C.I.), arrival time (A.T.), and a trajectory plot to compare male responses under various conditions accurately. This method allows for robust comparisons between males of different genetic backgrounds or developmental stages. Furthermore, the experimental setup outlined here is adaptable to investigating other chemoattraction chemicals.

<meta charset="utf8"></head><body>著者スポットライト:揮発性性フェロモンがオスの C.エレガンスの 行動に及ぼす影響の調査

This protocol establishes methods for extracting and quantifying responses to the volatile sex pheromone in C. elegans, providing tools to study chemical communication and navigation trajectory.

Caenorhabditis elegansにおける揮発性性フェロモン抽出と化学吸引アッセイ

Chemical communication is vital in organismal health, reproduction, and overall well-being. Understanding the molecular pathways, neural processes, and ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, reductionist, and scalable system for in-depth investigation of motivation using the mating drive of male Drosophila&#160;melanogaster (Drosophila), the methods for which we detail here. The behavioral paradigm centers on the finding that male mating drive decreases alongside fertility over the course of repeated copulations and recovers over ~3 d. In this system, the powerful neurogenetic tools available in the fly converge with the genetic accessibility and putative wiring diagram available for sexual behavior. This convergence allows rapid isolation and interrogation of small neuronal populations with specific motivational functions. Here we detail the design and execution of the satiety assay that is used to measure and alter courtship motivation in the male fly. Using this assay, we also demonstrate that low male mating drive can be overcome by stimulating dopaminergic neurons. The satiety assay is simple, affordable, and robust to influences of genetic background. We expect the satiety assay to generate many new insights into the neurobiology of motivational states.

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

This article describes a behavioral assay that uses male mating drive in Drosophila melanogaster to study motivation. Using this method, researchers can utilize advanced fly neurogenetic techniques to uncover the genetic, molecular, and cellular mechanisms that underlie this motivation.

パインウッドセンチュウの交配挙動の観察と定量化、

要約

さらに動画を探す

ツリー組織内節足動物と微生物群集を研究するための技術

で捕食摂食行動を分析します

誘導と近親交配アリ、 Vollenhovia Emeryiを使用しての評価

環境内の交信が交配行動に及ぼす影響を調べる方法

Tigriopusカイアシ類と仲間を守る行動の定量分析の個別培養

ベアマン・ファネルによる野生の線虫の迅速な分離

Caenorhabditis elegansにおける揮発性性フェロモン抽出と化学吸引アッセイ

Caenorhabditis elegansにおける揮発性性フェロモン抽出と化学吸引アッセイ

Caenorhabditis elegansにおける揮発性性フェロモン抽出と化学吸引アッセイ

測定とマレの変更交尾ドライブ