TGF-βファミリーのメンバーの研究は、がんゲノム解析センターオランダでサポートされています。シジア・リューと江漣はライデン大学の研究の4年間の中国奨学金委員会によってサポートされています。私たちは、MCF10A細胞株のために博士フレッド・ミラー（バーバラ・アン・カルマノス癌研究所、デトロイト、MI、USA）を感謝します。

トランスジェニック蛍光ゼブラフィッシュのTg（FLI：EGFP）を使用して、すべての研究緑色蛍光タンパク質（EGFP）を増大した株は、住宅や実験を含む、血管系20を標識は、国際的なガイドラインに従って行ったと地元の制度委員会によって承認されましたライデン大学医療センターの動物福祉（DIER Ethische Commissie（DEC）のために。 注：胚の収集（ 図1A）、マイクロインジェクション（ 図1B）、スクリーニング（ 図1C）、及び分析（ 図1D）。 図1にまとめたように、プロトコルは、大きく4つのステップに分解されます。 1.注射針を準備<ol><li>ホウケイ酸ガラスマイクロキャピラリーに注射針を準備します。次の設定でマイクロピペットプラー装置にマイクロキャピラリーを入れ：空気圧、500。熱、650。 、100を引きます。速度、200;時間、これらは、注射のために使用されるまで40針ホルダプレートに注射針を保ちます。 </li></ol> 2.注射用蛍光灯、遺伝的に標識乳癌細胞を準備します<ol><li> 100ペニシリン - ストレプトマイシン（ペニシリン - ストレプトマイシン）：L-グルタミン、10％ウシ胎児血清、および1を含むDMEM高グルコース培地中で37℃で培養ヒト乳癌MDA-MB-231細胞。 </li><li>培養5％ウマ血清、20ng / mlの上皮増殖因子、の10mg / mlのL-グルタミンを含むDMEM / F12培地中で37℃で乳房上皮細胞株MCF10A（M1）およびMCF10A-RAS（M2）、インスリン、100ng / mlのコレラエンテロトキシン、を0.5mg / mLのヒドロコルチゾン、および1：100ペニシリン - ストレプトマイシン。 </li><li> HEK293T細胞にPLV-mCherryを、のpCMV-VSVG 21、pMDLg-RRE（GAG / POL）22、とのpRSV-REV 22プラスミドを共トランスフェクトすることによってmCherryをレンチウイルスを産生します。収穫細胞上清を-80℃でトランスフェクションし、店舗48時間後。 </li><li>私5 / mlのポリブレンの存在下で通常の培地で1：nfectレンチウイルス上清と共に24時間、30％コンフルエンスでMDA-MB-231、M1、およびM2細胞は、1に希釈しました。 </li><li>安定mCherryを発現する細胞株が得られるまで、単離された細胞クローンの増殖を可能にする96ウェルプレートに細胞を希釈することによって、単一細胞クローンを選択します。 </li><li>注射のための細胞の培養1つのT75フラスコ。 0.5％トリプシン-EDTA処理で80％コンフルエンスで細胞を採取。 1×PBS 2~3時間で細胞を洗浄。 </li><li> PBSの約200μLで細胞を再懸濁。注射の前に、以下の5時間のためにそれら4°Cで保存。 </li></ol> 3.注射用ゼブラフィッシュ胚を準備します<ol><li>ゼブラフィッシュの繁殖ペアを設定し、ローゼンらによる以前のJoveの記事に示されるように、胚を収集します。 23。 </li><li>未受精卵や胚の異常を除去することにより、0-4 HPFである胚を選択します。ペトリDISに胚を保ちます卵水（60 / mlの海の塩;〜60個の胚/皿）の完全な時間とは、28℃でインキュベートします。 </li><li> 48 HPFで細かいピンセットで胚をDechorionate。 </li><li>しかし、もう2時間よりも注射前、注射前に卵の水、約2分を含有する40μgの/ mLのトリカイン（3-アミノ安息香酸）に転送することによって胚を麻酔ありません。 注：トリカインストック溶液（4 mg / mlと、100X）7.4にpH調整して、二重蒸留水97.9 mLの1 Mトリス塩基（pHを9）の2.1 mLのトリカイン粉末400mgのように調製されます。 -20°Cの冷凍庫に保管してください。 </li></ol> 4.卵黄周囲空間にヒト乳癌細胞を注入<ol><li>注射針への細胞懸濁液の負荷15μL。マイクロマニピュレーターに針をマウントし、5〜10ミクロンの先端開口径を得るために、細いピンセットで針の先端を断ちます。 </li><li>マイクロインジェクションを実行するために、空気圧picopumpとマニピュレータを使用してください。 AdjuST 400個のセルごとに注入するpicopump。注射前に、1％アガロースを含むペトリ皿の上に細胞を注入することによって手動で細胞数を数えます。 </li><li> 10個の胚各年頃ラインナップ麻酔胚フラット、1％アガロース注入プレート上の（2-3日後に受精（DPF））。 </li><li> （ すなわち 、斜めに）針を挿入するための好ましい位置に胚を配置する注射中に手でオリエント噴射板。 </li><li>注射部位に針の先端を指し、穏やかに卵黄嚢およびゼブラフィッシュ胚（ 図2A）の周皮との間の囲卵腔に針の先端を挿入します。 </li><li>約400 mCherryを標識腫瘍細胞を注入します。卵黄嚢は、卵黄嚢への移植を避けるために破裂されていないことを確認します。 </li></ol> 5.ドキュメントにヒト乳癌細胞を注入<ol><li>私が説明するように、注射針やゼブラフィッシュの胚を準備します<html> Nプロトコルは、1,2、及び3の手順。 </li><li>ドクは、胚の背側からアプローチすることができるように45°の角度針を使用してください。 </li><li>ちょうどダクトが卵黄嚢の上に広げる始まるまで背側、及び約400細胞を注入し、ドク（ 図3A）の出発点に針を挿入します。ダクト内の容積は、パルスと卵黄嚢の後に直接膨張場合注射が正確です。 注：いくつかの連続した注射針を抽出することなく行うことができます。 </li><li>卵の水に注入ゼブラフィッシュ胚を転送します。 注：としてかなりの変動は、個々のゼブラフィッシュ胚の中に存在し、注入後の胚の死が起こり得るように、（100程度）ゼブラフィッシュ胚の比較的多数の癌細胞を注入しなければなりません。 </li><li>魚および哺乳動物細胞のための最適な温度要件に対応するために33°Cでのゼブラフィッシュ胚を維持します。 </li></ol>_title &quot;&gt; 6。注入した胚を選別<ol><li>囲卵腔注射2時間後噴射（HPI）（ 図2）における蛍光実体顕微鏡下で各魚をスクリーニングまたはドキュメントの注入（ 図2）のための2-24 HPIで胚の全てを用いて注入されることを確実にするために腫瘍細胞の同様の数。卵黄嚢のような破裂（ 図2B）、または注射などの注射エラー、（ 図3B）で胚を削除し、以下注入された細胞（ 図2Cおよび3B）を有する、または（ 図2Dおよび図3B）上記胚を取り出す閾値。文化の中で約400細胞と胚のみを保管してください。 </li><li>細胞は、すでに流通している細胞と胚を除去することにより、射出プロセス中に循環内に直接導入される可能性を排除します。また、ドキュメント質量近い細胞（ 図2dで任意胚を除去</stronG&gt;）。 </li></ol> 7.画像および転移プロセスを分析<ol><li>ワイドチップパスツールピペットを用いていくつかの麻酔胚を収集し、ポリスチレンディッシュのガラス底部に転送します。 </li><li>過剰の水を除去し、卵の水の限られた量を保ちます。髪のループツールを使用して所定の位置に胚を操作し、ガラスの上にカバーを置きます。 </li><li>水浸や長距離ドライ目標と組み合わせて倒立共焦点顕微鏡を使用してください。関心領域は、可能な限り客観的に近くなるように胚を置き。 </li><li>液体の蒸発による死亡のリスクを軽減するために、すぐに麻酔後に撮影を行います。 <ol><li>同時登録2つの撮像チャネルをマージすることにより、血管を有する細胞を注入する胚の同じ位置におけるEGFP標識血管系およびmCherryを標識した腫瘍細胞からの信号を捕捉します。 </li><li>各ゼブラフィッシュの胚のために、画像の2つの異なるセットを収集頭部と尾部から。 </li></ol></li><li>散在性細胞の数を定量化します。 <ol><li>囲卵空間注射のために、ヘッドとテール領域4,15内胚魚の体に向かって細胞塊から播種した各魚における細胞の数を数えます。領域は浮き袋の背側の上に、正面心腔の境界を越えており、泌尿生殖器の開口部を越えて尾側に。 </li><li>ドキュメントの注射のために、個々の循環（MDA-MB-231）から尾翼のコラーゲン繊維に侵入した細胞または尾造血組織（CHT）の中の細胞まとめ（M2）によって形成されるクラスタの数の数を数えますそれぞれが19をゼブラフィッシュ。 </li></ol></li><li>共焦点顕微鏡を使用して、より詳細に浸潤・転移を研究する（強く推奨）。 <ol><li>画像全体に低倍率（4Xの目標）を使用します腫瘍細胞の普及パターンの概要を取得するために、本体と。 注：高倍率（20Xと40Xの目標は）内および腫瘍周囲の血管形成および胚体内における播種細胞の正確な局在を研究するのに適しています。 </li><li>赤色蛍光で標識した移植された腫瘍細胞をスキャンするためにゼブラフィッシュ胚の血管系と543 nmのレーザーをスキャンするために488nmのレーザーを使用してください。 8〜10の手順で各胚をスキャンすることで、高品質な画像を得ます。 6回スキャンし、各ステップを平均化します。 </li></ol></li><li>それがさらなる実験のために必要な場合は慎重に卵水に戻す胚を置きます。 </li></ol> 8. 事後解析が続く分散（ANOVA）の一方向分析を用いた統計解析を実行します

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	<li>Wan, L., Pantel, K., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+metastasis:+moving+new+biological+insights+into+the+clinic.">Tumor metastasis: moving new biological insights into the clinic.</a> Nat. Med. 19 (11), 1450-1464 (2013).</li><li>Obenauf, A. C., Massagu&#233;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surviving+at+a+distance:+Organ-specific+metastasis.">Surviving at a distance: Organ-specific metastasis.</a> Trends Cancer. 1 (1), 76-91 (2015).</li><li>Saxena, M., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rebuilding+cancer+metastasis+in+the+mouse.">Rebuilding cancer metastasis in the mouse.</a> Mol. Oncol. 7 (2), 283-296 (2013).</li><li>Teng, Y., Xie, X., Walker, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+human+cancer+cell+metastasis+in+zebrafish.">Evaluating human cancer cell metastasis in zebrafish.</a> BMC cancer. 13 (1), 453 (2013).</li><li>Konantz, M., Balci, T. B., Hartwig, U. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+xenografts+as+a+tool+for+in+vivo+studies+on+human+cancer.">Zebrafish xenografts as a tool for in vivo studies on human cancer.</a> Ann N Y Acad Sci. 1266 (1), 124-137 (2012).</li><li>Zhao, S., Huang, J., Ye, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fresh+look+at+zebrafish+from+the+perspective+of+cancer+research.">A fresh look at zebrafish from the perspective of cancer research.</a> J Exp Clin Cancer Res. 34 (1), 80 (2015).</li><li>Stanton, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diethylnitrosamine-induced+hepatic+degeneration+and+neoplasia+in+the+aquarium+fish,+Brachydanio+rerio.">Diethylnitrosamine-induced hepatic degeneration and neoplasia in the aquarium fish, Brachydanio rerio.</a> J. Natl. Cancer Inst. 34 (1), 117-130 (1965).</li><li>Lam, S. H., Wu, Y. L., Vega, V. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conservation+of+gene+expression+signatures+between+zebrafish+and+human+liver+tumors+and+tumor+progression.">Conservation of gene expression signatures between zebrafish and human liver tumors and tumor progression.</a> Nat. Biotechnol. 24 (1), 73-75 (2006).</li><li>Spitsbergen, J. M., Kent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+state+of+the+art+of+the+zebrafish+model+for+toxicology+and+toxicologic+pathology+research-advantages+and+current+limitations.">The state of the art of the zebrafish model for toxicology and toxicologic pathology research-advantages and current limitations.</a> Toxicol. Pathol. 31, 62-87 (2003).</li><li>Stoletov, K., Klemke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catch+of+the+day:+zebrafish+as+a+human+cancer+model.">Catch of the day: zebrafish as a human cancer model.</a> Oncogene. 27 (33), 4509-4520 (2008).</li><li>Lee, L. M., Seftor, E. A., Bonde, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fate+of+human+malignant+melanoma+cells+transplanted+into+zebrafish+embryos:+assessment+of+migration+and+cell+division+in+the+absence+of+tumor+formation.">The fate of human malignant melanoma cells transplanted into zebrafish embryos: assessment of migration and cell division in the absence of tumor formation.</a> Dev. Dynam. 233 (4), 1560-1570 (2005).</li><li>Mizgirev, I., Revskoy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+clonal+zebrafish+lines+and+transplantable+hepatic+tumors.">Generation of clonal zebrafish lines and transplantable hepatic tumors.</a> Nat. Protoc. 5 (3), 383-394 (2010).</li><li>Mizgireuv, I. V., Revskoy, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantable+tumor+lines+generated+in+clonal+zebrafish.">Transplantable tumor lines generated in clonal zebrafish.</a> Cancer Res. 66 (6), 3120-3125 (2006).</li><li>Stoletov, K., Montel, V., Lester, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+imaging+of+the+dynamic+tumor+cell-vascular+interface+in+transparent+zebrafish.">High-resolution imaging of the dynamic tumor cell-vascular interface in transparent zebrafish.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104 (44), 17406-17411 (2007).</li><li>Rouhi, P., Jensen, L. D., Cao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+metastasis+model+in+embryonic+zebrafish.">Hypoxia-induced metastasis model in embryonic zebrafish.</a> Nat. Protoc. 5 (12), 1911-1918 (2010).</li><li>Drabsch, Y., He, S., Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor-&#946;+signalling+controls+human+breast+cancer+metastasis+in+a+zebrafish+xenograft+model.">Transforming growth factor-&#946; signalling controls human breast cancer metastasis in a zebrafish xenograft model.</a> Breast Cancer Res. 15 (6), R106 (2013).</li><li>He, S., Lamers, G. E., Beenakker, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-mediated+experimental+metastasis+is+enhanced+by+VEGFR+inhibition+in+a+zebrafish+xenograft+model.">Neutrophil-mediated experimental metastasis is enhanced by VEGFR inhibition in a zebrafish xenograft model.</a> J. Pathol. 227 (4), 431-445 (2012).</li><li>Nicoli, S., Presta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish/tumor+xenograft+angiogenesis+assay.">The zebrafish/tumor xenograft angiogenesis assay.</a> Nat. Protoc. 2 (11), 2918-2923 (2007).</li><li>de Boeck, M., Cui, C., Mulder, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smad6+determines+BMP-regulated+invasive+behaviour+of+breast+cancer+cells+in+a+zebrafish+xenograft+model.">Smad6 determines BMP-regulated invasive behaviour of breast cancer cells in a zebrafish xenograft model.</a> Sci. Rep. 6, 24968 (2016).</li><li>Lawson, N. D., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+embryonic+vascular+development+using+transgenic+zebrafish.">In vivo imaging of embryonic vascular development using transgenic zebrafish.</a> Dev. Biol. 248 (2), 307-318 (2002).</li><li>Stewart, S. A., Dykxhoorn, D. M., Palliser, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentivirus-delivered+stable+gene+silencing+by+RNAi+in+primary+cells.">Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells.</a> RNA. 9 (4), 493-501 (2003).</li><li>Dull, T., Zufferey, R., Kelly, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+third-generation+lentivirus+vector+with+a+conditional+packaging+system.">A third-generation lentivirus vector with a conditional packaging system.</a> J. Virol. 72 (11), 8463-8471 (1998).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+zebrafish+embryos+to+analyze+gene+function.">Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).</li><li>Lawson, N. D., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arteries+and+veins:+making+a+difference+with+zebrafish.">Arteries and veins: making a difference with zebrafish.</a> Nat. Rev. Genet. 3 (9), 674-682 (2002).</li><li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish.">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 4 (1), 35-44 (2005).</li></ol>

著者は、開示することは何もありません。

囲卵腔とドク注射でゼブラフィッシュ胚、：ここでは、Tgは（EGFP FLI1）における乳癌細胞の浸潤性の挙動を調査するために二つの方法を説明しました。トランスジェニックゼブラフィッシュ胚に化学色素または蛍光タンパク質で標識された癌細胞を注入することにより、浸潤および転移の動的及び空間特性は、明らかに蛍光顕微鏡下で単細胞またはクラスタレベルでリアルタイ?...

クリニックでの明白な癌の転移は「転移カスケード」として知られ、複雑で多段階の一連のイベントを含みます。カスケードは広く概説されており、連続したステップに解剖することができます：局所浸潤、脈管内、普及、逮捕、血管外漏出、および植民地化1、2。癌転移の病因の理解とin vivoでの潜在的な治療戦略の開発は、癌細胞の広がりの強力なホストモデルが必要です。げっ歯類のモデルは十分に確立され、広く転移3を評価するために使用されているが、これらのアプローチは、低効率性と倫理的な限界があり、特定の操作が転移性の表現型に影響を与える可能性があるかどうかを判断するために最先端モデルとして高価です。その他の効率的な、信頼性の高い、低コストのモデルはすぐに（エピ）遺伝的変化やpharmacologの潜在的な影響へのアクセスに必要なiCalの化合物。その高い遺伝ヒトに対する相同性およびその胚のゼブラフィッシュ（ ゼブラフィッシュ ）の透明性に重要な脊椎動物のモデルとして浮上していると、ますます発達プロセス、微生物宿主相互作用、ヒトの疾患、薬物スクリーニングなどの研究に適用されています。4。ゼブラフィッシュに設立された癌転移モデルは、齧歯類モデル5、6の欠点に対する答えを提供することができます。 自発的新生物はほとんど野生ゼブラフィッシュ7に見られないが、ゼブラフィッシュにおいて所望癌を誘発するためのいくつかの長年の技術があります。発癌物質誘発性の遺伝子突然変異またはシグナル伝達経路の活性化は、組織学的および分子モデル発癌、ゼブラフィッシュ7、8、9、ヒト疾患を模倣することができます。 TAKにより、前方多様の利点をすると、癌遺伝子または腫瘍抑制因子の遺伝子操作を逆に、（遺伝子組換え）ゼブラフィッシュまた、癌の形成と維持6、10の潜在的な研究を有効にしています。ゼブラフィッシュにおける誘導癌モデルは、消化器、生殖、血液、神経系、および上皮6を含む広いスペクトルをカバーしています。 癌研究におけるゼブラフィッシュの利用はこれによる生物におけるヒト腫瘍細胞の異種移植モデルの確立に最近拡大しています。これは、最初に成功した2005年11胞胚段階でゼブラフィッシュの胚に移植したヒト転移メラノーマ細胞で報告されました。いくつかの独立した研究室では、様々なサイトや発達段階でゼブラフィッシュへの哺乳動物の癌細胞株の多様な範囲を導入することで、この先駆的な仕事の実現可能性を検証してきた5 &lt;/ SUP&gt;。例えば、胚盤および胞胚期の胚盤胞の近くに注射します。 5日齢の胚に卵黄嚢、卵黄周囲スペース、キュビエ（DOC）のダクト、及び6-H-の後部主静脈への注射;および30日齢の免疫抑制幼虫の腹腔内への注射は、5、12を行ってきました。また、同種異系腫瘍移植もゼブラフィッシュ12、13で報告されました。異種移植片を使用しての大きな利点の一つは、移植された癌細胞が簡単に蛍光標識し、正常細胞と区別することができるということです。したがって、microtumor形成14、細胞浸潤および転移15、16、17、腫瘍誘導血管形成15、1の動的挙動の調査8、および癌細胞とホスト間の相互作用は、トランスジェニックゼブラフィッシュの行は5に適用されている場合は特に、17は明らかに生きた魚の体に可視化することができる要因。 ドク注射〜16ゼブラフィッシュの胚：転移を評価するために、ゼブラフィッシュ異種移植モデルの高電位に触発され、我々は、Tgは（EGFP FLI）の尾翼領域に異なる乳癌細胞株の経血管外遊出の性質を示しました。プロ/抗乳癌細胞の浸潤や転移におけるトランスフォーミング増殖因子βの役割（TGF-β）16と、骨形成タンパク質（BMP）19のシグナル伝達経路はまた、このモデルで検討しました。また、我々はまた、卵黄周囲スペース注射で異種移植ゼブラフィッシュモデルを使用して循環に様々な乳癌細胞株の脈管内の能力を再現し。

<table><tbody><tr><td>Agarose</td><td>MP Biomedicals</td><td>AGAF0500</td><td></td></tr><tr><td>Borosilicate glass capillary</td><td>Harvard Apparatus</td><td>300038</td><td></td></tr><tr><td>Cholera enterotoxin&amp;nbsp;</td><td>Calbiochem</td><td>227035</td><td></td></tr><tr><td>Confocal microscope</td><td>Leica</td><td>SP5 STED</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-high glucose media containing L-glutamine</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12 media containing L-glutamine</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21041025</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forceps</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Epidermal growth factor</td><td>Merck Millipore</td><td>01-107</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum&amp;nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>16140071</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescent stereo microscope</td><td>Leica</td><td>M165 FC</td><td></td></tr><tr><td>HEK293T cell line</td><td>American Type Culture Collection</td><td>CRL-1573</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>SigmaAldrich</td><td>227035</td><td></td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>SigmaAldrich</td><td>I-6634</td><td></td></tr><tr><td>MCF10A (M1) cell line</td><td></td><td></td><td>Kindly provided by Dr. Fred Miller (Barbara Ann Karmanos Cancer Institute, Detroit, MI, USA)&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>MCF10Aras (M2) cell line</td><td></td><td></td><td>Kindly provided by Dr. Fred Miller (Barbara Ann Karmanos Cancer Institute, Detroit, MI, USA)&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>MDA-MB-231 cell line</td><td>American Type Culture Collection</td><td>CRM-HTB-26</td><td></td></tr><tr><td>Manual micromanipulator&amp;nbsp;</td><td>World Precision Instruments</td><td>M3301R</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette puller</td><td>Sutter Instruments</td><td>P-97&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Wide-tip Pasteur pipette (0.5-20 &amp;micro;L)</td><td>Eppendorf</td><td>F276456I</td><td></td></tr><tr><td>pCMV-VSVG plasmid</td><td></td><td></td><td>Kindly provided by Prof. Dr. Rob Hoeben (Leiden University Medical Center, Leiden, The Netherlands)</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>PLV-mCherry plasmid</td><td>Addgene</td><td>36084</td><td></td></tr><tr><td>pMDLg-RRE (gag/pol) plasmid</td><td></td><td></td><td>Kindly provided by Prof. Dr. Rob Houben (Leiden University Medical Center, Leiden, The Netherlands)</td></tr><tr><td>Pneumatic picoPump</td><td>World Precision Instruments</td><td>SYS-PV820</td><td></td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>SigmaAldrich</td><td>107689</td><td></td></tr><tr><td>Prism 4 software</td><td>GraphPad Software</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pRSV-REV plasmid</td><td></td><td></td><td>Kindly provided by Prof. Dr. Rob Hoeben (Leiden University Medical Center, Leiden, The Netherlands)</td></tr><tr><td>Stereo microscope</td><td>Leica</td><td>MZ16FA</td><td></td></tr><tr><td>Tg (&lt;em&gt;fli:EGFP&lt;/em&gt;) zebrafish strain</td><td></td><td></td><td>Kindly provided by Dr. Ewa Snaar-Jagalska (Institute of Biology, Leiden University, Leiden, The Netherlands)</td></tr><tr><td>Tris-base</td><td>SigmaAldrich</td><td>11814273001</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine (3-aminobenzoic acid)</td><td>SigmaAldrich</td><td>A-5040</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.5%)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Petri dishes, polystyrene (60 &amp;times; 15 mm)</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5481-500EA</td><td></td></tr><tr><td>Polystyrene dish with glass bottom</td><td>WillCo</td><td>GWST-5040</td><td></td></tr></tbody></table>

invasive behavior of human breast cancer cells in embryonic zebrafish

多くの場合、癌患者は、原発腫瘍で死ぬのではなく、理由転移のしないでください。多数のげっ歯類モデルは、in vivoで癌転移を研究するために利用可能であるが、他の効率的な、信頼性の高い、低コストのモデルはすぐに（エピ）の遺伝的変化または薬理学的化合物の潜在的な効果にアクセスするために必要とされています。そのため、我々は説明し、この目標をサポートするために、ゼブラフィッシュの胚に注入ヒト乳癌細胞を用いた異種移植モデルの実現可能性を説明します。顕微鏡下で、蛍光タンパク質または化学的に標識されたヒト乳癌細胞は、トランスジェニックゼブラフィッシュ胚に移植され、Tgは（FLI：EGFP）、48時間受精後囲卵腔またはキュビエ（DOC）のダクトに。まもなくして、生きている魚の体内の癌細胞の浸潤、普及、および転移の時間的・空間的なプロセスは、蛍光顕微鏡下で可視化されます。別の注射部位を使用したモデル、 すなわち、あたりivitellineスペースまたはドキュメントは、イベントの多段階転移カスケードの初期段階（血管内のステップ）及び後期（血管外遊出ステップ）を反映し、互いに相補的です。また、腫瘍周囲および腫瘍内血管新生は囲卵腔への注射を用いて観察することができます。全実験期間は、これ以上の8日未満です。これらの2つのモデルが、遺伝的および薬理学的操作に応じて、癌転移の迅速な評価を可能にする、細胞標識、マイクロ移植、および蛍光イメージング技術を兼ね備えています。

囲卵腔注入して胚性異種移植ゼブラフィッシュモデルでは、魚の体中の標識された癌細胞の血行性の普及を積極的移行と考えられています。上記の方法に記載のように、このプロセスは、蛍光顕微鏡下で検出および定量することができます。この異種移植モデルを説明するために、我々は、in vitroに応じて公知の（又は無し）浸潤/転移電位と異なる乳癌細胞株?...

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Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

ここでは、侵襲的な行動を調査し、それぞれ、ヒト乳癌細胞の脈管内および血管外漏出の可能性を評価するために、二つの異なる注射部位、 すなわち、卵黄周囲のスペースとキュビエのダクトを使用して異種移植ゼブラフィッシュモデルを記述します。

胚ゼブラフィッシュにおけるヒト乳癌細胞の浸潤挙動

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

16.6K ビュー.  Leiden University Medical Center. ここでは、侵襲的な行動を調査し、それぞれ、ヒト乳癌細胞の脈管内および血管外漏出の可能性を評価するために、二つの異なる注射部位、 すなわち、卵黄周囲のスペースとキュビエのダクトを使用して異種移植ゼブラフィッシュモデルを記述します。 

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Testing the Vascular Invasive Ability of Cancer Cells in Zebrafish (Danio Rerio)

Cancer cell vascular invasion and extravasation is a hallmark of metastatic progression. Traditional in vitro models of cancer cell invasion of endothelia typically lack the fluid dynamics that invading cells are otherwise exposed to in vivo. However, in vivo systems such as mouse models, though more physiologically relevant, require longer experimental timescales and present unique challenges associated with monitoring and data analysis. Here we describe a zebrafish assay that seeks to bridge this technical gap by allowing for the rapid assessment of cancer cell vascular invasion and extravasation. The approach involves injecting fluorescent cancer cells into the precardiac sinus of transparent 2-day old zebrafish embryos whose vasculature is marked by a contrasting fluorescent reporter. Following injection, the cancer cells must survive in circulation and subsequently extravasate from vessels into tissues in the caudal region of the embryo. Extravasated cancer cells are efficiently identified and scored in live embryos via fluorescence imaging at a fixed timepoint. This technique can be modified to study intravasation and/or competition amongst a heterogeneous mixture of cancer cells by changing the injection site to the yolk sac. Together, these methods can evaluate a hallmark behavior of cancer cells and help uncover mechanisms indicative of malignant progression to the metastatic phenotype.

Testing the Vascular Invasive Ability of Cancer Cells in Zebrafish Danio Rerio

This method utilizes zebrafish embryos to efficiently test the vascular invasive ability of cancer cells. Fluorescent cancer cells are injected into the precardiac sinus or yolk sac of developing embryos. Cancer cell vascular invasion and extravasation is assessed via fluorescence microscopy of the tail region 24 to 96 hr later.

（ゼブラフィッシュにおける癌細胞の血管浸潤能をテストします<em&gt;ゼブラフィッシュ</em&gt;）

Cancer cell vascular invasion and extravasation is a hallmark of metastatic progression.  Traditional in vitro models of cancer cell invasion of ...

がん研究

Transplantation of Zebrafish Pediatric Brain Tumors into Immune-competent Hosts for Long-term Study of Tumor Cell Behavior and Drug Response

Tumor cell transplantation is an important technique to define the mechanisms controlling cancer cell growth, migration, and host response, as well as to assess potential patient response to therapy. Current methods largely depend on using syngeneic or immune-compromised animals to avoid rejection of the tumor graft. Such methods require the use of specific genetic strains that often prevent the analysis of immune-tumor cell interactions and/or are limited to specific genetic backgrounds. An alternative method in zebrafish takes advantage of an incompletely developed immune system in the embryonic brain before 3 days, where tumor cells are transplanted for use in short-term assays (i.e., 3 to 10 days). However, these methods cause host lethality, which prevents the long-term study of tumor cell behavior and drug response. This protocol describes a simple and efficient method for the long-term orthotopic transplantation of zebrafish brain tumor tissue into the fourth ventricle of a 2-day-old immune-competent zebrafish. This method allows: 1) long-term study of tumor cell behaviors, such as invasion and dissemination; 2) durable tumor response to drugs; and 3) re-transplantation of tumors for the study of tumor evolution and/or the impact of different host genetic backgrounds. In summary, this technique allows cancer researchers to assess engraftment, invasion, and growth at distant sites, as well as to perform chemical screens and cell competition assays over many months. This protocol can be extended to studies of other tumor types and can be used to elucidate mechanisms of chemoresistance and metastasis.

The transplantation of cancer cells is an important tool for the identification of cancer mechanisms and therapeutic responses. Current techniques depend on immune-incompetent animals. Here, we describe a method to transplant zebrafish tumor cells into immune-competent embryos for the long-term analysis of tumor cell behavior and in vivo drug responses.

腫瘍細胞の挙動および薬物応答の長期的研究のためのゼブラフィッシュ小児脳腫瘍の免疫適格宿主への移植

Tumor cell transplantation is an important technique to define the mechanisms controlling cancer cell growth, migration, and host response, as well as to ...

In Vivo Imaging and Quantitation of the Host Angiogenic Response in Zebrafish Tumor Xenografts

Tumor angiogenesis is a key target of anti-cancer therapy and this method has been developed to provide a new model to study this process in vivo. A zebrafish xenograft is created by implanting mammalian tumor cells into the perivitelline space of two days-post-fertilization zebrafish embryos, followed by measuring the extent of the angiogenic response observed at an experimental endpoint up to two days post-implantation. The key advantage to this method is the ability to accurately quantitate the zebrafish host angiogenic response to the graft. This enables detailed examination of the molecular mechanisms as well as the host vs tumor contribution to the angiogenic response. The xenografted embryos can be subjected to a variety of treatments, such as incubation with potential anti-angiogenesis drugs, in order to investigate strategies to inhibit tumor angiogenesis. The angiogenic response can also be live-imaged in order to examine more dynamic cellular processes. The relatively undemanding experimental technique, cheap maintenance costs of zebrafish and short experimental timeline make this model especially useful for the development of strategies to manipulate tumor angiogenesis.

The aim of this method is to generate an in vivo model of tumor angiogenesis by xenografting mammalian tumor cells into a zebrafish embryo that has fluorescently-labelled blood vessels. By imaging the xenograft and associated vessels, a quantitative measurement of the angiogenic response can be obtained.

ゼブラフィッシュ腫瘍異種移植片における宿主血管新生応答の生体内イメージングと定量

Tumor angiogenesis is a key target of anti-cancer therapy and this method has been developed to provide a new model to study this process in vivo. A ...

Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model

Genomic studies of human cancers have yielded a wealth of information about genes that are altered in tumors1,2,3. A challenge arising from these studies is that many genes are altered, and it can be difficult to distinguish genetic alterations that drove tumorigenesis from that those arose incidentally during transformation. To draw this distinction it is beneficial to have an assay that can quantitatively measure the effect of an altered gene on tumor initiation and other processes that enable tumors to persist and disseminate. Here we present a rapid means to screen large numbers of candidate melanoma modifiers in zebrafish using an autochthonous tumor model4 that encompasses steps required for melanoma initiation and maintenance. A key reagent in this assay is the miniCoopR vector, which couples a wild-type copy of the mitfa melanocyte specification factor to a Gateway recombination cassette into which candidate melanoma genes can be recombined5. The miniCoopR vector has a mitfa rescuing minigene which contains the promoter, open reading frame and 3'-untranslated region of the wild-type mitfa gene. It allows us to make constructs using full-length open reading frames of candidate melanoma modifiers. These individual clones can then be injected into single cell Tg(mitfa:BRAFV600E);p53(lf);mitfa(lf)zebrafish embryos. The miniCoopR vector gets integrated by Tol2-mediated transgenesis6 and rescues melanocytes. Because they are physically coupled to the mitfa rescuing minigene, candidate genes are expressed in rescued melanocytes, some of which will transform and develop into tumors. The effect of a candidate gene on melanoma initiation and melanoma cell properties can be measured using melanoma-free survival curves, invasion assays, antibody staining and transplantation assays.

A rapid way to screen for melanoma modifiers using a zebrafish autochthonous tumor model is presented. It takes advantage of the miniCoopR vector which allows for expression of candidate melanoma genes in melanocytes. A method to obtain melanoma-free survival curves, an invasion assay, a protocol for antibody staining of scale melanocytes and a melanoma transplantation assay are described.

ゼブラ土着腫瘍モデルを用いたメラノーマの修飾のためのスクリーニング

Genomic studies of  human cancers have yielded a wealth of information about genes that are altered  in tumors1,2,3. A challenge arising from these ...

医学

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the standard in the field, but zebrafish have emerged as an alternative model with several advantages, including the ability for high-throughput and low-cost drug screening. Zebrafish also allow for in vivo drug screening with large replicate numbers that were previously only obtainable with in vitro systems. The ability to rapidly perform large scale drug screens may open up the possibility for personalized medicine with rapid translation of results back to clinic. Zebrafish xenograft models could also be used to rapidly screen for actionable mutations based on tumor response to targeted therapies or to identify new anti-cancer compounds from large libraries. The current major limitation in the field has been quantifying and automating the process so that drug screens can be done on a larger scale and be less labor-intensive. We have developed a workflow for xenografting primary patient samples into zebrafish larvae and performing large scale drug screens using a fluorescence microscope equipped imaging unit and automated sampler unit. This method allows for standardization and quantification of engrafted tumor area and response to drug treatment across large numbers of zebrafish larvae. Overall, this method is advantageous over traditional cell culture drug screening as it allows for growth of tumor cells in an in vivo environment throughout drug treatment, and is more practical and cost-effective than mice for large scale in vivo drug screens.

Zebrafish xenograft models allow for high-throughput drug screening and fluorescent imaging of human cancer cells in an in vivo microenvironment. We developed a workflow for large scale, automated drug screening on patient-derived leukemia samples in zebrafish using an automated fluorescence microscope equipped imaging unit.

ゼブラフィッシュにおける原発性腫瘍異種移植片の薬物スクリーニング

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

In Vivo Targeting of Xenografted Human Cancer Cells with Functionalized Fluorescent Silica Nanoparticles in Zebrafish

Developing nanoparticles capable of detecting, targeting, and destroying cancer cells is of great interest in the field of nanomedicine. In vivo animal models are required for bridging the nanotechnology to its biomedical application. The mouse represents the traditional animal model for preclinical testing; however, mice are relatively expensive to keep and have long experimental cycles due to the limited progeny from each mother. The zebrafish has emerged as a powerful model system for developmental and biomedical research, including cancer research. In particular, due to its optical transparency and rapid development, zebrafish embryos are well suited for real-time in vivo monitoring of the behavior of cancer cells and their interactions with their microenvironment. This method was developed to sequentially introduce human cancer cells and functionalized nanoparticles in transparent Casper zebrafish embryos and monitor in vivo recognition and targeting of the cancer cells by nanoparticles in real time. This optimized protocol shows that fluorescently labeled nanoparticles, which are functionalized with folate groups, can specifically recognize and target metastatic human cervical epithelial cancer cells labeled with a different fluorochrome. The recognition and targeting process can occur as early as 30 min postinjection of the nanoparticles tested. The whole experiment only requires the breeding of a few pairs of adult fish and takes less than 4 days to complete. Moreover, zebrafish embryos lack a functional adaptive immune system, allowing the engraftment of a wide range of human cancer cells. Hence, the utility of the protocol described here enables the testing of nanoparticles on various types of human cancer cells, facilitating the selection of optimal nanoparticles in each specific cancer context for future testing in mammals and the clinic.

Described here is a method for utilizing zebrafish embryos to study the ability of functionalized nanoparticles to target human cancer cells in vivo. This method allows for the evaluation and selection of optimal nanoparticles for future testing in large animals and in clinical trials.

ゼブラフィッシュにおける機能化された蛍光シリカナノ粒子を用いた異種移植ヒト癌細胞のビボ標的化

Developing nanoparticles capable of detecting, targeting, and destroying cancer cells is of great interest in the field of nanomedicine. In vivo animal ...

Generation of Zebrafish Larval Xenografts and Tumor Behavior Analysis

Zebrafish larval xenografts are being widely used for cancer research to perform in vivo and real-time studies of human cancer. The possibility of rapidly visualizing the response to anti-cancer therapies (chemo, radiotherapy, and biologicals), angiogenesis and metastasis with single cell resolution, places the zebrafish xenograft model as a top choice to develop preclinical studies.

The zebrafish larval xenograft assay presents several experimental advantages compared to other models, but probably the most striking is the reduction of size scale and consequently time. This reduction of scale allows single cell imaging, the use of a relatively low number of human cells (compatible with biopsies), medium-high-throughput drug screenings, but most importantly enables a significant reduction of the time of the assay. All these advantages make the zebrafish xenograft assay extremely attractive for future personalized medicine applications.

Many zebrafish xenograft protocols have been developed with a wide diversity of human tumors; however, a general and standardized protocol to efficiently generate zebrafish larval xenografts is still lacking. Here we provide a step-by-step protocol, with tips to generate xenografts and guidelines for tumor behavior analysis, whole-mount immunofluorescence, and confocal imaging quantification.

Here, we provide a step-by-step protocol, with tips to generate xenografts and guidelines for tumor behavior analysis, whole-mount immunofluorescence, and confocal imaging quantification.

ゼブラフィッシュラーバル異種移植片の生成と腫瘍行動解析

Zebrafish larval xenografts are being widely used for cancer research to perform in vivo and real-time studies of human cancer. The possibility of rapidly ...

Zebrafish Model of Neuroblastoma Metastasis

Zebrafish has emerged as an important animal model to study human diseases, especially cancer. Along with the robust transgenic and genome editing technologies applied in zebrafish modeling, the ease of maintenance, high-yield productivity, and powerful live imaging altogether make the zebrafish a valuable model system to study metastasis and cellular and molecular bases underlying this process in vivo. The first zebrafish neuroblastoma (NB) model of metastasis was developed by overexpressing two oncogenes, MYCN and LMO1, under control of the dopamine-beta-hydroxylase (d&#946;h) promoter. Co-overexpressed MYCN and LMO1 led to the reduced latency and increased penetrance of neuroblastomagenesis, as well as accelerated distant metastasis of tumor cells. This new model reliably reiterates many key features of human metastatic NB, including involvement of clinically relevant and metastasis-associated genetic alterations; natural and spontaneous development of metastasis in vivo; and conserved sites of metastases. Therefore, the zebrafish model possesses unique advantages to dissect the complex process of tumor metastasis in vivo.

This paper introduces the method of developing, characterizing, and tracking in real-time the tumor metastasis in zebrafish model of neuroblastoma, specifically in the transgenic zebrafish line with overexpression of MYCN and LMO1, which develops metastasis spontaneously.

神経芽細胞腫転移のゼブラフィッシュモデル

Zebrafish has emerged as an important animal model to study human diseases, especially cancer. Along with the robust transgenic and genome editing ...

ゼブラフィッシュ幼生の効率的なIn vivo腫瘍研究への活用

A Simple, Rapid, and Effective Method for Tumor Xenotransplantation Analysis in Transparent Zebrafish Embryos

In vivo studies of tumor behavior are a staple of cancer research; however, the use of mice presents significant challenges in cost and time. Here, we present larval zebrafish as a transplant model that has numerous advantages over murine models, including ease of handling, low expense, and short experimental duration. Moreover, the absence of an adaptive immune system during larval stages obviates the need to generate and use immunodeficient strains. While established protocols for xenotransplantation in zebrafish embryos exist, we present here an improved method involving embryo staging for faster transfer, survival analysis, and the use of flow cytometry to assess disease burden. Embryos are staged to facilitate rapid cell injection into the yolk of the larvae and cell marking to monitor the consistency of the injected cell bolus. After injection, embryo survival analysis is assessed up to 7 days post injection (dpi). Finally, disease burden is also assessed by marking transferred cells with a fluorescent protein and analysis by flow cytometry. Flow cytometry is enabled by a standardized method of preparing cell suspensions from zebrafish embryos, which could also be used in establishing the primary culture of zebrafish cells. In summary, the procedure described here allows a more rapid assessment of the behavior of tumor cells in vivo with larger numbers of animals per study arm and in a more cost-effective manner.

著者スポットライト:ゼブラフィッシュにおける腫瘍異種移植を用いたがん治療の進歩

We describe a protocol for xenotransplantation into the yolk of transparent zebrafish embryos that is optimized by a simple, rapid staging method. Post-injection analyses include survival and assessing the disease burden of xenotransplanted cells by flow cytometry.

透明ゼブラフィッシュ胚における腫瘍異種移植解析のための簡便、迅速、効果的な方法

In vivo studies of tumor behavior are a staple of cancer research; however, the use of mice presents significant challenges in cost and time. Here, we ...

胚ゼブラフィッシュにおけるヒト乳癌細胞の浸潤挙動

要約

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（ゼブラフィッシュにおける癌細胞の血管浸潤能をテストします

腫瘍細胞の挙動および薬物応答の長期的研究のためのゼブラフィッシュ小児脳腫瘍の免疫適格宿主への移植

ゼブラフィッシュ腫瘍異種移植片における宿主血管新生応答の生体内イメージングと定量

ゼブラ土着腫瘍モデルを用いたメラノーマの修飾のためのスクリーニング

ゼブラフィッシュにおける原発性腫瘍異種移植片の薬物スクリーニング

ゼブラフィッシュにおける機能化された蛍光シリカナノ粒子を用いた異種移植ヒト癌細胞のビボ標的化

ゼブラフィッシュラーバル異種移植片の生成と腫瘍行動解析

神経芽細胞腫転移のゼブラフィッシュモデル

透明ゼブラフィッシュ胚における腫瘍異種移植解析のための簡便、迅速、効果的な方法

透明ゼブラフィッシュ胚における腫瘍異種移植解析のための簡便、迅速、効果的な方法