Name: synthesis and characterization of 1,2-dithiolane modified self-assembling peptides
Uploaded: 2018-08-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synthesis and Characterization of 1,2-Dithiolane Modified Self-Assembling Peptides at JoVE.com

著者博士 B. エレン Scanley をありがとう彼女の技術的なトレーニングと彼女の CD にアクセスするためのナノテク ・ ウェスリアン大学で博士中川ムカージについてコネチカット州立大学および大学 (CSCU) センターで TEM を使用してヘルプをしたいです。分光光度計。報告される作業は、フェア フィールド大学、NASA コネチカット宇宙グラント コンソーシアムの科学研究所、国立科学財団助成番号チェ-1624774 の下に一部サポートされていました。

1. 1, 2-ジチオランの合成・精製ペプチドを変更
<ol><li>ジチオラン前駆体、3-(acetylthio)-2 の合成-(acetylthiomethyl) プロパン酸19。
	<ol>
<li>3 の 1 グラムを追加-ブロモ - 2-(ブロモメチル) プロピオン酸 (1 当量) 最小限の 55 ° C で攪拌しながら 25 mL 丸底反応フラスコに 1 M 水酸化ナトリウム (約 4 mL) に溶解隔壁を有する反応フラスコを密封し、窒素雰囲気下で配置します。</li>
		<li>1.49 カリウム thioacetate g を含むソリューションを準備 (3.2 当量) 4 ml の脱イオン水と 2 M 硫酸 3 mL (H2SO4) 酸場チオを作成します。</li>
		<li>プラスチック製の使い捨て 10 mL 注射器にチオ酢酸溶液を引き、注射器に針を配置します。セプテムを針で突き刺すことにより、反応フラスコに滴下し混合物を追加します。55 ° C で一晩反応を続ける</li>
		<li>メタノール及びジクロロ メタン (1:9) の混合物を用いたシリカゲル 60 F254板の薄層クロマトグラフィー (TLC) による反応を監視します。ブロモ クレゾール グリーン染色で反応の進行を視覚化します。製品は Rf = 0.57。</li>
		<li>反応が完了したら部屋の温度に冷却後、だから 2 M H2pH 1 に混合物を酸性化4。黄色の油をソリューションから分離します。</li>
		<li>冷たいクロロホルム (40 mL x 3) 製品を抽出します。有機層を結合し、硫酸マグネシウムで乾燥します。減圧下でクロロホルムを削除します。</li>
		<li>図 1 bとCに示すように、核磁気共鳴 (NMR) 分光法による分離製品 ( 1) の id を確認します。次の結果を期待する: 1H NMR、CDCl3, 300 MHz: d = (s、6 H) 2.4 2.9 (m, 1 H)、3.2 (m, 4 H) 10.1 (b、1 H)13C NMR、CDCl3、75 MHz: d = 195.1 (CH3COS-)、177.6 (-COOH)、45.1 (CH2S-)、30.5 (CH)、29.2 (-SCOCH3)。 注: 製品は黄色の油、83% の全体的な利回り。さらに精製することがなく製品を使用します。</li>
	</ol></li>
	<li>SPP とジチオラン前駆体の樹脂に結合 注: 自動化されたペプチッド シンセサイザー、推奨メーカーのプロトコルを次に下記固相ペプチド合成を行った。設定と試薬は、特殊なアミノ酸を使用する場合またはその他の商業器械のため適応かもしれません。<ol>
<li>0.156 g リンク アミド 4-methylbenzhydrylamine (MBHA) 樹脂 (0.1 モル) の重量を量り、反応容器の場所します。合成の開始前に少なくとも 15 分のジメチルホルムアミド (DMF) に樹脂をうねり。</li>
		<li>各 fluorenylmethyloxycarbonyl (fmoc 保護) の 4 の同等物を重量を量る保護アミノ酸 (0.4 モル) シーケンスと 0.152 g N、N、N'、N'- テトラメチル-O-(1H- benotriazol-1-イル) ウラン ヘキサフルオロリン酸 (0.4 モル、HBTU) のシーケンスの各アミノ酸。各カートリッジには、fmoc 保護保護アミノ酸と HBTU の両方が含まれています。</li>
		<li>すべて事前合成シンセサイザーのチェックを実行した後 (補充試薬、試薬の行をフラッシュされ、すべての試薬瓶を加圧)、C のカルーセルにアミノ酸カートリッジを配置 'n' 末端方向。N 末端 fmoc 保護脱保護の最後の手順の最終的なアミノ酸位置の後、空のカートリッジを配置します。</li>
		<li>標準の推奨設定を使用するペプチドを合成します。<ol>
<li>DMF (5 分 × 2) で 20% ピペリジンの樹脂 5 mL を fmoc 保護グループを deprotect します。</li>
			<li>カップリング ステップの前に DMF (6 x 5 mL) と樹脂を洗浄します。</li>
			<li>単一ステップの fmoc 保護保護アミノ酸と HBTU DMF で 0.4 M N-メチルモルホリン 4 mL を追加します。30 アミノ酸 fmoc 保護で保護されたソリューションをアクティブ ソリューションを反応容器に転送する前に s。 注: 自動ペプチド合成装置ミックス樹脂とソリューション N2ガスをバブリングによってあらゆる 30 のカップリング反応しながら 20 分間は場所を取ります。手動ペプチッド統合、低速で軌道シェーカーでカップリング段階の間反応容器を配置します。</li>
			<li>ソリューションをドレインし、DMF (3 x 5 mL) と樹脂を洗浄します。</li>
			<li>1.2.4.4 を通じて 1.2.4.1 手順各 fmoc 保護保護アミノ酸の c 'n'-末端方向興味のペプチドを合成します。</li>
		</ol>
</li>
		<li>最後の N ターミナル脱保護手順後ガラスフリット シリンジに樹脂を転送します。DMF (3 x 5 mL)、ジクロロ メタン (DCM、3 x 5 mL) に樹脂を洗浄します。 メモ: 樹脂は DCM 真空デシケータで洗浄後保存可能性があります。樹脂は、結合前に保存されていた、DMF でカップリング反応前に、の樹脂を膨張するを確認します。</li>
		<li>HBTU 4 相当 10 及び n, N-diisopropylethylamine (DIPEA) 1、dmf、5 mL の 4 の同等物を追加することによって樹脂のペプチドの N 末端にジチオラン前駆体 (1) のカップルします。ガラスフリットの注射器を含む樹脂を追加する前に 10 分間結合混合物を前活動化させます。</li>
		<li>2 h のカップリング反応を振る。2 時間後に DMF (3 x 5 mL) 樹脂を洗浄し、一晩振動カップリング反応を繰り返します。</li>
		<li>2 番目の結合後 DMF (3 x 5 mL)、DCM (3 x 5 mL) に樹脂を洗浄します。 注: 樹脂は真空下でこの時点で胸の谷間まで格納できます。</li>
	</ol></li>
	<li>Thioacetate および樹脂からペプチド胸の谷間
	<ol>
<li>N 末端ジチオラン前駆体から thioacetate グループを deprotect、乾燥した樹脂を 10 mL マイクロ波反応管に転送し、DMF の 2 mL を追加します。樹脂を膨潤する容器に小さな電磁攪拌棒を追加して、15 分間電磁攪拌の低速で再停止を許可します。</li>
		<li>濃アンモニア水 2 mL を加えてシリコーン隔壁を有する反応容器のキャップ 45 分攪拌の 75 ° C の電子レンジ設定を使用してマイクロ波リアクター反応容器に配置。</li>
		<li>マイクロ波反応の完了後は、ガラスフリットきれいなシリンジに樹脂を転送します。DMF (2 x 5 mL)、メタノール (メタノール、2 x 5 mL) で洗浄します。</li>
		<li>量 5 mL のメタノール (1:4)、濃水酸化アンモニウムのソリューションを追加します。ジチオラン環ジスルフィド結合の分子内酸化を増加するために一晩を振ることを残します。</li>
		<li>メタノール (2 x 5 mL)、DCM (3 x 5 mL) に樹脂を洗浄します。 注意: 乾燥した樹脂が格納する真空デシケータでこの時点で。</li>
		<li>胸の谷間のカクテルを優しく 1.5 時間振とうしながら注射器を含む樹脂に追加します。95% トリフルオロ酢酸 (TFA)、2.5 %triisopropylsilane (ヒント)、2.5% 水 5 mL の容量であり、使用されるカクテルの谷間。 注意: にのみ化学発煙のフードの下で動作します。TFA は、揮発性および腐食性です。 注記: ペプチド配列とアミノ酸側鎖の保護基の大半は、上記の胸の谷間カクテル ソリューションは十分です。ただし、代替胸の谷間のカクテルは、特定のアミノ酸の側鎖 (システイン、メチオニン、Trp、Arg を含む特定のペプチド) のグループまたは他の樹脂化学20の保護のため必要かもしれない。</li>
		<li>ガラスフリットの注射器から滴下することで 50 mL の円錐管に冷たいジエチル エーテル 25 mL に原油のペプチドを沈殿させます。ペプチドは、白色固体として析出します。ペレットで 1300 x g で 10 分間の遠心分離によってペプチドは慎重に廃棄物収集のための別の容器にジエチル エーテルをデカントします。</li>
		<li>円錐管にジエチル エーテルの別の 25 mL を追加し、再ボルテックスで沈殿を中断します。10 分間 1300 × g で遠心分離を繰り返し、ジエチル エーテルを再度デカントします。真空下でペレットを乾燥させます。</li>
	</ol></li>
	<li>1, 2-ジチオランの精製は、ペプチドを変更 注: は、逆相高速液体クロマトグラフィーによる原油のペプチドを浄化します。収集しペプチド ピーク、MALDI-TOF 質量分析法による質量を確認します。<ol>
<li>0.1% アセトニ トリルの最小限の量で粗ペプチド ペレットを溶解 TFA。ペプチドの疎水性と集約傾向のため優しく溶解度を支援する 40 の ° C のサンプルを加熱します。 注: は、潜在的なジスルフィド交換反応21,22,23を防ぐために高い温度およびペプチドの超音波処理を避けてください。</li>
		<li>HPLC 精製の粗ペプチドの 1 mL を準備をするには、400 μ L を追加集中ペプチド株式のアセトニ トリルで 600 μ L H2O 0.1 %tfa とフィルターに 22 μ m シリンジ フィルターを通して HPLC バイアルに。追加の 5% イソプロパノールは、ペプチドの凝集を防ぐために追加できます。</li>
		<li>浄化の 20 分セット 15-55% アセトニ トリルの線形グラデーションを 3 mL/min の流速で C-18 セミ分取カラムを用いたペプチド 222 に UV 検出器 nm (アミド バックボーン) と 330 nm (ジスルフィド結合)。収集し、(図 2 a) の関心のピークを組み合わせます。</li>
		<li>リフレクトロン モード (図 2 b) で MALDI-TOF 質量分析計でペプチド製品質量を確認します。0.5 μ L 2, 5-ジヒドロキシ安息香酸 (DHB) 行列の解析、ミックス MALDI プレートに収集されたピークの 0.5 μ L (10 mg/mL DHB アセトニ トリル 50%、0.1 %tfa)。 注: 一般的な MALDI-TOF における付加体の質量分析法は、ナトリウムとカリウム塩の付加物 ([M+na]+ [M + k]+) のピーク。推奨は、分析の前にサンプルの脱塩塩付加ピーク [M + H]+主峰の信号を抑制する場合。さらに、[M + O]+の酸化ピークも 1, 2-ジチオラン変更ペプチドの検出します。DHB 行列を用いた MALDI イオンからのレーザー誘起酸化に関する報告書では、MALDI 誘起酸化アーティファクト24を制限するため、サンプル濃度、溶媒、レーザー強度などの要因を変更できることを示唆しています。</li>
		<li>MALDI-TOF 正しい質量の確認の後に、フラッシュの凍結後ペプチドを凍結乾燥します。アセンブリまで真空下で凍結乾燥させたペプチド粉末を保ちます。</li>
	</ol></li>
</ol>2 分子の特性は自己組織化構造します。
<ol><li>
アミロイド線維の形成
	<ol>
<li>自己集合ソリューションを準備するには、分析用天秤を用いたペプチド粉末の 1 mg を重量を量る。20% アセトニ トリルと 10 mM (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic 酸 (HEPES) 1 mg/mL ペプチド アセンブリ混合物の最終的な集中に、1.5 mL 遠心チューブの混合物 (pH 7.5) に溶解します。渦アセンブリ ソリューションと室温でアセンブルする残す。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
アミロイド線維の分光学的キャラクタリゼーション
	<ol>
<li>数日おきフーリエ変換の赤外線 (FTIR) 分光法によるペプチド アセンブリ プロセスに従います。1670 cm-1を中心とした広範なピークは、サンプル17の組み立てのペプチドから生じる IR 署名です。ペプチド アセンブリ サンプルは通常消えて、成熟に達する広い組み立てピークの 1 〜 2 週間を取る。<ol>
<li>ATR のダイヤモンド結晶の薄膜としてアセンブリ ソリューションの 8-10 μ L の因数を乾燥します。ドライ フィルム フォームとして 1630 cm-1に 1640 年から大きく、広い水のピークの消失を監視します。</li>
			<li>1500-1800 cm-1 2 cm-1解像度 50 のスキャンの平均から IR スペクトルを取得します。取得し、各サンプル スキャン前にバック グラウンド ・ スキャンを減算します。Β シート アセンブリの赤外線署名は、1625 と 1635 cm-1 (図 3 a)25,26の間鋭いピークです。</li>
		</ol>
</li>
		<li>円二色性 (CD) による β シート豊富な超分子構造にペプチド組み立てを特徴付けます。ペルチェ温度コントロール システムで CD 性分光を使用してスペクトルを記録します。<ol>
<li>0.1 mm のパス長さ microcuvette でアセンブリ ソリューションの 30 μ L をピペットします。 注: 電池ホルダーはクランプし、楽器の短いパスの長さセルを配置する必要です。</li>
			<li>各スペクトル CD 楽器を次のパラメーターに設定: 300 の波長をスキャン nm、180 nm、100/分のスキャン率 1 海里、25 ° C、3 つのスキャンの平均帯域幅。</li>
			<li>バッファー (20% アセトニ トリル/10 mM HEPES、pH 7.5) のスペクトルを収集し、コントロールとして各サンプル スキャンから減算します。Β シートの CD 署名は、楕円率、最小中心約 220 nm (図 3 b)27です。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
アミロイド繊維の顕微鏡観察
	<ol>
<li>Β シート豊富な超分子構造に成熟するペプチド試料の 2 〜 3 週間かかります。 注: アセンブリは、同様のアセンブリ プロセスの初期の段階で透過型電子顕微鏡 (TEM) を使用してイメージすることができます。<ol>
<li>カーボンの TEM グリッドの表面上にペプチド アセンブリ ソリューションの 10 μ L をピペットします。 注: グリッド表面にピペット チップに触れないように注意してください。高精度、自動閉鎖準備中に TEM グリッドを保持するためにピンセットを使用します。</li>
			<li>1-2 分グリッド表面に吸着するアセンブリを許可するを待ちます。余分なサンプルを削除するには、グリッドの端にフィルター ペーパーに触れます。</li>
			<li>市販のウラニル 4% 酢酸溶液を 100 μ L の脱イオン水を追加することによって 2% ウラニル アセテート染色を準備します。グリッド サーフェス上に 2% ウラニル アセテート染色の 10 μ L をピペットし、2-3 分間インキュベートします。、孵化後、グリッドの端にろ紙を触れることにより、余分な汚れを削除します。</li>
			<li>一晩真空デシケータに TEM グリッドを配置します。イメージングまで真空下で保存します。</li>
			<li>TEM (図 3) で作製した試料をイメージします。顕微鏡検査のための一般的なパラメーターは次のとおりです: に至る 9,300 X 23、倍率で画像 000 X 120 の加速電圧を持つタングステン フィラメント kV。 注: 取得した TEM 画像28の超分子構造体の平均繊維の幅を測定する ImageJ を使用できます。 注意: 使用する前にすべての関連する安全性データ シート (SDS) を参照してください。いくつかの化学物質は、合成、精製で使用されると説明 1, 2-ジチオラン修正の自己組織化ペプチドの解析、腐食性や毒性と化学の発煙のフードの下でのみ使用する必要があります。常に適切な個人用保護具 (安全眼鏡、白衣、フルの長さのズボン、閉じてつま先の靴を含む) を使用して、研究室で作業するとき。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Wang, J., Liu, K., Xing, R., Yan, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+self-assembly:+Thermodynamics+and+kinetics.">Peptide self-assembly: Thermodynamics and kinetics.</a> Chemical Society Reviews. 45, 5589-5604 (2016).</li><li>Dong, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+supramolecular+polymers+for+biomedical+applications.">Functional supramolecular polymers for biomedical applications.</a> Advanced Materials. 27, 498-526 (2015).</li><li>Edwards-Gayle, C. J. C., Hamley, I. 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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-induced+oxidation+of+cholesterol+observed+during+MALDI-TOF+mass+spectrometry.">Laser-induced oxidation of cholesterol observed during MALDI-TOF mass spectrometry.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 22, 659-669 (2011).</li><li>Krimm, S., Bandekar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vibrational+spectroscopy+and+conformation+of+peptides,+polypeptides,+and+proteins.">Vibrational spectroscopy and conformation of peptides, polypeptides, and proteins.</a> Advances in Protein Chemistry. 38, 181-364 (1986).</li><li>Halverson, K. J., Sucholeiki, I., Ashburn, T. T., Lansbury, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Location+of+&#946;-sheet-forming+sequences+in+amyloid+proteins+by+FTIR.">Location of &#946;-sheet-forming sequences in amyloid proteins by FTIR.</a> Journal of the American Chemical Society. 113, 6701-6703 (1991).</li><li>Greenfield, N., Fasman, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computed+circular+dichroism+spectra+for+the+evaluation+of+protein+confirmation.">Computed circular dichroism spectra for the evaluation of protein confirmation.</a> Biochemistry. 8, 4108-4116 (1969).</li><li>. ImageJ Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij">https://imagej.nih.gov/ij</a> (2016)</li><li>Roy, S., Shinde, S., Hamilton, G. A., Hartnett, H. E., Jones, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+[FeFe]-hydrogenase:+On+resin+modification+of+an+amino+acid+to+anchor+a+hexacarbonyldiiron+cluster+in+a+peptide+framework.">Artificial [FeFe]-hydrogenase: On resin modification of an amino acid to anchor a hexacarbonyldiiron cluster in a peptide framework.</a> European Journal of Inorganic Chemistry. 2011, 1050-1055 (2011).</li><li>Van Duinen, S. G., Castano, E. M., Prelli, F., Bots, G. T. A. B., Luyendijk, W., Frangione, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hereditary+cerebral+hemorrhage+with+amyloidosis+in+patients+of+Dutch+origin+is+related+to+Alzheimer+disease.">Hereditary cerebral hemorrhage with amyloidosis in patients of Dutch origin is related to Alzheimer disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84, 5991-5994 (1987).</li><li>Barth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+infrared+absorption+of+amino+acid+sidechains.">The infrared absorption of amino acid sidechains.</a> Progress in Biophysics and Molecular Biology. 74, 141-173 (2000).</li><li>Jayaraman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slow+amyloid+nucleation+via+&#945;-helix-rich+oligomeric+intermediates+in+short+polyglutamine-containing+Huntingtin+fragments.">Slow amyloid nucleation via &#945;-helix-rich oligomeric intermediates in short polyglutamine-containing Huntingtin fragments.</a> Journal of Molecular Biology. 415, 881-899 (2012).</li></ol>

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この記事では、両方の合成の詳細は、N ターミナル 1, 2-ジチオラン修正の自己組織化ペプチドの精製と結果の超分子構造の性質をについて説明します。ここで報告される 1, 2-ジチオラン ペプチドの合成ジチオラン前駆体、3-(acetylthio)-2 を生成するワンステップ合成を含む利点があります-(acetylthiomethyl) プロパン酸と樹脂の電子レンジの脱保護反応、有毒なヒドラジンの脱保護する安全な代替案...

固相ペプチド合成に関与する堅牢なペプチド結合の化学を形成し、シーケンスの長さと構成を制御する機能、超分子構造に重く研究フィールドをまとめる自己ペプチド。制御し、側鎖の立体を含むペプチドの自己組織化構造と静電相互作用、水素結合、疎水性効果1、安定の要因はデザイン ルールのセットとして機能します。これらの基本的な設計ルールに研究が進み、ペプチドの論理の次の手順では自己ペプチド ベースの構造と機能の多様性を拡大して含まれます。自己組織化ペプチドがペプチド シーケンスまたはアセンブリ条件2,3,4のための戦略の開発をチューニングすることによって多くの医用に使用されている汎用性の高い生体材料ペプチド ナノファイバー5,6,7,8,9組立後変更のまま比較的未踏の領域です。
動的ジスルフィド交換とチオール化学超分子構造体の表面では、機能的な新しい生体材料をもたらす可能性がある 1 つの領域です。1, 2-ジチオラン鎖 (一般的リポ酸 (la) やアスパラガス酸 (aa) の派生物) の設立がリポソーム システム10、11ブロック共重合体12,13と報告されています。表面14,15でアンカーを整理します。ここで、合成と 1, 2-ジチオラン機能グループ16、N 末端修飾アルツハイマー病に関連付けられている a β ペプチドの核のコアから派生した自己組織化ペプチドの特性を報告します。 17。結果として得られる分子繊維は今アミロイド繊維18の超分子表面にチオール、ジスルフィド交換反応性を研究する実験的プラットフォームとして機能します。

<table><tbody><tr><td>Rink amide MBHA resin, high load</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>RAM-5-HL</td><td>Avoid contact with skin and eyes; do not inhale</td></tr><tr><td>N,N-Dimethylformamide</td><td>Fisher Scientific</td><td>D119-4</td><td>Flammable liquid and vapor; irritating to eyes and skin; Use personal protective equipment; keep away from open flame</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Val-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-V</td><td>Wear personal protective equipment; do not inhale</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Leu-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-L</td><td>Wear personal protective equipment; do not inhale</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Lys(Boc)-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-KBC</td><td>Wear personal protective equipment; do not inhale</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Phe-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-F</td><td>Wear personal protective equipment; do not inhale</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ala-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-A</td><td>Wear personal protective equipment; do not inhale</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Gln(Trt)-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-QT</td><td>Wear personal protective equipment; do not inhale</td></tr><tr><td>N,N,N&amp;prime;,N&amp;prime;-Tetramethyl-O-(1H-benzotriazol-1-yl)uronium hexafluorophosphate</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>26432</td><td>Causes skin, eye and respiratory irritation; do not inhale; use under hood or in well ventilated area</td></tr><tr><td>0.4 M N-methylmorpholine in DMF</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>PS3-MM-L</td><td>highly flammable; wear personal protective equipment; keep away from heat and keep container tightly closed; do not inhale or swallow; wash skin thoroughly after handling</td></tr><tr><td>20% piperidine in DMF</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>PS3-PPR-L</td><td>Causes severe eye and skin burns; Flammable Liquid and vapor; Do not inhale</td></tr><tr><td>dichloromethane</td><td>Fisher Scientific</td><td>D37-4</td><td>May cause cancer; Do not inhale; Wear personal protective equipment; use under hood only; if contacted rise with water for at least 15 minutes and obtain medical attention</td></tr><tr><td>acetonitrile</td><td>Fisher Scientific</td><td>A998-4</td><td>Flammable; irritating to eyes; Use personal protective equipment; Use only under a fume hood; keep away from open flame or hot surface; if contacted rinse wiith water for at least 15 minutes and obtain medical attention</td></tr><tr><td>trifluoroacetic acid</td><td>Fisher Scientific</td><td>A116-50</td><td>Causes severe burns; do not inhale; harmful to aquatic life; use personal protective equipment; use only under fume hood; if contacted rinse with water for at least 15 minutes and obain immediate medical attention</td></tr><tr><td>4% uranyl acetate</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>22400-4</td><td>Do not inhale; harmful to aquatic life</td></tr><tr><td>4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid</td><td>Acros Organics</td><td>AC172571000</td><td>Do not inhale; use outdoors or in well-ventilated area</td></tr><tr><td>nitrogen Gas</td><td>TechAir</td><td></td><td>Contents under pressure, may explode if heated</td></tr><tr><td>3-bromo-2-(bromomethyl)propionic acid</td><td>Alfa Aesar</td><td>AAA1963014</td><td>Do not inhale; causes irritation to skin and eyes; corrosive</td></tr><tr><td>sodium hydroxide</td><td>Fisher Scientific</td><td>S318-100</td><td>Use personal protective equipment; use only under fume hood; if contact rinse area for at least 15 minutes and obtain medical attention</td></tr><tr><td>potassium thioacetate</td><td>Acros Organics</td><td>AC221300250</td><td>Causes skin and eye irritation; do not inhale; use personal protective equipment</td></tr><tr><td>sulfuric acid</td><td>Fisher Scientific</td><td>SA213</td><td>Causes burns; keep away from water; keep away from combustible material; do not inhale; use personal protective equipment; if contact rinse area for at least 15 minutes and obtain medical attention</td></tr><tr><td>chloroform-d</td><td>Acros Organics</td><td>AC320690075</td><td>Possible cancer hazard; irritating to skin and eyes; do not inhale; Use personal protective equipment; use only under fume hood; If contact rinse area for at least 15 minutes and obtain medical attention</td></tr><tr><td>chloroform</td><td>Fisher Scientific</td><td>C298-4</td><td>Possible cancer hazard; irritating to skin and eyes; do not inhale; Use personal protective equipment; use only under fume hood; If contact rinse area for at least 15 minutes and obtain medical attention</td></tr><tr><td>N,N-diisopropylethylamine</td><td>Acros Organics</td><td>AC367841000</td><td>Highly flammable; harmful to aquatic life; wear personal protective equipment; do not swallow</td></tr><tr><td>ammonium hydroxide</td><td>Fisher Scientific</td><td>A669S-500</td><td>Corrosive; do not inhale</td></tr><tr><td>methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A452-4</td><td>Flammable liquid and vapor; use personal protective equipment; do not inhale; If contact rinse area for at least 15 minutes and obtain medical attention</td></tr><tr><td>triisopropylsilane</td><td>Sigma Aldrich</td><td>233781</td><td>Flammable; use personal proctective safety equipment; keep container tightly closed</td></tr><tr><td>diethyl ether</td><td>Fisher Scientific</td><td>E138-1</td><td>Extremely flammable; Irritating to skin and eyes; Use personal protective equipment</td></tr><tr><td>2,5-dihydroxybenzoic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>39319-10x10MG-F</td><td>do not inhale; irritating to skin and eyes</td></tr><tr><td>alpha-cyano-4-hydroxycinnamic acid</td><td>Alfa Aesar</td><td>AAJ67635EXK</td><td></td></tr><tr><td>c18 zip-tip</td><td>Millipore</td><td>ZTC18S096</td><td></td></tr><tr><td>tris(2-carboxyethyl) phospine hydrochloride</td><td>Thermo Scientific</td><td>PI20490</td><td></td></tr><tr><td>silica gel 60 F254 coated aluminum-backed TLC sheets</td><td>EMD Millipore</td><td>1.05549.0001</td><td></td></tr><tr><td>Thin walled Precision NMR tubes</td><td>Bel-Art</td><td>663000585</td><td>5mm O.D.</td></tr><tr><td>All-plastic Norm-Ject syringes</td><td>Air Tite</td><td>AL10</td><td></td></tr><tr><td>single-use needle</td><td>BD PrecisionGlide</td><td>BD 305185</td><td>used needles get disposed on in sharps waste container</td></tr><tr><td>disposable fritted syringe</td><td>Torviq</td><td>SF1000LL</td><td>10mL fritted syringes were used in the report, but larger syringes are avaibale if needed for larger scale synthesis.</td></tr><tr><td>carbon grid</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>CF200-CU</td><td>Make sure to prepare samples and staining on the carbon grid side, not the shiny copper side of grid</td></tr><tr><td>self-closing tweezers</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>78318-3X</td><td>very sharp tips, length: 120 mm</td></tr><tr><td>0.1 mm short path length cell</td><td>Starna Cells, Inc.</td><td>20/C-Q-0.1</td><td>Fragile</td></tr><tr><td>10mL Vessel Caps</td><td>CEM</td><td>909210</td><td></td></tr><tr><td>10mL Pressure Vessels</td><td>CEM</td><td>908035</td><td></td></tr><tr><td>Aeris Semi-Prep HPLC column</td><td>Phenomenex</td><td>00F-4632-N0</td><td>150 x 10mm</td></tr><tr><td>cell holder</td><td>Starna Cells, Inc.</td><td>CH-2049</td><td>Needed when using short pathlength cells</td></tr><tr><td>PS3 peptide synthesizer</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DiscoverSP Microwave Reactor</td><td>CEM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>centrifuge</td><td>HERMLE</td><td>Z 206 A</td><td>used a fixed 6x50 mL rotor</td></tr><tr><td>HPLC</td><td>Shimadzu</td><td></td><td>UV Detector</td></tr><tr><td>nuclear magnetic resonance spectrometer</td><td>Avance, Bruker</td><td></td><td>300 MHz</td></tr><tr><td>MALDI-TOF mass spectrometer</td><td>Axima Confidence, Shimadzu</td><td></td><td></td></tr><tr><td>lyophilizer</td><td>Millrock Technology</td><td>BT85A</td><td></td></tr><tr><td>Fourier-Transform Infrared Spectrometer</td><td>Alpha Tensor, Bruker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Transmission Electron Microscope</td><td>Tecnai Spirit, FEI</td><td></td><td>Used with Gatan Orius Fiberoptic CCD digital camera. Accessed at CSCU Center for Nanotechnology</td></tr><tr><td>Circular Dichroism Spectropolarimeter</td><td>J-810, JASCO</td><td></td><td>Used with a six-cell Peltier temperature controller. Accessed at Wesleyan University.</td></tr></tbody></table>

synthesis and characterization of 1,2-dithiolane modified self-assembling peptides

本報告では N 末端の 1, 2-ジチオランの合成に焦点を当てて自己組織化ペプチドとその結果の評価を変更された自己組織化超分子構造。合成経路は、ジチオラン前駆体分子 3-(acetylthio)-2 の樹脂の結合の固相ペプチド合成の活用-(acetylthiomethyl) プロパン酸、およびマイクロ波を用いた thioacetate ペプチドの deprotection1, 2-ジチオランに屈する前に、ガレージから最終的な胸の谷間 N 末端ペプチドを変更しました。アルツハイマー病に関連付けられている a β ペプチドの核のコアから派生した、1, 2-ジチオラン ペプチドの高速液体クロマトグラフィー (HPLC) 精製後、ペプチドはクロス β アミロイド線維に自己組み立てるに表示されます。フーリエ変換赤外分光法 (FT-IR)、円二色性分光法 (CD) と透過型電子顕微鏡 (TEM) によるアミロイド繊維を特徴付けるためのプロトコルが表示されます。組立後変更戦略を開発し、動的共有結合化学を探索するモデル系として、よ特徴付けられた自己組織化ペプチドを 1, 2-ジチオラン構造 N 末端修飾の方法を検討今することができます。超分子のペプチド ナノファイバーの表面。

ジチオラン前駆体分子の初期段階合成、脇から 1, 2-ジチオラン変更ペプチド合成の残りの部分は、固体支持体 (図 1 a) で発生します。3 の変換-ブロモ - 2-(ブロモメチル) プロピオン酸 3-(acetylthio)-2- 1H (acetylthiomethyl) プロパン酸、ジチオラン前駆体を確認し、 13C の NMR (図 1 bとC) それの前に自由に?...

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Synthesis and Characterization of 1,2-Dithiolane Modified Self-Assembling Peptides

1, 2-ジチオランの合成のためのプロトコルは、ペプチドやペプチドの自己集合結果超分子構造の評価に変更されました。

1, 2-ジチオランの合成とキャラクタリゼーション自己組織化ペプチド

This report focuses on the synthesis of an N-terminus 1,2-dithiolane modified self-assembling peptide and the characterization of the resulting ...

synthesis-characterization-12-dithiolane-modified-self-assembling

Research

JoVE Journal

Chemistry

7.2K ビュー.  Fairfield University. 1, 2-ジチオランの合成のためのプロトコルは、ペプチドやペプチドの自己集合結果超分子構造の評価に変更されました。

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Formation of Ordered Biomolecular Structures by the Self-assembly of Short Peptides

In nature, complex functional structures are formed by the self-assembly of biomolecules under mild conditions. Understanding the forces that control self-assembly and mimicking this process in vitro will bring about major advances in the areas of materials science and nanotechnology. Among the available biological building blocks, peptides have several advantages as they present substantial diversity, their synthesis in large scale is straightforward, and they can easily be modified with biological and chemical entities1,2. Several classes of designed peptides such as cyclic peptides, amphiphile peptides and peptide-conjugates self-assemble into ordered structures in solution. Homoaromatic dipeptides, are a class of short self-assembled peptides that contain all the molecular information needed to form ordered structures such as nanotubes, spheres and fibrils3-8. A large variety of these peptides is commercially available.
This paper presents a procedure that leads to the formation of ordered structures by the self-assembly of homoaromatic peptides. The protocol requires only commercial reagents and basic laboratory equipment. In addition, the paper describes some of the methods available for the characterization of peptide-based assemblies. These methods include electron and atomic force microscopy and Fourier-Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR). Moreover, the manuscript demonstrates the blending of peptides (coassembly) and the formation of a &#34;beads on a string&#34;-like structure by this process.9 The protocols presented here can be adapted to other classes of peptides or biological building blocks and can potentially lead to the discovery of new peptide-based structures and to better control of their assembly.

This paper describes the formation of highly ordered peptide-based structures by the spontaneous process of self-assembly. The method utilizes commercially available peptides and common lab equipment. This technique can be applied to a large variety of peptides and may lead to the discovery of new peptide-based assemblies.

短いペプチドの自己組織化によって順序付け生体分子構造の形成

In nature, complex functional structures are formed by the self-assembly of biomolecules under mild conditions. Understanding the forces that control ...

化学

Split-and-pool Synthesis and Characterization of Peptide Tertiary Amide Library

Peptidomimetics are great sources of protein ligands. The oligomeric nature of these compounds enables us to access large synthetic libraries on solid phase by using combinatorial chemistry. One of the most well studied classes of peptidomimetics is peptoids. Peptoids are easy to synthesize and have been shown to be proteolysis-resistant and cell-permeable. Over the past decade, many useful protein ligands have been identified through screening of peptoid libraries. However, most of the ligands identified from peptoid libraries do not display high affinity, with rare exceptions. This may be due, in part, to the lack of chiral centers and conformational constraints in peptoid molecules. Recently, we described a new synthetic route to access peptide tertiary amides (PTAs). PTAs are a superfamily of peptidomimetics that include but are not limited to peptides, peptoids and N-methylated peptides. With side chains on both &#945;-carbon and main chain nitrogen atoms, the conformation of these molecules are greatly constrained by sterical hindrance and allylic 1,3 strain. (Figure 1) Our study suggests that these PTA molecules are highly structured in solution and can be used to identify protein ligands. We believe that these molecules can be a future source of high-affinity protein ligands. Here we describe the synthetic method combining the power of both split-and-pool and sub-monomer strategies to synthesize a sample one-bead one-compound (OBOC) library of PTAs.

Peptide tertiary amides (PTAs) are a superfamily of peptidomimetics that include but are not limited to peptides, peptoids and N-methylated peptides. Here we describe a synthetic method which combines&#160;both split-and-pool and sub-monomer strategies to synthesize a one-bead one-compound library of PTAs.

ペプチド第三級アミドライブラリのスプリット·アンド·プールの合成とキャラクタリゼーション

Peptidomimetics are great sources of protein ligands. The oligomeric nature of these compounds enables us to access large synthetic libraries on solid ...

Nucleoside Triphosphates - From Synthesis to Biochemical Characterization

The traditional strategy for the introduction of chemical functionalities is the use of solid-phase synthesis by appending suitably modified phosphoramidite precursors to the nascent chain. However, the conditions used during the synthesis and the restriction to rather short sequences hamper the applicability of this methodology. On the other hand, modified nucleoside triphosphates are activated building blocks that have been employed for the mild introduction of numerous functional groups into nucleic acids, a strategy that paves the way for the use of modified nucleic acids in a wide-ranging palette of practical applications such as functional tagging and generation of ribozymes and DNAzymes. One of the major challenges resides in the intricacy of the methodology leading to the isolation and characterization of these nucleoside analogues.
	
	In this video article, we present a detailed protocol for the synthesis of these modified analogues using phosphorous(III)-based reagents. In addition, the procedure for their biochemical characterization is divulged, with a special emphasis on primer extension reactions and TdT tailing polymerization. This detailed protocol will be of use for the crafting of modified dNTPs and their further use in chemical biology.

The protocol described herein aims to explain and abridge the numerous obstacles in the way of the intricate route leading to modified nucleoside triphosphates. Consequently, this protocol facilitates both the synthesis of these activated building-blocks and their availability for practical applications.

ヌクレオシド三リン酸 - 合成からの生化学的特徴付けへ

The  traditional strategy for the introduction of chemical functionalities is the  use of solid-phase synthesis by appending suitably modified ...

Solid-phase Submonomer Synthesis of Peptoid Polymers and their Self-Assembly into Highly-Ordered Nanosheets

Peptoids are a novel class of biomimetic, non-natural, sequence-specific heteropolymers that resist proteolysis, exhibit potent biological activity, and fold into higher order nanostructures. Structurally similar to peptides, peptoids are poly N-substituted glycines, where the side chains are attached to the nitrogen rather than the alpha-carbon. Their ease of synthesis and structural diversity allows testing of basic design principles to drive de novo design and engineering of new biologically-active and nanostructured materials.
Here, a simple manual peptoid synthesis protocol is presented that allows the synthesis of long chain polypeptoids ( up to 50mers) in excellent yields. Only basic equipment, simple techniques (e.g. liquid transfer, filtration), and commercially available reagents are required, making peptoids an accessible addition to many researchers' toolkits. The peptoid backbone is grown one monomer at a time via the submonomer method which consists of a two-step monomer addition cycle: acylation and displacement. First, bromoacetic acid activated in situ with N,N'-diisopropylcarbodiimide acylates a resin-bound secondary amine. Second, nucleophilic displacement of the bromide by a primary amine follows to introduce the side chain. The two-step cycle is iterated until the desired chain length is reached. The coupling efficiency of this two-step cycle routinely exceeds 98% and enables the synthesis of peptoids as long as 50 residues. Highly tunable, precise and chemically diverse sequences are achievable with the submonomer method as hundreds of readily available primary amines can be directly incorporated.
 
Peptoids are emerging as a versatile biomimetic material for nanobioscience research because of their synthetic flexibility, robustness, and ordering at the atomic level. The folding of a single-chain, amphiphilic, information-rich polypeptoid into a highly-ordered nanosheet was recently demonstrated. This peptoid is a 36-mer that consists of only three different commercially available monomers: hydrophobic, cationic and anionic. The hydrophobic phenylethyl side chains are buried in the nanosheet core whereas the ionic amine and carboxyl side chains align on the hydrophilic faces. The peptoid nanosheets serve as a potential platform for membrane mimetics, protein mimetics, device fabrication, and sensors. Methods for peptoid synthesis, sheet formation, and microscopy imaging are described and provide a simple method to enable future peptoid nanosheet designs.

A simple and general manual peptoid synthesis method involving basic equipment and commercially available reagents is outlined, enabling peptoids to be easily synthesized in most laboratories. The synthesis, purification and characterization of an amphiphilic peptoid 36mer is described, as well as its self-assembly into highly-ordered nanosheets.

高秩序のナノシートにペプトイドポリマーおよびそれらの自己組織化の固相Submonomer合成

Peptoids are a novel class of biomimetic, non-natural, sequence-specific heteropolymers that resist proteolysis, exhibit potent biological activity, and ...

生物工学

Constructing Thioether/Vinyl Sulfide-tethered Helical Peptides Via Photo-induced Thiol-ene/yne Hydrothiolation

Here, we describe a detailed protocol for the preparation of thioether-tethered peptides using on-resin intramolecular/intermolecular thiol-ene hydrothiolation. In addition, this protocol describes the preparation of vinyl-sulfide-tethered peptides using in-solution intramolecular thiol-yne hydrothiolation between amino acids that possess alkene/alkyne side chains and cysteine residues at i, i+4 positions. Linear peptides were synthesized using a standard Fmoc-based solid-phase peptide synthesis (SPPS). Thiol-ene hydrothiolation is carried out using either an intramolecular thio-ene reaction or an intermolecular thio-ene reaction, depending on the peptide length. In this research, an intramolecular thio-ene reaction is carried out in the case of shorter peptides using on-resin deprotection of the trityl groups of cysteine residues following the complete synthesis of the linear peptide. The resin is then set to UV irradiation using photoinitiator 4-methoxyacetophenone (MAP) and 2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone (MMP). The intermolecular thiol-ene reaction is carried out by dissolving Fmoc-Cys-OH in an N,N-dimethylformamide (DMF) solvent. This is then reacted with the peptide using the alkene-bearing residue on resin. After that, the macrolactamization is carried out using benzotriazole-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBop), 1-hydroxybenzotriazole (HoBt), and 4-Methylmorpholine (NMM) as activation reagents on the resin. Following the macrolactamization, the peptide synthesis is continued using standard SPPS. In the case of the thio-yne hydrothiolation, the linear peptide is cleaved from the resin, dried, and subsequently dissolved in degassed DMF. This is then irradiated using UV light with photoinitiator 2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone (DMPA). Following the reaction, DMF is evaporated and the crude residue is precipitated and purified using high-performance liquid chromatography (HPLC). These methods could function to simplify the generation of thioether-tethered cyclic peptides due to the use of the thio-ene/yne click chemistry that possesses superior functional group tolerance and good yield. The introduction of thioether bonds into peptides takes advantage of the nucleophilic nature of cysteine residues and is redox-inert relative to disulfide bonds.

We present a protocol for the construction of thioether/vinyl sulfide-tethered helical peptides using photo-induced thiol-ene/thiol-yne hydrothiolation.

チオエーテル/ビニール硫化テザー ヘリカル ペプチドによる光誘起チオール-エン/イン Hydrothiolation を構築します。

Here, we describe a detailed protocol for the preparation of thioether-tethered peptides using on-resin intramolecular/intermolecular thiol-ene ...

Synthesis of Information-bearing Peptoids and their Sequence-directed Dynamic Covalent Self-assembly

This protocol presents the use of Lewis acidic multi-role reagents to circumvent kinetic trapping observed during the self-assembly of information-encoded oligomeric strands mediated by paired dynamic covalent interactions in a manner mimicking the thermal cycling commonly employed for the self-assembly of complementary nucleic acid sequences. Primary amine monomers bearing aldehyde and amine pendant moieties are functionalized with orthogonal protecting groups for use as dynamic covalent reactant pairs. Using a modified automated peptide synthesizer, the primary amine monomers are encoded into oligo(peptoid) strands through solid-phase submonomer synthesis. Upon purification by high-performance liquid chromatography (HPLC) and characterization by electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS), sequence-specific oligomers are subjected to high-loading of a Lewis acidic rare-earth metal triflate which both deprotects the aldehyde moieties and affects the reactant pair equilibrium such that strands completely dissociate. Subsequently, a fraction of the Lewis acid is extracted, enabling annealing of complementary sequence-specific strands to form information-encoded molecular ladders characterized by matrix assisted laser desorption/ionization mass spectrometry (MALDI-MS). The simple procedure outlined in this report circumvents kinetic traps commonly experienced in the field of dynamic covalent assembly and serves as a platform for the future design of robust, complex architectures.

A protocol is presented for the synthesis of information-encoded peptoid oligomers and for the sequence-directed self-assembly of these peptoids into molecular ladders using amines and aldehydes as dynamic covalent reactant pairs and Lewis acidic rare-earth metal triflates as multi-role reagents.

情報を持つペプトイドの合成と、その配列指向動的共有自己集合

This protocol presents the use of Lewis acidic multi-role reagents to circumvent kinetic trapping observed during the self-assembly of information-encoded ...

Constructing Cyclic Peptides Using an On-Tether Sulfonium Center

In recent years, cyclic peptides have attracted increasing attention in the field of drug discovery due to their excellent biological activities, and, as a consequence, they are now used clinically. It is, therefore, critical to seek effective strategies for synthesizing cyclic peptides to promote their application in the field of drug discovery. This paper reports a detailed protocol for the efficient synthesis of cyclic peptides using on-resin or intramolecular (intermolecular) bisalkylation. Using this protocol, linear peptides were synthesized by taking advantage of solid-phase peptide synthesis with cysteine (Cys) and methionine (Met) coupled simultaneously on the resin. Further, cyclic peptides were synthesized via bisalkylation between Met and Cys using a tunable tether and an on-tether sulfonium center. The whole synthetic route can be divided into three major processes: the deprotection of Cys on the resin, the coupling of the linker, and the cyclization between Cys and Met in a trifluoroacetic acid (TFA) cleavage solution. Furthermore, inspired by the reactivity of the sulfonium center, a propargyl group was attached to the Met to trigger thiol-yne addition and form a cyclic peptide. After that, the crude peptides were dried and dissolved in acetonitrile, separated, and then purified by high-performance liquid chromatography (HPLC). The molecular weight of the cyclic peptide was confirmed by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), and the stability of the cyclic peptide combination with the reductant was further confirmed using HPLC. In addition, the chemical shift in the cyclic peptide was analyzed by 1H nuclear magnetic resonance (1H NMR) spectra. Overall, this protocol aimed to establish an effective strategy for synthesizing cyclic peptides.

This protocol presents the synthesis of cyclic peptides via bisalkylation between cysteine and methionine and the facile thiol-yne reaction triggered by the propargyl sulfonium center.

オンテザースルホニウム中心を用いた環状ペプチドの構築

In recent years, cyclic peptides have attracted increasing attention in the field of drug discovery due to their excellent biological activities, and, as ...

<meta charset="utf8"></head><body> ペプチドハイドロゲル:ECF-5の環境応答性ゲル化法

Preparation of Mechanically Stable Self-Assembled Peptides Hydrogels

Peptide hydrogels are highly hydrophilic, three-dimensional network gels formed by the self-assembly of nanofibers or polymers, creating water-locking networks. Their morphology closely resembles that of the extracellular matrix, allowing them to exhibit both the biological functions of peptides and responsive gelation properties. These unique characteristics have led to their extensive application in tissue engineering, three-dimensional cell culture, cancer therapy, regenerative medicine, and other biomedical fields. This article describes three methods for preparing ECF-5 peptide hydrogels using self-assembling peptides with environmentally responsive gelation processes: (1) pH-responsive gelation: varying pH levels induce the protonation or deprotonation of amino acid residues, altering electrostatic interactions between peptide molecules and promoting their self-assembly into hydrogels; (2) Metal ion addition: polyvalent metal ions chelate with negatively charged amino acid residues, acting as bridges between peptides to form a network hydrogel; (3) Solvent exchange: hydrophobic peptides are initially dissolved in non-polar organic solvents and subsequently induce self-assembly into hydrogels upon transitioning to a polar aqueous environment. These methods utilize conventional experimental procedures to facilitate peptide self-assembly into hydrogels. By designing peptide sequences to align with specific gelation-inducing conditions, it is possible to achieve finely tuned micro/nanostructures and biological functions, highlighting the significant potential of peptide hydrogels in the biomedical domain.

<meta charset="utf8"></head><body>著者スポットライト:優れた生体適合性のための自己組織化繊維およびペプチドハイドロゲルの生産の改善

This protocol presents three fast and simple preparation methods that use environmental conditions to trigger the self-assembly of peptides into hydrogels. Additionally, the characterization of peptide hydrogels is described, demonstrating that mechanically stable peptide hydrogels can be formed under these straightforward conditions.

機械的に安定な自己組織化ペプチドハイドロゲルの調製

Peptide hydrogels are highly hydrophilic, three-dimensional network gels formed by the self-assembly of nanofibers or polymers, creating water-locking ...

1, 2-ジチオランの合成とキャラクタリゼーション自己組織化ペプチド

要約

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この動画の章

短いペプチドの自己組織化によって順序付け生体分子構造の形成

ペプチド第三級アミドライブラリのスプリット·アンド·プールの合成とキャラクタリゼーション

ヌクレオシド三リン酸 - 合成からの生化学的特徴付けへ

高秩序のナノシートにペプトイドポリマーおよびそれらの自己組織化の固相Submonomer合成

チオエーテル/ビニール硫化テザーヘリカルペプチドによる光誘起チオール-エン/イン Hydrothiolation を構築します。

情報を持つペプトイドの合成と、その配列指向動的共有自己集合

オンテザースルホニウム中心を用いた環状ペプチドの構築

機械的に安定な自己組織化ペプチドハイドロゲルの調製

機械的に安定な自己組織化ペプチドハイドロゲルの調製

機械的に安定な自己組織化ペプチドハイドロゲルの調製

1, 2-ジチオランの合成とキャラクタリゼーション自己組織化ペプチド

要約

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短いペプチドの自己組織化によって順序付け生体分子構造の形成

ペプチド第三級アミドライブラリのスプリット·アンド·プールの合成とキャラクタリゼーション

ヌクレオシド三リン酸 - 合成からの生化学的特徴付けへ

高秩序のナノシートにペプトイドポリマーおよびそれらの自己組織化の固相Submonomer合成

チオエーテル/ビニール硫化テザー ヘリカル ペプチドによる光誘起チオール-エン/イン Hydrothiolation を構築します。

情報を持つペプトイドの合成と、その配列指向動的共有自己集合

オンテザースルホニウム中心を用いた環状ペプチドの構築

機械的に安定な自己組織化ペプチドハイドロゲルの調製

機械的に安定な自己組織化ペプチドハイドロゲルの調製

機械的に安定な自己組織化ペプチドハイドロゲルの調製

チオエーテル/ビニール硫化テザーヘリカルペプチドによる光誘起チオール-エン/イン Hydrothiolation を構築します。