ミツバチ (セイヨウミツバチ) 労働者の下咽頭腺 Acinus サイズを測定

この方法は、貧しい栄養と下咽頭腺の成長と発達との関連について、ミツバチの栄養分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、簡単に染色、視覚化、およびブズ下咽頭腺を測定するためにそれを使用することができるということです。一般的に、この方法に新しい個人は、下咽頭腺を見つけるのが難しい、視覚的な指導なしに解剖することができるので、苦労します。

手順を開始する前に、ガラスペトリ皿に溶かしたクールセッティングワックスを注ぎます。1つの井戸に作りたてのギムサ染色の20マイクロリットルを追加し、50〜100マイクロリットルの生理食塩水を1つの顕微鏡スライドの隣接する井戸に加え、看護師の労働者1匹あたりに加工します。ワックスがセットされたら、10ミリメートルマイクロスプリングハサミを使用して最初のハチから頭を取り除き、鉗子、解剖顕微鏡、ワックス彫刻ペンを使用して、ヘッドフロントサイドアップをワックス解剖プレートに埋め込みます。

目と口にピンを挿入して頭をプレートに固定し、ピンバイスに固定された鋭く壊れやすいカミソリの刃を使用して、フェイスプレートの両側の目と下顎骨の間に2〜3ミリメートルの切開を行います。マイクロハサミをフェイスプレートの下にそっと走り、アンテナと脳の間を走るアンテナ神経を切ります。細かい鉗子を使用して、口でフェイスプレートをつかみ、組織を細かい点鉗子とピンでワックスに顔を下に固定します。

次に、ピペット20マイクロリットルのPBSを頭部の開いた部分に置く。下咽頭腺は真珠の列のように見え、無傷であれば脳の上に位置しています。超微細な点鉗子を使用して、顕微鏡スライド上のGiemsa染色に即座に浸漬するために腺の1つを穏やかに収穫する。

5分間のインキュベーションの後、同じスライド上の生理生理のプールに腺を移し、必要に応じてマイクロハサミで顕微鏡の下で腺を小さく切ります。腺を測定するには、光顕微鏡の測定プログラムを開き、10倍の倍率を選択します。スライドを顕微鏡のステージに置き、眼球を通して手動で腺を見つけます。

60~80倍に拡大し、新しい倍率で腺の焦点を手動で調整します。さらにモニター上のライブ画像上の腺の焦点を調整し、画像名とサンプルの説明を画像名ボックスに入力します。[画像の取得] をクリックして腺のイメージを取得し、[解析] タブで [エリア] ツールを選択し、[表示] タブの [値] を選択解除します。

ユニットも選択解除されます。他のすべての設定を既定に設定します。aciniを測定するには、マウスの左ボタンを連続的にクリックまたは押したままにして、一度に1つのアキビヌス周囲をできるだけ慎重にトレースします。

1 つのイメージからのすべての acini を測定したら、[レポートの作成] を選択し、適切なオプションが選択されていることを確認して、[エクスポート] をクリックします。次に、適切な形式でレポートを保存し、必要に応じて作業領域と材料をクリーンアップします。染色されていない組織において、アキニの適切なコントラストと定義されたエッジを見つけることは困難である。

染色された下咽頭腺では、染色された組織と白い背景との間のコントラストが改善されたため、アキニの縁部は鋭い。下咽頭腺は、花粉と混合した蜂蜜を与えられるミツバチでは、蜂蜜を単独で与えられるミツバチと比較して、時間の経過とともに成長する。下咽頭腺サイズはまた、提供される花粉の種類に敏感である。

例えば、砂漠やアーモンド花粉を与えられたミツバチは同等の大きさの腺を示し、ミツバチはミツバチだけが餌を与えたミツバチよりも大きいが、アーモンドや砂漠の花粉を与えられたミツバチの腺よりも小さい腺を示す。この手順を試みる間、慎重に腺を解剖し、それらを過度または下に染色しないように注意することが重要です。Giemsaの汚れで作業することは危険であり、汚れを炎から遠ざけ、適切な処分を行い、手袋と目の保護を着用するなどの予防措置は、常にこの手順を実行する間に取られるべきであることを忘れないでください。