Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области питания медоносных пчел, о связи между плохим питанием и гипофарингальным ростом и развитием желез. Основным преимуществом этой техники является то, что можно использовать его, чтобы легко пятно, визуализировать и измерять пчелиные гипофаринговые железы. Как правило, лица, новые для этого метода будет бороться, потому что гипофарингеальные железы может быть трудно найти и вскрыть без визуального руководства.
Перед началом процедуры, залить расплавленной прохладной установки воска в стеклянной чашке Петри. Добавьте 20 микролитров свежеприготовленного пятна Giemsa в одну колодец и от 50 до 100 микролитров солевого раствора в соседний колодец одного микроскопа слайда, на медсестру работника пчелы, которые будут обработаны. Когда воск установлен, используйте 10 миллиметров микро весенние ножницы, чтобы удалить голову из первой пчелы и использовать типсы, рассечение микроскопа, и воск резьба перо вставлять голову передней стороной вверх в восковой пластины вскрытия.
Вставьте булавки в глаза и рот, чтобы обеспечить голову к пластине, и использовать острый, breakable лезвие бритвы крепится в булавку тизави, чтобы сделать два-три миллиметра разрез между глазами и челюсти с каждой стороны лица пластины. Аккуратно запустите микро ножницы под лицовую пластину и разрежьте антенный нерв, который проходит между антенной и мозгом. Используя тонкие миппы, возьмите лицевую пластину за рот, и приколоть ткань лицом вниз к воску с тонкой точки миппы и булавку.
Далее, пипетка 20 микролитров PBS на открытой части головы. Гипофаринговые железы выглядят как вереница жемчуга и расположены на верхней части мозга, если нетронутыми. Используя супер тонкой точки миппы, осторожно урожай одной из желез для немедленного погружения в пятно Giemsa на слайде микроскопии.
После пятиминутной инкубации перенесите железу в бассейн солевого раствора на том же слайде, разрезая железу на более мелкие кусочки под микроскопом с помощью микро ножниц по мере необходимости. Чтобы измерить железы, откройте программу измерения для светового микроскопа, и выберите 10 раз увеличение. Поместите слайд на сцену микроскопа и вручную найдите железы через кусок глаза.
Увеличьте увеличение в 60-80 раз и вручную отрегулируйте фокус желез при новом увеличении. Далее отрегулируйте фокус желез на живом изображении на мониторе и введите имя изображения и описание образца в поле имени изображения. Нажмите Acquire Image, чтобы получить изображение желез и под вкладкой Анализ, выберите инструмент Area и не выбрать значение под вкладками Отображение.
Группа также будет не выбрана. Установите все остальные настройки по умолчанию. Чтобы измерить acini, непрерывно нажмите или удерживайте левую кнопку мыши при отслеживании одного периметра acinus в то время, как тщательно, насколько это возможно.
После того, как все acini из одного изображения были измерены выберите Создать отчет, подтверждающий, что соответствующие варианты выбраны, и нажмите Экспорт. Затем сохраните отчет в подходящем формате и при необходимости очистите рабочую зону и материалы. Трудно найти правильный контраст и определенные края acini в необлянные ткани.
В окрашенных гипофаринговых желез, края acini являются острыми из-за улучшения контраста между окрашенных тканей и белого фона. Гипофаринговые железы растут с течением времени у пчел, которые кормят медом, смешанным с пыльцой, по сравнению с пчелами, которые питаются медом в одиночку. Гипофарингальный размер железы также чувствителен к типу пыльцы при условии.
Например, пчелы кормили пустыни или пыльцы миндаля продемонстрировать желез эквивалентного размера, в то время как пчелы кормили юго-восточной пыльцы диеты экспонат желез, которые больше, чем мед только кормили пчел, но меньше, чем железы от пчел кормили либо миндаль или пыльцу пустыни. При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы тщательно вскрыть железы и не более-или под-пятно их. Не забывайте, что работа с пятном Giemsa может быть опасным и что меры предосторожности, такие как сохранение пятна от пламени, используя надлежащее удаление, и носить перчатки и защиты глаз всегда должны быть приняты при выполнении этой процедуры.
