Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Honigbienenernährung zu beantworten, über den Zusammenhang zwischen schlechter Ernährung und Hypopharyngealdrüsenwachstum und -entwicklung. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass man sie verwenden kann, um Bienenhypopharyngealdrüsen leicht zu färben, zu visualisieren und zu messen. Im Allgemeinen, Personen neu zu dieser Methode wird kämpfen, weil die hypopharyngealdds kann schwierig sein, ohne visuelle Führung zu lokalisieren und zu sezieren.
Bevor Sie mit dem Eingriff beginnen, gießen Sie geschmolzenes kühles Einstellwachs in eine Glas-Petrischale. Fügen Sie 20 Mikroliter frisch zubereiteten Giemsa-Flecken in einen Brunnen und 50 bis 100 Mikroliter Saline in einen angrenzenden Brunnen eines Mikroskopschlittens, pro Zubearbeiten von Krankenschwestern und Krankenschwestern, hinzu. Wenn das Wachs gesetzt hat, verwenden Sie 10 Millimeter Mikrofederschere, um den Kopf von der ersten Biene zu entfernen und Zangen, ein Sezieren Mikroskop und einen Wachsschnitzstift zu verwenden, um den Kopf nach vorne in die Wachssesektionsplatte einzubetten.
Legen Sie Stifte in die Augen und den Mund, um den Kopf auf der Platte zu sichern, und verwenden Sie eine scharfe, zerbrechliche Rasierklinge, die in einem Stiftvistont befestigt ist, um einen Zwei- bis Drei-Millimeter-Schnitt zwischen den Augen und Unterkiefern auf jeder Seite der Gesichtsplatte zu machen. Führen Sie vorsichtig die Mikroschere unter die Gesichtsplatte und schneiden Sie den Antennennerv, der zwischen der Antenne und dem Gehirn verläuft. Mit feinen Zangen greifen Sie die Gesichtsplatte durch den Mund und heften Sie das Gewebe seitlich an das Wachs mit feinen Point Forceps und einem Stift.
Als nächstes Pipette 20 Mikroliter PBS auf den offenen Abschnitt des Kopfes. Die hypopharyngealen Drüsen sehen aus wie eine Perlenkette und befinden sich auf der Oberseite des Gehirns, wenn sie intakt sind. Mit superfeinen Punktzangen, ernten Sie vorsichtig eine der Drüsen für das sofortige Eintauchen in den Giemsa Fleck auf der Mikroskopie-Rutsche.
Nach einer fünfminütigen Inkubation die Drüse auf den Pool der Kochnische auf dem gleichen Schlitten übertragen und die Drüse unter dem Mikroskop mit der Mikroschere nach Bedarf in kleinere Stücke schneiden. Um die Drüsen zu messen, öffnen Sie das Messprogramm für das Lichtmikroskop, und wählen Sie die 10-fache Vergrößerung aus. Legen Sie die Rutsche auf die Mikroskopstufe und lokalisieren Sie die Drüsen manuell durch das Augenstück.
Erhöhen Sie die Vergrößerung auf das 60- bis 80-fache und passen Sie den Fokus der Drüsen bei der neuen Vergrößerung manuell an. Passen Sie den Fokus der Drüsen auf das Livebild auf dem Monitor weiter an und geben Sie den Bildnamen und die Beispielbeschreibung in das Bildnamensfeld ein. Klicken Sie auf Bild erfassen, um ein Bild der Drüsen zu erhalten, und wählen Sie unter Registerkarten "Analyse" das Werkzeug Bereich aus, und deaktivieren Sie die Option Wert unter Registerkarten Anzeigen.
Die Einheit wird ebenfalls nicht ausgewählt. Legen Sie alle anderen Einstellungen auf den Standardwert fest. Um den Acini zu messen, klicken oder halten Sie kontinuierlich die linke Maustaste gedrückt, während Sie einen Acinus-Umfang nach dem anderen so sorgfältig wie möglich verfolgen.
Nachdem alle acini aus einem einzelnen Bild gemessen wurden, wählen Sie Bericht erstellen aus, um zu bestätigen, dass die entsprechenden Optionen ausgewählt sind, und klicken Sie auf Exportieren. Speichern Sie dann den Bericht in einem geeigneten Format und bereinigen Sie den Arbeitsbereich und die Materialien entsprechend. Es ist schwierig, einen richtigen Kontrast und definierte Kanten der Acini in ungefärbten Geweben zu finden.
Bei gefärbten Hypopharyngealdrüsen sind die Ränder der Acini aufgrund des verbesserten Kontrasts zwischen dem gebeizten Gewebe und dem weißen Hintergrund scharf. Die hypopharyngealen Drüsen wachsen im Laufe der Zeit in Bienen, die Honig mit Pollen gemischt gefüttert werden, im Vergleich zu Bienen, die Honig allein gefüttert werden. Hypopharyngealdrüsengröße ist auch empfindlich auf die Art der Pollen zur Verfügung gestellt.
Zum Beispiel zeigen Bienen, die mit Wüsten- oder Mandelpollen gefüttert werden, Drüsen gleicher Größe, während Bienen, die mit südöstlichen Pollendiäten gefüttert werden, Drüsen aufweisen, die größer sind als Honig allein, die Mitbienen gefüttert werden, aber kleiner als Drüsen von Bienen, die entweder mit Mandel- oder Wüstenpollen gefüttert werden. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, die Drüsen sorgfältig zu sezieren und sie nicht zu über- oder unterflecken. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Giemsa Fleck gefährlich sein kann und dass Vorsichtsmaßnahmen, wie das Halten des Flecks von Flammen, mit ordnungsgemäßer Entsorgung, und das Tragen von Handschuhen und Augenschutz sollte immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden.
