Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la nutrición de la abeja melígri venal, sobre el vínculo entre la mala nutrición y el crecimiento y desarrollo de la glándula hipofaríngea. La principal ventaja de esta técnica es que se puede utilizar para manchar, visualizar y medir fácilmente las glándulas hipofaríngeas de las abejas. Generalmente, los individuos nuevos en este método lucharán porque las glándulas hipofaríngeas pueden ser difíciles de localizar y diseccionar sin guía visual.
Antes de comenzar el procedimiento, vierta la cera fría derretida en un plato de Petri de vidrio. Agregue 20 microlitros de la mancha Giemsa recién preparada en un pozo, y 50 a 100 microlitros de solución salina en un pozo adyacente de un portaobjetos de microscopio, por abeja trabajadora enfermera que se procesará. Cuando la cera se haya establecido, utilice tijeras de micro muelle de 10 milímetros para quitar la cabeza de la primera abeja y utilizar fórceps, un microscopio de disección y una pluma de tallado de cera para incrustar la cabeza de lado hacia arriba en la placa de disección de cera.
Inserte alfileres en los ojos y la boca para fijar la cabeza a la placa, y utilice una cuchilla de afeitar afilada y rompible fijada en una visera de pasador para hacer una incisión de dos a tres milímetros entre los ojos y las mandíbulas a cada lado de la placa frontal. Coloque suavemente las micro tijeras debajo de la placa frontal y corte el nervio antena que se extiende entre la antena y el cerebro. Usando fórceps finos, agarre la placa frontal por la boca, y clavar el tejido boca abajo a la cera con fórceps de punto fino y un alfiler.
A continuación, pipetear 20 microlitros de PBS en la sección abierta de la cabeza. Las glándulas hipofaríngeas parecen una cadena de perlas y se encuentran en la parte superior del cerebro si están intactas. Usando fórceps de punto súper fino, cosecha suavemente una de las glándulas para una inmersión inmediata en la mancha de Giemsa en el portaobjetos de microscopía.
Después de una incubación de cinco minutos, transfiera la glándula a la piscina de solución salina en el mismo portaobjetos, cortando la glándula en trozos más pequeños bajo el microscopio con las micro tijeras según sea necesario. Para medir las glándulas, abra el programa de medición para el microscopio de luz y seleccione el aumento 10 veces. Coloque la diapositiva en la etapa del microscopio y localice manualmente las glándulas a través de la pieza del ojo.
Aumente el aumento a 60 a 80 veces y ajuste manualmente el enfoque de las glándulas en el nuevo aumento. Ajuste aún más el enfoque de las glándulas en la imagen en vivo en el monitor e introduzca el nombre de la imagen y la descripción de la muestra en el cuadro de nombre de la imagen. Haga clic en Adquirir imagen para obtener una imagen de los prensaestcos y, en la pestaña Análisis, seleccione la herramienta Area y ancle Value en Mostrar fichas.
La unidad también no se seleccionará. Establezca todos los demás ajustes en el valor predeterminado. Para medir el acini, haga clic o mantenga pulsado el botón izquierdo del ratón mientras traza un perímetro acinus a la vez con el máximo cuidado posible.
Una vez medido todo el acini de una sola imagen, seleccione Crear informe, confirme que se han seleccionado las opciones adecuadas y haga clic en Exportar. A continuación, guarde el informe en un formato adecuado y limpie el área de trabajo y los materiales según corresponda. Es difícil encontrar un contraste adecuado y bordes definidos del acini en tejidos no manchados.
En las glándulas hipofaríngeas teñidas, los bordes del acini son afilados debido a la mejora del contraste entre el tejido teñido y el fondo blanco. Las glándulas hipofaríngeas crecen con el tiempo en abejas que se alimentan de miel mezclada con polen, en comparación con las abejas que se alimentan solo de miel. El tamaño de la glándula hipofaríngea también es sensible al tipo de polen proporcionado.
Por ejemplo, las abejas alimentadas con polen desértico o almendra demuestran glándulas de tamaño equivalente, mientras que las dietas alimentadas con polen del sureste exhiben glándulas que son más grandes que las abejas alimentadas con miel sola, pero más pequeñas que las glándulas alimentadas con abejas alimentadas con almendras o polen del desierto. Al intentar este procedimiento, es importante recordar diseccionar cuidadosamente las glándulas y no sobre-o mancharlas. No olvide que trabajar con la mancha Giemsa puede ser peligroso y que las precauciones, como mantener la mancha alejada de las llamas, el uso de la eliminación adecuada, y el uso de guantes y protección para los ojos siempre deben tomarse durante la realización de este procedimiento.
