当社の凍結融解法は、生体医療、医薬品、または化粧品用途に使用するための生体適合性ヒドロゲルを調製するのに適したプロセスであるため、このプロトコルは重要です。この方法の主な利点は、出生時欠損を引き起こす可能性のある化学的架橋剤を使用していないということです。また、この方法で利用される凍結条件は、度等のヒドロゲルの最終特性を制御する。
この方法は、他の用途とヒドロゲルに適用することができる。これは水質汚染を治療するために使用されます。実際、新しい培養用の水容器として使用されるポリマービーズを製造するために使用できます。
測定するポリマー溶液を完全に均質化することが重要です。それ以外の場合、ヒドロゲルは割れ点を提示します。また、各サイクルの凍結時間に注意する必要があります。
この手順を開始するには、キトサンの0.2グラムと室温で0.1モル酢酸の10ミリリットルを溶解し、連続的な機械的撹拌を一晩維持し、2%キトサン溶液を調製する。翌日、PVA1グラムと蒸留水10ミリリットルを溶解し、摂氏80度で1時間かき混ぜます。磁気スターラーを使用して、均質になるまで室温で同量の溶液を混合します。
ペトリ皿に混合物を注ぎます。放気するために2時間、大気圧でサンプルを残します。ヒドロゲルをマイナス4度、マイナス20度、マイナス80度で20時間4サイクル凍結します。
5~6回の凍結サイクルを使用して、マイナス80度で別のヒドロゲルを20時間凍結します。3回目の凍結サイクルの後、ヒドロゲルを脱イオン水で洗浄します。最後の凍結サイクルの終わりには、マイナス50°Cで48時間ヒドロゲルを乾燥させ、さらなる特徴付けのためにかき混ぜます。
FT-IR特性を実行する準備ができたら、ATRモードでFT-IR分光光度計にヒドロゲルの小片を配置します。4000 から 600 の波長の FT-IR 分光器を取ります。まず、直径13ミリメートル、高さ10ミリメートルのヒドロゲルからディスクを切り取ります。
彼らの重量を量る。揺れながら摂氏25度で50ミリリットルの脱イオン水でディスクをインキュベートします。30分ごとに培地からサンプルを取り出します。
余分な水を除去し、それを重量を量るためにサンプルをブロット。次に、膨れ上がり度を計算し、テキストプロトコルで概説されているように電子顕微鏡と孔非対称を行います。ロードする前に、1リットル当たり15ミリグラムで4リットルのディフルニサル溶液を調製し、一晩かき混ぜます。
UV-Vis分光法により溶液の濃度を確認します。その後、400ミリグラムの凍結乾燥ヒドロゲルサンプルと6ミリリットルの蒸留水を24時間膨らませます。ローディングの場合は、フラスコに50ミリリットルのディフルニサル溶液を充填し、一定の攪拌で摂氏25度で維持します。
フラスコに膨らんだヒドロゲルを水没する。次に、残りの二倍溶液の2ミリリットルのアリコートを異なる時間に取り、曲線のプラトー領域を決定する。24時間後、溶液を新鮮なものに交換してください。
252ナノメートルで各アリコートの吸光度を測定し、二lunisalの較正曲線を用いて溶液中に存在する二分泌量の濃度を決定する。ヒドロゲルに保持されるジルニサルの量と、テキストプロトコルで概説されているカプセル化効率を決定します。その後、ロードされたヒドロゲルをマイナス80度で凍結し、マイナス50度で凍結乾燥させます。
薬物放出の場合、pH 7.4と摂氏25度で凍結乾燥ジフニサルロードヒドロゲルの300ミリグラムとリン酸緩衝液50ミリリットルを水没させる。一定の攪拌を維持します。異なる時間に2ミリリットルのアリコートを撤回し、一定のボリュームを維持するために新鮮な媒体に置き換えます。
較正曲線に従って252ナノメートルで分光光度を放出したDiflunisalを決定します。この後、テキストプロトコルで概説されているように、ヒドロゲル中の主要な薬物放出機構を推測する。ここでCSPVAヒドロゲルは、凍結融解法を用いた架橋剤を用いずに調製される。
FT-IR分光器は両方のポリマーの7つの特徴的な信号を示す。すべてのCSPVAヒドロゲルは、非常に多孔質の表面を示し、独特の変化は、調製条件に従って観察される。マイナス4度で調製されたヒドロゲルは、最大の毛穴を提示します。
マイナス80度で調製されたヒドロゲルは、より多孔質のネットワークを有するように見え、凍結サイクルの数は、より定義され、円形の毛穴を促進するように見える。しかし、マイナス80度で6回の凍結サイクルで調製されたヒドロゲルは、おそらくその高いトルトウ酸率のためにマイナス80°Cで4つの凍結サイクルで調製されたものよりも透過性が低く、これは低い総侵入量に反映された。膨潤行動では、ヒドロゲルは大量の水を素早く吸収し、最初の5時間は10倍、20時間後には体重の15倍まで維持します。
温度の影響を観察すると、マイナス80度で4回の凍結サイクルで調製したヒドロゲルは、最初の5時間で膨潤能力が低いことがわかりました。凍結サイクルの数は、いつでも違いを作成するために見られるものではありません。ヒドロゲルからのジフルニサルの放出動態は、マイナス80°Cの4つの凍結サイクルで調製されたヒドロゲルを用いて、すべての場合において約30時間維持され、最高量を放出する。
マイナス80°Cの4つの凍結サイクルで調製されたヒドロゲルとマイナス80°Cで6回の凍結サイクルで調製されたヒドロゲルとの間に放出に違いはありません。この手順を試みる際に覚えておくべきことは、凍結条件です。完成した、形成されたヒドロゲルを得るためには、ほぼ3つの凍結サイクルから開始する必要があります。
この方法は、インビトロの生体適合性を評価するために細胞培養と組み合わせることができる。また、分解研究と組み合わせることもできます。これらの手順の開発後、我々は混合物またはアロエベラのような天然化合物に他のポリマーを組み込む可能性を探ることができることに気づいた。
そうすることで、これらの材料に新しい特性を組み込むことができます。
