実験的および臨床的証拠は、肝虚血再灌流が癌細胞を循環させることによって転移性病巣の形成および微小転移性疾患の増殖を増加させることができることを示す。この再現性マウスモデルは、転移の確立と肝臓内の既存の腫瘍の成長の両方の関連する研究を可能にする。肝臓の外科手術、出血、敗血症性ショックはすべて肝臓虚血再灌流に関連しており、転移性疾患の成長に影響を与える可能性があります。
これらの技術は、より良い診断し、臨床環境で腫瘍の成長に虚血再灌流の有害な影響を防ぐために、この現象の研究を可能にします。8〜12週齢の雄C57黒6マウスでつま先ピンチへの応答の欠如を確認した後、露出した腹壁の皮膚をポビドネヨウ素スクラブで消毒し、歯付き鉗子を使用して皮膚を持ち上げる。外科用メスを使用して、皮膚に中線切開を行い、腹筋と腹膜を持ち上げて、腹の内容物を露出させる3センチメートルの中線切開の作成を容易にする。
切開の両側とxiphoidプロセスの下に止血体を置いた後、尾を引いてテープで腹部を伸ばし、6インチの無菌綿先端アプリケーターを使用して脾臓を膵臓脂肪組織から分離して露出させます。次に、目的の癌細胞懸濁液をボルテックスして、細胞塊を解離し、28ゲージの針を備えた0.5ミリリットルのインスリン注射器に細胞をロードする。ゆっくりと慎重に脾臓の先端に細胞の100マイクロリットルを注入し、注射中に脾臓を安定させるために穏やかな圧力を加えながら、腹腔に腫瘍のこぼれの可能性を吸収するために針穿刺の側面に隣接する綿の先端を置きます。
成功した注射は、肝臓の色の変化によって明らかになります.すべての細胞が送達されたら、PBS浸した滅菌ガーゼを解剖領域の上に置き、マウスを加熱パッドに15分間置き、癌細胞がシステム内を循環できるようにします。虚血と再灌流の傷害を誘発するには、2つの湿らせた綿の先端を使用して、口腔から腸を静かに移動させ、門脈を露出させ、マウスを解剖顕微鏡の下に置きます。
中央値を持ち上げ、横隔膜に対して横葉を持ち上げます。中央分離帯と右横葉の間に小さな湿った綿棒を置き、クランプするのに十分なスペースを作り、慎重にポータルトライアドの後ろに容器拡張鉗子を渡し、容器拡張鉗子を使用して4-0ポリプロピレン縫合糸の10センチメートルの部分を使用して後ろを通過し、ポータルトライアドを持ち上げます。マイクロセリファインクランプアプリケーターを使用して、左に微小血管クランプを配置し、中央値の肝臓ローブを使用して、ポータルトライアド内のすべての構造物を閉塞させます。
ブランチングが観察されたら、4-0ポリプロピレン縫合糸と小さな綿棒を取り除き、慎重に腹腔に腸を戻します。腹壁をPBS浸したガーゼで覆い、ガーゼをラップで覆い、蒸発損失を最小限に抑えます。その後、マウスを暖房パッドに60分間戻します。
虚血区間を通して、右の内側、左内側、および横葉の淡いブランチングを視覚化して、虚血損傷の証拠を確認する。負傷期間の終わりに、クランプを取り外します。脾臓摘出術を行うために、滑らかな鉗子で脾臓を慎重に持ち上げ、過度の出血を避けるために、手持ちの焼灼装置を使用して脾臓血管を焼灼する。
焼灼されたセクションで血管をトランセクトして脾臓を取り除き、すぐに4-0ポリプロピレン縫合糸を使用して、二重層縫合パターンの筋肉と皮膚切開を閉じます。その後、完全な回復まで監視して、ホームケージにマウスを戻します。外科的ストレスは、肝臓内の確立済みの微小転移の量を有意に増加させる。
この差は、非虚血再灌流マウスと比較して虚血再灌流の2週間後でも観察される。肝虚血再灌流および腫瘍細胞注入は、室温および細胞生存率の影響を受ける可能性があるため、これらの変数を制御するように注意してください。この技術は、転移性疾患の成長に対する外科的ストレスおよび肝臓損傷の影響の研究を促進する。
これは、研究者が手術によって引き起こされる腫瘍の成長の現象をよりよく理解するのに役立ちます。
