この豚心不全モデルは、左回折動脈閉塞および急速なペーシングによって誘発され、心臓再生に対する直接の心筋内幹細胞注入の影響を評価するために使用することができる。私たちの豚コロニー心不全モデルは非常に安定しています。このモデルの新しい梗塞サイズは、ベースラインから少なくとも40%減少した左心室および左心室注射梗塞の約16%である。
実験豚を直した位置に、頸動脈とジャグラー静脈を頸動脈三角形に配置し、止血鉗子と無菌技術を用いて右頸動脈と頸静脈を分離する。右頸動脈とジャグラー静脈の遠位端をリゲートし、右のジャグラー静脈をカニュール化するために血管を使用します。X線ガイダンスの下で右心室にペースメーカーのリードを挿入した後、胸骨筋と前scalene筋肉を分離し、ペースメーカーをリードに接続するために鉗子を使用します。
その後、2つの筋肉の間にペースメーカーを埋め込みます。その後、2-0シルクで2つの筋肉を閉じます。左心室機能の変化を評価するには、大腿三角形の右大腿動脈と大腿静脈を分離し、血管カスで右大腿動脈を計算する。
血管カスを介して大腿静脈にガイドワイヤーを入れ、血管を取り除きます。ガイドワイヤーの指導の下で大腿静脈に12フランスの鞘をカニュールし、ガイドワイヤーを取り外します。ちょうど実証したように、9つのフランスの鞘で右大腿動脈をカヌレートします。
そして、X線ガイダンスの下で内部の大静脈に12フランスのシースを通してバルーンカテーテルを挿入します。圧力容積信号プロセッサを用いて等張生理生理的な生理的な生理的に7つのフランスの圧力容積カテーテルを較正し、X線指導の下で9つのフランスの外装を通して左心室の頂点にカテーテルを挿入する。換気を中断し、圧力量信号プロセッサを使用して、左心室最大および負圧誘導体、収縮期圧および拡張期末圧を測定します。
その後、換気を再開します。心筋梗塞誘導の場合、1キロのアミオダロンあたり5ミリグラム、キログラム当たり1.5ミリグラムを静脈内に1時間かけて投与し、8つのフランスの鞘で右頸動脈を計算する前に心室性不整脈を予防する。標準的なC腕の透視法によって導かれる置かれた外装を介して6つのフランスのシースのワイヤー上導きカテーテルを通して冠状血管造影を行う。
X線誘導の下で経皮的な経年冠動脈拡張バルーンカテーテルインフレを有する最初の閉塞性限界枝に左の角反射冠動脈位相位への閉塞。7ミリリットルのスポンジマイクロスフィアを10ミリリットルの注射器に7ミリリットルのイオヘキソールと混合して1ミリリットルをロードし、バルーンカテーテルを通して混合物を注入して左の角折り冠動脈を遮断する。次にバルーンを収縮させ、血管造影を行い、閉塞を確認します。
梗塞誘導負荷の2回10から8番目のヒト誘導多能性幹細胞由来間葉系幹細胞を通常の生理食塩水の2ミリリットルに5ミリリットルのシリンジに2回、麻酔実験動物の頂点ビート領域の周りに10センチメートル殺菌した。リトラクターを使用して、4つまたは5つの肋間空間で左胸部切り出し術を行い、心膜切り出しを行い、梗塞した横壁を露出させます。梗塞領域が見える場合は、鉄線で肋間空間を閉じ、2-0のシルク縫合糸と2-0ビクリル縫合糸を有する皮下組織および皮膚層で筋肉層を閉じる前に、注入ごとに約300マイクロリットルの細胞の5〜8個の心筋内注射を行う。
細胞治療後の心室頻脈の可分性を評価するには、大腿静脈を介して6つのフランス語電気生理学的カテーテルを右心室の頂点に挿入し、表面心電図リースI、II、およびIIIを用いて心電学的記録システムに毎秒200ミリメートルの速度で表示する。刺激装置を使用して、拡張期閾値の2倍のパルス幅を2ミリ秒で提供し、1つの200ミリ秒で8回の刺激と1つの300ミリ秒のドライブサイクル長さのペーシングトレインを提供し、その後に1つまたは2つの早期余分な刺激を提供します。次に、不整脈の心室有効難治期が誘発されるまで結合間隔を順次短くし、誘導性持続性心室頻脈の存在を示す。
この代表的な実験では、左心室駆出率がベースラインから有意に減少し、左心室のエンド拡張期寸法および終期収縮期寸法が心筋梗塞誘導後8週間で有意に増加することが示された。これに対し、左心室駆出率は大幅に増加し、期末の収縮期寸法は投与後8週間の細胞移植群において著しく減少した。負圧誘導体と終期収縮期圧容積関係は、心筋梗塞の誘導後8週間でベースラインから有意に減少し、間葉系幹細胞の心筋内投与はこれらの機能の増加をもたらした。
各動物から5~7本の連続1センチメートルの厚切れにおける左心室梗塞壁厚の測定により、移植後8週間の梗塞領域における注入部位の周りに細胞生存率が約16%の左心室梗塞の割合が明らかになった。しかし、残存する注入幹細胞の少数は、心筋梗塞周辺領域に見えた。誘導性持続的な心室頻脈の事件は、心不全の動物で容易に増加する可能性がある。
なお、幹細胞移植は、心室頻脈に対する感受性を低下させるために、基礎となる心筋基質を有意に改変しなかった。左回折性冠動脈閉塞として不整脈を誘発する。ECGを監視し、必要に応じて副鼻腔を再確立するためにすぐに外部二ファシ体除細動器を使用してください。
この方法は、幹細胞ベースの治療法の有効性をテストするための心不全の安定した、再現性の高い大動物モデルを提供する。
