Este modelo de insuficiência cardíaca suína, induzido pelo bloqueio da artéria circunflexo esquerda e ritmo rápido, pode ser usado para avaliar os efeitos da injeção direta de células-tronco intramiocárdia na regeneração cardíaca. Nosso modelo de insuficiência cardíaca da colônia suína é estável. O novo tamanho do infarto deste modelo é de cerca de 16% do ventrículo esquerdo e o infarto de injeção de ventrículo esquerdo reduzido em pelo menos 40% da linha de base.
Com o porco experimental fixado na posição supina, localize a artéria carótida direita e a veia malabarista no triângulo carótida, e use fórceps hemostáticos e técnica asséptica para isolar a artéria carótida direita e a veia jugular. Ligate a extremidade distal da artéria carótida direita e veia malabarista e use um angiocato para cannutar a veia malabarista direita. Depois de inserir um lead-marca-passo no ventrículo direito sob orientação de raio-x use fórceps para isolar os músculos estenicleidomastoide e escala anterior e conectar o marca-passo ao chumbo.
Em seguida, implante um marca-passo entre os dois músculos. Em seguida, feche os dois músculos com 2-0 de seda. Para avaliar as alterações na função ventrículo esquerdo, isole a artéria femoral direita e a veia femoral no triângulo femoral, e calcule a artéria femoral direita com um angiocato.
Coloque um fio-guia na veia femoral através do angiocato e remova o angiocato. Cannulate uma bainha francesa de 12 na veia femoral sob a orientação do fio-guia e remova o fio-guia. Cannulate a artéria femoral direita com uma baanha de nove francesas como apenas demonstrado.
E insira um cateter de balão através da baia 12 francesa na veia cava interior sob orientação de raio-x. Calibrar um cateter de sete volumes de pressão francês em soro fisiológico isotônico com um processador de sinal de volume de pressão e inserir o cateter no ápice do ventrículo esquerdo através da nove bainha francesa sob orientação de raio-x. Suspenda a ventilação e use o processador de sinal de volume de pressão para medir o derivado de pressão máxima e pressão negativa do ventrículo esquerdo, pressão sistólica e pressões diastólicas finais.
Em seguida, reinicie a ventilação. Para indução de infarto do miocárdio, administre cinco miligramas por quilograma de amiodarona e 1,5 miligramas por quilograma de bolus lidocaína por via intravenosa durante uma hora para evitar arritmias ventriculares antes de calcular a artéria carótida direita com uma baá de oito francesas como demonstrado. Realize a angiografia coronária através de um cateter guia de seis baias francesas através da baia colocada guiada pela fluoroscopia do braço C padrão.
Ocluimento da artéria coronária circunflexa esquerda distal ao primeiro ramo marginal obtuso com inflação de cateter de dilatação de angioplastia transluminal percutânea sob orientação de raio-x. Carregue um mililitro de microesferas esponjas de 700 micrômetros misturados com sete mililitros de iohexol em uma seringa de 10 mililitros e injete a mistura através do cateter de balão para bloquear a artéria coronária circunflexa esquerda. Em seguida, esvazie o balão e realize um angiograma para confirmar a oclusão.
Oito semanas após a indução de infarto carga duas vezes 10 para o oitavo pluripotente pluripotente induzido por células-tronco mesenquimais em dois mililitros de soro fisiológico normal em uma seringa de cinco mililitros e esterilizar 10 centímetros ao redor da área de batida do ápice do animal experimental anestesiado. Use um retraínte para realizar uma toracotomia esquerda no espaço intercostal de quatro ou cinco e realize uma pericardiotomia para expor a parede lateral infartada. Quando as áreas infartadas se visualizam, realize de cinco a oito injeções intra miocárdia de aproximadamente 300 microliters de células por injeção antes de fechar o espaço intercostal com fio de ferro e fechar a camada muscular com suturas de seda 2-0 e os tecidos subcutâneos e camadas de pele com 2-0 suturas vicryl.
Para avaliar a indubitabilidade da taquiarritmia ventricular após a terapia celular, insira um cateter eletrofisiológico francês no ápice ventricular direito através da veia femoral e exiba as gravações intracardicascas com os leas de eletrocardiograma de superfície I, II e III no sistema de gravação eletrofisiológica a uma velocidade de 200 milímetros por segundo. Use um estimulador para fornecer uma largura de pulso de dois milissegundos em duas vezes o limiar diastólico e fornecer um trem de oito estímulos a um 200 milissegundos e um comprimento de ciclo de unidade de 300 milissegundos seguido por um ou dois estímulos extras prematuros. Em seguida, sequencialmente encurtou os intervalos de acoplamento até que o período refratário ventricular efetivo da arritmia seja induzido, observando a presença de uma taquiarritmia ventricular sustentada indutível.
Neste experimento representativo, o exame ecocardiográfico em série mostrou que a fração de ejeção ventrícculo esquerda diminuiu significativamente da linha de base, enquanto a dimensão terminante-diastólica do ventrículo esquerdo e a dimensão sistólica final aumentaram significativamente oito semanas após a indução do infarto do miocárdio. Em contraste, a fração de ejeção do ventrículo esquerdo aumentou significativamente e a dimensão sistólica final diminuiu notavelmente no grupo de transplante celular oito semanas após a administração. A relação de volume de pressão sistólica negativa e de pressão sistólica final diminuiu significativamente da linha de base em oito semanas após a indução do infarto do miocárdio, enquanto a administração intramocárida de células-tronco mesenquimais resultou em um aumento nessas funções.
A medição da espessura da parede infarto do ventrículo esquerdo em cinco a sete seções de um centímetro de espessura de cada animal revelou uma porcentagem do infarto do ventrículo esquerdo de aproximadamente 16% Não houve sobrevida celular ao redor do local da injeção na área de infarto oito semanas após o transplante. Mas um pequeno número de células-tronco injetadas sobreviventes eram visíveis na área periinfarto. Os incidentes de taquiarritmias ventriculares indutíveis sustentadas poderiam ser facilmente aumentados em animais com insuficiência cardíaca.
Note-se que o transplante de células-tronco não modificou significativamente o substrato do miocárdio subjacente para reduzir a suscetibilidade à taquiarritmia ventricular. Como o bloqueio da artéria coronária circunflexo esquerda pode induzir arritmia. Certifique-se de monitorar o ECG e usar imediatamente desfibrilador bifásico externo para restabelecer os seios conforme necessário.
Este método fornece um modelo animal de grande porte estável e reprodutível clinicamente relevante para testar a eficácia de terapias baseadas em células-tronco.
