このプロトコルは、小規模セル製造のための閉じた自動バッファ交換と濃度のためのソリューションを提供します。重要なことに、バッファー交換は、高い回収と濃縮物の非常に少量の配信で行うことができる。新規ユーザーは、すべての自動化手順に従うのに苦労する可能性があります。
これらのステップのプログラミングを練習し、中程度でテスト実行を行うことは、デバイスに慣れる良い方法です。バッファー交換を開始する前に、クラス2の層流ヘッドで、注射器と針の組み立てを使用して、500ミリリットルの生理食塩水袋から50ミリリットルの生理食塩水を除去します。このボリュームを20%ヒト血清アルブミンの50ミリリットルに置き換え、その培養容器から目的の細胞を収穫する。
カウント後、シリンジを使用してセルを転送バッグにロードし、Luerロックを使用して転送バッグを使い捨て処理キットに接続します。次に、以前に準備した洗浄バッファーの袋を、使い捨て加工キットに接続します。自動バッファ交換を設定するには、デバイスのグラフィックユーザーインターフェイスを開き、スタートボタンをクリックします。
新しいプロトコルを作成するには、[新規] をクリックし、[コントロール] をクリックして開閉するバルブ、遠心およびポンプ速度、ポンプ方向、およびアクション トリガを選択します。すべてのパラメータが設定されたら、[保存]をクリックします。接続されている適切なバッグをデバイスに掛け、単独使用処理キットを機械に置きます。
次に、接続ボタンをクリックして、保存されたプログラムをダウンロードします。再生ボタンが点灯すると、プロトコルを開始する準備が整います。自動バッファ交換を実行するには、転送バッグチューブの手動クランプを開き、[開始]をクリックしてバッファ交換プログラムを開始します。
オートメーションステップ6の終わりに、プロセスは現在空の袋の空気によって気泡センサーのトリガーのために一時停止します。バッグが空の場合は、次の手順に移動する次のボタンを押します。自動処理が完了したら、チューブクランプをすべて閉じて、デバイスのドアを開けます。
次に、デバイスから使い捨てキットを取り出し、シリンジを取り外して、後続の分析のために細胞を収集できるようにします。通常、流動化された細胞床は、この画像に示されるように表示され、細胞は真ん中に蓄積され、コーンの前方に向かって、細胞が蓄積しないチャンバーの先端の小さなスペース、および細胞ローディング入口内の目に見える開口部を持つ。流動セルベッドは、異なる粘度または密度にある新しいバッファーを導入する際に圧縮され得る。
死んだ細胞が小さく、軽く、流量を増やすことによってチャンバーから強制的に出すことができるので、高い流量が生細胞のために選択するために適用されるかもしれない。バッファ交換処理時間の自動化処理は、手動バッファ交換処理の処理よりも短い。この分析では、手動プロセスと自動化プロセスの間の回復率は、テストされた細胞の両方のタイプで類似しており、細胞の生存率はどちらのプロセスの影響も受けませんでした。
回収された細胞は、処理の種類に関係なく、同様の増殖速度、サイトカインを産生する能力、および表意体活動を示した。このプロトコルはガイドラインとしてのみ機能するため、ユーザーはセルの種類とバッファーに応じて流量と遠心速度をプログラミングする必要があることを覚えておくことが重要です。バッファー交換は、細胞培養の拡大または凍結保存および製剤に従い得る細胞製造における中間工程である。
目標は、プロセス全体を囲む方法を開発することです。カウンターフロー遠心分離は非常に汎用性の高いプラットフォームです。今後の研究では、死細胞除去や単核細胞分離などの細胞選択における応用を探る。
