ラットのポンに梗塞を確立するためのプロトコルを提供します。このポンチン梗塞ラットモデルは、容易に行われ、容易に再現でき、非常に成功したモデルであった。電気刺激は、視床のような他の脳領域で梗塞を作るために使用することができます。
このモデルを実行したい人は、実験の前にポンティンの自律性を学ぶべきです。手術前に、ラットの体重を量り、付随するテキストに記載されているように行動検査に従ってそれらの神経学的性能を評価する。麻酔の直前に加熱パッドを摂氏37度に予熱し、ステレオタキシックフレームのホルダーに頭蓋骨ドリルを取り付けます。
最初の麻酔ラットのペダル反射に対する応答の欠如を確認し、加熱パッド上の立体的な位置に立体フレームにラットを取り付けます。耳の棒を外耳道の上に置き、頭を固定し、注射の歪みを避けるために頭蓋骨を水平に保つよう注意する。動物の目に軟膏を塗布し、頭蓋骨から髪を取り除くためにマイクロシャバーを使用しています。
マーカーを使用して、両側側カンサスの線から後部フォンタネルの後ろに0.5センチメートルまで頭蓋骨の正線に沿って3センチメートルの線を引き、メスを使用してマークされた線に沿って正中線切開を行います。綿棒を使用して血液を除去し、皮膚の両側に外科テープを置いて頭蓋骨を露出させます。0.9%の塩化ナトリウムを浸した新しい綿棒を使用して、頭蓋骨から結合組織をそっと取り除き、ブレグマを見つけます。
細かい先端マーカーペンを使用して、ブレグマの中心点を原点として示し、ドリルを6ミリメートル前部後部、2ミリメートル内側横に配置する。ドリルを使用して、直径1ミリメートルの開頭術を慎重に行います。次に、ドリルを22ゲージプローブに絶縁シースで交換し、先端をシースの近位端から2ミリメートル上に置いた。
シートを脳に7ミリメートル挿入し、プローブの上部が脳の表面から9ミリメートル下になるまでシースに沿ってプローブを進めます。電極を電気刺激装置に接続し、アノードをプローブに接続します。次に、陰極をラットの耳に接続します。
次に、電気刺激装置をオンにし、単一のパルス幅を4,050ミリ秒、電圧を50ボルト、電流を4ミリアンペアに設定します。脳からデバイスを取り外す前に、刺激後5分間プローブを位置に残します。骨セメントで開頭術を覆い、4.0ポリアミド縫合糸フィラメントを使用して創傷を閉じる前にセメントを乾燥させます。
3つまたは4つのステッチの後、2-1-1標準的な外科結び目を結ぶ。その後、腹腔内にペニシリン250マイクロリットルでラットを注入し、動物をケージに戻す前に完全に目を覚ますまで15分ごとにラットを監視する。この分析では、6匹の動物が実証されたように手術を受け、6匹の動物がコントロールとして扱われた。
これらの画像の脳スライスは、グループごとに1ラットから導き出された。MRIスキャンは、梗塞がヒト患者の前部梗塞を模倣したポンに基づいて位置することを明らかにした。絶縁鞘が使用されたため、皮質、小脳、または中脳では梗塞は認められなかった。
拡散重み付け画像はまた、急性ポンチン梗塞を明らかにした。TTC染色は、手術後24時間の梗塞を確認するために使用した。予想通り、梗塞容積は対照群と比較して手術群において有意に高かった。
行動スコアは手術前後に測定した。対照群と比較して、ポンチン梗塞を有するラットは左に円を描いた。ロンガ、ベルダーソン、四肢の配置、ビームバランス、およびポンチン梗塞と対照群ラットとの暴言間の粘着除去体性感覚試験スコアに有意な差異が認められた。
特定の脳領域は、電気刺激によって破壊される予定です。
