自家血液の二重注射による巨大なポンチン出血

ラットに大量のポンチン出血を確立するためのプロトコルを提供します。このモデルは、確立が容易で、再現性があり、非常に成功しています。自己のラット法の蒸留注射は、脳領域のいずれかで出血を作るために使用することができます。

これらの技術を試してみたい人は、ステレオタキシックフレームを使用する方法を学び、ポンチン解剖学に精通する必要があります。まず、マウスの上に外科用ドレープを置くことから始めます。マークされた正中線に沿ってメスで切開を行います。

綿棒を使用して潜在的な血液を除去します。その後、頭皮のフラップの両側に鉗子を置き、頭蓋骨を露出させる。綿棒を0.9%生理布に浸し、頭蓋骨から結合組織を静かに取り除きます。

マーカー ペンを使用して、bregma の中心点を原点としてマークします。マイクロドリルを使用して開頭術を行い、慎重に進めます。終了したら、ステレオタックスフレームからマイクロドリルを取り外します。

100マイクロリットルのハミルトン注射器をステレオタックスホルダーに入れます。インジェクションポンプスイッチをオンにします。急速吸入ボタンをクリックします。

その後、ヘパリン溶液を100マイクロリットルに吸引し、完全に排出する。皮膚を消毒するために、根から先端まで全体の物語にクロルヘキシジンと75%アルコール外科スクラブを適用し、角質を柔らかくし、注射の成功率を高めるために尾静脈を拡張する。頭皮の鍼を1ミリリットルの注射器に取り付け、頭皮の鍼を尾端から3センチメートル離れた側面尾部静脈に挿入し、150マイクロリットルの血液を取ります。

1ミリリットルの注射器から頭皮の鍼を取り出し、血液をチューブに移します。血液凝固を防ぐために迅速に作業します。手術用手袋を交換します。

取り出しモードを選択します。体積を100マイクロリットルに設定し、速度を毎分200マイクロリットルに設定します。ランボタンをクリックし、ハミルトン注射器に100マイクロリットルの血液を吸い込む。

注入モードに切り替え、速度を毎分1マイクロリットルに設定します。先端が脳の表面から9.2ミリメートル下に達するまで注射器を進め、血液の最初の10マイクロリットルを注入する。実行ボタンをクリックします。

注射を停止し、血液がくも膜下腔に流れ込むのを防ぐために、注射器を20分間放置します。先端が脳の表面の下9ミリメートルに到着するまで注射器を引き込み、残りの血液が完全に注入されるまで、毎分1マイクロリットルの同じ速度で注射を再開する。血流を避けるために10分間、シリンジを置いたままにしておきます。

ゆっくりと脳から注射器を取り除く。その後、骨セメントを使用して開頭口を覆います。セメントが乾燥すると、創傷は4つのゼロポリアミド縫合糸フィラメントで縫合する。

縫製3つまたは4つのステッチの後に2つの11標準的な外科結び目を結ぶ。麻酔から完全に回復するまで15分ごとにラットを観察し、下に加熱パッドを置いて元のケージに戻します。ネズミに食料と水への無料アクセスを提供します。

コントロール30マイクロリットル、60マイクロリットル、および100マイクロリットルの血液注射には合計25匹の動物が使用された。行動検査は手術後1日目、3日目、7日目、14日目に行われた。ポンチン出血は、角膜反射や循環の減少のような神経学的欠陥を引き起こした。

100マイクロリットルの血液の注入はまた、ミオトニアを誘発した。MRIスキャンは手術後24時間行った。血液注射群では、出血は、池のバシラー部分のわずかに肥大なコアにISOを有する低強烈な縁として検出された。

注入量とともに出血量が増加した。ラットは手術後24時間14日で屠殺した。そして、2ミリメートルの厚いセクションが作られました。

注射部位を取り囲み、池の底部に分化する出血が検出された。100マイクロリットルの血液注射群では出血の周りにわずかな浮腫があった。一部のラットは手術の3日後に屠殺され、パラフィン切片はHE染色のために作られた。

結果は、血液注射群において、パラ出血帯に富んだ炎症細胞中に、ヘモグロビンが無傷の赤血球に含まれたままであることを示した。このプロトコルを試みるとき注入位置を覚えておくことを確認してください。この方法は、任意の特定の脳領域で出血を誘発するために使用することができる。