このプロトコルは、24時間の臓器保存時間と周術遠隔測定モニタリングを使用して、ブタの異所性腎臓自動移植モデルを確立するための重要な手順をすべて説明します。小動物モデルに関する元生体研究に対するこの大型動物自動移植モデルの主な利点は、外科的解剖学的および臨床現場との病態生理学的類似性である。大学病院RWTHアーヘンの私たちのチームは、手順を実証します.
一晩絶食成雌豚で適切なレベルの沈下を確認した後、鼠径部に3〜5センチメートルの切開を行い、360度の方法で大腿動脈を解剖する。11個のメスを使って動脈管を作り、テレメトリデバイスの動脈センサーを挿入します。左脇腹に皮下ポーチを作った後、テレメトリトランスポンダーを側面にトンネルし、トランスポンダーを3-Oポリプロピレン単一結び目縫合糸で筋肉筋膜に固定します。
次に、胸郭の左右に2つの小さな切開を行い、赤と白のECG電極を指定された場所にトンネルします。電極が固定されたら、テレメトリデータの登録を開始します。安定した信号取得時に、縫合糸とスプレーフィルムドレッシングで鼠径部切開部を閉じ、動物に適切なサイズのブタジャケットを置きます。
最初の手術の14日後、麻酔動物の右側にある頸部溝に4〜5センチメートルの切開を行い、皮下および筋肉組織を解剖してジャグラー静脈を露出させる。皮をむくシートインジャまたはセルディンガー法を使用して、頸部カテーテルを挿入します。5-0ポリプロピレン縫合糸でカテーテルを固定し、2つの層で切開を閉じます。
外科的消毒および生殖不能のドレープの後、中腹開術を行い腹部を開き、標準的な腹部レトラクタを使用して外科分野を露出させる。腹膜層を開き、単極性焼灼器、双極鉗子、および細かいはさみを使用して、接着組織から左腎臓および尿管を解剖する。その後、3-0ポリグラクチン縫合糸を使用して、腎臓のヒラムに少なくとも10センチメートル遠位の左尿管をリゲートし、分割する。
移植片腎臓を取り出すために、大動脈と大静脈に近い腎動脈および静脈を閉じるために血管クランプを使用する。そして、アサリの上の容器を切断します。その後、腎臓を後ろのテーブルチームに与え、5-0ポリプロピレン縫合糸を使用して腎動脈と腎静脈の切り株を閉じます。
検索直後に、標準的な14ゲージの末梢カテーテルを使用して腎動脈をカニュール化し、少なくとも500ミリリットルの氷冷器官保存液で腎臓を洗い流す。フラッシュ後、コンピュータ制御冷却回路を使用して、摂氏4度で24時間の目標冷たい虚血時間で臓器保存液に貯蔵するための無菌オルガンバッグに移植片を包む。血管クランプの2〜5分前に、1キログラム当たり100の国際単位を静脈内に注入し、その後、実証通りに対して右腎臓を除去し、中央値開腹術を再開する。
血管クランプの2〜5分前に、1キログラム当たり100の国際単位を静脈内に注入し、その後、実証したように対側右腎臓を除去する。保存された移植片腎臓を外科分野に入れ、平均動脈血圧と心拍数を使用して持続的な注入としてノルエピネフリンの1キログラムあたり0.1〜1マイクログラムの投与を開始し、効率を監視する。腎静脈のエンドツーエンド吻合のために、5-0ポリプロピレンを使用して2つのコーナーステッチを配置し、連続的に後壁を縫合します。
後方壁を完成させた後、頭蓋コーナーステッチの一端を使用して頭蓋頭蓋方向に前壁を縫合し、ヘパリナイズ生理食塩水のミリリットル当たり100国際単位で静脈を洗い流します。腎動脈のエンドツーエンド吻合のために、示されているように連続的な方法で後壁を縫合するパラシュート技術を使用する前に6-0ポリプロピレン頭蓋コーナーステッチを使用してください。二重武装6-0ポリプロピレン縫合の他端と前壁を縫合し、ヘパリナイズ生理食塩水のミリリットル当たり100国際単位で動脈を洗い流す。
吻合が完了した後、尾骨角の2本の糸を結び、静脈血管および動脈クランプを順次開けて腎臓の再灌流を可能にする。再灌流後、5ミリリットルのパパベリンを腎動脈の外壁に局所的に投与し、20%グルコース溶液を1回の80ミリグラム用量のフルロセミドで静脈内投与する。次に、12のフランスの小児尿カテーテルを腹壁と皮膚を通り抜け、合字を使用してカテーテルを尿管に固定します。
腎臓の上に腹膜層を閉じて、移植片の転位と血管吻合のキンキングを防ぎます。そして、実証したように4層の腹部を閉じます。最後に、色ドップラー超音波を使用して、完全にリカンベント動物を住宅施設に戻す前に、腎臓移植片の十分な動脈および静脈灌流を確保する。
この代表的な5つの豚の整形性腎臓自動移植実験では、観察期間中に登録された十分なテレメトリ信号を有する各動物におけるトランスポンダー移植および自動移植手順が成功した。腹部閉鎖後、色ドップラー超音波は、すべての症例において腎臓の満足のいく動脈および静脈灌流を明らかにした。血清カリウムおよびクレアチン値は術後3~4日目にピークを迎え、その後徐々に回復を示した。
血液pHは正常範囲内にとどまり、尿の出力は術後の最初の4日間にわたって正常な値に回復した。このプロトコルは、臨床的に重要な大型動物モデルにおける臓器保存技術または元生体内または生体内療法の効果に関する様々な質問に答えるために使用することができる。
