Этот протокол описывает все ключевые шаги для успешного создания свиной ортопедической модели автоматической трансплантации почек с использованием времени сохранения органов в течение 24 часов и пери-оперативного телеметрического мониторинга. Основным преимуществом этой крупной модели автоматической трансплантации животных по сравнению с исследованиями ex-vivo на моделях мелких животных являются хирургические анатомические и патофизиологические сходства с клиническими установками. Наша команда в университетской больнице RWTH Aachen будет демонстрировать процедуры.
После подтверждения соответствующего уровня седии в ночь постилась взрослая самка свиньи, сделать три-пять сантиметров разрез в паху и вскрыть бедренную артерию в 360 градусов моды. Используйте скальпель номер 11, чтобы сделать артериотомию и вставить артериальный датчик телеметрии устройства. Сделав подкожный мешок на левом фланге, туннель телеметрии транспондера на фланг и исправить транспондер к мышечной фасции с 3-O полипропилена одного узла шва.
Затем сделайте два небольших разреза на левой и правой стороне грудной клетки и туннель красных и белых электродов ЭКГ в назначенное место. Когда электроды будут защищены, начать регистрацию телеметрии данных. После стабильного приобретения сигнала, закрыть разрез паха с швами и спрей пленка соусом и место подходящего размера свиной куртке на животное.
Через 14 дней после первой операции сделайте разрез на четыре-пять сантиметров в яремной канавке на правой стороне обезболивающего животного и рассекните подкожно-мышечную ткань, чтобы разоблачить жонглерную вену. Используйте пилинг от листа введения или метод Seldinger вставить яремного катетера. Закрепить катетер полипропиленовым швом 5-0 и закрыть разрез на два слоя.
После хирургической дезинфекции и стерильной драпировки, выполнить средний лапаротомии, чтобы открыть живот и использовать стандартный брюшной втягивающий разоблачить хирургическое поле. Откройте брюшной слой и используйте монополярную прижигать, биполярные миппы и тонкие ножницы, чтобы вскрыть левую почку и мочеточник из любой ткани адепта. Затем используйте 3-0 Polyglactin шов для ligate и разделить левый мочеточник по крайней мере 10 сантиметров дистальной почки.
Для извлечения трансплантата почки, использовать сосудистые зажимы, чтобы закрыть почечную артерию и вену близко к аорты и вены кавы. И вырезать сосуды над моллюсками. Затем дайте почку на задний стол команды для дополнительной подготовки и использовать 5-0 полипропиленовый шов, чтобы закрыть пень почечной артерии и почечной вены.
Сразу же после извлечения, используйте стандартный 14 калибровочный периферический катетер, чтобы cannulate почечной артерии и промыть почку, по крайней мере 500 миллилитров ледяного раствора сохранения органов. После промывки, оберните трансплантат в стерильные мешки органов для хранения в растворе сохранения органов с целевой холодной ишемической времени 24 часов при четырех градусах по Цельсию с помощью компьютера контролируемой цепи охлаждения. За две-пять минут до зажима сосудов внутривенно вводят 100 международных единиц на килограмм натриума гепарина, а затем удаляют контралатерацию правой почки, как это было продемонстрировано, и вновь открывают медианную лапаротомию.
За две-пять минут до зажима сосудов внутривенно вводят 100 международных единиц на килограмм натриума гепарина и впоследствии удаляют контралатерацию правой почки, как это было продемонстрировано. Поместите сохраненную трансплантатную почку в хирургическое поле и инициируете администрирование от 0,1 до 1 микрограмма на килограмм в минуту норадреналина в качестве непрерывного вливания с использованием среднего артериального кровяного давления и сердечного ритма для контроля эффективности. Для эндо-энд-анатомоза почечной вены, используйте 5-0 полипропилена, чтобы поместить два угловых стежка и швы задней стенки в непрерывной моды.
После завершения задней стенки, используйте один конец черепного углового стежка, чтобы швы передней стены в craniocaudal направлении и промыть вену с 100 международных единиц на миллилитр гепаринизированного солевого раствора. Для конца-к-конца анатомоза почечной артерии, используйте 6-0 полипропилен черепный угол стежок перед использованием парашютной техники, чтобы шв задней стенки в непрерывной моды, как попродемонстрировано. Шов передней стенки с другим концом двойного вооруженного 6-0 полипропиленового шва и промыть артерию с 100 международных единиц на миллилитр гепаринизированного солевого раствора.
После завершения анатомоза свяжите две нити в хвостовом углу и последовательно откройте венозные сосудистые и артериальные зажимы, чтобы дать возможность реперфузии почек. После реперфузии, местно ввисят пять миллилитров папаверина к внешней стенке почечной артерии и внутривенно вводят 250 миллилитров 20%-глюкозного раствора в одной 80-миллиграммовой дозе фуросемида. Далее, пройти 12 французский детский катетер мочи через брюшную стенку и кожу и использовать лигатуры для обеспечения катетер мочеточника.
Закройте брюшной слой над почкой, чтобы предотвратить вывих трансплантата и излом сосудистого анатомоза. И закройте живот в четыре слоя, как попродемонстрировано. Наконец, используйте цвет Доплер ультразвук для обеспечения адекватной артериальной и венозной перфузии трансплантата почки, прежде чем вернуть полностью лежачих животных в жилой комплекс.
В этом репрезентативном наборе из пяти экспериментов по аутоплантологии свиной ортопедической почки, транспондерная имплантация и процедуры автоматической трансплантации были успешными в каждом животном с достаточными телеметрическими сигналами, зарегистрированными в течение периода наблюдения. После закрытия брюшной полости, цвет Доплер УЗИ выявил удовлетворительные артериальные и венозные перфузии почек во всех случаях. Значения калия и креатина в сыворотке крови достигли своего пика в послеоперационные дни в три-четыре и показали постепенное восстановление после этого.
РН крови оставался в пределах нормы, а выход мочи восстанавливался до нормальных значений в течение первых четырех послеоперационных дней. Этот протокол может быть использован для ответа на различные вопросы о влиянии методов сохранения органов или ex-vivo или in-vivo терапии в клинически значимой модели крупных животных.
