Questo protocollo descrive tutti i passaggi chiave per stabilire con successo un modello di autotras trapianto di rene ortotopico suino utilizzando un tempo di conservazione degli organi di 24 ore e un monitoraggio telemetrico perioperatorio. Il principale vantaggio di questo grande modello di auto-trapianto animale rispetto agli studi ex-vivo su piccoli modelli animali sono le somiglianze anatomiche chirurgiche e fisiopatofiche con l'ambiente clinico. Il nostro team dell'ospedale universitario RWTH Aquisgrana dirà le procedure.
Dopo aver confermato il livello appropriato di sedazione in un maiale femmina adulto digiunato durante la notte, fai un'incisione da tre a cinque centimetri nell'inguine e seziona l'arteria femorale in modo a 360 gradi. Utilizzare un bisturi numero 11 per creare un'arteriotomia e inserire il sensore arterioso del dispositivo di telemetria. Dopo aver fatto una busta sottocutanea nel fianco sinistro, tunnelare il transponder di telemetria nel fianco e fissare il transponder alla fascia muscolare con una sutura a 3-O in polipropilene a nodo singolo.
Successivamente, fare due piccole incisioni sul lato sinistro e destro del torace e tunnelare gli elettrodi ECG rossi e bianchi nella loro posizione designata. Una volta fissati gli elettrodi, iniziare la registrazione dei dati di telemetria. Al momento dell'acquisizione stabile del segnale, chiudere l'incisione dell'inguine con suture e medicazione a film spray e posizionare una giacca suina di dimensioni adeguate sull'animale.
14 giorni dopo il primo intervento chirurgico, fare un'incisione da quattro a cinque centimetri nel solco giugulare sul lato destro dell'animale anestetizzato e sezionare il tessuto sottocutaneo e muscolare per esporre la vena giocoliera. Utilizzare un introducer di foglio pelato o il metodo Seldinger per inserire il catetere giugulare. Fissare il catetere con una sutura in polipropilene 5-0 e chiudere l'incisione in due strati.
Dopo la disinfezione chirurgica e il drappeggio sterile, eseguire una laparotomia media per aprire l'addome e utilizzare un riavvolgitore addominale standard per esporre il campo chirurgico. Aprire lo strato peritoneale e utilizzare un cautery monopolare, forcelle bipolari e forbici fini per sezionare il rene sinistro e l'uretero da qualsiasi tessuto aderente. Quindi utilizzare una sutura di poliglactina 3-0 per legare e dividere l'uretro sinistro almeno 10 centimetri distale all'hilum renale.
Per recuperare il rene dell'innesto, utilizzare morsetti vascolari per chiudere l'arteria renale e la vena vicino all'aorta e alla vena cava. E tagliare i vasi sopra le vongole. Quindi dare il rene alla squadra del tavolo posteriore per una preparazione aggiuntiva e utilizzare una sutura in polipropilene 5-0 per chiudere il ceppo dell'arteria renale e la vena renale.
Immediatamente dopo il recupero, utilizzare un catetere periferico standard calibro 14 per cannulare l'arteria renale e lavare il rene con almeno 500 millilitri di soluzione di conservazione degli organi ghiacciati. Dopo lo scarico, avvolgere l'innesto in sacchetti di organi sterili per la conservazione in soluzione di conservazione degli organi con un tempo ischemico freddo target di 24 ore a quattro gradi Celsius utilizzando un circuito di raffreddamento controllato dal computer. Due o cinque minuti prima del bloccaggio vascolare, iniettare per via endovenosa 100 unità internazionali per chilogrammo di natrium eparina e successivamente rimuovere il rene destro contralaterale come dimostrato e riaprire la laparotomia mediana.
Da due a cinque minuti prima del bloccaggio vascolare, iniettare per via endovenosa 100 unità internazionali per chilogrammo di eparina natrium e successivamente rimuovere il rene destro contralaterale come dimostrato. Posizionare il rene di innesto conservato nel campo chirurgico e iniziare la somministrazione da 0,1 a 1 microgrammo per chilogrammo al minuto di noradrenalina come infusione continua utilizzando la pressione arteriosa media e la frequenza cardiaca per monitorare l'efficienza. Per l'anastomosi end-to-end della vena renale, utilizzare il polipropilene 5-0 per posizionare due punti d'angolo e suturare la parete posteriore in modo continuo.
Dopo aver completato la parete posteriore, utilizzare un'estremità del punto d'angolo cranica per suturare la parete anteriore in direzione craniocaudale e sciacquare la vena con un'unità internazionale 100 per millilitro di soluzione salina eparinizzata. Per l'anastomosi end-to-end dell'arteria renale, utilizzare un punto d'angolo cranico in polipropilene 6-0 prima di utilizzare la tecnica del paracadute per suturare la parete posteriore in modo continuo come dimostrato. Suturare la parete frontale con l'altra estremità della sutura in polipropilene 6-0 a doppio braccio e sciacquare l'arteria con 100 unità internazionali per millilitro di soluzione salina eparinizzata.
Dopo il completamento dell'anastomosi, legare i due fili all'angolo caudale e aprire in sequenza le pinze vascolari e arteriose venose per consentire la riperfusione del rene. Dopo la riperfusione, somministrare topicamente cinque millilitri di papaverina alla parete esterna dell'arteria renale e somministrare per via endovenosa 250 millilitri di soluzione di glucosio al 20% in una singola dose di 80 milligrammi di Furosemide. Successivamente, passare un catetere di urina pediatrico francese attraverso la parete addominale e la pelle e utilizzare le legature per fissare il catetere all'uretro.
Chiudere lo strato peritoneale sul rene per evitare la lussazione dell'innesto e l'innesto dell'anastomosi vascolare. E chiudere l'addome in quattro strati come dimostrato. Infine, utilizzare ultrasuoni Doppler a colori per garantire un'adeguata perfusione arteriosa e venosa dell'innesto renale prima di restituire l'animale completamente reclinato alla struttura abitativa.
In questo set rappresentativo di cinque esperimenti di autotras trapianto di rene ortotopico suino, le procedure di impianto e autotrasfusione del transponder hanno avuto successo in ogni animale con sufficienti segnali di telemetria registrati durante il periodo di osservazione. Dopo la chiusura addominale, l'ecografia Doppler a colori ha rivelato una perfusione arteriosa e venosa soddisfacente del rene in tutti i casi. I valori sierico di potassio e creatina hanno raggiunto il picco nei giorni postoperatori da tre a quattro e hanno mostrato un graduale recupero in seguito.
Il pH del sangue è rimasto entro il range normale e la produzione di urina è stata recuperata a valori normali nei primi quattro giorni postoperatori. Questo protocollo può essere utilizzato per rispondere a varie domande sugli effetti delle tecniche di conservazione degli organi o delle terapie ex-vivo o in vivo in un modello animale di grandi dimensioni clinicamente significativo.
