Bu protokol, 24 saatlik organ koruma süresi ve perioperatif telemetrik izleme kullanarak bir domuz ortopik böbrek ototransplantasyon modelini başarıyla oluşturmak için atılan tüm önemli adımları açıklamaktadır. Bu büyük hayvan oto-transplantasyon modelinin küçük hayvan modelleri üzerinde yapılan eski vivo çalışmalara göre en büyük avantajı cerrahi anatomik ve patolojik ortama patofizyolojik benzerliklerdir. Üniversite hastanesi RWTH Aachen'daki ekibimiz prosedürleri sergileyecek.
Bir gecede oruç yetişkin dişi domuz sedasyon uygun düzeyde doğruladıktan sonra, kasık bir 3-5 santimetre kesi yapmak ve 360 derece moda femoral arter diseksiyon. Arteriyotomi yapmak ve telemetri cihazının arteriyel sensör ünü yerleştirmek için 11 sayı neşter kullanın. Sol kanatta bir deri altı kese yaptıktan sonra, telemetri transponder'ı yan tarafa geçirin ve transponder'ı 3-O polipropilen tek düğüm sütürle kas fasyasına sabitle.
Daha sonra, toraksın sol ve sağ tarafında iki küçük kesi ler yapın ve kırmızı ve beyaz EKG elektrotlarını belirlenen konuma tünel e-tünel. Elektrotlar emniyete alındıklarında, telemetri verilerinin kaydına başlayın. Kararlı sinyal alımı üzerine, dikiş ve sprey film pansuman ile kasık kesi kapatın ve hayvan üzerine uygun büyüklükte bir domuz ceket yerleştirin.
İlk ameliyattan 14 gün sonra, anestezili hayvanın sağ tarafındaki juguler olukta 4-5 santimetrelik bir kesi yapın ve hokkabaz damarını ortaya çıkarmak için deri altı ve kas dokusunu inceleyin. Juguler kateteri takmak için bir peel away sheet introducer veya Seldinger yöntemini kullanın. Kateteri 5-0 polipropilen dikişle sabitle ve kesiyi iki katmanhalinde kapatın.
Cerrahi dezenfeksiyon ve steril draping sonrasında, karın açmak için orta laparotomi yapmak ve cerrahi alanı ortaya çıkarmak için standart bir abdominal retraktör kullanın. Periton tabakasını açın ve herhangi bir yapışık dokudan sol böbrek ve üreter incelemek için monopolar bir katutery, bipolar forceps ve ince makas kullanın. Sonra ligate ve böbrek hilum için en az 10 santimetre distal sol üreter bölmek için bir 3-0 Polyglactin sütür kullanın.
Greft böbrek almak için, aort ve vena kava yakın böbrek arter ve ven kapatmak için vasküler kelepçeler kullanın. Ve istiridyelerin üzerindeki damarları kes. Sonra ek hazırlık için arka masa ekibine böbrek vermek ve böbrek arter ve renal ven kütüğü kapatmak için 5-0 polipropilen sütür kullanın.
Aldıktan hemen sonra, böbrek arter kanülasyon ve buz gibi organ koruma çözeltisi en az 500 mililitre ile böbrek floş standart bir 14 gauge periferik kateter kullanın. Floş sonra, bir bilgisayar kontrollü soğutma devresi kullanarak dört derece santigrat bir hedef soğuk iskemik süresi ile organ koruma çözeltisi depolama için steril organ torbaları içinde greft sarın. Vasküler kenetlenmeden 2-5 dakika önce, intravenöz olarak natrium heparin kilogram başına 100 uluslararası birim enjekte ve daha sonra gösterildiği gibi kontralateral sağ böbrek kaldırmak ve medyan laparotomi yeniden açın.
Vasküler kenetlenmeden 2-5 dakika önce, intravenöz olarak natrium heparin kilogram başına 100 uluslararası birim enjekte ve daha sonra gösterildiği gibi kontralateral sağ böbrek kaldırmak. Cerrahi alana korunmuş greft böbrek yerleştirin ve verimliliği izlemek için ortalama arteriyel kan basıncı ve kalp hızı kullanarak sürekli infüzyon olarak norepinefrin dakika başına dakikada 0,1 ila 1 mikrogram uygulanması başlatmak. Renal ven uçtan uca anastomoz için, iki köşe dikiş yerleştirmek ve sürekli bir şekilde arka duvar dikiş 5-0 polipropilen kullanın.
Arka duvarı tamamladıktan sonra, cranial köşe dikişi bir ucunu kullanarak ön duvarı kraniyoaudal yönde dikin ve damarı mililitre başına 100 uluslararası bir ünite yle temizler. Renal arterin uçtan uca anastomozu için, arka duvarı sürekli olarak dikmek için paraşüt tekniğini kullanmadan önce 6-0 polipropilen kranial köşe dikişi kullanın. Çift silahlı 6-0 polipropilen sütür diğer ucu ile ön duvar dikiş ve Heparinized tuzlu çözelti mililitre başına 100 uluslararası birimleri ile arter floş.
Anastomoz tamamlandıktan sonra, kaudal köşesinde iki konuları kravat ve sırayla venöz vasküler ve arteriyel kelepçeler böbrek reperfüzyon sağlamak için açın. Reperfüzyonu takiben, topikal renal arterin dış duvarına papaverine beş mililitre yönetmek ve intravenöz furosemid tek bir 80 miligram dozda% 20 glikoz çözeltisi 250 mililitre uygulayın. Daha sonra, karın duvarı ve deri yoluyla bir 12 Fransız pediatrik idrar kateter geçmek ve üreter için kateter güvenli ligatürler kullanın.
Greftin çıkışını ve vasküler anastomozun bükmesini önlemek için böbrek üzerindeki periton tabakasını kapatın. Ve gösterildiği gibi dört tabaka halinde karın kapatın. Son olarak, konut tesisine tam recumbent hayvan dönmeden önce böbrek greftyeterli arteriyel ve venöz perfüzyon sağlamak için renk Doppler ultrason kullanın.
Beş adet domuz ortopik böbrek ototransplantasyonu deneylerinden oluşan bu temsilci setinde, gözlem süresi boyunca yeterli telemetri sinyali ile her hayvanda transponder implantasyonu ve ototransplantasyon işlemleri başarılı olmuştur. Karın kapanmasının ardından renkli Doppler ultrasonunda tüm olgularda böbreğin tatmin edici arteriyel ve venöz perfüzyonu saptandı. Serum potasyum ve kreatin değerleri ameliyat sonrası günde 3-4 gün zirveye ulaştı ve sonrasında kademeli iyileşme gösterdi.
Kan pH normal aralıkta kaldı ve idrar çıkışı ilk dört postoperatif gün boyunca normal değerlere geri kurtarıldı. Bu protokol, klinik olarak önemli büyük bir hayvan modelinde organ koruma tekniklerinin veya ex-vivo veya in-vivo terapilerin etkileri hakkında çeşitli soruları yanıtlamak için kullanılabilir.
