このプロトコルは、げっ歯類の非外傷性脳室内出血後の頭蓋内圧、平均動脈圧、および脳灌流圧を測定する方法を説明しています。頭蓋内圧と平均動脈圧は、ラットの皮質と大腿動脈にそれぞれ挿入された光ファイバーセンサーで正確かつ確実に測定できます。ここで説明する技術は、脳室内出血の患者が侵襲的な頭蓋内圧モニタリングを必要とする場合に臨床現場に変換されます。
この研究の目的は、脳室内IVH後のICP、MAP、およびCCPを客観的にモニタリングするIVH動物モデルを確立し、著者らがこれを将来の実験にさらに適用できるようにすることでした。主な苦労には、光ファイバーセンサーが小さいため、精度が含まれる場合があります。大腿動脈解離はまた、一部の人、特に顕微手術のスキルで使用されていない人にとって課題をもたらす可能性があります。
ラットに麻酔をかけた後、直腸体温計を挿入して温度を継続的に監視します。頭と大腿部の髪を切り取り、手術前にベタジンと70%アルコールの3つの交互のスクラブで皮膚を準備します。ラットを人工呼吸器から一時的に取り外し、10ミリリットルの注射器に接続されたPE-50チューブで分泌物を吸引することにより、蓄積した呼吸器分泌物を吸引します。
滅菌人工涙液眼軟膏で目を保護します。頭皮切開の前に、局所ブピバカインを皮膚と皮下組織に注射します。ラットを定位フレームの腹臥位に置き、耳をバーにします。
15枚の刃のメスで正中線に沿って1.5センチの頭皮を切開します。止血のためにガーゼで穏やかな圧力をかけます。滅菌綿チップアプリケーターを使用して、ブレグマのランドマークが見えるまで骨膜を頭蓋骨から分離します。
定位固定装置を使用してブレグマを見つけてマークアウトし、ブレグマの外側1.4ミリメートルと負0.9ミリメートル後方の2つの両側バリ穴の位置をマークします。ハンドヘルドドリルを使用して、右半球と左半球にこれらの2つの小さな頭蓋バリ穴を作成します。余分な骨チップを滅菌乳酸リンゲル溶液で灌漑します。
右半球で、22ゲージのガイドカニューレをバリ穴の高さに配置し、28ゲージの針をカニューレを通して右側脳室の深さまで挿入して脳室内出血を引き起こします。光ファイバ圧力センサーを読み出しユニットに接続します。読み出しユニットの電源を入れ、選択したユニットが水銀柱ミリメートル単位であることを確認します。
次に、読み出しユニットがゼロを読み出して使用できるようになるまで、乳酸リンガー溶液を入れた小さなビーカーに先端を沈めてセンサーをプライミングします。左半球で、ICPをリアルタイムで監視するために、圧力センサーを皮質に2〜3ミリメートルの深さまでそっと挿入します。ICPモニターを挿入した後、ラットの下部胴体を回して、左大腿部と鼠径部に簡単にアクセスできるようにします。
滅菌製剤と局所ブピバカイン投与後、15枚刃メスで後肢を1.5センチの皮膚切開を行います。左大腿動脈を止血剤で表面的に解剖し、次に顕微鏡下で細かい先端を持つ鉗子を使用してより深い層を解剖します。隣接する動脈の位置を特定するのに役立つ濃い青色の大腿静脈を特定します。
3-0シルク縫合糸を使用して遠位大腿動脈を結び、大腿動脈の近位部分に一時的な金属クリップを置きます。読み出しユニットに接続された2番目の光ファイバー圧力センサーをすでにプライミングします。圧力センサーをPE-50チューブに挿入し、PE-50チューブをTuohy Borstに挿入して閉じます。
Tuohy Borstを、一方の端に1ミリメートルのシリンジを接続し、もう一方の端にPE-50チューブを備えた22ゲージの針に接続された3方向活栓に接続します。顕微鏡下で、マイクロハサミで2ミリメートルの大腿動脈切開を行い、残りのセットアップに接続されたPE-50チューブでそれをカニューレ挿入します。1ミリの注射器で500マイクロリットルの血液を吸引し、三方活栓を回して圧力センサーにMAPを読み取らせます。
PE-50チューブに接続された28ゲージの脳室内針を、IVH動物用の吸引血液とビヒクル対照動物用の乳酸リンガーズでプライミングします。次に、この針をガイドカニューレに右側脳室の深さまで挿入します。毎分100マイクロリットルの速度を使用して、親指で1ミリメートルの注射器をポンピングすることにより、血液または200マイクロリットルの滅菌乳酸リンゲル溶液を右側脳室に注入します。
ICP、動脈血圧、直腸温を監視および記録します。注入後の ICP 値と MAP 値を監視および記録します。脳室内注入が完了したら、大腿動脈に挿入した圧力センサーが入ったPE-50チューブを引き出し、出血を防ぐために一時的なクリップを大腿動脈に当てます。
3-0シルク縫合糸を使用して大腿動脈の近位部分を結び、3-0シルクを使用して中断された方法で大腿骨切開を閉じます。ICPモニターの脳室内針でガイドカニューレを取り外します。バリ穴を骨ワックスで塞ぎます。
そして、3-0シルク縫合糸で頭蓋切開を中断して閉じます。局所ブピバカインを切開部に塗布し、カルプロフェン1キログラムあたり0.5ミリグラムを注射する。動物が胸骨横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、動物を放置しないでください。
ラットが監督下で手術後に完全に回復し、回復後に餌と水に自由にアクセスできるホームケージに戻します。偽群を除くと、ICPはIVHおよびビヒクル対照群の脳室内注射中に有意に増加した。ICPは、車両制御と比較してIVHグループで高かった。
その後、ICPは急速に減少し、これらの動物群の脳室内注射後5分以内に正常化しました。.MAPは処置を通して類似したままであったが、CPPは血液または乳酸リンゲル溶液のいずれかの脳室内注射中に減少したことが観察された。手術の重要なステップには、正しい位置とバリ穴の穴あけと大腿動脈切開が含まれます。
センサーが圧力変化を正確に読み取る仕事を果たすように、上記の手順に厳密に従う必要があります。
