ラットモデルにおける実験的くも膜下出血を誘発するための自己血の交叉前単回注射

くも膜下出血のこのモデルは、病態生理学的メカニズムとその結果をよりよく理解するのに役立ちます。これはうまくいけば、治療法を生み出し、苦しんでいる患者の病気の負担を減らすでしょう。この技術の主な利点は、一定量の血液が注入されるため、再現性が高いことです。

さらに、それは重要なパラメータにおいてヒトくも膜下出血に似ています。ICPプローブを作成するには、20ミリメートルのポリエチレンチューブの一端を燃やし、円形のプレートを作り、内腔を開いたままにします。次に、10ミリメートルのシリコンチューブをポリエチレンチューブの端に接続する前に、ポリエチレンチューブの上に1ミリメートルのシリコンチューブリングを滑り込ませます。

次に、スプレイグドーリーラットを麻酔、挿管、カテーテル挿入してから、定位固定装置フレームに入れます。局所麻酔の投与後、正中線の針穿刺から尾側に8ミリメートルの皮膚切開を行います。解剖顕微鏡下で、すべての筋肉を鈍く層状に解剖して、大西洋後頭膜を特定します。

次に、アームリトラクターを使用して首の筋肉組織を拘束し、必要に応じてリトラクターを尾側に置きます。滅菌ICPプローブがICPトランスデューサに接続されていることを確認した後、ICPプローブを生理食塩水で洗い流し、プローブに気泡がないことを確認します。23ゲージの針を使用して、大西洋後頭膜を切開し、膜を通してICPプローブを穏やかに同軸するための穴を開けます。

プローブを軽く引いて、水銀柱0〜5ミリメートルの範囲の脈動曲線を示していることを確認します。そうでない場合は、プローブを取り外し、トランスデューサーへの接続を再確認して、ルーメンを流れる流れを確認します。大西洋後頭膜がプローブを包み込む領域に、2滴の組織接着剤を塗布します。

次に、1ミリメートルのシリコンチューブをメンブレンに向かって前方に動かしてから、ICPプローブの変位のリスクを最小限に抑えるために追加の接着剤を塗布します。ICPプローブが接着されたら、リトラクターを取り外します。次に、非吸収性モノフィラメント4-0縫合糸を使用して、切開部の尾端に1本の水平マットレス縫合糸を配置し、橈側皮端に1本の単純な中断縫合糸を配置する。

レーザードップラープローブを配置するには、目のすぐ前から正中線を尾側に15ミリメートル切開します。鉗子で結合組織と筋肉を取り除いた後、滅菌綿棒の端をルージンとして使用して、ブレグマと冠状縫合糸を特定します。武装リトラクターを配置した後、25ゲージの脊髄針を脳定位固定装置フレームに正確に置き、位置をメモします。

次に、ブレグマから針を外します。フレームを前方に6.5ミリメートル動かします。次に、正中線の針を交換して、穴あけの側面をマークします。

硬膜が骨の下に特定されるまでドリルします。まっすぐな鉗子を使用して、骨片をそっと取り除きます。次に、空洞を骨ワックスで満たします。

次に、ブレグマの右側に3〜4ミリメートルの横方向、レーザードップラーの冠状縫合糸のすぐ前に、別の穴を開けます。硬膜を貫通しないように注意してください。レーザードップラーが血流を測定できる血管を探します。

レーザードップラーを配置し、値を確認します。最小値は 100 フラックス単位です。顕微鏡を取り外した後も値が許容できる場合は、接着剤を1滴加えてプローブを固定します。

値が80フラックス単位を超えているかどうかを再確認してください。くも膜下出血を誘発するには、頭蓋骨の基部に抵抗が感じられるまで、半球間の正中線の頭蓋骨に針をそっと挿入します。針を1ミリメートル引っ込めて、視交叉のすぐ前方に正しく配置されるようにします。

血液を注入するときに最も均質な結果を確実にするために、針の先端が右を向くように針を時計回りに90度回します。次に、小剣を取り外します。15分間の平衡化後、麻酔レベルを調整して、水銀柱80〜100ミリメートルの範囲の平均動脈血圧を取得します。

次に、血液ガス分析を実行して、pH、二酸化炭素分圧、酸素分圧が生理学的パラメータ内にあることを確認します。次に、鈍い23ゲージの針を備えた1ミリリットルの注射器を使用して、尾部カテーテルから500マイクロリットルの血液を採取します。空気の注入を避けるために、脊髄針腔のデッドスペースを血液で満たします。

シリンジ内の血液量を300マイクロリットルに調整した後、シリンジを脊髄針に接続します。次に、注射器の周りをしっかりとつかみ、平均動脈圧を超えるように手動で血液を注入します。脳内圧の急激な上昇と脳血流の急降下を同時に観察します。

くも膜下出血の誘発から30分後、針とレーザードップラープローブを取り外します。そして空洞を骨ワックスで満たします。非吸収性モノフィラメント4-0縫合糸を使用して、2本の水平マットレス縫合糸で切開部を閉じます。

ICPプローブを槽マグナへの注入に使用するには、シリコンチューブを取り外し、ピンポートアダプターをポリエチレンチューブに挿入します。動物が起きている間に髄腔内投与を行うには、ピンポートインジェクターを精密注射器に置きます。次に、ピンポートアダプターを介して治療を行います。

髄腔内投与を行う必要がない場合は、単純な中断された縫合糸を切断します。次に、ハサミを使用してICPプローブをできるだけ短くし、脳脊髄液漏れを防ぐために端を接着します。非吸収性モノフィラメント4-0縫合糸で切開部を閉じます。

回転極試験を用いた肉眼的感覚運動機能の評価では、実験的にくも膜下出血を誘発したラットは、偽の動物と比較して、手術後24時間および48時間で有意に悪化した。エンドセリン-1受容体ファミリーのアゴニストであるエンドセリン-1に対する感受性は、実験ラットの脳底動脈および中大脳動脈におけるくも膜下出血の2日後に、偽対照と比較して有意に増加した。実験ラットの両方の動脈はまた、5-ヒドロキシトリプタミン受容体ファミリーのアゴニストである5-カルボキシアミドトリプタミンに対する感受性の同様の増加を示した。

手順に続いて、神経行動学的検査、および免疫組織化学、PCR、ウェスタンブロッティング分析装置などの組織分析を実行して、結果とメカニズムを分析できます。