このプロトコルは、マウスに最大10週間慢性腰痛を誘発する非侵襲的な方法を概説しており、最小限のトレーニングで迅速かつ確実に実行できます。このテクニックの最も難しい側面は、靭帯を注入することと筋肉を注入することがどのように感じるかを認識することです。接触時の抵抗感は靭帯注入の兆候です。
抵抗がないということは、針が筋肉や腹腔内にある可能性があることを意味します。まず、滅菌した平らな面にマウスを置きます。次に、手術装置の隣に温熱パッド回収ステーションを設置し、注射後すぐにマウスを移植します。
次に、ウロキナーゼとハミルトンシリンジを準備します。マウスが麻酔下で過ごす時間を最小限に抑えるために、事前に溶液を描画します。マウスに麻酔をかけた後、2本の指を使って胸郭の下のL2とL3にある腰椎セグメントの位置を特定し、注射部位を確認します。
ハミルトンシリンジの先端を脊椎の隣に置きます。シリンジを骨のすぐ隣の靭帯に約45度の角度で配置します。.針先を靭帯に静かに、しかししっかりと挿入し、5マイクロリットルすべてが注入されるまでゆっくりと注入します。
針を静かにゆっくりと取り外します。次に、マウスがウェイクアップして可動可能になるまで、マウスを熱回収ステーションに置きます。手術後1時間マウスをチェックして、すべての正常な運動機能が継続していることを確認します。
手術後、感染や合併症を防ぐために、マウスの体重と注射部位を1週間毎日チェックします。試験の前に、各動物を試験台のスクリーントップ付きの別々の透明なキュービクルに移動させます。次に、4グラムの力を引き出す3.61フォンフレイフィラメントでフットパッドを刺激します。
3〜5回の刺激の足の撤退は、肯定的な反応と見なされます。次に、動物が機械的刺激に反応しなくなるまで、シリーズの次の弱いフィラメントを適用します。応答が引き出されるまで高いフィラメントを使用し、その後、低いフィラメントに戻します。
カーブフィッティングアルゴリズムを使用して、50%の時間で応答を引き出すために必要な最小の力量である機械的離脱閾値を計算します。ハーグリーブステストを実行するには、赤外線エミッターによって下から加熱されたガラス面のキュービクルにマウスを置きます。マウスの後ろ足に赤外線刺激を与えてから引き抜くまでの時間を足の潜時として測定します。
コールドプレートテストでは、マイナス9°Cに冷却したコールドプレート装置にマウスを置きます。マウスが装置に置かれた後、足を持ち上げるのにかかる時間を、足を引っ込めるための待ち時間として記録します。不安テストを実施するには、各動物を2つのチャンバーの間に通路がある場所選好テストボックスに配置します。
一方の装置室は明るく照らし、反対側は暗いままにする必要があります。コンピューターを使用して、10分間のテスト中に動物の明暗の占有時間と遷移を監視します。次に、モデルげっ歯類または素朴な動物をゼロ迷路に配置するか、2チャンバーの明暗場所選好テストを使用します。
ストップウォッチを使用して、迷路の閉じたエリアと開いたエリアで費やした時間を評価します。スクローススプラッシュうつ病テストでは、10〜30%のスクロース溶液を背筋にスプレーし、グルーミングの頻度、期間、および待機時間を10分間スコアリングします。新しい物体試験を行うには、マウスを上部が開いた透明なプラスチックケージに1時間個別に順応させます。
ケージの反対側の角に2つの同じおもちゃのミニフィギュアを5分間追加します。実験当日に1時間順応させ、2体の同一のミニフィギュアをケージの同じ位置に5分間置いてから、ホームケージに戻します。次に、元のフィギュアの 1 つを、明らかに異なる新しいオブジェクトに置き換えます。
4時間後、マウスをテストケージに戻し、物体の探索に費やした時間を記録します。運動機能評価では、片方の端を縦に切ったペーパータオルチューブからトンネルを構築します。きれいなプリンター用紙の上にトンネルを広げます。
マウスが落ち着くまでそっと抱きしめます。無毒の墨をネズミの足に塗るには、インクウェルに入れたり、スタンプパッドに入れたり、綿棒を使ったりします。トンネルの入り口でネズミを放します。
トンネルを通り抜けて、最後に捕まえましょう。歩幅、歩幅、つま先の広がりに基づいて足跡を採点します。機械的および熱過敏症アッセイは、慢性腰痛マウスがナイーブコントロールと比較して機械的、熱的、および低温感受性を有意に増加させることを示しました。
不安解析の結果、慢性腰痛マウスでは、明暗箱の光室で過ごした合計時間と飼育イベント数が有意に少なく、不安を示すことが示されました。スクローススプラッシュテストでは、慢性腰痛のマウスは、毛づくろい時間と毛づくろいの回数が少なかった。しかし、グルーミングが始まるまでの時間は大幅に長くなりました。
慢性腰痛マウスとナイーブマウスでは歩幅に有意差があった。この施術を試みる際に覚えておくべき最も重要なことは、筋肉ではなく脊椎の周りの靭帯を狙っているということです。慢性腰痛モデルは、さまざまな新しい研究、薬理学的、およびその他の潜在的な治療法を評価するための信頼できるツールを提供します。
