Evaluation of the Impact of a New Cooling Cell Processor System on Islet Cell Isolation Facility

こんにちは、私はセンターPラボのディレクターであるジハード博士です。このビデオの今日の目標は、アイレット分離施設で使用される適応冷却セルプロセッサを示し、環境や細胞の回収に影響を与えないことを示すことです。まず、軽量密度と重密度の勾配とセルプロセッサキットを摂氏4度で予冷します。

次に、セルプロセッサを45分間予冷して準備します。Pre-Cool Cell Processor Kitを、標準的なエタノール冷却ダブルジャケットグラジエントメーカーのCell Processorに挿入します。2つのガラスチャンバーを接続し、マグネチックスターにかけます Clamp 2つのチャンバーの間にチューブを挟みます。涼しい。

冷却後、摂氏0度のエタノール循環チラーを備えたグラジエントメーカー。ポンプ速度を毎分150ミリリットルに設定して、バッグの底に130ミリリットルの高密度勾配をチャンバーに充填します。重い勾配がバッグに入ったら、2つのチャンバーの間の止血栓を閉じます。

次に、フロントビーカーに130ミリリットルの高密度を追加し、140ミリリットルの低密度勾配をバックビーカーに追加します。次に、血液バンクから提供された全血老廃物から収集された複数のプールされた匿名のバフィーコートから精製するためのヒト単核バフィーコート細胞を調製します。

分離後、毎分25ミリリットルに設定された蠕動ポンプを使用して、トランスファーバッグ内の低密度単核細胞懸濁液に似た5ミリリットルの比重を95ミリリットルの高密度勾配培地に加えます。事前にキャリブレーションされたサーモプローブを使用して、30ミリリットルの単核細胞懸濁液で予め形成されたグラジエントをトップロードします。引っ切り無し。滅菌サーモプローブに接続されたデジタル熱電対を使用して、セルプロセッサー内の温度を測定します。

プロセス中のグラジエントとセルの温度を監視します。グラジエントローディングの終了時に、セルプロセッサーを537 Gに設定して、ローターから発生する熱を最小限に抑えます。セルプロセッサをオフにして、油圧システムが運転前のレベルに戻り、空気を放出できるようにします。

次に、セルプロセッサを537Gで再起動し、130ミリリットルの重グラジエントと140ミリリットルの低密度グラジエントを追加して、毎分50ミリリットル、摂氏4.3度の流量で連続的な密度グラジエントを作成します。次に、負荷密度勾配の上に30ミリリットルのバフィーコートセル懸濁液を、毎分25ミリリットル、摂氏6度の流量でロードします。セルローディング後、5分後に50ミリリットルの洗浄液をセルプロセッサーに加えます。

毎分100ミリリットルの流量と摂氏5度の充填チューブ(1つは100ミリリットルの洗浄培地と150ミリリットルの細胞を含む)で12本のボトルに紡糸グラジエントを収集します。次に、チューブ2〜12に225ミリリットルの洗浄培地と25ミリリットルの細胞を入れます。クリーンルーム環境、グレードC、グレードBでの浮遊粒子評価では、クリーンルーム、GMPグレードC、グレードB、BSLの3つの基準に従って、0.5ミクロンと5ミクロンの浮遊粒子が過剰にないことが示されました。

最初の 4 つのステップでは、グラジエント温度に大きな差は見られず、両方のプロセッサで摂氏約 4.5 度を維持しました。ただし、遠心分離後および収集ステップ中に、両方のプロセッサで収集ステップの開始時と終了時に温度が上昇しました。さらに、冷却された細胞プロセッサーは、ヒト細胞の精製に影響を与えます。

効率と生存率は遠心分離後に決定しました。採取した細胞の温度は、わずかに上昇して摂氏8.5度になりました。積極的な空気サンプリングと無菌スクリーニングでは、成長は見られませんでした。