マウスの一過性中大脳動脈閉塞に関するビデオガイドへようこそ。私の名前はRok Isterで、この実験はザグレブ大学医学部の再生神経科学研究所で行われました。一過性中大脳動脈法(略してtMCAO)は、虚血性脳卒中の最も一般的に使用される動物モデルです。
これは主にラットやマウスなどのげっ歯類で行われます。総頸動脈と外頸動脈の2つの主要な手術方法は、主にフィラメント挿入のための動脈切開部位が異なります。このビデオでは、私たちの変更点と、外頸動脈法を使用して完全な再灌流を確保するためのいくつかの重要なポイントを紹介します。
推奨されるツールから始めて、デュモンタイプ5ピンセット、デュモンタイプ7ピンセット、デュモンタイプN0自動閉鎖ピンセット、ミニコリブリリトラクター、および動脈切開用のストレートマイクロスプリングハサミが2個必要です。止血には、2つの血管マイクロクランプを一緒に使用し、それぞれのアプリケーターを使用します。手術用ハサミ、ニードルホルダー、手術用鉗子など、手術創の開閉に使用します。
材料については、外科的創傷には5/0モノフィラメント縫合糸、動脈結紮糸には6/0編組シルク縫合糸、動物の固定にはサージカルテープ、動物の目を保護するための眼軟膏ジェル、追加の局所麻酔にはリドカインジェルを使用します。最後に、余分な血液を排出するために、先のとがったペーパータオルを使用します。実体手術用顕微鏡は、このような顕微手術に不可欠です。
麻酔をかけたげっ歯類は低体温症になりやすいので、温度モニターを使用します。動物の手術面では、お手入れが簡単で加熱された表面と麻酔ガス供給チューブ、および手術中の動物の体温を確実に監視する方法が必要になります。左側のテーブルには、さらに使用するツールと材料がいくつかあります。
手順の特定の部分の期間を測定することは、再現性の理由から、また後でデータ分析するために非常に重要です。ベタジン皮膚消毒剤と装填された注射器で、すばやく簡単に使用できます。動物の毛皮を剃るための動物のバリカン。
麻酔の正しい投与に重要な体重計。そして最後に、窒素と酸素のガス混合物を2:1の比率で供給できる動物ガス麻酔システムと、麻酔誘導用のノックアウトボックスを備えています。このビデオで紹介されているすべての動物の取り扱いと手順は、ザグレブ大学医学部の倫理ライセンス委員会によって承認され、訓練を受け、ライセンスを受けた職員によって行われました。議定書。
動物と手術部位の準備。動物を加熱された手術台に置き、鼻を麻酔マスクに入れます。動物の目には、水分補給やフッ素ガスの使用から目を保護するために、目の軟膏を塗布します。
動物を仰向けにし、手術用テープで作られた小さな枕を動物の首の下に置いて首を伸ばします。サージカルテープを使用して動物の手足を所定の位置に固定します。前肢を伸ばしすぎたり、うっかり肩関節脱臼を起こさないように注意してください。
ワセスホワイトゼリーを使用して直腸プローブを潤滑し、直腸に挿入して連続体温測定を行います。術前に生理食塩水とブプレノルフィンの腹腔内注射を適用して、動物に十分な水分を補給し、処置中に痛みを感じさせないようにします。コードレスの動物用クリッパーを使用して、首の部分で動物の毛皮を形作ります。
サージカルテープを使用して、すべての剃った毛皮を収集します。その領域に毛皮が完全にないようにするには、さらにかみそりで領域を形作ります。手術台の上に清潔な外科用ドレープを置きます。
動物の剃った皮膚にベタジンを一滴垂らします。綿棒を使用して、消毒剤を内側から外側に円形に皮膚にこすりつけます。その後、エタノールを染み込ませた綿棒で同じことを行います。
この手順を3回繰り返し、新しい滅菌綿棒で繰り返します。局所創傷鎮痛のために、将来の切開部位の消毒された領域にリドカインジェルを軽くたたきます。.虚血導入手術。
消毒した皮膚をメスで切開し、皮膚の切開回数を最小限にして、手術創の治癒を容易にします。タイプ7および5の鉗子を使用して、表在性筋膜を引き裂き、下にある組織から唾液腺を剥離します。ワイヤーリトラクターを初期位置に置き、唾液腺が後続のステップの邪魔にならないようにします。
7型鉗子を使用して首の深い筋膜を切除し、頸動脈領域から胸鎖乳突筋を取り外してリトラクターの位置を変更します。リトラクターを胸鎖乳突筋の下に到達するように再配置して、頸動脈領域へのアクセスを可能にします。舌骨筋を切除して、頸動脈領域への明確な視覚的で簡単なアプローチを可能にします。
頸動脈トライアドの外側にある頸動脈筋膜をつまみ、横方向にそっと引っ張って、動脈、神経、静脈、および周囲のすべての血管枝を視覚的に識別します。湾曲したタイプ7鉗子を使用して、CCAの下部を下にある組織と筋膜から完全に取り外し、将来のステップでクランプする準備ができていることを確認します。CCAを慎重に準備し、それぞれの2つの枝と一緒に、湾曲したタイプ7鉗子を使用してECAを持ち上げ、タイプN0自己閉鎖鉗子でクランプしますECAをクランプし、タイプN0ピンセットでしっかりと保持し、ECAの後ろに2本の編組絹糸を導入します。
頭蓋糸は永久的なものであるため、完全に縛り、余分な糸をハサミで切り取ります。尾側の糸を緩い固定結び目に結びます。血管マイクロクリップを使用して、CCAをクランプし、ICAを閉じて、動脈切開後の出血を防ぎます。
マイクロスプリングハサミを使用して、ECAクランプ部位の真下に小さな動脈切開を行います。ECAの角度と一致する角度で、フィラメントをCCAの近位方向に動脈切開部位に挿入し、ECAの分岐側の緩い固定結び目を通過し、フィラメントでCCAの内腔に突き刺さります。ICAマイクロクリップを慎重に開き、取り外します。
フィラメントをECAに部分的に挿入し、固定した状態で、完全な動脈切開を行い、MCAOフィラメントを内部に含めてECAの切り株を緩めます。この時点で、タイプN0自閉鉗子を離し、取り外します。タイプ5ピンセット1セットでECAの切り株をしっかりとつまみ、少し上げます。
部分的に挿入されたフィラメントを別の鉗子で保持しながら、ECA切り株を下げてそっと引っ張り、フィラメントの内側の端をICAに向けます。フィラメントのシリコン部分を挟まないでください。MCAOフィラメントをCycle of Willisをゆっくりと進め、抵抗が急激に増加するのを感じます。
このとき、フィラメントの残りの長さを観察することが重要です。成体マウスでは、フィラメントはICA分岐点から少なくとも7mm離れて楽に進む必要があります。虚血期間中にフィラメントがずれないように、固定結び目を締めます。
CCAクリップを取り外し、これが虚血発症の始まりを示す時間に注意してください。ワイヤーリトラクターを取り外し、手術創の端を互いに近づけます。組織が解剖学的位置に戻るまで、手術部位を数秒間落ち着かせます。
テープ創傷閉鎖を使用して外科的創傷を閉じ、虚血期間後の創傷の迅速な再開を促進します。虚血期。MRIまたはその他の定量的灌流測定方法を使用して、手術の成功を検証します。
フィラメント引き抜き手術。テープ巻きクローザーを取り外し、ワイヤーリトラクターで外科的創傷を再度開きます。タイプN0鉗子では、ECA切り株の端を腹側につまんで引っ張り、ECA切り株に張力をかけます。
CCAを大血管クリップで再度クランプします。フィラメントのシリコン部分がECAの切り株から突き出始めるまで、MCAOフィラメントをゆっくりと引き抜きます。固定結び目を少し締めて、フィラメントを完全に引き抜く準備をします。
フィラメントのシリコン端に近づいたら、MCAOフィラメントを押し出してECA切り株を1回で閉じるように、固定結び目を締めます。フィラメントが滑り落ちたら、結び目を完全に締めます。つまむ鉗子をCCAクリップと一緒に開いて取り外します。
末梢から始めて外科的創傷を縫合し、それによって下にある組織が見えずに創傷を完全に閉じます。必要な縫合糸の数は、外科的創傷のサイズによって異なります。消毒用アルコールワイプを使用して手術部位を洗浄し、消毒します。
代表的な結果。手順が成功すると、MRIスキャンの結果は次のようになります。術中、虚血期間中は、灌流強調画像で虚血のある明確な領域を観察できるはずです。
見かけの拡散係数病変は、ほぼ同じ領域をカバーする必要があります。術後、フィラメントの抜去後、理想的には、灌流強調画像で過灌流病変コアを観察する必要があります。虚血性コアを除いて、病変のADC値に回復とわずかなオーバーシュートが見られるはずです。
処置後2日目に、病変を完全に再灌流する必要があります。脳浮腫により、虚血性病変コアのADC値は再び低下するはずであり、これはT2画像でも確認できるはずです。フィラメント誘発性出血の場合、術後の灌流マップやADCマップの改善は観察されません。
また、術中と術後の両方で、T2画像に出血の明確な兆候が観察されます。結論。マウスの脳血管系に関する最近の解剖学的研究のおかげで、新しい知識に基づいてMCAOモデルを調整および変更することができます。緑色に塗られた後部連絡動脈は、最も一般的に使用されるマウス系統のわずか10%で両側の特許を取得しています。
そのため、MCAから近位の枝に血流を供給するために頼ることができます。これにより、虚血期間中はCCAの特許を保持する必要があり、フィラメントのシリコン部分の長さは3ミリメートルを超えてはなりません。このビデオでは、情報提供と簡潔さが得られたことを願っています。
ご視聴いただきありがとうございました。
