2 血管閉塞マウス脳虚血・再灌流モデル

この2血管閉塞マウス脳虚血再灌流モデルは、脳卒中の病態生理を調べることができる。このモデルは虚血性脳の免疫細胞に浸透する脳の大部分の安定な梗塞容積を誘導し、脳虚血再灌流後の行動障害を引き起こす。このモデルでは、皮質領域に梗塞が起き、死亡率が低い。

ライゲーションMCAO再灌流モデルは遠位MCAのサイズを露出させるために頭蓋開頭術を必要とするため、サイズを容易に確認することができ、そして処置の間に遠位MCAOの血流が中断されるかどうかの試験は簡単である。手術まで、マウスに水と食べ物への無料アクセスを提供します。手術用具をオートクレーブし、手術台および装置を消毒するために70%エタノールを使用する。

8〜12週齢のマウスを麻酔した後、しっかりとしたつまみを使用してテストしたときにペダル反射がないようにしてください。マウスが麻酔下にある間、眼の乾燥を防ぐために獣医軟膏を使用してください。血圧を監視するには、まず髪を取り除き、次に非侵襲的な血圧システムと生理学的モニタリングシステムを使用して直腸温度および動脈血性ガスを監視する。

予防的抗生物質でマウスを皮下注射する。次に、マウスを加熱パッドの上のスパイン位置に置きます。皮膚を露出するには、電気バリカンを使用して腹側首領域と右目と右耳の間の領域で毛皮を剃ります。

動物の体から毛皮を上皮クリームで取り除き、70%エタノールで手術部位を消毒する。その後、虹彩はさみを使用して首に1センチメートルの正中線切開をカットします。虹彩鉗子では、身体損傷を引き起こすことなく、迷走神経から離れた一般的な頸動脈を慎重に解剖し、5-0シルク縫合糸を使用して動脈を分離する。

次に、虹彩はさみを使用して、右目と右耳の中間点で頭皮に0.3センチメートルの切開を行います。マイクロハサミを使用して、側頭筋を切断して、頬骨とスカモサル骨を露出させる。マウスをステレオ解剖顕微鏡の下に置き、マイクロドリルを使用して、右側の遠位中大脳動脈の上に直接2ミリリットルの穴を作成します。

10-0 縫合糸を使用して右側遠位 MCA のトランクをリゲートし、非外傷性動脈瘤クリップを使用して右側の CCA を閉塞させます。虚血の所望の持続期間の後、MCAおよびCCAへの血流を回復させるために縫合および動脈瘤のクリップを取り除く。縫合クリップを使用して、頭の皮膚切開を密封し、頸部皮膚切開部を外科用接着剤で密封します。

痛みの軽減のために皮下にブプレノルフィンを注入します。.加熱パッドの36.5プラスマイナス0.5度で動物の体温を維持し、麻酔から完全に回復するまで放置したり、他の動物の会社に戻したりしないでください。最後に、マウスをオートクレーブケージに入れ、完全に回復した後に水や食べ物に自由にアクセスできるようにします。

虹彩はさみを使用して、麻酔と首を切られたマウスの頭部の皮膚を切開して頭蓋骨を露出させます。その後、手術用ハサミを使用して前頭骨の前部を切断し、虹彩はさみで矢状縫合に沿って頭蓋骨を切断します。骨の回転で、前頭骨と頭頂骨を脇に押し出し、脳を露出させます。

脳を取り除き、マウスの脳マトリックスに入れる。カミソリの刃を使用して2ミリリットルのコロナスライスを得て、2%TTCの5ミリリットルで満たされた50ミリリットルのチューブに入れなさい。マウスの脳マトリックスを使用してコロナスライスを得る場合、切断サイズは異なる脳で同じでなければなりません。

切断サイズは脳スライスのサイズにも影響を与え、梗塞サイズの計算にも影響を与えます。2%TTCと1X PBSで脳スライスを摂氏37度で10分間染色し、10%ホルマリンで2回洗いすます。24時間室温で10%ホルマリンで脳スライスを固定します。

ティッシュペーパーの脳スライスを乾燥させて過剰なホルマリンを吸収した後、きれいなプラスチックスライドに配置し、滑り台から尾理に向け、別のきれいなプラスチックスライドで覆います。スキャナを使用してスライドをスキャンします。スライドを裏返し、裏面をスキャンします。

ImageJソフトウェアを使用して、各セクションの梗塞領域を計算し、最初に画像ファイルを開き、画像のスケールを設定します。その後、フリーハンド選択を使用して梗塞領域を選択し、関心のある領域ROIマネージャーを使用して対象領域を測定します。最後に、各セクションの梗塞領域を合計し、その結果にセクションの厚さを掛けて梗塞の総量を推定し、原稿に記載されているように統計解析を完了します。

このMCAO再灌流手順中の虚血期間の増加は、右MCA領域の大脳皮質における虚血誘発性梗塞容積および神経細胞喪失の異なる程度を生み出した。さらに、虚血はMCAO再灌流後48時間で動物の運動活動を減少させた。脳虚血再灌流後、末梢免疫細胞の大部分が虚血性脳の半球に浸透した。

また、この2容器閉塞モデルをMCAOモデルと比較した場合、その梗塞容積は有意に異なっていなかった。マイクロドリルは、頭蓋骨に穴を開ける際に注意深く使用する必要があります。不適切な行為で、MCAからの出血を引き起こすのは簡単です。

MCAは損傷を受けてはならないし、出血は結紮の処置の前後に避けなければならない。MCAの閉塞および再灌流の状態はレーザードップラーによって点検することができる。この方法はMCAの血流の状態を確認できる。