Brain Slice Biotinylation: An <em>Ex Vivo</em> Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

Regulated endocytic trafficking is the central mechanism facilitating a variety of neuromodulatory events, by dynamically controlling receptor, ion ...

University of Massachusetts Medical School

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (DAT) &#x5220;&#x9664;&#x4ECE;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x548C;&#x5148;&#x5929;&#xFF0C;&#x6545;&#x7CBE;&#x795E;&#x79D1;&#x836F;&#x7269;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x3001; &#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E;&#x548C;&#x54CC;&#x918B;&#x7532;&#x916F; &#xFF08;&#x5229;&#x4ED6;&#x6797;&#xFF09; &#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;&#x591A;&#x884C;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC) &#x4E0B;-&#x8C03;&#x8282;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8FD0;&#x8F93;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x53D1; DAT &#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x5F80;&#x8F66;&#x53A2; endosomal&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x519C;&#x7528;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8F66;&#x87AF;&#x5408;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x672A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E; DAT &#x4E00;&#x52A0;&#x4EE5;&#x56DE;&#x6536;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7624; (PC12) &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6E29;&#x5EA6;&#x5C01;&#x9501;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x57FA;&#x5E95;&#x7684;&#x5185;&#x5316;&#x548C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x518D;&#x7528;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FDD;&#x6301; DAT &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6C34;&#x5E73;&#x4F9D;&#x8D56;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x56DE;&#x6536;&#x5C01;&#x9501;&#x4E0E; bafilomycin A1 &#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x8F6C;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53; (&#x603B;&#x548C;&#x751F;&#x80B2;&#x7387;&#xFF09; &#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5BF9; DAT &#x8868;&#x9762;&#x6C34;&#x5E73;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x901A;&#x8FC7;&#x72EC;&#x7279;&#x7684; endosomal &#x673A;&#x5236;&#xFF0C;DAT &#x548C;&#x751F;&#x80B2;&#x7387;&#x7684;&#x4EA4;&#x901A;&#x3002;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x9C81;&#x68D2;&#x7684;&#x672C;&#x6784; DAT&#xFF0C;&#x9A91;&#x81EA;&#x884C;&#x8F66;&#x5F80;&#x8FD4;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4F5B;&#x6CE2;&#x916F;&#x4ECB;&#x5BFC; PKC &#x6FC0;&#x6D3B;&#x52A0;&#x901F; DAT &#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x51CF;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x56DE;&#x6536; DAT &#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x5BF9;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x672C;&#x6784; DAT &#x8D29;&#x8FD0;&#x548C; PKC &#x4ECB;&#x5BFC; DAT &#x87AF;&#x5408;&#x4F5C;&#x7528;&#x901A;&#x8FC7;&#x52A0;&#x901F;&#x56FD;&#x9645;&#x5316;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x5FAA;&#x73AF;&#x518D;&#x9020;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7531;&#x672C;&#x6784;&#x548C;&#x7BA1;&#x63A7; DAT &#x8D29;&#x8FD0;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x5DEE;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4E00;&#x52A0;&#x4EE5;&#x548C;&#x56DE;&#x6536;&#x4E2D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x67D3; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x8C03;&#x8282;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;

The dopamine transporter (DAT) removes dopamine from the extracellular milieu and is potently inhibited by number of psychoactive drugs, including cocaine, amphetamines, and methylphenidate (Ritalin). Multiple lines of evidence demonstrate that protein kinase C (PKC) down-regulates dopamine transport, primarily by redistributing DAT from the plasma membrane to endosomal compartments, although the mechanisms facilitating transporter sequestration are not defined. Here, we demonstrate that DAT constitutively internalizes and recycles in rat pheochromocytoma (PC12) cells. Temperature blockades demonstrated basal internalization and reliance on recycling to maintain DAT cell surface levels. In contrast, recycling blockade with bafilomycin A1 significantly decreased transferrin receptor (TfR) surface expression but had no effect on DAT surface levels, suggesting that DAT and TfR traffic via distinct endosomal mechanisms. Kinetic analyses reveal robust constitutive DAT cycling to and from the plasma membrane, independent of transporter expression levels. In contrast, phorbol ester-mediated PKC activation accelerated DAT endocytosis and attenuated transporter recycling in a manner sensitive to DAT expression levels. These data demonstrate constitutive DAT trafficking and that PKC-mediated DAT sequestration is achieved by a combination of accelerated internalization and reduced recycling. Additionally, the differential sensitivity to expression level exhibited by constitutive and regulated DAT trafficking suggests that these two processes are mediated by independent cellular mechanisms.

The dopamine transporter constitutively internalizes and recycles in a protein kinase C-regulated manner in stably transfected PC12 cell lines.

Le transporteur de la dopamine (DAT) supprime la dopamine &#xE0; partir du milieu extracellulaire et est fortement inhib&#xE9; par le nombre de m&#xE9;dicaments psychoactifs, y compris la coca&#xEF;ne, les amph&#xE9;tamines et le m&#xE9;thylph&#xE9;nidate (Ritalin). Plusieurs &#xE9;l&#xE9;ments de preuve d&#xE9;montrent que la prot&#xE9;ine kinase C (PKC) r&#xE9;gule &#xE0; la baisse transport de la dopamine, principalement par la redistribution des DAT de la membrane plasmique &#xE0; endosomes, bien que les m&#xE9;canismes facilitant la s&#xE9;questration du transporteur ne sont pas d&#xE9;finis. Ici, nous d&#xE9;montrons que la DAT int&#xE9;riorise de mani&#xE8;re constitutive et recycle dans ph&#xE9;ochromocytome de rat (PC12) des cellules. Blocus de la temp&#xE9;rature basale d&#xE9;montr&#xE9; l&#x26;#39;internalisation et la d&#xE9;pendance sur le recyclage pour maintenir les niveaux DAT surface des cellules. En revanche, le blocus de recyclage avec bafilomycine A1 diminu&#xE9; de mani&#xE8;re significative r&#xE9;cepteur de la transferrine (TfR) l&#x26;#39;expression en surface, mais n&#x26;#39;a eu aucun effet sur les niveaux de surface DAT, sugg&#xE9;rant que le trafic DAT et TfR par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire des m&#xE9;canismes distincts endosomes. Analyses cin&#xE9;tiques r&#xE9;v&#xE8;lent robustes v&#xE9;lo DAT constitutive et de la membrane plasmique, ind&#xE9;pendamment des niveaux de l&#x26;#39;expression du transporteur. En revanche, l&#x26;#39;ester de phorbol-activation m&#xE9;di&#xE9;e par PKC acc&#xE9;l&#xE9;r&#xE9; endocytose DAT et le recyclage transporteur att&#xE9;nu&#xE9; d&#x26;#39;une mani&#xE8;re sensible &#xE0; des niveaux d&#x26;#39;expression DAT. Ces donn&#xE9;es d&#xE9;montrent le trafic DAT constitutive et que la s&#xE9;questration du PKC-m&#xE9;diation DAT est r&#xE9;alis&#xE9; par une combinaison de l&#x26;#39;internalisation et le recyclage acc&#xE9;l&#xE9;r&#xE9; r&#xE9;duite. En outre, la sensibilit&#xE9; diff&#xE9;rentielle au niveau d&#x26;#39;expression pr&#xE9;sent&#xE9; par le trafic de DAT constitutive et r&#xE9;gul&#xE9;e sugg&#xE8;re que ces deux processus sont m&#xE9;di&#xE9;s par des m&#xE9;canismes ind&#xE9;pendants cellulaires.

Le transporteur de la dopamine int&#xE9;riorise de mani&#xE8;re constitutive et recycle dans une prot&#xE9;ine kinase C-r&#xE9;glement&#xE9; Mani&#xE8;re PC12 transfect&#xE9;es de fa&#xE7;on stable des lign&#xE9;es cellulaires

Die Dopamin-Transporter konstitutiv internalisiert und Recycling in einem Proteinkinase-C-geregelten Art und Weise stabil transfizierten PC12-Zelllinien.

Il trasportatore della dopamina (DAT) rimuove il milieu extracellulare dopamina e potentemente &egrave; inibito dal numero di droghe psicoattive, cocaina, anfetamine e il metilfenidato (Ritalin). Linee multiple di prova dimostrano che protein chinasi C (PKC) gi&ugrave;-regola trasporto della dopamina, principalmente ridistribuendo DAT dalla membrana del plasma endosomal compartimenti, anche se non sono definiti i meccanismi di facilitare sequestro del trasportatore. Qui, ci dimostrano che DAT costitutivamente interiorizza e ricicla in cellule di feocromocitoma (PC12) del ratto. I blocchi temperatura dimostrato interiorizzazione basale e affidamento sul riciclaggio per mantenere livelli superficiali DAT cell. Al contrario, riciclaggio blocco con bafilomycin A1 significativamente diminuita espressione superficiale di transferrina recettore (TfR) ma ha avuto alcun effetto sui livelli di superfici DAT, suggerendo che DAT e TfR il traffico attraverso meccanismi distinti endosomal. Analisi cinetiche rivelano robuste DAT costitutiva ciclismo da e verso la membrana plasmatica, indipendente dei livelli di espressione del trasportatore. Al contrario, forbolo estere-mediata attivazione PKC accelerato endocitosi DAT e attenuato transporter riciclaggio in maniera sensibile a livelli di espressione di DAT. Questi dati dimostrano costitutiva DAT traffico e che PKC-mediated DAT sequestro &egrave; ottenuto da una combinazione di interiorizzazione accelerato e ridotto di riciclaggio. Inoltre, la sensibilit&agrave; differenziale a livello di espressione esibito da costitutiva e regolata DAT traffico suggerisce che questi due processi sono mediati da meccanismi cellulari indipendenti.

Il trasportatore della dopamina costitutivamente interiorizza e ricicla in proteina chinasi C-regolato modo in linee di cellule PC12 stabile transfected.

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E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;PC12&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x8ABF;&#x7BC0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#x3068;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC218;&#xC1A1; (DAT) &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xAC70; &#xB418; &#xACE0; potently psychoactive &#xB9C8;&#xC57D;, &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;, &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC;, methylphenidate (&#xB9AC; &#xD0C8;&#xB9B0;) &#xB4F1;&#xC758; &#xC218;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC904;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC) &#xB2E4;&#xC6B4;-&#xADDC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC804;&#xC1A1; &#xACA9;&#xB9AC;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; endosomal &#xAD6C;&#xD68D; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; DAT&#xB97C; &#xC7AC;&#xBC30;&#xD3EC; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, DAT constitutively &#xC720;&#xC785; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC950; pheochromocytoma (PC12) &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC628;&#xB3C4; &#xBD09;&#xC1C4; &#xAE30;&#xC800; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xBC0F; DAT &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, bafilomycin a 1&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBD09;&#xC1C4;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; transferrin &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TfR) &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; DAT &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; endosomal &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; DAT&#xC640; TfR &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC81C;&#xC815; DAT &#xC804;&#xC1A1; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xC624;&#xAC00;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xB9C1;. &#xBC18;&#xBA74;, phorbol &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xC911;&#xC7AC; PKC &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC00;&#xC18D; DAT endocytosis &#xBC0F; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; DAT &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xAC10;&#xC1E0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0;&#xB294; &#xC81C;&#xC815; DAT &#xBC00;&#xB9E4;&#xC640; PKC &#xC911;&#xC7AC; DAT &#xACA9;&#xB9AC; &#xAC00;&#xC18D;&#xB41C; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xAC10;&#xC18C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC81C;&#xC815; &#xBC0F; &#xADDC;&#xC81C; DAT &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC804;&#xC2DC; &#xC2DD; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C; &#xCC28;&#xB4F1; &#xAC10;&#xB3C4;&#xC774; &#xB450; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xAC00; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB418;&#xC5B4; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1; constitutively &#xC720;&#xC785; &#xBC0F; &#xC548;&#xC815;&#xC801; transfected PC12 &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &#xADDC;&#xC81C; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;.

El transportador de dopamina (DAT) elimina la dopamina desde el medio extracelular y est&#xE1; potentemente inhibida por el n&#xFA;mero de f&#xE1;rmacos psicoactivos, como la coca&#xED;na, las anfetaminas y el metilfenidato (Ritalin). M&#xFA;ltiples l&#xED;neas de evidencia demuestran que la prote&#xED;na quinasa C (PKC) abajo-regula el transporte de la dopamina, principalmente mediante la redistribuci&#xF3;n de DAT de la membrana plasm&#xE1;tica de endosomal compartimentos, aunque los mecanismos que facilitan el secuestro de transportista no se definen. Aqu&#xED;, nos demuestran que DAT constitutivamente interioriza y lo recicla en el feocromocitoma de rata (PC12) las c&#xE9;lulas. Bloqueos de temperatura basal demostr&#xF3; la internalizaci&#xF3;n y la confianza en el reciclaje para mantener los niveles de DAT de la superficie celular. En contraste, el bloqueo de reciclaje con bafilomicina A1 disminuy&#xF3; significativamente los receptores de transferrina (TfR) expresi&#xF3;n en la superficie pero no tuvo ning&#xFA;n efecto sobre los niveles de superficie DAT, lo que sugiere que el tr&#xE1;fico de DAT y TfR a trav&#xE9;s de distintos mecanismos endosomal. Los an&#xE1;lisis cin&#xE9;ticos revelan ciclismo robusto DAT constitutiva hacia y desde la membrana plasm&#xE1;tica, independiente de los niveles de expresi&#xF3;n del transportador. Por el contrario, &#xE9;ster de forbol mediada por la activaci&#xF3;n de la PKC se aceler&#xF3; la endocitosis y el reciclaje DAT transportista atenuada de una manera sensible a los niveles de expresi&#xF3;n de DAT. Estos datos demuestran el tr&#xE1;fico DAT constitutiva y que el secuestro de la PKC mediada por DAT se logra mediante una combinaci&#xF3;n de internalizaci&#xF3;n acelerada y reciclado reducida. Adem&#xE1;s, la sensibilidad diferencial a nivel de expresi&#xF3;n mostrada por el tr&#xE1;fico de DAT constitutiva y regulada sugiere que estos dos procesos est&#xE1;n mediados por mecanismos independientes de celulares.

El transportador de dopamina constitutivamente interioriza y Recicla en una prote&#xED;na quinasa C-regulado Manera en transfectadas establemente l&#xED;neas de c&#xE9;lulas PC12

I trasportatori di sodio e cloruro-dipendente della famiglia del gene SLC6 sono regolatori chiave dei livelli del neurotrasmettitore extracellulare e sono necessari per la normale neurotrasmissione. Abbondante evidenza supporta la premessa che membrana traffico dinamicamente modula espressione superficiale transporter in risposta all&#39;esposizione di psicostimolanti, attivazione del recettore e attivit&agrave; neuronale. Lavoro recente dal nostro gruppo e gli altri dimostra che molti trasportatori di SLC6 non solo traffico in risposta a stimoli esogeni, ma anche costitutivamente traffico, con esogeno segnalazione modulante transporter intrinseca traffico cinetica. Questa recensione si concentra su ci&ograve; che attualmente &egrave; capito circa costitutiva e regolata transporter traffico e pone un modello in cui traffico endocitico dinamicamente primes trasportatori per molteplici eventi normativi.

Neurotrasmettitore transporter traffico: endocitosi, riciclaggio e regolamento.

SLC6 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC5FC;&#xD654; &#xC885;&#xC18D; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xBA70; &#xC815;&#xC0C1; neurotransmission&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;. &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC70; &#xB9C9; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; psychostimulant &#xB178;&#xCD9C;, &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC1A1; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xBCC0;&#xC870; &#xC804;&#xC81C;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB8F9; &#xB4F1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xB9CE;&#xC740; SLC6 &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAD50;&#xD1B5; exogenous &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC73C;&#xB85C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; constitutively exogenous &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xC870; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC00;&#xB9E4; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0; &#xBB34;&#xC5C7;&#xC744; &#xD604;&#xC7AC;, &#xC81C;&#xC815; &#xBC0F; &#xADDC;&#xC81C; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD94;&#xACE0;&#xC640; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA40;&#xD2F0; &#xADDC;&#xC81C; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xC18C;&#xC218; endocytic &#xBC00;&#xB9E4; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB378; &#xD3EC;&#xC988;.

&#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC804;&#xC1A1; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;: endocytosis, &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xADDC;&#xC815;.

SLC6&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x5869;&#x5316;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x7CBE;&#x795E;&#x523A;&#x6FC0;&#x85AC;&#x306E;&#x66DD;&#x9732;&#x306F;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x524D;&#x63D0;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306A;&#x3069;&#x304B;&#x3089;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x3001;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x3082;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;SLC6&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x69CB;&#x6210;&#x3068;&#x898F;&#x5236;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3001;&#x591A;&#x9762;&#x7684;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x58F2;&#x8CB7;&#x52D5;&#x7684;&#x7D20;&#x6570;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x8D77;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#xFF1A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3001;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x898F;&#x5236;

De sodium et de chlorure de-d&#xE9;pendants des transporteurs de la famille SLC6 g&#xE8;ne sont des r&#xE9;gulateurs cl&#xE9;s de niveaux de neurotransmetteurs extracellulaires et sont n&#xE9;cessaires pour la neurotransmission normale. La preuve abondante appuie l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se selon laquelle le trafic membranaire module dynamiquement expression &#xE0; la surface du transporteur en r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;exposition psychostimulant, l&#x26;#39;activation du r&#xE9;cepteur, et l&#x26;#39;activit&#xE9; neuronale. Des travaux r&#xE9;cents de notre groupe et d&#x26;#39;autres d&#xE9;montrent que de nombreux transporteurs SLC6 non seulement la circulation en r&#xE9;ponse &#xE0; des stimuli exog&#xE8;nes, mais aussi constitutive de la circulation, avec exog&#xE8;nes de signalisation modulant la cin&#xE9;tique intrins&#xE8;que de trafic des transporteurs. Cette revue se concentre sur ce qui est actuellement compris sur le trafic du transporteur constitutive et r&#xE9;gul&#xE9;e, et pose un mod&#xE8;le dans lequel l&#x26;#39;endocytose des transporteurs de trafic nombres premiers dynamique multi-facettes des &#xE9;v&#xE9;nements r&#xE9;glementaires.

Transporter le trafic neurotransmetteur: Endocytose, recyclage, et le r&#xE8;glement

Neurotransmitter-Transporter des Menschenhandels: Endozytose, Recycling und Regulierung.

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&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x8D29;&#x5356;&#x4EBA;&#x53E3;&#xFF1A; &#x541E;&#x3001; &#x56DE;&#x6536;&#x548C;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

Sodium- and chloride-dependent transporters in the SLC6 gene family are key regulators of extracellular neurotransmitter levels and are required for normal neurotransmission. Copious evidence supports the premise that membrane trafficking dynamically modulates transporter surface expression in response to psychostimulant exposure, receptor activation, and neuronal activity. Recent work from our group and others demonstrates that many SLC6 transporters not only traffic in response to exogenous stimuli, but also constitutively traffic, with exogenous signaling modulating intrinsic transporter trafficking kinetics. This review focuses on what is currently understood about constitutive and regulated transporter trafficking, and poses a model wherein endocytic trafficking dynamically primes transporters for multi-faceted regulatory events.

Neurotransmitter transporter trafficking: endocytosis, recycling, and regulation.

Sodio-cloruro y dependientes de los transportadores en la familia de genes SLC6 son reguladores clave de los niveles extracelulares de neurotransmisores y son necesarios para la neurotransmisi&#xF3;n normal. Abundante evidencia apoya la premisa de que el tr&#xE1;fico de membrana din&#xE1;mica modula la expresi&#xF3;n del transportador de superficie en respuesta a la exposici&#xF3;n psicoestimulante, la activaci&#xF3;n del receptor, y la actividad neuronal. Un trabajo reciente de nuestro grupo y otros, demuestra que muchos SLC6 transportistas no s&#xF3;lo de tr&#xE1;nsito, en respuesta a est&#xED;mulos ex&#xF3;genos, sino tambi&#xE9;n constitutiva de tr&#xE1;fico, con la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de modulaci&#xF3;n ex&#xF3;genas cin&#xE9;tica intr&#xED;nseca del transportador de trata de personas. Esta revisi&#xF3;n se centra en lo que se entiende en la actualidad sobre el tr&#xE1;fico de transportador constitutiva y regulada, y plantea un modelo en el que los transportistas endoc&#xED;tica tr&#xE1;fico de forma din&#xE1;mica los n&#xFA;meros primos de m&#xFA;ltiples facetas eventos reguladores.

Trata de neurotransmisor Transportador: endocitosis, reciclaje, y el Reglamento

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&#x975E;&#x7ECF;&#x5178;&#x3001; &#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x541E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x542C;&#x5199;&#x672C;&#x6784;&#x548C; PKC &#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x5185;&#x5316;&#x3002;

Neurotransmitter transporters are critical for synaptic neurotransmitter inactivation. Transporter inhibitors markedly increase the duration and magnitude of synaptic transmission, underscoring the importance of transporter activity in neurotransmission. Recent studies indicate that membrane trafficking dynamically governs neuronal transporter cell-surface presentation in a protein kinase C-regulated manner, suggesting that transporter trafficking profoundly affects synaptic signaling. However, the molecular architecture coupling neurotransmitter transporters to the endocytic machinery is not defined. Here, we identify nonclassical, distinct endocytic signals in the dopamine transporter (DAT) that are necessary and sufficient to drive constitutive and protein kinase C-regulated DAT internalization. The DAT internalization signal is conserved across SLC6 neurotransmitter carriers and is functional in the homologous norepinephrine transporter, suggesting that this region is likely to be the endocytic signal for all SLC6 neurotransmitter transporters. The DAT endocytic signal does not conform to classic internalization motifs, suggesting that SLC6 neurotransmitter transporters may have evolved unique endocytic mechanisms.

Nonclassical, distinct endocytic signals dictate constitutive and PKC-regulated neurotransmitter transporter internalization.

Transporteurs de neurotransmetteurs sont essentiels pour l&#x26;#39;inactivation des neurotransmetteurs synaptique. Transporter des inhibiteurs d&#x26;#39;augmenter sensiblement la dur&#xE9;e et l&#x26;#39;ampleur de la transmission synaptique, en soulignant l&#x26;#39;importance de l&#x26;#39;activit&#xE9; du transporteur dans la neurotransmission. Des &#xE9;tudes r&#xE9;centes indiquent que le trafic membranaire r&#xE9;git dynamiquement neuronale transporteur de surface cellulaire de pr&#xE9;sentation dans un prot&#xE9;ine kinase C-r&#xE9;glement&#xE9; de mani&#xE8;re, ce qui sugg&#xE8;re que le trafic du transporteur affecte profond&#xE9;ment signalisation synaptiques. Cependant, l&#x26;#39;architecture mol&#xE9;culaire de couplage transporteurs de neurotransmetteurs &#xE0; la machinerie d&#x26;#39;endocytose n&#x26;#39;est pas d&#xE9;fini. Ici, nous identifions non classiques, distincts des signaux d&#x26;#39;endocytose dans le transporteur de la dopamine (DAT) qui sont n&#xE9;cessaires et suffisantes pour conduire constitutive et la prot&#xE9;ine kinase C-r&#xE9;glement&#xE9; DAT internalisation. Le signal d&#x26;#39;internalisation DAT est conserv&#xE9; &#xE0; travers les transporteurs des neurotransmetteurs et SLC6 est fonctionnel dans le transporteur de la noradr&#xE9;naline homologue, ce qui sugg&#xE8;re que cette r&#xE9;gion est susceptible d&#x26;#39;&#xEA;tre le signal d&#x26;#39;endocytose pour tous les transporteurs de neurotransmetteurs SLC6. Le signal de DAT endocytose n&#x26;#39;est pas conforme aux motifs d&#x26;#39;internalisation classiques, ce qui sugg&#xE8;re que SLC6 transporteurs de neurotransmetteurs peuvent avoir &#xE9;volu&#xE9; uniques m&#xE9;canismes d&#x26;#39;endocytose.

Non classique, distincts des signaux d&#x26;#39;endocytose Dictate constitutif et PKC-r&#xE9;glement&#xE9; internalisation Transporter neurotransmetteur

Nichtklassische, deutliche Signale zu diktieren konstitutive Endozytose und PKC-regulierten Neurotransmitter-Transporter Verinnerlichung.

I trasportatori del neurotrasmettitore sono critici per inattivazione del neurotrasmettitore sinaptico. Inibitori Transporter aumentano notevolmente la durata e l&#39;entit&agrave; della trasmissione sinaptica, sottolineando l&#39;importanza dell&#39;attivit&agrave; di trasportatore nella neurotrasmissione. Studi recenti indicano che membrana traffico dinamicamente governa presentazione di superficie delle cellule neuronali transporter in un proteina chinasi C-regolato modo, suggerendo che trasportatore traffico colpisce profondamente segnalazione sinaptica. Tuttavia, l&#39;architettura molecolare accoppiamento dei trasportatori del neurotrasmettitore al macchinario endocitico non &egrave; definito. Qui, ci identifichiamo nonclassical, distinti segnali endocitico del trasportatore della dopamina (DAT) che sono necessarie e sufficienti per unit&agrave; costitutiva e la chinasi di proteina interiorizzazione DAT C-regolato. Il segnale di interiorizzazione DAT &egrave; conservato attraverso gli elementi portanti del SLC6 neurotrasmettitore ed &egrave; funzionale nel transporter noradrenalina omologhe, suggerendo che questa regione &egrave; probabile che sia il segnale endocitico per tutti i trasportatori del neurotrasmettitore SLC6. Il segnale endocitico DAT non &egrave; conforme ai motivi classici interiorizzazione, suggerendo che i trasportatori del neurotrasmettitore SLC6 potrebbero essersi evoluto meccanismi endocitico unici.

Nonclassical, distinti segnali endocitico dettano interiorizzazione transporter neurotrasmettitore costitutiva e regolata da PKC.

&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x6642;&#x9593;&#x3068;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x8F38;&#x9001;&#x306F;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x304C;&#x6DF1;&#x304F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x8ABF;&#x7BC0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x795E;&#x7D4C;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x63D0;&#x793A;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306B;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x5206;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x304B;&#x3064;&#x69CB;&#x6210;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x8ABF;&#x7BC0;DAT&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x99C6;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;DAT&#xFF09;&#x306E;&#x975E;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x3001;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DAT&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;SLC6&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;&#x4FDD;&#x5B58;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x540C;&#x7A2E;&#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;SLC6&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; DAT&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;SLC6&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x9032;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306B;&#x6E96;&#x62E0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x975E;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x3001;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x3068;PKC&#x8ABF;&#x7BC0;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3092;&#x6307;&#x793A;

&#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xAC00; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC5C5; &#xC790; &#xC800; &#xD574;&#xC81C; &#xAE30;&#xAC04; &#xBC0F; neurotransmission&#xC5D0; &#xC804;&#xC1A1; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xC9C4;&#xB3C4; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB974;&#xBA74; &#xB9C9; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &#xADDC;&#xC81C; &#xBC29;&#xC2DD;, &#xC804;&#xC1A1; &#xBC00;&#xB9E4; &#xBFCC;&#xB9AC;&#xAE4A;&#xC740; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC2E0;&#xD638; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xD504;&#xB808; &#xC820; &#xD14C;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; endocytic &#xAE30;&#xACC4;&#xC5D0; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xBD84;&#xC790; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; nonclassical, &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; endocytic &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1; (DAT)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC704;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC81C;&#xC815; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &#xADDC;&#xC81C; DAT &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DAT &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638; SLC6 &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC218;&#xC1A1; &#xCC28;&#xB7C9;&#xC744; &#xAC74;&#xB108;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB4E0; SLC6 &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; endocytic &#xC2E0;&#xD638;&#xAC00; &#xB420; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB192;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xB3D9;&#xC885; norepinephrine &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9;. DAT endocytic &#xC2E0;&#xD638; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xD504;, SLC6 &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; endocytic &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC9C4;&#xD654; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nonclassical, &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; endocytic &#xC2E0;&#xD638; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xC81C;&#xC815; &#xBC0F; PKC &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC804;&#xC1A1; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;.

Los transportadores de neurotransmisores son fundamentales para la inactivaci&#xF3;n del neurotransmisor sin&#xE1;ptico. Los inhibidores del transportador de aumentar notablemente la duraci&#xF3;n y la magnitud de la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica, lo que subraya la importancia de la actividad de transporte en la neurotransmisi&#xF3;n. Estudios recientes indican que el tr&#xE1;fico de membrana din&#xE1;mica gobierna transportador neuronal de la superficie celular en una presentaci&#xF3;n de la prote&#xED;na quinasa C-regulado de manera, lo que sugiere que el tr&#xE1;fico de transportista afecta profundamente a la se&#xF1;alizaci&#xF3;n sin&#xE1;ptica. Sin embargo, la arquitectura molecular de acoplamiento transportadores de neurotransmisores a la maquinaria endoc&#xED;tica no est&#xE1; definida. En este sentido, identificar las se&#xF1;ales no cl&#xE1;sicos, distintas endoc&#xED;tica en el transportador de dopamina (DAT) que son necesarios y suficientes para conducir constitutiva y la prote&#xED;na quinasa C-regulado internalizaci&#xF3;n DAT. La se&#xF1;al de internalizaci&#xF3;n DAT se conservan a trav&#xE9;s de las compa&#xF1;&#xED;as SLC6 neurotransmisores y es funcional en el transportador de norepinefrina hom&#xF3;loga, lo que sugiere que esta regi&#xF3;n es probable que sea la se&#xF1;al para todos los endoc&#xED;tica SLC6 transportadores de neurotransmisores. La se&#xF1;al de DAT endoc&#xED;tica no se ajusta a los motivos cl&#xE1;sicos de la internalizaci&#xF3;n, lo que sugiere que SLC6 transportadores de neurotransmisores podr&#xED;an haber evolucionado &#xFA;nicos mecanismos endoc&#xED;tica.

Las se&#xF1;ales no cl&#xE1;sicas, la internalizaci&#xF3;n endoc&#xED;tica Distintos Dictar neurotransmisor Transportador Constitutiva y PKC-regulado

&#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E; &#xFF08;AMPH&#xFF09; &#x662F;&#x5F3A;&#x6548;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; (DA) &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (DAT) &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86;&#x80DE;&#x5916; DA &#x7EA7;&#x522B;&#x3002;&#x9664;&#x4E86; DAT &#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5176;&#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;&#x6025;&#x6027; AMPH &#x66B4;&#x9732;&#x8BF1;&#x5BFC; DAT &#x635F;&#x5931;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x7275;&#x8FDE;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x819C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;AMPH &#x8C03;&#x8282; DAT &#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x76EE;&#x524D;&#x672A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x8D29;&#x5356;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x62A5;&#x9053;&#x4E86; DAT &#x6B8B;&#x7559; 587 596 &#x53D1;&#x6325;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6216;&#x7F3A;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x672C;&#x6784;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C PKC &#x52A0;&#x901F; DAT &#x5185;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E86; PKC &#x523A;&#x6FC0; DAT &#x5185;&#x5316;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x662F;&#x5426;&#x5FC5;&#x8981;&#x81F4; AMPH DAT &#x5C01;&#x5B58;&#x3002;&#x6025;&#x6027;&#x82EF;&#x4E19;&#x80FA;&#x66B4;&#x9732;&#x589E;&#x52A0; DAT &#x541E;&#x7387;&#xFF0C;&#x4F46; DAT &#x7FA7;&#x57FA;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x6B8B;&#x7559; 587-590 &#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684; PKC &#x6FC0;&#x53D1;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x5BF9; AMPH &#x52A0;&#x901F; DAT &#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;AMPH &#x51CF;&#x5C11; DAT &#x541E;&#x56DE;&#x6536;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x8C03;&#x5236;&#x8F6C;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;&#x56DE;&#x6536;&#x3001; &#x6697;&#x793A; AMPH &#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x5168;&#x7403;&#x51CF;&#x5F31;&#x541E;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4E0E; PKC &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6CBB;&#x7597;&#x8868;&#x660E;&#x4ECE;&#x8840;&#x6D46;&#x819C;&#x8BF1;&#x5BFC; AMPH DAT &#x635F;&#x5931;&#x4E0D;&#x4F9D;&#x8D56; PKC &#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8D1F;&#x8D23; AMPH &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; DAT &#x5185;&#x5316;&#x673A;&#x5236;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x7406;&#x4E8B; PKC &#x654F;&#x611F; DAT &#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E;&#x81F4;&#x8DCC;&#x5E45;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x72EC;&#x7ACB;&#x3002;

Amphetamine (AMPH) is a potent dopamine (DA) transporter (DAT) inhibitor that markedly increases extracellular DA levels. In addition to its actions as a DAT antagonist, acute AMPH exposure induces DAT losses from the plasma membrane, implicating transporter-specific membrane trafficking in amphetamine's actions. Despite reports that AMPH modulates DAT surface expression, the trafficking mechanisms leading to this effect are currently not defined. We recently reported that DAT residues 587-596 play an integral role in constitutive and protein kinase C (PKC)-accelerated DAT internalization. In the current study, we tested whether the structural determinants required for PKC-stimulated DAT internalization are necessary for AMPH-induced DAT sequestration. Acute amphetamine exposure increased DAT endocytic rates, but DAT carboxy terminal residues 587-590, which are required for PKC-stimulated internalization, were not required for AMPH-accelerated DAT endocytosis. AMPH decreased DAT endocytic recycling, but did not modulate transferrin receptor recycling, suggesting that AMPH does not globally diminish endocytic recycling. Finally, treatment with a PKC inhibitor demonstrated that AMPH-induced DAT losses from the plasma membrane were not dependent upon PKC activity. These results suggest that the mechanisms responsible for AMPH-mediated DAT internalization are independent from those governing PKC-sensitive DAT endocytosis.

Amphetamine-induced decreases in dopamine transporter surface expression are protein kinase C-independent.

Amph&#xE9;tamine (AMPH) est un puissant dopamine (DA) transporteur (DAT) inhibiteur qui augmente nettement les niveaux extracellulaires DA. En plus de ses actions comme un antagoniste DAT, l&#x26;#39;exposition aigu&#xEB; entra&#xEE;ne des pertes AMPH DAT de la membrane plasmique, impliquant transporteur sp&#xE9;cifique du trafic membranaire dans les actions de l&#x26;#39;amph&#xE9;tamine. Malgr&#xE9; les rapports qui module l&#x26;#39;expression de surface AMPH DAT, les m&#xE9;canismes de trafic de coca&#xEF;ne &#xE0; cet effet ne sont pas actuellement d&#xE9;finies. Nous avons r&#xE9;cemment rapport&#xE9; que les r&#xE9;sidus 587-596 DAT jouent un r&#xF4;le essentiel dans constitutive et la prot&#xE9;ine kinase C (PKC)-acc&#xE9;l&#xE9;r&#xE9;e internalisation DAT. Dans l&#x26;#39;&#xE9;tude actuelle, nous avons test&#xE9; si les d&#xE9;terminants structurels n&#xE9;cessaires pour la PKC-stimul&#xE9; internalisation DAT sont n&#xE9;cessaires pour AMPH induite par la s&#xE9;questration du DAT. Aigu&#xEB; exposition aux amph&#xE9;tamines a augment&#xE9; les taux d&#x26;#39;endocytose DAT, mais les r&#xE9;sidus DAT carboxy-terminale 587-590, qui sont n&#xE9;cessaires pour l&#x26;#39;internalisation PKC-stimul&#xE9;, n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; requis pour AMPH acc&#xE9;l&#xE9;r&#xE9; endocytose DAT. AMPH diminu&#xE9; DAT recyclage endocytose, mais n&#x26;#39;a pas de moduler le recyclage r&#xE9;cepteur de la transferrine, ce qui sugg&#xE8;re que AMPH ne pas globalement diminuer le recyclage d&#x26;#39;endocytose. Enfin, un traitement avec un inhibiteur de la PKC a d&#xE9;montr&#xE9; que les pertes dues AMPH DAT de la membrane plasmique ne d&#xE9;pendait pas de l&#x26;#39;activit&#xE9; PKC. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que les m&#xE9;canismes responsables de l&#x26;#39;internalisation DAT AMPH m&#xE9;diation sont ind&#xE9;pendantes de celles qui r&#xE9;gissent l&#x26;#39;endocytose DAT PKC-sensibles.

Induit par l&#x26;#39;amph&#xE9;tamine diminutions de l&#x26;#39;expression du transporteur de surface dopamine sont Protein Kinase C-ind&#xE9;pendante

Amphetamine (Ladeeffekt) ist ein potenter Dopamin (DA)-Transporter (DAT)-Hemmer, der extrazellul&auml;re DA Ebenen deutlich erh&ouml;ht. Zus&auml;tzlich zu seinen Aktionen als ein DAT-Antagonist induziert akute Verbraucherexposition bei Ladeeffekt DAT Verluste aus der Plasmamembran, zielbewu&szlig;t Transporter-spezifischen Membran Menschenhandel Amphetamin Aktionen. Trotz Berichte, dass Ladeeffekt DAT Oberfl&auml;che Ausdruck moduliert sind die Menschenhandel Mechanismen dazu, derzeit nicht definiert. Vor kurzem berichteten wir, dass DAT R&uuml;ckst&auml;nde 587-596 integral in eine konstitutive Rolle und Proteinkinase C PKC-beschleunigte DAT Internalisierung. In der aktuellen Studie haben wir getestet, ob die strukturellen Determinanten f&uuml;r die PKC-stimuliert DAT Internalisierung Ladeeffekt induziert DAT-Sequestrierung notwendig sind. Akuter Amphetamin Exposition erh&ouml;ht DAT endocytic Preise, aber DAT Carboxy terminal R&uuml;ckst&auml;nde 587-590, die f&uuml;r PKC-stimuliert Internalisierung erforderlich sind, sind nicht zur Ladeeffekt-beschleunigte DAT Endozytose erforderlich. Ladeeffekt verringert, DAT endocytic Verwertung, aber nicht modulieren Transferrin-Rezeptor-recycling, darauf hindeutet, dass Ladeeffekt nicht global endocytic Wiederverwertung vermindert wird. Behandlung mit einer PKC-Hemmer nachweislich schlie&szlig;lich Ladeeffekt induziert DAT Verluste von der Plasmamembran nicht PKC Aktivit&auml;t abh&auml;ngig waren. Diese Ergebnisse legen nahe, dass die Mechanismen, DAT Ladeeffekt-vermittelte Internalisierung von regierenden PKC-Sensitive DAT Endozytose unabh&auml;ngig sind.

Amphetamin-induzierten R&uuml;ckgang der Dopamin-Transporter-Oberfl&auml;che-Ausdruck sind Proteinkinase C-unabh&auml;ngig.

Anfetamine (AMPH) sono un inibitore di transporter (DAT) potente della dopamina (DA) che aumenta marcatamente extracellulari DA livelli. Oltre alle sue azioni come antagonista DAT, esposizione acuta AMPH induce perdite DAT dalla membrana del plasma, implicando specifiche del trasportatore membrana tratta di azioni di anfetamine. Nonostante i rapporti che AMPH modula espressione superficiale DAT, i traffici meccanismi che portano a questo effetto attualmente non sono definiti. Abbiamo recentemente segnalato che residui DAT 587-596 giocano un ruolo integrante nella costitutiva e interiorizzazione DAT C PKC-accelerato la chinasi di proteina. In questo studio, abbiamo testato sia i determinanti strutturali richiesti per interiorizzazione PKC-stimolato DAT sono necessari per il sequestro del DAT AMPH-indotta. L&#39;esposizione acuta anfetamine aumentato i tassi endocitico DAT, ma DAT carbossi terminale residui 587-590, che sono richiesti per interiorizzazione PKC-stimolato, non sono stati richiesti per endocitosi DAT accelerato AMPH. AMPH diminuito DAT endocitico riciclaggio, ma non ha fatto modulano il recettore Transferrina riciclaggio, suggerendo che AMPH, non diminuire globalmente endocitico riciclaggio. Infine, il trattamento con un inibitore PKC ha dimostrato che le perdite DAT AMPH-indotta dalla membrana del plasma non erano dipendente da attivit&agrave; PKC. Questi risultati suggeriscono che i meccanismi responsabili di interiorizzazione mediata da AMPH DAT sono indipendenti da quelle che disciplinano endocitosi DAT PKC-sensibili.

Anfetamina-indotto diminuzioni nell&#39;espressione superficiale di trasportatore della dopamina sono chinasi di proteina C-indipendente.

&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;AMPH&#xFF09;&#x304C;&#x9855;&#x8457;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;DA&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;DA&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;DAT&#xFF09;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; DAT&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3001;&#x6025;&#x6027;AMPH&#x66B4;&#x9732;&#x306F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x819C;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x304B;&#x3089;DAT&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3002; AMPH&#x306F;&#x3001;DAT&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x5831;&#x544A;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;DAT&#x6B8B;&#x57FA;587&#x304B;&#x3089;596&#x306F;&#x3001;&#x69CB;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#xFF08;PKC&#xFF09;&#xB7;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30E9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;DAT&#x30CA;&#x30EA;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;PKC&#x523A;&#x6FC0;DAT&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;AMPH-&#x8A98;&#x5C0E;DAT&#x9694;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6025;&#x6027;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x66DD;&#x9732;&#x306F;&#x3001;DAT&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;PKC&#x523A;&#x6FC0;&#x5185;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;DAT&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x672B;&#x7AEF;&#x6B8B;&#x57FA;587&#x304B;&#x3089;590&#x306F;&#x3001;AMPH-&#x52A0;&#x901F;DAT&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; AMPH&#x306F;&#x3001;DAT&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;AMPH&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;PKC&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x304B;&#x3089;AMPH-&#x8A98;&#x5C0E;DAT&#x640D;&#x5931;&#x306F;PKC&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;AMPH-DAT&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;PKC&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;DAT&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x304B;&#x3089;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;

&#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC; (AMPH)&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB2E4; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; (DA) &#xC804;&#xC1A1; (DAT) &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;. DAT &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xB85C; &#xC11C;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAE09;&#xC131; AMPH &#xB178;&#xCD9C; &#xC804;&#xC1A1; &#xAD00;&#xB828; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xBC00;&#xB9E4; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; DAT &#xC190;&#xC2E4; &#xC720;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. AMPH &#xBCC0;&#xC870; DAT &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xD604;&#xC7AC; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; DAT &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 587-596 &#xC81C;&#xC815;&#xC5D0; &#xD575;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xD560; &#xBCF4;&#xACE0; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C PKC &#xAC00;&#xC18D; DAT &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; PKC &#xC790;&#xADF9; DAT &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; AMPH &#xC720;&#xB3C4; DAT &#xACA9;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC778;&#xC9C0; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. &#xAE09;&#xC131; &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xB178;&#xCD9C; DAT endocytic &#xC18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; DAT carboxy &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 587-590, PKC &#xC790;&#xADF9; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; AMPH &#xAC00;&#xC18D; DAT endocytosis &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4;. AMPH DAT endocytic &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;, &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; AMPH&#xC740; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0; endocytic &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; transferrin &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, PKC &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; DAT AMPH &#xC720;&#xB3C4; &#xC190;&#xC2E4; PKC &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; AMPH &#xC911;&#xC7AC; DAT &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; PKC &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; DAT endocytosis &#xD1B5;&#xCE58; &#xADF8; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC218;&#xC1A1; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xC720;&#xBC1C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;.

La anfetamina (ANF) es una potente dopamina (DA) del transportador (DAT) inhibidor que aumenta notablemente los niveles extracelulares de DA. Adem&#xE1;s de sus acciones como un antagonista de la DAT, la exposici&#xF3;n aguda provoca p&#xE9;rdidas de AMPH DAT de la membrana plasm&#xE1;tica, lo que implica transportador espec&#xED;fico de tr&#xE1;fico de membrana en las acciones de las anfetaminas. A pesar de los informes de que AMPH modula la expresi&#xF3;n de DAT superficie, los mecanismos de tr&#xE1;fico que conducen a este efecto, no est&#xE1;n definidos. Recientemente hemos informado de que los residuos 587-596 DAT desempe&#xF1;an un papel integral en la constitutiva y la prote&#xED;na quinasa C (PKC)-DAT acelerada internacionalizaci&#xF3;n. En el presente estudio, hemos probado si los determinantes estructurales que se requieren para PKC-estimulado la internalizaci&#xF3;n DAT son necesarios para AMPH inducida por el secuestro de DAT. La exposici&#xF3;n aguda de anfetamina aument&#xF3; las tasas de DAT endoc&#xED;tica, pero DAT residuos carboxilo terminales 587-590, que son necesarios para la internalizaci&#xF3;n de PKC-estimulado, no se requiere para AMPH acelerado endocitosis DAT. AMPH disminuy&#xF3; reciclaje DAT endoc&#xED;tica, pero no modular reciclaje receptor de transferrina, lo que sugiere que no AMPH globalmente disminuir reciclaje endoc&#xED;tica. Por &#xFA;ltimo, el tratamiento con un inhibidor de la PKC demostrado que AMPH las p&#xE9;rdidas inducidas por DAT de la membrana plasm&#xE1;tica no depende de la actividad de la PKC. Estos resultados sugieren que los mecanismos responsables de la internalizaci&#xF3;n mediada por DAT AMPH son independientes de las que rigen la PKC sensibles endocitosis DAT.

Inducida por las anfetaminas La disminuci&#xF3;n en la expresi&#xF3;n de superficie Transportador de dopamina son la prote&#xED;na quinasa C-independiente

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; (DA) &#x518D;&#x6444;&#x53D6;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x80FD;&#x9012;&#x8D28;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x7EC8;&#x6B62;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ECB;&#x5BFC; DA &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (Dat)&#x3002;&#x6025;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC) &#x6FC0;&#x6D3B;&#x52A0;&#x901F;&#x4E86; DAT &#x5185;&#x5316;&#x7387;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x51CF;&#x5C11; DAT &#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x57FA;&#x5E95; DAT &#x541E;&#x548C; PKC &#x523A;&#x6FC0; DAT &#x529F;&#x80FD;&#x4E0B;&#x8C03;&#x867D;&#x7136; pkc DAT &#x4E0B;&#x8C03;&#x53CD;&#x6620;&#x4E86;&#x519C;&#x7528;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8F66;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x5236;&#x6302;&#x94A9;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x63A7;&#x5236;&#x57FA;&#x5E95;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x7387;&#x662F;&#x5426;&#x672A;&#x77E5;&#x4F9D;&#x8D56; 587 596 &#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E86;&#x5173;&#x4E8E;&#x57FA;&#x5E95;&#x548C; PKC &#x523A;&#x6FC0; DAT &#x5185;&#x541E;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x4EE3; DAT &#x6B8B;&#x7559; 587-590 1) &#x5E9F;&#x9664; PKC &#x523A;&#x6FC0; DAT &#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; 2&#xFF09; &#x663E;&#x8457;&#x52A0;&#x901F;&#x57FA;&#x5E95; DAT&#x3001; &#x5185;&#x5316;&#xFF0C;tn &#x91CE;&#x6BD2; DAT PKC &#x6FC0;&#x6D3B;&#x671F;&#x95F4;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x3002;&#x52A0;&#x901F;&#x57FA;&#x5E95; DAT &#x5185;&#x5316;&#x4E13;&#x95E8;&#x4F9D;&#x9760;&#x6B8B;&#x7559; 588-590&#xFF0C;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88; SLC6 &#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x5373; 587-590 &#x62C9;&#x4F38;&#x5185;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x53EF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x57FA;&#x5E95; DAT &#x5185;&#x5316;&#x7387;&#x80FD;&#x70BC;&#x5C31; PKC &#x654F;&#x611F;&#x5236;&#x52A8;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x8F68;&#x8FF9;&#x3002;

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x541E;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF1A; &#x7FA7;&#x57FA;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x6B8B;&#x7559;&#x57FA;&#x5E95;&#x548C; PKC &#x6FC0;&#x53D1;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

Dopamine (DA) reuptake terminates dopaminergic neurotransmission and is mediated by DA transporters (DATs). Acute protein kinase C (PKC) activation accelerates DAT internalization rates, thereby reducing DAT surface expression. Basal DAT endocytosis and PKC-stimulated DAT functional downregulation rely on residues within the 587-596 region, although whether PKC-induced DAT downregulation reflects transporter endocytosis mechanisms linked to those controlling basal endocytosis rates is unknown. Here, we define residues governing basal and PKC-stimulated DAT endocytosis. Alanine substituting DAT residues 587-590 1) abolished PKC stimulation of DAT endocytosis, and 2) markedly accelerated basal DAT internalization, comparable to that of wildtype DAT during PKC activation. Accelerated basal DAT internalization relied specifically on residues 588-590, which are highly conserved among SLC6 neurotransmitter transporters. Our results support a model whereby residues within the 587-590 stretch may serve as a locus for a PKC-sensitive braking mechanism that tempers basal DAT internalization rates.

Dopamine transporter endocytic determinants: carboxy terminal residues critical for basal and PKC-stimulated internalization.

La dopamine (DA) de la recapture de la neurotransmission dopaminergique et se termine est m&#xE9;di&#xE9;e par les transporteurs DA (DAT). Aigu&#xEB; la prot&#xE9;ine kinase C (PKC) d&#x26;#39;activation acc&#xE9;l&#xE8;re taux d&#x26;#39;internalisation DAT, r&#xE9;duisant ainsi l&#x26;#39;expression de surface DAT. Endocytose DAT basale et stimul&#xE9;e par la PKC r&#xE9;gulation &#xE0; la baisse DAT fonctionnelle compter sur les r&#xE9;sidus dans la r&#xE9;gion 587-596, bien que ce soit PKC induite par la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative refl&#xE8;te les m&#xE9;canismes d&#x26;#39;endocytose DAT transporteurs li&#xE9;s &#xE0; ces taux de contr&#xF4;le endocytose basales est inconnue. Ici, nous d&#xE9;finissons les r&#xE9;sidus r&#xE9;gissant basale et stimul&#xE9;e par la PKC endocytose DAT. Alanine substituant les r&#xE9;sidus 587-590 DAT 1) a supprim&#xE9; la stimulation de l&#x26;#39;endocytose PKC DAT, et 2) sensiblement acc&#xE9;l&#xE9;r&#xE9; internalisation DAT basale, comparable &#xE0; celle de type sauvage DAT lors de l&#x26;#39;activation de PKC. Acc&#xE9;l&#xE9;ration de l&#x26;#39;internalisation DAT basale s&#x26;#39;appuie sp&#xE9;cifiquement sur les r&#xE9;sidus 588-590, qui sont hautement conserv&#xE9;es parmi les SLC6 transporteurs de neurotransmetteurs. Nos r&#xE9;sultats appuient un mod&#xE8;le dans lequel les r&#xE9;sidus dans le tron&#xE7;on de 587 &#xE0; 590 peut servir comme un lieu d&#x26;#39;un m&#xE9;canisme PKC-sensibles de freinage qui temp&#xE8;re basales taux d &#x26;#39;internalisation DAT.

D&#xE9;terminants transporteur de la dopamine endocytose: R&#xE9;sidus carboxy-terminal critiques pour l&#x26;#39;internalisation basale et stimul&#xE9;e par la PKC

Dopamin (DA)-Reuptake beendet die dopaminergen Neurotransmission und ist von DA-Transporter (DAT) vermittelt. Akute Proteinkinase C (PKC) Aktivierung beschleunigt DAT Internalisierung Preise, wodurch DAT Oberfl&auml;che Ausdruck. Basale DAT Endozytose und PKC-stimuliert DAT funktionale Heraufregulation Vertrauen auf R&uuml;ckst&auml;nde innerhalb der 587-596-Region, obwohl ob PKC-induzierte DAT Heraufregulation Transporter Endozytose Mechanismen verbunden spiegelt diese steuernde basale Endozytose-Raten ist unbekannt. Hier definieren wir R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r basale und PKC-stimuliert DAT Endozytose. Alanin ersetzen DAT R&uuml;ckst&auml;nde 587-590 1) abgeschafft PKC Stimulation der DAT Endozytose und 2) deutlich beschleunigten basale DAT Internalisierung, vergleichbar mit der Wildtyp DAT w&auml;hrend der PKC-Aktivierung. Beschleunigte basale DAT Internalisierung st&uuml;tzte sich speziell auf R&uuml;ckst&auml;nde 588-590, die stark unter SLC6 Neurotransmitter-Transporter konserviert werden. Unsere Ergebnisse unterst&uuml;tzen ein Modell, wobei R&uuml;ckst&auml;nde innerhalb der 587-590-Strecke als ein Ort f&uuml;r ein PKC-Sensitive-Bremsen-Mechanismus dienen k&ouml;nnen, die basale DAT Internalisierung Preise m&auml;&szlig;igt.

Dopamin Transporter endocytic Determinanten: Carboxy-terminal-R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r basale und PKC-stimuliert Internalisierung von entscheidender Bedeutung.

Reuptake della dopamina (DA) termina la neurotrasmissione dopaminergica ed &egrave; mediata da trasportatori DA (dat). Chinasi di proteina acuta attivazione C (PKC) accelera i tassi di interiorizzazione DAT, riducendo in tal modo espressione superficiale DAT. Endocitosi DAT basale e PKC-stimolato DAT funzionale downregulation affidano residui all&#39;interno della regione di 587-596, pur se DAT PKC indotta downregulation riflette meccanismi di endocitosi trasportatore collegati a tali tariffe controllo basale endocitosi &egrave; sconosciuto. Qui, definiamo residui direttivo endocitosi DAT basale e stimolata da PKC. Alanina sostituendo residui DAT 587-590 1) abolita stimolazione PKC di endocitosi DAT e 2) notevolmente accelerato basale DAT interiorizzazione, paragonabile a quella di wildtype DAT durante l&#39;attivazione della PKC. Interiorizzazione di DAT basale accelerato invocata specificamente residui 588-590, che sono altamente conservati tra i trasportatori del neurotrasmettitore SLC6. I nostri risultati supportano un modello per cui residui all&#39;interno del tratto di 587-590 possono servire come un locus per un meccanismo frenante PKC-sensibili che temperamenti basali tassi di interiorizzazione di DAT.

Determinanti endocitico dopamina trasportatore: carbossi terminale residui critici per interiorizzazione basale e stimolata da PKC.

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;DA&#xFF09;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x7D42;&#x4E86;&#x3057;&#x3001;DA&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;DAT&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x6025;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#xFF08;PKC&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;DAT&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;DAT&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PKC&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;DAT&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7387;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x57FA;&#x5E95;&#x306E;DAT&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;PKC&#x523A;&#x6FC0;DAT&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;587&#x304B;&#x3089;596&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;PKC&#x523A;&#x6FC0;DAT&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DAT&#x6B8B;&#x57FA;587&#x304B;&#x3089;590&#x306B;1&#x3092;&#x4EE3;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;DAT&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;PKC&#x523A;&#x6FC0;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x3001;2&#xFF09;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x52A0;&#x901F;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x57FA;&#x5E95;DAT&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3001;PKC&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x4E2D;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;DAT&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x52A0;&#x901F;&#x57FA;&#x5E95;DAT&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;SLC6&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;588&#x304B;&#x3089;590&#x3001;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;587&#x304B;&#x3089;590&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x5185;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x6012;&#x308A;&#x57FA;&#x5E95;DAT&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7387;&#x304C;&#x305D;&#x306E;PKC-&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x5236;&#x52D5;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x8ECC;&#x8DE1;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x50CD;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#xFF1A;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;PKC&#x523A;&#x6FC0;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x672B;&#x7AEF;&#x6B8B;&#x57FA;

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; (DA) &#xC7AC;&#xD761;&#xC218; dopaminergic neurotransmission&#xB97C; &#xC885;&#xB8CC; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; (DATs)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE09;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC00;&#xC18D; DAT internalization &#xC694;&#xAE08;, DAT &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xAC10;&#xC18C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; &#xADF8; &#xC81C;&#xC5B4; &#xAE30;&#xC800; endocytosis &#xC694;&#xAE08; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; PKC &#xC720;&#xB3C4; DAT downregulation &#xC804;&#xC1A1; endocytosis &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xBC18;&#xC601; &#xC5EC;&#xBD80; &#xAE30;&#xC800; DAT endocytosis &#xBC0F; PKC &#xC790;&#xADF9; DAT &#xAE30;&#xB2A5; downregulation 587-596 &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB0B4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xAE30;&#xC800; &#xBC0F; PKC &#xC790;&#xADF9; DAT endocytosis &#xD1B5;&#xCE58; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xB300;&#xCCB4; DAT &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 587-590 1) &#xD3D0;&#xC9C0; PKC &#xC790;&#xADF9; DAT endocytosis &#xBC0F; 2) &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC00;&#xC18D;&#xB41C; &#xAE30;&#xC800; DAT &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;, PKC &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; wildtype DAT&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;. &#xAC00;&#xC18D;&#xB41C; &#xAE30;&#xC800; DAT &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 588-590, SLC6 &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC6B4;&#xBC18; &#xC911; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; 587-590 &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xCE58; &#xB0B4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xAE30;&#xC800; DAT internalization &#xC694;&#xAE08; tempers PKC &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC81C;&#xB3D9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC218;&#xC1A1; endocytic &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;: carboxy &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xAE30;&#xC800; &#xBC0F; PKC &#xC790;&#xADF9; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;.

La dopamina (DA) termina la recaptaci&#xF3;n de la neurotransmisi&#xF3;n dopamin&#xE9;rgica y est&#xE1; mediada por los transportadores de DA (DAT). Quinasa aguda prote&#xED;na C (PKC) acelera la activaci&#xF3;n tasas DAT internalizaci&#xF3;n, reduciendo as&#xED; la expresi&#xF3;n de DAT superficie. Endocitosis DAT basal y estimulada por la PKC regulaci&#xF3;n a la baja DAT funcionales dependen de los residuos dentro de la regi&#xF3;n 587-596, aunque si la PKC inducida por la regulaci&#xF3;n a la baja DAT refleja los mecanismos de endocitosis del transportador vinculados a esos tipos de endocitosis basales controlan es desconocida. En este caso, definimos los residuos que regulan la endocitosis DAT basal y estimulado la PKC. Alanina sustituyendo los residuos 587-590 DAT 1) aboli&#xF3; la estimulaci&#xF3;n de la PKC endocitosis DAT, y 2) notablemente acelerado internalizaci&#xF3;n DAT basal, comparable a la de tipo salvaje DAT durante la activaci&#xF3;n de PKC. Internalizaci&#xF3;n acelerada DAT basal se bas&#xF3; espec&#xED;ficamente en los residuos 588-590, que son altamente conservadas entre SLC6 transportadores de neurotransmisores. Nuestros resultados apoyan un modelo en el que los residuos dentro del tramo 587-590 puede servir como un locus para un mecanismo PKC sensible frenado que atempera basales tasas de internalizaci&#xF3;n DAT.

Determinantes transportador de dopamina endoc&#xED;tica: residuos carboxilo terminal cr&#xED;ticos para la internalizaci&#xF3;n basal y estimulado la PKC-

&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (DAT) &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; (DA) &#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x6210;&#x763E;&#x6027;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x7CBE;&#x795E;&#x79D1;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;DAT &#x654F;&#x9510;&#x5730;&#x53D7;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC) &#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E;&#x7684;&#x66DD;&#x5149;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x8C03;&#x5236; DAT &#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x541E;&#x8D29;&#x5356;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7814;&#x7A76; DAT &#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x88AB;&#x9700;&#x8981;&#x4EE5;&#x72EC;&#x5360;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6807;&#x7B7E; DAT &#x8868;&#x9762;&#x6C60;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x819C; impermeant&#x3001; &#x78FA;&#x5316; biarsenic &#x67D3;&#x6599;&#x5177;&#x6709;&#x6F5C;&#x529B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x548C;&#x9700;&#x8981;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x80DE;&#x5916; tetracysteine (tetraCys &#xFF1B; &#x6BCD;&#x9898;CCPGCC&#xFF09;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x67D3;&#x6599;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x7518;&#x6C28;&#x9178; (Pro-&#x7518;) &#x4E8C;&#x80BD;&#x5728;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684; DAT &#x80DE;&#x5916;&#x57DF; tetraCys &#x56FE;&#x6848;&#x5F15;&#x5165; DAT &#x80DE;&#x5916;&#x73AF; 2&#x3001; 3 &#x548C; 4 &#x4E2D;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;[H (3)]DA &#x5438;&#x6536;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5728; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9; tetraCys &#x63D2;&#x5165;&#x5230;&#x7EF4;&#x62A4; PKC &#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4E2D;&#x7684; DAT &#x4E8C;&#x80DE;&#x5916;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;TetraCys &#x5F15;&#x5165; 3 &#x548C; 4 &#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF;&#x8DEF;&#x4EA7;&#x751F; Dat &#x672A;&#x80FD;&#x6210;&#x719F;&#x53CA;&#x4EA4;&#x901A;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x4E25;&#x91CD;&#x53D7;&#x635F;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F; tetracysteine &#x6BCD;&#x9898;&#x6210;&#x529F;&#x5F15;&#x5165; DAT &#x80DE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x9996;&#x6B21;&#x5C55;&#x793A;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x9884;&#x793A; biarsenic &#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x51B5; DAT &#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x3002;

&#x4E2D;&#x63D2;&#x5165; tetracysteine &#x56FE;&#x6848;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x80DE;&#x5916;&#x57DF;&#x3002;

The neuronal dopamine transporter (DAT) is a major determinant of extracellular dopamine (DA) levels and is the primary target for a variety of addictive and therapeutic psychoactive drugs. DAT is acutely regulated by protein kinase C (PKC) activation and amphetamine exposure, both of which modulate DAT surface expression by endocytic trafficking. In order to use live imaging approaches to study DAT endocytosis, methods are needed to exclusively label the DAT surface pool. The use of membrane impermeant, sulfonated biarsenic dyes holds potential as one such approach, and requires introduction of an extracellular tetracysteine motif (tetraCys; CCPGCC) to facilitate dye binding. In the current study, we took advantage of intrinsic proline-glycine (Pro-Gly) dipeptides encoded in predicted DAT extracellular domains to introduce tetraCys motifs into DAT extracellular loops 2, 3, and 4. [(3)H]DA uptake studies, surface biotinylation and fluorescence microscopy in PC12 cells indicate that tetraCys insertion into the DAT second extracellular loop results in a functional transporter that maintains PKC-mediated downregulation. Introduction of tetraCys into extracellular loops 3 and 4 yielded DATs with severely compromised function that failed to mature and traffic to the cell surface. This is the first demonstration of successful introduction of a tetracysteine motif into a DAT extracellular domain, and may hold promise for use of biarsenic dyes in live DAT imaging studies.

Insertion of tetracysteine motifs into dopamine transporter extracellular domains.

Le transporteur de la dopamine neuronale (DAT) est un d&#xE9;terminant majeur de extracellulaires dopamine (DA) les niveaux et est la principale cible pour une vari&#xE9;t&#xE9; de d&#xE9;pendance et th&#xE9;rapeutique des m&#xE9;dicaments psychotropes. DAT est extr&#xEA;mement r&#xE9;glement&#xE9;e par la prot&#xE9;ine kinase C (PKC) et activation exposition aux amph&#xE9;tamines, &#xE0; la fois de ce qui modulent l&#x26;#39;expression de surface par le trafic endocytaire DAT. Afin d&#x26;#39;utiliser des m&#xE9;thodes d&#x26;#39;imagerie en direct pour &#xE9;tudier l&#x26;#39;endocytose DAT, les m&#xE9;thodes sont n&#xE9;cessaires pour &#xE9;tiqueter exclusivement de la piscine de surface DAT. L&#x26;#39;utilisation de imperm&#xE9;ant membrane, sulfon&#xE9;s colorants biarsenic d&#xE9;tient un potentiel comme une telle approche, et n&#xE9;cessite l&#x26;#39;introduction d&#x26;#39;un motif t&#xE9;tracyst&#xE9;ine extracellulaire (tetraCys; CCPGCC) pour faciliter fixation d&#x26;#39;un colorant. Dans l&#x26;#39;&#xE9;tude actuelle, nous avons profit&#xE9; de intrins&#xE8;ques dipeptides proline-glycine (Pro-Gly) encod&#xE9;s dans des domaines extracellulaires DAT pr&#xE9;vus pour introduire des motifs tetraCys en DAT extracellulaire boucles 2, 3 et 4. [(3) H] DA &#xE9;tudes de la capture, la biotinylation de surface et la microscopie de fluorescence dans les cellules PC12 indiquent que l&#x26;#39;insertion dans les DAT tetraCys deuxi&#xE8;me boucle extracellulaire des r&#xE9;sultats dans un transporteur fonctionnel qui maintient la PKC-m&#xE9;diation r&#xE9;gulation &#xE0; la baisse. Introduction de tetraCys en boucles extracellulaires 3 et 4 a abouti &#xE0; des fichiers DAT avec la fonction qui a &#xE9;chou&#xE9; gravement compromise &#xE0; m&#xFB;rir et &#xE0; la circulation &#xE0; la surface cellulaire. C&#x26;#39;est la premi&#xE8;re d&#xE9;monstration de l&#x26;#39;introduction r&#xE9;ussie d&#x26;#39;un motif t&#xE9;tracyst&#xE9;ine dans un DAT domaine extracellulaire, qui pourrait &#xEA;tre prometteuse pour l&#x26;#39;utilisation de colorants biarsenic en direct des &#xE9;tudes d&#x26;#39;imagerie DAT.

Insertion de motifs t&#xE9;tracyst&#xE9;ine dans les domaines transporteur de la dopamine extracellulaire

Der neuronale Dopamin-Transporter (DAT) ist ein ausschlaggebender Faktor f&uuml;r extrazellul&auml;re Dopamin (DA) Ebenen und ist das prim&auml;re Ziel f&uuml;r eine Vielzahl von s&uuml;chtig und therapeutische Psychopharmaka. DAT wird akut durch Proteinkinase C (PKC) Aktivierung und Amphetamin-Exposition, reguliert beide DAT Oberfl&auml;che Ausdruck von endocytic Menschenhandel modulieren. Um verwenden sind live imaging Ans&auml;tze um DAT Endozytose, studieren Methoden notwendig, ausschlie&szlig;lich den DAT-Oberfl&auml;chen-Pool zu kennzeichnen. Die Verwendung der Membran impermeant, sulfonierte Biarsenic Farbstoffe enth&auml;lt potential wie einen solchen Ansatz und erfordert die Einf&uuml;hrung einer extrazellul&auml;ren Tetracysteine Motiv (TetraCys; CCPGCC) Farbstoff Bindung zu erleichtern. In der aktuellen Studie nutzten wir systeminterne Prolin-Glycin (Pro-Gly) Dipeptide in vorhergesagten DAT extrazellul&auml;re Dom&auml;nen zur Einf&uuml;hrung von TetraCys Motiven in DAT extrazellul&auml;re Schleifen, 2, 3 und 4 codiert. [(3) H]DA Aufnahme Studien, Oberfl&auml;che Biotinylierung und Fluoreszenz-Mikroskopie in PC12 Zellen zeigen, dass TetraCys Einf&uuml;gung in die DAT zweite extrazellul&auml;re Schleife ergibt eine funktionelle Transporter, der PKC-vermittelte Heraufregulation verwaltet. Einf&uuml;hrung des TetraCys in extrazellul&auml;ren Schleifen, 3 und 4 hat mit stark beeintr&auml;chtigte Funktion, die nicht Reifen und Verkehr an der Zelloberfl&auml;che DATs ergeben. Dies ist die erste Demonstration der erfolgreichen Einf&uuml;hrung eines Tetracysteine-Motivs in eine DAT extrazellul&auml;ren Dom&auml;ne und Versprechen f&uuml;r die Verwendung von Biarsenic Farbstoffe in live DAT imaging Studien halten kann.

Einf&uuml;gen von Tetracysteine Motiven in Dopamin Transporter extrazellul&auml;re Dom&auml;nen.

Il trasportatore neuronale della dopamina (DAT) &egrave; un determinante della dopamina extracellulare (DA) livelli ed &egrave; l&#39;obiettivo primario per una variet&agrave; di droghe psicoattive coinvolgente e terapeutici. DAT acutamente &egrave; regolato dalla proteina chinasi C (PKC) attivazione e anfetamine esposizione, entrambi i quali modulano espressione superficiale DAT da traffico endocitico. Per poter utilizzare live imaging approcci per studiare endocitosi DAT, metodi sono necessari per l&#39;etichetta esclusiva piscina superficie DAT. L&#39;uso di coloranti solfonati, impermeant biarsenic membrana tiene potenziale come un tale approccio e richiede l&#39;introduzione di un motivo tetracysteine extracellulare (tetraCys; CCPGCC) per facilitare l&#39;associazione colorante. In questo studio, abbiamo approfittato della prolina-glicina intrinseca dipeptidi (Pro-Gly) codificati nel predetti domini extracellulari DAT ad introdurre motivi tetraCys in loop extracellulare DAT 2, 3 e 4. [H (3)]DA studi di captazione, superficie microscopia di fluorescenza e biotinylation in cellule PC12 indicare tale inserimento tetraCys nei risultati del ciclo extracellulare secondo DAT in un trasportatore funzionale che mantiene la downregulation PKC-mediata. Introduzione nel loop extracellulare 3 e 4 di tetraCys ceduto DATs con funzione compromessa, che non &egrave; riuscito a maturare e traffico alla superficie delle cellule. Questa &egrave; la prima dimostrazione del successo dell&#39;introduzione di un motivo di tetracysteine in un dominio extracellulare DAT e possa tenere la promessa per l&#39;uso di coloranti biarsenic in DAT dal vivo gli studi di imaging.

Inserimento di motivi tetracysteine in domini extracellulari di dopamina trasportatore.

&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;DAT&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;DA&#xFF09;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x7CBE;&#x795E;&#x85AC;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002; DAT&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#xFF08;PKC&#xFF09;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3067;DAT&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x66B4;&#x9732;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DAT&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x306B;DAT&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x819C;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30F3;&#x5316;biarsenic&#x67D3;&#x6599;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#xFF08;tetraCys&#x3002;CCPGCC&#xFF09;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x8272;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DAT&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;2&#x3001;3&#x3001;4&#x306B;tetraCys&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;DAT&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3; - &#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;PRO-Gly&#xFF09;&#x306E;&#x30B8;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002; [&#xFF08;3&#xFF09;H] PC12&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;DA&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;PKC&#x5A92;&#x4ECB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;DAT&#x7B2C;2&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x305D;&#x306E;tetraCys&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;3&#x3068;4&#x306B;tetraCys&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x305F;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x5371;&#x967A;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;DAT&#x3092;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;DAT&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x306B;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;DAT&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;biarsenic&#x67D3;&#x6599;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x633F;&#x5165;

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; (DAT) &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xACB0;&#xC815;&#xC790; (DA) &#xC218;&#xC900; &#xACE0; &#xC2B5; &#xAD00;&#xC131; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC815;&#xC2E0; &#xD65C;&#xC131; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xB300;&#xC0C1;&#xC778;. DAT&#xB294; &#xC2EC;&#xD558;&#xAC8C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xB178;&#xCD9C;, &#xB458; &#xB2E4; endocytic &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; DAT &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; DAT endocytosis &#xACF5;&#xBD80; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95; &#xD544;&#xC694; &#xB3C5;&#xC810;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; DAT &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC601;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; impermeant, &#xC220; &#xD3F0; &#xD654; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4; biarsenic &#xC5FC;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xAC19;&#xC740; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; tetracysteine &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; (tetraCys;&#xC758; &#xB3C4;&#xC785;&#xC774; &#xD544;&#xC694; CCPGCC) &#xC5FC;&#xB8CC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; DAT &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB8E8;&#xD504; 2, 3 &#xBC0F; 4&#xB85C; tetraCys &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC608;&#xCE21; &#xB41C; DAT &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; (&#xD504;&#xB85C; Gly) dipeptides &#xB0B4;&#xC7A5; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xC774;&#xC6A9;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. [(3) H]&#xB2E4; &#xD638;&#xC751;&#xC744; &#xC5BB; &#xC5C8; &#xC5F0;&#xAD6C; PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; biotinylation &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; DAT &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB8E8;&#xD504; &#xACB0;&#xACFC; PKC &#xC911;&#xC7AC; downregulation&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; tetraCys &#xC0BD;&#xC785;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB8E8;&#xD504; 3 &#xBC0F; 4&#xB85C; Tetracys&#xC758; &#xC18C;&#xAC1C; &#xC131;&#xC219; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC2E4;&#xD328; &#xD558;&#xB294; &#xC2EC;&#xAC01; &#xD558; &#xAC8C; &#xC190;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; Dats&#xB97C; &#xC5BB;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xB2E4;. DAT &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; tetracysteine &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xC785;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB370;&#xBAA8; &#xC774;&#xBA70; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; DAT &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; biarsenic &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xC7A1;&#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC218;&#xC1A1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; tetracysteine &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; &#xC0BD;&#xC785;.

El transportador de dopamina neuronal (DAT) es un determinante importante de la extracelulares de dopamina (DA) los niveles y es el objetivo principal para una gran variedad de sustancias psicoactivas adictivas y terap&#xE9;uticos. DAT es extremadamente regulado por la prote&#xED;na quinasa C (PKC) la activaci&#xF3;n y la exposici&#xF3;n anfetamina, ambos de los cuales modulan la expresi&#xF3;n de DAT superficie por el tr&#xE1;fico endoc&#xED;tica. Con el fin de utilizar enfoques vivos de imagen para estudiar endocitosis DAT, se necesitan m&#xE9;todos para etiquetar exclusivamente la superficie de la piscina DAT. El uso de impermeant membrana, sulfonados tintes biarsenic tiene potencial como un enfoque tal, y requiere la introducci&#xF3;n de un motivo tetracysteine &#x200B;&#x200B;extracelular (tetraCys; CCPGCC) para facilitar la fijaci&#xF3;n de colorante. En el estudio actual, que tom&#xF3; ventaja de intr&#xED;nsecas dip&#xE9;ptidos prolina-glicina (Pro-Gly) codificados en predijo dominios extracelulares DAT para introducir motivos tetraCys en DAT extracelular bucles de 2, 3 y 4. [(3) H] DA estudios de absorci&#xF3;n, la biotinilaci&#xF3;n superficie y microscop&#xED;a de fluorescencia en las c&#xE9;lulas PC12 indican que la inserci&#xF3;n tetraCys en los resultados DAT segundo bucle extracelular en un transportador funcional que mantiene la PKC mediada downregulation. Introducci&#xF3;n de tetraCys en bucles extracelulares 3 y 4 dio DAT con funci&#xF3;n gravemente comprometida que no maduran y el tr&#xE1;fico a la superficie celular. Esta es la primera demostraci&#xF3;n de la introducci&#xF3;n con &#xE9;xito de un motivo tetracysteine &#x200B;&#x200B;en un dominio extracelular de DAT, y pueden ser prometedoras para el uso de tintes biarsenic en vivo DAT estudios de imagen.

La inserci&#xF3;n de Motivos Tetracysteine &#x200B;&#x200B;en los dominios extracelulares de dopamina Transporter

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x80FD;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x548C;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x5BF9;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x75C5;&#x7406;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3001; &#x8BA4;&#x77E5;&#x3001; &#x548C;&#x6210;&#x763E;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x82EF;&#x4E19;&#x80FA;&#x548C;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x654F;&#x611F;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; (DA) &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (DAT) &#x4E25;&#x683C;&#x63A7;&#x5236;&#x80DE;&#x5916; DA &#x6D53;&#x5EA6;&#x548C;&#x534A;&#x8870;&#x671F;&#x3002;DAT &#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0D;&#x662F;&#x9759;&#x6001;&#x7684;&#x4F46;&#x52A8;&#x6001;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x819C;&#x8D29;&#x5356;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86; DAT C &#x603B;&#x7AD9;&#x5BF9;&#x8FD8;&#x53D6;&#x6D88;&#x57FA;&#x5E95; DAT &#x541E;&#x7684; PKC &#x654F;&#x611F;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7406;&#x4E8B;&#x4F1A;&#x76D1;&#x7BA1; DAT &#x8D29;&#x8FD0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5668;&#x4E0D;&#x662F;&#x5B9A;&#x4E49;&#x597D;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684; Ras &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;Rin (&#x4E3A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684; Ras &#x6837;&#xFF09; &#xFF08;Rit2&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;DAT C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x541E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x3001; GST &#x62C9;&#x4E0B;&#x548C;&#x97F3;&#x54C1;&#x7814;&#x7A76;&#x5EFA;&#x7ACB; DAT &#x548C; Rin &#x76F4;&#x63A5;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A; DAT/Rin &#x534F;&#x4F1A;&#x53D1;&#x751F;&#x4E3B;&#x8981;&#x5728;&#x8102;&#x7B4F;&#x5FAE;&#x533A;&#x3002;Coimmunoprecipitations &#x8868;&#x660E; PKC &#x6D3B;&#x5316;&#x8C03;&#x8282; Rin Rin dat &#x4E2D;&#x6444;&#x52A8;&#x51FD;&#x6570;&#x5173;&#x8054;&#x86CB;&#x767D;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC; shRNA Rin &#x2477; &#x63ED;&#x793A;&#x4E86; Rin PKC &#x4ECB;&#x5BFC; DAT &#x5185;&#x5316;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x4E0B;&#x8C03;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x7ACB; Rin &#x662F; DAT &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6240;&#x9700;&#x7684; PKC &#x89C4;&#x8303; DAT &#x8D29;&#x5356;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E; Rin &#x53C2;&#x52A0;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x76F8;&#x5173; GTPase Rin &#x4E0E;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9700;&#x5BF9;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x8C03;&#x8282;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x8D29;&#x5356;&#x3002;

Dopaminergic signaling and plasticity are essential to numerous CNS functions and pathologies, including movement, cognition, and addiction. The amphetamine- and cocaine-sensitive dopamine (DA) transporter (DAT) tightly controls extracellular DA concentrations and half-life. DAT function and surface expression are not static but are dynamically modulated by membrane trafficking. We recently demonstrated that the DAT C terminus encodes a PKC-sensitive internalization signal that also suppresses basal DAT endocytosis. However, the cellular machinery governing regulated DAT trafficking is not well defined. In work presented here, we identified the Ras-like GTPase, Rin (for Ras-like in neurons) (Rit2), as a protein that interacts with the DAT C-terminal endocytic signal. Yeast two-hybrid, GST pull down and FRET studies establish that DAT and Rin directly interact, and colocalization studies reveal that DAT/Rin associations occur primarily in lipid raft microdomains. Coimmunoprecipitations demonstrate that PKC activation regulates Rin association with DAT. Perturbation of Rin function with GTPase mutants and shRNA-mediated Rin knockdown reveals that Rin is critical for PKC-mediated DAT internalization and functional downregulation. These results establish that Rin is a DAT-interacting protein that is required for PKC-regulated DAT trafficking. Moreover, this work suggests that Rin participates in regulated endocytosis.

The plasma membrane-associated GTPase Rin interacts with the dopamine transporter and is required for protein kinase C-regulated dopamine transporter trafficking.

Signalisation dopaminergique et la plasticit&#xE9; sont essentielles &#xE0; de nombreuses fonctions du syst&#xE8;me nerveux central et les pathologies, y compris le mouvement, la cognition, et de la toxicomanie. La dopamine amph&#xE9;tamine et de coca&#xEF;ne-sensibles (DA) transporteur (DAT) contr&#xF4;le &#xE9;troitement les concentrations extracellulaires DA et la demi-vie. Fonction de DAT et d&#x26;#39;expression de surface ne sont pas statiques, mais sont dynamiquement modul&#xE9;e par le trafic membranaire. Nous avons r&#xE9;cemment d&#xE9;montr&#xE9; que le terminus DAT C code pour un signal d&#x26;#39;internalisation PKC-sensible qui supprime aussi l&#x26;#39;endocytose DAT basale. Cependant, la machinerie cellulaire qui r&#xE9;git le trafic r&#xE9;glement&#xE9; DAT n&#x26;#39;est pas bien d&#xE9;finie. Dans le travail pr&#xE9;sent&#xE9; ici, nous avons identifi&#xE9; la Ras-GTPase, Rin (pour Ras-like dans les neurones) (Rit2), comme une prot&#xE9;ine qui interagit avec le DAT C-terminale du signal d&#x26;#39;endocytose. Deux hybrides de levure, GST pull vers le bas et &#xE9;tudes FRET &#xE9;tablir que DAT et Rin interagir directement, et les &#xE9;tudes r&#xE9;v&#xE8;lent que de colocalisation DAT / Rin associations se produisent principalement dans des microdomaines radeaux lipidiques. Coimmunoprecipitations d&#xE9;montrer que activation de la PKC r&#xE9;gule Rin association avec DAT. Perturbation de la fonction Rin avec des mutants GTPases et shRNA m&#xE9;diation knockdown Rin r&#xE9;v&#xE8;le que Rin est critique pour l&#x26;#39;internalisation DAT PKC-m&#xE9;diation et de r&#xE9;gulation &#xE0; la baisse fonctionnelle. Ces r&#xE9;sultats &#xE9;tablissent que Rin est une prot&#xE9;ine interagissant avec DAT qui est n&#xE9;cessaire pour la PKC-r&#xE9;glement&#xE9; le trafic DAT. En outre, ce travail sugg&#xE8;re que Rin participe &#xE0; l&#x26;#39;endocytose r&#xE9;glement&#xE9;.

Le plasma associ&#xE9;e &#xE0; la membrane GTPase Rin interagit avec le transporteur de la dopamine et est n&#xE9;cessaire pour la prot&#xE9;ine kinase C-r&#xE9;glement&#xE9; traite Dopamine Transporter

Dopaminergen Signalisierung und Plastizit&auml;t sind wesentlich f&uuml;r zahlreiche CNS-Funktionen und Krankheiten, einschlie&szlig;lich Bewegung, Kognition und sucht. Der Amphetamine und Kokain-Sensitive-Dopamin (DA)-Transporter (DAT) steuert eng extrazellul&auml;ren Konzentrationen in DA und Half-Life. DAT-Funktion und Oberfl&auml;che Ausdruck sind nicht statisch, sondern werden dynamisch durch Membranen moduliert. Wir vor kurzem gezeigt, dass das DAT Carboxyl-Terminus ein PKC-Sensitive Internalisierung Signal codiert, die auch basale DAT Endozytose unterdr&uuml;ckt. Die zellul&auml;re Maschinerie, die EZB geregelten DAT Menschenhandel ist jedoch nicht klar definiert. In der hier vorgestellten Arbeit, wir identifiziert die Ras-&auml;hnlichen GTPase, Rin (f&uuml;r Ras-wie in Neuronen) (Rit2), als ein Protein, das mit dem DAT-C-terminalen endocytic Signal interagiert. Hefe-zwei-Hybrid, GST herunterziehen und FRET Studien nachweisen, dass DAT und Rin direkt interagieren und Kolokalisation Studien zeigen, dass DAT/Rin Verb&auml;nde in erster Linie in Lipid Raft Microdomains auftreten. Coimmunoprecipitations zeigen, dass PKC Aktivierung Rin Verbindung mit DAT. St&ouml;rung von Rin-Funktion mit GTPase Mutanten reguliert und ShRNA-vermittelte Rin Niederschlag zeigt, dass Rin f&uuml;r PKC-vermittelte DAT Internalisierung und funktionale Heraufregulation wichtig ist. Diese Ergebnisse belegen, dass Rin ein DAT-Interaktion-Protein, das ist f&uuml;r DAT PKC geregelten Handels erforderlich ist. Dar&uuml;ber hinaus empfiehlt diese Arbeit Rin an geregelten Endozytose beteiligt ist.

Die Plasmamembran-assoziierten GTPase Rin interagiert mit den Dopamin-Transporter und ist erforderlich f&uuml;r Protein Kinase C geregelten Dopamin-Transporter-Handel.

Segnalazione di dopaminergico e plasticit&agrave; sono essenziali alle numerose funzioni di CNS e patologie, tra cui movimento, cognizione e dipendenza. Il trasportatore della dopamina (DA) anfetamine e cocaina-sensibili (DAT) controlla strettamente Half-Life e concentrazioni extracellulari di DA. Funzione di DAT ed espressione superficiale non sono statici ma dinamicamente sono modulati dal traffico di membrana. Abbiamo recentemente dimostrato che il capolinea DAT C codifica un segnale di interiorizzazione di PKC-sensibili che sopprime anche endocitosi DAT basale. Tuttavia, il macchinario cellulare che regolano il traffico DAT regolamentato non &egrave; ben definito. Nel lavoro qui presentato, abbiamo identificato il simil-Ras GTPasi, Rin (per Ras-come nei neuroni) (Rit2), come una proteina che interagisce con il segnale endocitico DAT C-terminale. Due-ibrido del lievito, GST tirare verso il basso e studi FRET stabiliscono che DAT e Rin interagire direttamente e presenza studi rivelano che le associazioni DAT/Rin si verificano principalmente in microdomains Zattera lipidica. Coimmunoprecipitations dimostrare che attivazione PKC regola Rin associazione con funzione di DAT. perturbazione di Rin con GTPase mutanti e mediata da shRNA Rin atterramento rivela che Rin &egrave; critica per interiorizzazione PKC-mediated DAT e funzionale downregulation. Questi risultati stabiliscono che Rin &egrave; una proteina interagente DAT che &egrave; necessaria per il traffico di DAT PKC-regolato. Inoltre, questo lavoro suggerisce che Rin partecipa endocitosi regolata.

La membrana plasmatica associati GTPase Rin interagisce con il trasportatore della dopamina ed &egrave; necessaria per la proteina chinasi C-regolato dopamina trasportatore traffico.

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x304C;&#x904B;&#x52D5;&#x3001;&#x8A8D;&#x77E5;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x75C5;&#x614B;&#x3078;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3084;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;DA&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;DAT&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;DA&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DAT&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x9759;&#x7684;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x819C;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;DAT&#x3001;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x3082;&#x57FA;&#x5E95;DAT&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;PKC-&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30CA;&#x30EA;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x898F;&#x5236;DAT&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DAT&#x3001;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;RAS-GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x3001;&#x51DB;&#xFF08;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x306E;Ras&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#xFF09;&#xFF08;Rit2&#xFF09;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;GST&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DAT&#x3068;Rin&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;FRET&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DAT / RIN&#x5354;&#x4F1A;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x8102;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Coimmunoprecipitations&#x306F;&#x3001;PKC&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;DAT&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x304A;&#x3088;&#x3073;shRNA&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x308A;&#x3093;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3068;&#x51DB;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;RIN&#x306F;&#x3001;PKC&#x5A92;&#x4ECB;DAT&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;Rin&#x306F;PKC&#x8ABF;&#x7BC0;DAT&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;DAT&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898F;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x898F;&#x5236;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x95A2;&#x9023;GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x51DB;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;

Dopaminergic &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC18C;&#xC131; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; CNS &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xBCD1; &#xB9AC;, &#xC6B4;&#xB3D9;, &#xC778;&#xC9C0;, &#xC911;&#xB3C5; &#xB4F1; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC;&#xACFC; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; (DA) &#xC804;&#xC1A1; (DAT) &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB2E4; &#xB18D;&#xB3C4; &#xD558;&#xD504; &#xB77C;&#xC774;&#xD504;&#xC5D0; &#xAE34;&#xBC00; &#xD558; &#xAC8C; &#xC81C;&#xC5B4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DAT &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xACE0;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xB9C9; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; DAT C &#xB9D0;&#xB2E8; &#xAE30;&#xC800; DAT endocytosis &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; PKC &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; DAT &#xBC00;&#xB9E4; &#xD1B5;&#xCE58; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAE30;&#xACC4; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C; Ras &#xAC19;&#xC740; GTPase &#xB9B0; &#xC2DD;&#xBCC4; (&#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; Ras &#xAC19;&#xC740;) (Rit2), DAT C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; endocytic &#xC2E0;&#xD638; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C;. &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xD558; &#xACE0; GST &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC218;&#xB9BD; DAT&#xC640; &#xB9B0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;, colocalization &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACF5;&#xAC1C; DAT/&#xB9B0; &#xD611;&#xD68C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB5CF;&#xBAA9; microdomains&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Coimmunoprecipitations &#xBCF4;&#xC5EC; PKC &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC870;&#xC808; GTPase &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; DAT. &#xB9B0; &#xC12D; &#xB3D9; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xB9B0; &#xD611;&#xD68C; &#xB9B0; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; shRNA &#xC911;&#xC7AC; &#xBC1D;&#xD600; &#xB9B0; PKC &#xC911;&#xC7AC; DAT &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xBC0F; downregulation &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9B0; DAT &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; PKC &#xADDC;&#xC81C; DAT &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; &#xC791;&#xD488; &#xB9B0; &#xADDC;&#xC81C; endocytosis&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

&#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; GTPase &#xB9B0; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &#xADDC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se&#xF1;alizaci&#xF3;n dopamin&#xE9;rgica y la plasticidad son esenciales para las funciones del sistema nervioso central y patolog&#xED;as m&#xFA;ltiples, incluyendo el movimiento, la cognici&#xF3;n y la adicci&#xF3;n. La dopamina de tipo anfetam&#xED;nico y sensibles a la coca&#xED;na (DA) del transportador (DAT) controla estrechamente las concentraciones extracelulares de DA y la vida media. Funci&#xF3;n de DAT y expresi&#xF3;n en la superficie no son est&#xE1;ticos sino que son modulados por el tr&#xE1;fico de forma din&#xE1;mica de la membrana. Recientemente hemos demostrado que el t&#xE9;rmino DAT C codifica una se&#xF1;al de la internalizaci&#xF3;n de PKC-sensible, que tambi&#xE9;n suprime la endocitosis DAT basal. Sin embargo, la maquinaria celular que rige regulado el tr&#xE1;fico de DAT no est&#xE1; bien definida. En el trabajo que aqu&#xED; se presenta, se identific&#xF3; el barrio de Ras-al igual que GTPasa, Rin (de Ras-al igual que en las neuronas) (Rit2), como una prote&#xED;na que interact&#xFA;a con el DAT C-terminal de la se&#xF1;al endoc&#xED;tica. Levadura de dos h&#xED;bridos, GST tirar hacia abajo y FRET estudios establecen que DAT y Rin interactuar directamente, y los estudios revelan que la colocalizaci&#xF3;n DAT / Rin asociaciones se presentan principalmente en microdominios balsa de l&#xED;pidos. Coimmunoprecipitations demuestran que la activaci&#xF3;n de PKC regula Rin asociaci&#xF3;n con DAT. Perturbaci&#xF3;n de la funci&#xF3;n Rin con mutantes GTPasa y shRNA mediada desmontables Rin Rin revela que es fundamental para la internalizaci&#xF3;n DAT mediada por PKC y la regulaci&#xF3;n a la baja funcional. Estos resultados establecen que Rin es una prote&#xED;na DAT-interacci&#xF3;n que se requiere para la PKC-regulado el tr&#xE1;fico DAT. Por otra parte, este trabajo sugiere que participa en la endocitosis Rin regulado.

La membrana plasm&#xE1;tica asociada GTPasa Rin Interact&#xFA;a con el transportador de dopamina y es necesario para la prote&#xED;na quinasa C-regulado el tr&#xE1;fico transportador de dopamina

The acid-sensitive neuronal potassium leak channel, KCNK3, is vital for setting the resting membrane potential and is the primary target for volatile anesthetics. Recent reports demonstrate that KCNK3 activity is down-regulated by PKC; however, the mechanisms responsible for PKC-induced KCNK3 down-regulation are undefined. Here, we report that endocytic trafficking dynamically regulates KCNK3 activity. Phorbol esters and Group I metabotropic glutamate receptor (mGluR) activation acutely decreased both native and recombinant KCNK3 currents with concomitant KCNK3 surface losses in cerebellar granule neurons and cell lines. PKC-mediated KCNK3 internalization required the presence of both 14-3-3β and a novel potassium channel endocytic motif, because depleting either 14-3-3β protein levels or ablating the endocytic motif completely abrogated PKC-regulated KCNK3 trafficking. These results demonstrate that neuronal potassium leak channels are not static membrane residents but are subject to 14-3-3β-dependent regulated trafficking, providing a straightforward mechanism to modulate neuronal excitability and synaptic plasticity by Group I mGluRs.

The acid-sensitive, anesthetic-activated potassium leak channel, KCNK3, is regulated by 14-3-3β-dependent, protein kinase C (PKC)-mediated endocytic trafficking.

Dopaminergic signaling profoundly impacts rewarding behaviors, movement, and executive function. The presynaptic dopamine (DA) transporter (DAT) recaptures released DA, thereby limiting synaptic DA availability and maintaining dopaminergic tone. DAT constitutively internalizes and PKC activation rapidly accelerates DAT endocytosis, resulting in DAT surface loss. Longstanding evidence supports PKC-stimulated DAT trafficking in heterologous expression studies. However, PKC-stimulated DAT internalization is not readily observed in cultured dopaminergic neurons. Moreover, conflicting reports implicate both classic and nonclassic endocytic mechanisms mediating DAT trafficking. Prior DAT trafficking studies relied primarily upon chronic gene disruption and dominant-negative protein expression, or were performed in cell lines and cultured neurons, yielding results difficult to translate to adult dopaminergic neurons. Here, we use newly described dynamin inhibitors to test whether constitutive and PKC-stimulated DAT internalization are dynamin-dependent in adult dopaminergic neurons. Ex vivo biotinylation studies in mouse striatal slices demonstrate that acute PKC activation drives native DAT surface loss, and that surface DAT surprisingly partitions between endocytic-willing and endocytic-resistant populations. Acute dynamin inhibition reveals that constitutive DAT internalization is dynamin-independent, whereas PKC-stimulated DAT internalization is dynamin-dependent. Moreover, total internal reflection fluorescence microscopy experiments demonstrate that constitutive DAT internalization occurs equivalently from lipid raft and nonraft microdomains, whereas PKC-stimulated DAT internalization arises exclusively from lipid rafts. Finally, DAT endocytic recycling relies on a dynamin-dependent mechanism that acts in concert with the actin cytoskeleton. These studies are the first comprehensive investigation of native DAT trafficking in ex vivo adult neurons, and reveal that DAT surface dynamics are governed by complex multimodal mechanisms.

Haley E. Melikian

Brudnick Neuropsychiatric Research Institute,
Department of Psychiatry,
Brudnick Neuropsychiatric Research Institute, Department of Psychiatry

University of Massachusetts Medical School

Brain Slice Biotinylation: An Ex Vivo Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

Haley E. Melikian

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Brudnick Neuropsychiatric Research Institute,Department of Psychiatry,Brudnick Neuropsychiatric Research Institute, Department of Psychiatry

University of Massachusetts Medical School

Brain Slice Biotinylation: An Ex Vivo Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

Brudnick Neuropsychiatric Research Institute,
Department of Psychiatry,
Brudnick Neuropsychiatric Research Institute, Department of Psychiatry