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The Importance of Correct Protein Concentration for Kinetics and Affinity Determination in Structure-function Analysis 

In this study, we explore the interaction between the bovine cysteine protease inhibitor cystatin B and a catalytically inactive form of papain (Fig. 1), ...

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&#x80F1;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236; B &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x9610;&#x660E;&#x6240;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684; N &#x665A;&#x671F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x88AB;&#x622A;&#x65AD;&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x53D8;&#x5F02;&#x725B;&#x5230;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x5B5F;&#x4E70; 1 &#x53BB;&#x9664;&#x9020;&#x6210; 8 &#x5230; 10 &#x500D;&#x4F4E;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; B&#x3001; &#x51CF;&#x5C11;&#x8FD8;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; L &#x7684;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EA;&#x6709;&#x5FAE;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; H &#x4EB2;&#x548C;&#x3002;&#x5B5F;&#x4E70;-2 &#x989D;&#x5916;&#x622A;&#x65AD;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x524A;&#x5F31;&#x4E86;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; B 40-70 &#x500D;&#xFF0C;&#x800C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; L &#x548C; H &#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x662F;&#x57FA;&#x672C;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;Cys-3 &#x53BB;&#x9664;&#x4E86;&#x6C9F;&#x901A;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x6D41;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x4EB2;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x7EA6; 1500-fold &#x7684;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#xFF0C;&#x5927;&#x7EA6; 700-fold &#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; L &#x7684;&#x6700;&#x91CD;&#x5927;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C;&#x5927;&#x7EA6; 1g &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; H &#xFF1B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; B &#x4E0D;&#x80FD;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x53EA;&#x80FD;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; H &#x8FDB;&#x884C;&#x8BA1;&#x7B97;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9176;&#x51CF;&#x5C11;&#x4EB2;&#x7F18;&#x5173;&#x7CFB;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x589E;&#x52A0;&#x89E3;&#x79BB;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x80F1;&#x6291;&#x7D20; B N &#x672B;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x5404;&#x9879;&#x63D0;&#x8BAE;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x8D1F;&#x8D23;&#x5BF9;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x80FD;&#x6E90;&#x603B;&#x91CF; 12 40%&#x8C03;&#x67E5;&#xFF0C;&#x6B63;&#x5728;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; H &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6700;&#x4E0D;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;Cys-3 &#x662F;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; L &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; H&#xFF0C;&#x6B64;&#x533A;&#x57DF;&#x53D8;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;

&#x4E2A;&#x522B;&#x5730;&#x533A; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x7684;&#x80F1;&#x6291;&#x7D20; B (stefin B) &#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;

The importance of individual residues in the N-terminal region of cystatin B for proteinase inhibition was elucidated by measurements of the affinity and kinetics of binding of N-terminally truncated, recombinant variants of the bovine inhibitor to cysteine proteinases. Removal of Met-1 caused an 8- to 10-fold lower affinity for papain and cathepsin B, decreased the affinity also for cathepsin L but only minimally affected cathepsin H affinity. Additional truncation of Met-2 further weakened the binding to papain and cathepsin B by 40-70-fold, whereas the affinity for cathepsins L and H was essentially unaffected. Removal of Cys-3 had the most drastic effects on the interactions, resulting in a further affinity decrease of approximately 1500-fold for papain, approximately 700-fold for cathepsin L and approximately 15-fold for cathepsin H; the binding to cathepsin B could not be assessed. The binding kinetics could only be evaluated for papain and cathepsin H and showed that the reduced affinities for these enzymes were predominantly due to increased dissociation rate constants. These results demonstrate that the N-terminal region of cystatin B contributes appreciably to proteinase inhibition, in contrast to previous proposals. It is responsible for 12-40% of the total binding energy of the inhibitor to the proteinases investigated, being of least importance for cathepsin H binding. Cys-3 is the most important residue of the N-terminal region for inhibition of papain, cathepsin L and cathepsin H, the role of the other residues of this region varying with the target proteinase.

Contributions of individual residues in the N-terminal region of cystatin B (stefin B) to inhibition of cysteine proteinases.

L&#x26;#39;importance de r&#xE9;sidus individuels dans la r&#xE9;gion N-terminale de B cystatine pour l&#x26;#39;inhibition prot&#xE9;inase est &#xE9;clair&#xE9; par des mesures de l&#x26;#39;affinit&#xE9; et la cin&#xE9;tique de liaison N-terminale de tronqu&#xE9;s, des variants recombinants de l&#x26;#39;inhibiteur de bovin aux prot&#xE9;inases cyst&#xE9;ine. Retrait de Met-1 a provoqu&#xE9; une 8 - &#xE0; 10 fois plus faible affinit&#xE9; pour la papa&#xEF;ne et la cathepsine B, une diminution de l&#x26;#39;affinit&#xE9; aussi pour la cathepsine L, mais seulement tr&#xE8;s peu affect&#xE9; la cathepsine H affinit&#xE9;. Troncature suppl&#xE9;mentaire de Met-2 encore affaibli la liaison &#xE0; la papa&#xEF;ne et la cathepsine B par 40 &#xE0; 70 fois, tandis que l&#x26;#39;affinit&#xE9; pour les cathepsines L et H &#xE9;tait essentiellement inchang&#xE9;e. Enl&#xE8;vement de Cys-3 a eu les effets les plus drastiques sur les interactions, ce qui entra&#xEE;ne une diminution de l&#x26;#39;affinit&#xE9; suppl&#xE9;mentaire d&#x26;#39;environ 1500 fois pour la papa&#xEF;ne, environ 700 fois pour la cathepsine L et environ 15 fois pour la cathepsine H, la liaison &#xE0; la cathepsine B pourrait pas &#xEA;tre &#xE9;valu&#xE9;e. Les cin&#xE9;tiques de liaison ne pouvait &#xEA;tre &#xE9;valu&#xE9; pour la papa&#xEF;ne et la cathepsine H et a montr&#xE9; que les affinit&#xE9;s r&#xE9;duits pour ces enzymes ont &#xE9;t&#xE9; principalement due &#xE0; l&#x26;#39;augmentation des constantes de vitesse de dissociation. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que la r&#xE9;gion N-terminale de la cystatine B contribue sensiblement &#xE0; l&#x26;#39;inhibition de la prot&#xE9;inase, contrairement aux propositions ant&#xE9;rieures. Il est responsable de 12-40% de l&#x26;#39;&#xE9;nergie totale de liaison de l&#x26;#39;inhibiteur de prot&#xE9;ases aux enqu&#xEA;tes, &#xE9;tant de moindre importance pour la cathepsine H contraignant. Cys-3 est le r&#xE9;sidu le plus important de la r&#xE9;gion N-terminale pour l&#x26;#39;inhibition de la papa&#xEF;ne, la cathepsine L et la cathepsine H, le r&#xF4;le des autres r&#xE9;sidus de cette r&#xE9;gion variant avec la prot&#xE9;inase cible.

Contributions des r&#xE9;sidus individuels dans la r&#xE9;gion N-terminale de la cystatine B (Stefin B) &#xE0; l&#x26;#39;inhibition de prot&#xE9;inases de la cyst&#xE9;ine

Beitr&#xE4;ge der einzelnen Reste in der N-terminalen Region von Cystatin B (Stefin B) zur Hemmung von Cystein-Proteinasen.

L&#39;importanza dei singoli residui nella regione N-terminale della Cistatina B per inibizione della proteinasi fu chiarita da misurazioni dell&#39;affinit&agrave; e cinetica di legame del N-terminale troncato, ricombinante varianti dell&#39;inibitore bovino a proteinases cisteina. Rimozione di Met-1 ha causato una 8 - a 10 volte pi&ugrave; bassa affinit&agrave; per papaina e catepsina B, &egrave; diminuito l&#39;affinit&agrave; anche per catepsina L ma affinit&agrave; solo minimamente interessato catepsina H. Troncamento supplementare di Met-2 ulteriormente indebolito l&#39;associazione di papaina e catepsina B da 40-70-piega, considerando che l&#39;affinit&agrave; per catepsine L e H &egrave; stato sostanzialmente inalterato. Rimozione di Cys-3 ha avuto gli effetti pi&ugrave; drastici sulle interazioni, con conseguente un&#39;ulteriore diminuzione di affinit&agrave; di circa 1500-fold per la papaina, circa 700-fold per catepsina L e circa 15-fold per catepsina H; l&#39;associazione di catepsina B non potrebbe essere valutato. La cinetica di associazione potrebbe essere valutata per la papaina e catepsina H e ha mostrata che la ridotta affinit&agrave; per questi enzimi sono stati principalmente a causa di costanti di dissociazione maggiore velocit&agrave;. Questi risultati dimostrano che la regione N-terminale della Cistatina B contribuisce sensibilmente all&#39;inibizione della proteinasi, in contrasto con le precedenti proposte. &Egrave; responsabile di 12-40% dell&#39;energia totale di legame dell&#39;inibitore della proteinases indagato, di minor importanza per l&#39;associazione catepsina H. CYS-3 &egrave; il residuo pi&ugrave; importante della regione N-terminale per inibizione della papaina, catepsina L e catepsina H, il ruolo di altri residui di questa regione varia con la proteinasi di destinazione.

Contributi dei singoli residui nella regione N-terminale della Cistatina B (stefin B) per l&#39;inibizione della proteinases cisteina.

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;B&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30A6;&#x30B7;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;N-&#x672B;&#x7AEF;&#x5207;&#x65AD;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30C3;&#x30C8;-1&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x3001;8&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F; - &#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;B&#x306E;10&#x500D;&#x4F4E;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306B;&#x3001;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;L&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x3057;&#x304B;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;H&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;L&#x3068;H&#x3068;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x30E1;&#x30C3;&#x30C8;-2&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;40&#x304B;&#x3089;70&#x500D;&#x306B;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;B&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5F31;&#x3081;&#x305F;&#x3002;&#x306E;Cys-3&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;L&#x306E;&#x7D04;700&#x500D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;H&#x306E;&#x7D04;15&#x500D;&#x3001;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D04;1500&#x500D;&#x306E;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;B&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x7D50;&#x5408;&#x901F;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;H&#x306B;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x89E3;&#x96E2;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;B&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x63D0;&#x6848;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;H&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x8ABF;&#x67FB;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x7DCF;&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;12&#x304B;&#x3089;40&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306E;Cys-3&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;L&#x53CA;&#x3073;&#x30AB;&#x30C6;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;H&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x5909;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;B&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#xFF08;&#x30B9;&#x30C6;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;B&#xFF09;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5BC4;&#x4E0E;

Cystatin B &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC758; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC758; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD574;&#xBA85; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; N &#xB9D0;&#xAE30;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xC798;&#xB9B0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; proteinases &#xD558; &#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBCC0;&#xC885;. &#xBA54;&#xD2B8;&#xB85C; 1&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xB294; 8 &#xC6D4;&#xC5D0; 10 &#xBC30; &#xB0AE;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; papain cathepsin B&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;, &#xB610;&#xD55C; cathepsin L&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xB9CC; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; cathepsin H &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;. Cathepsins L&#xACFC; H&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xBA54;&#xD2B8;&#xB85C; 2&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC790;&#xB974;&#xAE30; &#xCD94;&#xAC00; papain &#xBC0F; cathepsin B 40 70 &#xBC30; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC57D;&#xD654;. Cys-3&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70; &#xD588;&#xB2E4;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xC57D; 1500-fold &#xC704;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; papain, &#xC57D; 700-fold cathepsin L&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xACFC;&#xAC10; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC57D; 15 cathepsin H;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; cathepsin B&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; papain cathepsin H&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC218;&#xB9CC;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; cystatin B N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC9C0;&#xC5ED; appreciably &#xC774;&#xC804; &#xC81C;&#xC548; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Proteinases 12-40%&#xB294; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xCD1D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xB2F4;&#xB2F9; cathepsin H &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC704;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC18C; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC758; &#xC870;&#xC0AC;. Cys 3 &#xC5B5;&#xC81C; papain, cathepsin L &#xBC0F; &#xB300;&#xC0C1; &#xC131;&#xBD84; &#xD568;&#xAED8; cathepsin H,&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; N-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC774;&#xB2E4;.

N-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED; cystatin B (stefin B) &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; proteinases&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC;.

La importancia de los residuos individuales en la regi&#xF3;n N-terminal de la cistatina B para la inhibici&#xF3;n de proteinasa se identific&#xF3; por mediciones de la afinidad y la cin&#xE9;tica de uni&#xF3;n de la N-terminal truncado, variantes recombinantes del inhibidor de bovino a proteinasas de ciste&#xED;na. La eliminaci&#xF3;n de Met-1 caus&#xF3; un 8 - a 10 veces menor afinidad por la papa&#xED;na y la catepsina B, la disminuci&#xF3;n de la afinidad tambi&#xE9;n para la catepsina L, pero s&#xF3;lo m&#xED;nimamente afectada catepsina H afinidad. Truncamiento adicional de Met-2 debilitado a&#xFA;n m&#xE1;s la uni&#xF3;n a la papa&#xED;na y la catepsina B por 40 a 70 veces, mientras que la afinidad por catepsinas L y H era esencialmente afectadas. La eliminaci&#xF3;n de Cys-3 ten&#xED;a los efectos m&#xE1;s dr&#xE1;sticos en las interacciones, resultando en una disminuci&#xF3;n de afinidad m&#xE1;s de aproximadamente 1500-pliegue de la papa&#xED;na, aproximadamente 700 veces para la catepsina L y aproximadamente 15-veces para la catepsina H, la uni&#xF3;n a la catepsina B podr&#xED;a no se evaluar&#xE1;. La cin&#xE9;tica de uni&#xF3;n s&#xF3;lo podr&#xED;a ser evaluada por la papa&#xED;na y la catepsina H y demostraron que las afinidades reducidos para estas enzimas eran predominantemente debido al aumento de las constantes de velocidad de disociaci&#xF3;n. Estos resultados demuestran que la regi&#xF3;n N-terminal de la cistatina B contribuye sensiblemente a la inhibici&#xF3;n de proteinasa, en contraste con las propuestas anteriores. Es responsable de 12-40% de la energ&#xED;a total de uni&#xF3;n del inhibidor a las proteinasas investigados, por ser de menor importancia para la catepsina H uni&#xF3;n. Cys-3 es el residuo m&#xE1;s importante de la regi&#xF3;n N-terminal para la inhibici&#xF3;n de la papa&#xED;na, la catepsina L y la catepsina H, el papel de los dem&#xE1;s residuos de esta regi&#xF3;n que var&#xED;an con la proteinasa de destino.

Las contribuciones de los distintos residuos en la regi&#xF3;n N-terminal de la cistatina B (Stefin B) a la inhibici&#xF3;n de proteinasas de ciste&#xED;na

&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E0E;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x5E38;&#x6570;&#x7684;&#x7ECF;&#x5178;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6D89;&#x53CA;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x76F8;&#x540C;&#x914D;&#x4F53;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x6D53;&#x5EA6;&#x548C;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5468;&#x671F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x6536;&#x96C6;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x79F0;&#x4E4B;&#x4E3A;&quot;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x6CD5;&quot;&#x3002;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6D89;&#x53CA;&#x6309;&#x987A;&#x5E8F;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7CFB;&#x5217;&#x65E0;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EFF;&#x771F;&#x548C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x662F;&#x4E00;&#x6837;&#x5F3A;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x7ECF;&#x5178;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8981;&#x6BD4;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x6536;&#x96C6;&#x65B9;&#x6CD5;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x5145;&#x5206;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5F88;&#x96BE;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x8868;&#x9762;&#x3002;

&#x5206;&#x6790;&#x4F7F;&#x7528;&#x4EB2;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x7CFB;&#x5217;&#x3002;

The classical method of measuring binding constants with affinity-based biosensors involves testing several analyte concentrations over the same ligand surface and regenerating the surface between binding cycles. Here we describe an alternative approach to collecting kinetic binding data, which we call "kinetic titration." This method involves sequentially injecting an analyte concentration series without any regeneration steps. Through a combination of simulation and experimentation, we show that this method can be as robust as the classical method of analysis. In addition, kinetic titrations can be more efficient than the conventional data collection method and allow us to fully characterize analyte binding to ligand surfaces that are difficult to regenerate.

Analyzing a kinetic titration series using affinity biosensors.

La m&#xE9;thode classique de mesure de constantes de liaison avec une affinit&#xE9; biocapteurs bas&#xE9;s consiste &#xE0; tester plusieurs concentrations d&#x26;#39;analytes sur la surface m&#xEA;me ligand et la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration de la surface entre les cycles contraignants. Nous d&#xE9;crivons ici une approche alternative &#xE0; la collecte cin&#xE9;tiques liaison de donn&#xE9;es, que nous appelons &#xAB;titrage cin&#xE9;tique.&#x26;quot; Cette m&#xE9;thode consiste &#xE0; injecter de mani&#xE8;re s&#xE9;quentielle une s&#xE9;rie concentration de l&#x26;#39;analyte sans que des &#xE9;tapes de r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration. Gr&#xE2;ce &#xE0; une combinaison de la simulation et l&#x26;#39;exp&#xE9;rimentation, nous montrons que cette m&#xE9;thode peut &#xEA;tre aussi robuste que la m&#xE9;thode classique d&#x26;#39;analyse. En outre, les titrages cin&#xE9;tiques peut &#xEA;tre plus efficace que la m&#xE9;thode de collecte de donn&#xE9;es classique et nous permettent de caract&#xE9;riser compl&#xE8;tement fixation de l&#x26;#39;analyte &#xE0; des surfaces de ligands qui sont difficiles &#xE0; se r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rer.

Analyse d&#x26;#39;une s&#xE9;rie de titrage cin&#xE9;tique utilisant des biocapteurs d&#x26;#39;affinit&#xE9;

Die klassische Methode des Messens verbindliche Konstanten mit Affinit&auml;t-basierten Biosensoren umfasst testen mehrere Analyt-Konzentrationen &uuml;ber die gleiche Ligand-Oberfl&auml;che und regenerierende Fl&auml;che zwischen Bindung Zyklen. Hier beschreiben wir einen alternativen Ansatz zur Erfassung der kinetischen Binden von Daten, die wir nennen &quot;kinetische Titrierung.&quot; Bei dieser Methode werden sequenziell Injektion eines Analyten-Konzentration-Serie ohne Regenerierung Schritte. Durch eine Kombination von Simulation und Experiment zeigen wir, dass diese Methode so robust wie die klassische Methode der Analyse sein kann. Dar&uuml;ber hinaus k&ouml;nnen kinetische Titrationen effizienter als konventionelle Datensammelmethode und erlauben uns, Analyten binden an Ligand Fl&auml;chen vollst&auml;ndig zu charakterisieren, die schwer zu regenerieren.

Analyse einer kinetischen Titrierung-Reihe mit Affinit&auml;ts-Biosensoren.

Il metodo classico di costanti di associazione con biosensori basati su affinit&agrave; di misura comporta prove diverse concentrazioni di analita sopra la stessa superficie ligando e la superficie tra associazione cicli di rigenerazione. Qui descriviamo un approccio alternativo alla raccolta dei dati cinetici associazione, che noi chiamiamo &quot;titolazione cinetica&quot;. Questo metodo coinvolge iniettare in sequenza una serie di concentrazione dell&#39;analita senza passaggi di rigenerazione. Attraverso una combinazione di simulazione e sperimentazione, ci mostra che questo metodo pu&ograve; essere potenti come il classico metodo di analisi. Inoltre, titolazioni cinetiche possono essere pi&ugrave; efficace rispetto al metodo di raccolta dati convenzionali e ci permettono di caratterizzare associazione analita per superfici ligando che sono difficili da rigenerare.

Analizzando una serie di cinetica titolazione usando biosensori di affinit&agrave;.

&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x5B9A;&#x6570;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x9762;&#x3068;&#x518D;&#x751F;&#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x691C;&#x4F53;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x304C;&#x200B;&#x200B;&#x547C;&#x3076;&#x904B;&#x52D5;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x53CE;&#x96C6;&#x3059;&#x308B;&#x5225;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B; &#x26;quot;&#x904B;&#x52D5;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x26;quot;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x9806;&#x6B21;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x518D;&#x751F;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x691C;&#x4F53;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x7CFB;&#x5217;&#x3092;&#x6CE8;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5805;&#x7262;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x53CE;&#x96C6;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x518D;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x691C;&#x4F53;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x904B;&#x52D5;&#x6EF4;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x5206;&#x6790;

&#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAE30;&#xBC18; biosensors&#xC640; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0C1;&#xC218;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xACE0;&#xC804;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; ligand &#xD45C;&#xBA74; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xB18D;&#xB3C4; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC0AC;&#xC774; &#xD45C;&#xBA74; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &quot;&#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xC801;&#xC815;.&quot; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBD80;&#xB974;&#xB294; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC218;&#xC9D1; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xCCB4; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xC2E4;&#xC815;&#xC774; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xB97C; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC8FC;&#xC785;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xACE0;&#xC804;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; titrations &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC218;&#xC9D1; &#xBC29;&#xBC95; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC218; &#xC788;&#xACE0; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xC2E4;&#xC815;&#xC774; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xC801;&#xC815; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; biosensors&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El m&#xE9;todo cl&#xE1;sico de medir constantes de uni&#xF3;n con afinidad basados &#x200B;&#x200B;en biosensores consiste en probar varias concentraciones de analito sobre la superficie mismo ligando y la regeneraci&#xF3;n de la superficie de uni&#xF3;n entre los ciclos. A continuaci&#xF3;n se describe un enfoque alternativo a la recogida de la cin&#xE9;tica del enlace de datos, lo que llamamos &#x26;quot;la valoraci&#xF3;n cin&#xE9;tica&#x26;quot;. Este m&#xE9;todo implica inyectar secuencialmente una serie de concentraci&#xF3;n de analito sin ning&#xFA;n paso de regeneraci&#xF3;n. A trav&#xE9;s de una combinaci&#xF3;n de la simulaci&#xF3;n y la experimentaci&#xF3;n, nos muestran que este m&#xE9;todo puede ser tan robusto como el m&#xE9;todo cl&#xE1;sico de an&#xE1;lisis. Adem&#xE1;s, titulaciones cin&#xE9;ticos puede ser m&#xE1;s eficiente que el m&#xE9;todo de recolecci&#xF3;n de datos convencional y nos permiten caracterizar completamente analito uni&#xF3;n a ligando superficies que son dif&#xED;ciles de regenerar.

An&#xE1;lisis de una serie de titulaci&#xF3;n cin&#xE9;ticos usando biosensores de afinidad

&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F; (SPR) &#x68C0;&#x6D4B;&#x6280;&#x672F;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x8C03;&#x67E5;&#x4ECE;&#x4E2D;&#x56FD;&#x8548;&#x72B6;&#x8548;&#x72B6;&#x652F;&#x539F;&#x4F53;&#x7279;&#x6B8A;&#x8131;&#x6C27;&#x817A;&#x82F7;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x673A;&#x5236;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x9644;&#x7740;&#x5728;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x8868;&#x9762;&#x3001; &#x53CD;&#x5E94;&#x7269;&#x5728;&#x79FB;&#x52A8;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6CE8;&#x5165;&#x548C;&#x7528;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x8D85;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x5176;&#x89E3;&#x79BB;&#x7684;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x4EA7;&#x54C1;&#x9176;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x3002;&#x8131;&#x6C27;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x524D;&#x7A33;&#x6001;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7206;&#x88C2;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4EA7;&#x54C1;&#x5206;&#x89E3;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x662F;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5206;&#x6790;&#x4ECE;&#x82AF;&#x7247;&#x6D17;&#x8131;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x51E0;&#x4E2A;&#x78F7;&#x9178;&#x53D7;&#x4F17; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#x8131;&#x6C27;&#x817A;&#x82F7;) &#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x6350;&#x52A9;&#x8005; &#xFF08;&#x5982; ATP&#xFF09; &#x4F7F;&#x7528; SPR &#x68C0;&#x6D4B;&#x7C73;&#x6C0F;&#x5E38;&#x6570;&#x8868;&#x73B0;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x9AD8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x503C;&#x662F;&#x5728;&#x597D;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x62A5;&#x544A;&#x4EE5;&#x524D; [&#x738B;&#x3001; L.&#x7B49;&#x4EBA; &#xFF08;2001 &#x5E74;&#xFF09; Mol.&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;.42&#x3001; 1065&#x5E74;-1073&#x5E74;]&#x3002;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684; bisubstrate &#x521D;&#x59CB;&#x901F;&#x7387;&#x6A21;&#x5F0F;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8FDE;&#x7EED;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x91C7;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x53D8;&#x5316;&#x8FDB;&#x884C;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x6709;&#x4EBA;&#x63D0;&#x8BAE;&#x89E3;&#x91CA;&#x4EA7;&#x54C1;&#x6291;&#x5236;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x6570;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6309;&#x7167;&#x8BE5;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x54C1;&#x6291;&#x5236;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x53CD;&#x5E94;&#x673A;&#x7406; Bi &#x987A;&#x5E8F;&#x7684;&#x547D;&#x4EE4;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x4E09;&#x5143;&#x590D;&#x6570;&#xFF0C;&#x54EA;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x8131;&#x6C27;&#x817A;&#x82F7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x987A;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x78F7;&#x9178;&#x57FA;&#x56E2;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x548C; ADP &#x6E38;&#x79BB;&#x5728;&#x6F6E;&#x6E7F;&#x4E4B;&#x524D;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x6709;&#x5E8F;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;

&#x652F;&#x539F;&#x4F53;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F;&#x6280;&#x672F;&#x4ECE;&#x8131;&#x6C27;&#x817A;&#x82F7;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Surface plasmon resonance (SPR) detection technology was employed to investigate the kinetic mechanism of deoxyadenosine kinase from Mycoplasma mycoides ssp. mycoides SC. In our experimental approach, the enzyme was attached to the sensor surface, the reactants were injected in the mobile phase, and the product-enzyme complex formation was measured using the fact that the rate of product formation exceeds that of its dissociation. The pre-steady-state analysis of deoxyguanosine phosphorylation showed the presence of a burst phase, which is consistent with product dissociation being a rate-limiting step. High activity of the immobilized enzyme was demonstrated by analyzing the reaction mixture eluted from the chip and by determining the Michaelis-Menten constants for several phosphate acceptors (e.g., deoxyadenosine) and phosphate donors (e.g., ATP) using SPR detection. These values were in good agreement with those reported previously [Wang, L. et al. (2001) Mol. Microbiol. 42, 1065-1073]. The bisubstrate initial rate pattern obtained was characteristic of a sequential kinetic mechanism. Because in the method applied here it is the mass change on the surface that is monitored, a new mathematical approach to interpreting product inhibition experiments was proposed. According to that approach, product inhibition studies, supported by product binding experiments, indicated that the reaction mechanism was of Bi Bi sequential ordered type, involving the formation of a ternary complex, in which ATP and deoxyadenosine bound sequentially, followed by a transfer of the phosphate group, and an ordered release of products with ADP dissociating before dAMP.

Kinetic mechanism of deoxyadenosine kinase from Mycoplasma determined by surface plasmon resonance technology.

R&#xE9;sonance plasmonique de surface technologie de d&#xE9;tection (SPR) a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;e pour &#xE9;tudier le m&#xE9;canisme cin&#xE9;tique de la kinase d&#xE9;soxyad&#xE9;nosine de Mycoplasma mycoides ssp. mycoides SC. Dans l&#x26;#39;approche exp&#xE9;rimentale, l&#x26;#39;enzyme a &#xE9;t&#xE9; fix&#xE9;e &#xE0; la surface du capteur, les r&#xE9;actifs sont inject&#xE9;s dans la phase mobile, et l&#x26;#39;enzyme de formation de produit-complexe a &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;e en utilisant le fait que le taux de formation du produit est sup&#xE9;rieure &#xE0; celle de sa dissociation. L&#x26;#39;analyse pr&#xE9;-&#xE9;tat d&#x26;#39;&#xE9;quilibre de la phosphorylation de la d&#xE9;soxyguanosine a montr&#xE9; la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;une phase d&#x26;#39;&#xE9;clatement, ce qui est coh&#xE9;rent avec le produit de dissociation &#xE9;tant une &#xE9;tape limitante. De haute activit&#xE9; de l&#x26;#39;enzyme immobilis&#xE9;e a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9;e par l&#x26;#39;analyse du m&#xE9;lange r&#xE9;actionnel &#xE9;lue &#xE0; partir de la puce et en d&#xE9;terminant les constantes de Michaelis-Menten pour les accepteurs de phosphate (par exemple plusieurs, d&#xE9;soxyad&#xE9;nosine) et les bailleurs de fonds (par exemple phosphate, l&#x26;#39;ATP) en utilisant la d&#xE9;tection SPR. Ces valeurs sont en bon accord avec ceux rapport&#xE9;s ant&#xE9;rieurement [Wang, L. et al. (2001) Mol. Microbiol. 42, 1065-1073]. Le mod&#xE8;le de taux de DEUX SUBSTRATS initiale obtenue est caract&#xE9;ristique d&#x26;#39;un m&#xE9;canisme s&#xE9;quentiel cin&#xE9;tique. Parce que dans la m&#xE9;thode appliqu&#xE9;e ici, c&#x26;#39;est le changement de masse sur la surface qui est surveill&#xE9;, une nouvelle approche math&#xE9;matique pour interpr&#xE9;ter des exp&#xE9;riences d&#x26;#39;inhibition de produits a &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9;e. Selon cette approche, les &#xE9;tudes d&#x26;#39;inhibition de produits, soutenus par des exp&#xE9;riences de produits de fixation, a indiqu&#xE9; que le m&#xE9;canisme de r&#xE9;action a &#xE9;t&#xE9; de Bi Bi ordonn&#xE9; de type s&#xE9;quentiel, impliquant la formation d&#x26;#39;un complexe ternaire, dans lequel l&#x26;#39;ATP et d&#xE9;soxyad&#xE9;nosine li&#xE9; s&#xE9;quentiellement, suivie d&#x26;#39;un transfert de la groupe phosphate, et une version ordonn&#xE9;e de produits avec dissociation ADP avant dAMP.

M&#xE9;canisme cin&#xE9;tique de la kinase d&#xE9;soxyad&#xE9;nosine de Mycoplasma D&#xE9;termin&#xE9; par r&#xE9;sonance plasmonique de surface de la technologie

Oberfl&auml;chen-Plasmon-Resonanz (SPR)-Detection-Technologie wurde eingesetzt, um den kinetischen Mechanismus der Deoxyadenosine Kinase von Mycoplasma Mycoides SSP Mycoides SC. untersuchen In unserer experimentellen Ansatz das Enzym auf der Sensoroberfl&auml;che befestigt war, die Edukte wurden in der mobilen Phase injiziert und die Produkt-Enzym-Komplex-Bildung wurde gemessen unter der Tatsache, dass die Rate der Produkt-Formation, die von seiner Dissoziation &uuml;berschreitet. Die steady-State-Analyse von Pentanatriumtriphosphat Phosphorylierung zeigte das Vorhandensein einer Burst-Phase, die Produkt-Dissoziation ein geschwindigkeitsbestimmende Schritt entspricht. Hoher Aktivit&auml;t des Enzyms immobilisierte zeigte sich durch die Analyse des Reaktionsgemisch eluiert vom Chip und durch die Bestimmung der Michaelis-Menten-Konstanten f&uuml;r mehrere Phosphat Acceptors (z.B. Deoxyadenosine) und Phosphat Spender (z. B. ATP) mit SPR-Erkennung. Diese Werte waren in guter &Uuml;bereinstimmung mit den gemeldeten vorher [Wang, L. Et Al. (2001) Mol Microbiol. 42, 1065-1073]. Das Bisubstrate ersten Satz Muster erhalten war charakteristisch f&uuml;r einen sequenziellen kinetische Mechanismus. Weil in die hier angewandte Methode der Massen&auml;nderung an der Oberfl&auml;che es, die &uuml;berwacht wird ist, wurde ein neuer mathematischer Ansatz zur Interpretation Produkt Hemmung Experimente vorgeschlagen. Nach diesem Ansatz, Produkt Hemmung Studien, unterst&uuml;tzt durch Produkt-Bindung-Experimente, darauf hingewiesen, dass der Reaktionsmechanismus der sequentiellen Bi Bi Typ, bei denen eine tern&auml;re komplexe, in denen ATP bestellt wurde und Deoxyadenosine sequenziell gebunden eine &Uuml;bertragung der Phosphatgruppe und folgten eine geordnete Freigabe von Produkten mit ADP man distanziert vor Feuchtigkeit.

Kinetische Mechanismus der Deoxyadenosine Kinase von Mycoplasma durch Oberfl&auml;chen-Plasmon-Resonanz-Technologie bestimmt.

Tecnologia di rilevamento (SPR) risonanza plasmonica di superficie &egrave; stata impiegata per studiare il meccanismo cinetico di deossiadenosina chinasi da Mycoplasma mycoides ssp. mycoides SC. Nel nostro approccio sperimentale, l&#39;enzima &egrave; stato attaccato alla superficie del sensore, i reagenti sono stati iniettati nella fase mobile e la formazione di complessi enzima prodotto &egrave; stata misurata usando il fatto che il tasso di formazione prodotto supera quello della sua dissociazione. L&#39;analisi di pre-steady-state di fosforilazione della deossiguanosina ha mostrato la presenza di una fase di scoppio, che &egrave; coerenza con la dissociazione del prodotto essendo un passo di limitazione della velocit&agrave;. Alta attivit&agrave; dell&#39;enzima immobilizzato &egrave; stata dimostrata analizzando la miscela di reazione eluita dal chip e di determinare le costanti di Michaelis-Menten per diversi ricettori del fosfato (ad es., deossiadenosina) e donatori di fosfato (ad es., ATP) mediante rilevamento SPR. Questi valori erano in buon accordo con quelli riportati in precedenza [Wang, L. et al (2001) mol Microbiol. 42, 1065-1073]. Il modello iniziale tasso bisubstrate ottenuto era caratteristico di un meccanismo cinetico sequenza. Perch&eacute; il metodo applicato qui &egrave; la variazione della massa sulla superficie che viene monitorata, &egrave; stato proposto un nuovo approccio matematico per interpretare gli esperimenti di inibizione di prodotto. Secondo quel approccio, gli studi di inibizione di prodotto, supportati da esperimenti di binding prodotto, indicati che il meccanismo di reazione &egrave; stata di Bi Bi sequenziale ordinato tipo, che comportano la formazione di un complesso ternario, in cui ATP e deossiadenosina vincolato in modo sequenziale, seguita da un trasferimento del gruppo fosfato e un ordinato rilascio di prodotti con ADP dissociando prima umido.

Meccanismo cinetico di deossiadenosina chinasi da Mycoplasma determinata dalla tecnologia di risonanza plasmonica di superficie.

&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4;&#xFF08;SPR&#xFF09;&#x691C;&#x51FA;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;mycoides SSP&#x304B;&#x3089;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7528;&#x3044;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002; mycoides SC&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x4ED8;&#x7740;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x53CD;&#x5FDC;&#x7269;&#x3092;&#x79FB;&#x52D5;&#x76F8;&#x306B;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x901F;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x524D;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x304C;&#x5F8B;&#x901F;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x76F8;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x9AD8;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x304B;&#x3089;&#x6EB6;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;SPR&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF09;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;ATP&#xFF09;&#x306E;&#x30DF;&#x30AB;&#x30A8;&#x30EA;&#x30B9; - &#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x5B9A;&#x6570;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5024;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;[&#x738B;&#x3001;L.&#x3089;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; &#xFF08;2001&#xFF09;&#x306E;Mol&#x3002;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3002; 42&#x3001;1065&#x304B;&#x3089;1073]&#x3002;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;bisubstrate&#x521D;&#x671F;&#x901F;&#x5EA6;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x76E3;&#x8996;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5909;&#x5316;&#x3001;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5B9F;&#x9A13;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x89E3;&#x91C8;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6570;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306B;&#x3088;&#x308C;&#x3070;&#x3001;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x88FD;&#x54C1;&#x963B;&#x5BB3;&#x8A66;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3001;Bi Bi&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x9806;&#x5E8F;&#x578B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x4E09;&#x5143;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;ATP&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x9806;&#x6B21;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x306E;&#x79FB;&#x8EE2;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x57FA;&#x3001;&#x6E7F;&#x3063;&#x305F;&#x524D;&#x306E;ADP&#x89E3;&#x96E2;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3002;

&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4;&#x6280;&#x8853;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x304B;&#x3089;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6A5F;&#x69CB;

&#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; (SPR) &#xD0D0;&#xC9C0; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; Mycoplasma mycoides ssp. mycoides &#xCE90;&#xB864;&#xB77C;&#xC774;&#xB098;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; deoxyadenosine &#xD0A4;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC13C;&#xC11C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBD99;&#xC5B4; &#xC788;&#xB358; &#xD558; &#xACE0; &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xBC18;&#xC751; &#xC8FC;&#xC785; &#xD588;&#xB2E4; &#xC81C;&#xD488; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131; &#xC81C;&#xD488; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xCD08;&#xACFC; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. Deoxyguanosine &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC; steady &#xC0AC;&#xC804; &#xBD84;&#xC11D; &#xC81C;&#xD488; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB418; &#xACE0; &#xC18D;&#xB3C4;-&#xC81C;&#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC774;&#xC9C0; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9; eluted &#xCE69;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC18;&#xC751; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC778;&#xC0B0; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; (&#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, deoxyadenosine)&#xC640; &#xC778;&#xC0B0; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; (&#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, ATP) SPR &#xAC10;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Menten Michaelis &#xC0C1;&#xC218;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAC12;&#xC740; &#xADF8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC640; &#xC88B;&#xC740; &#xACC4;&#xC57D;&#xC5D0; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; [&#xC655;, L. &#xC678;. (2001) Mol. Microbiol. 42, 1065-1073]. &#xC5BB;&#xC740; bisubstrate &#xCD08;&#xAE30; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD328;&#xD134;&#xC740; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xB418;&#xB294; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBCC0;&#xD654;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD488; &#xC800;&#xD574; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD574;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC218;&#xD559;&#xC801; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC811;&#xADFC;, &#xADF8; &#xBC18;&#xC751; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; Bi bi &#xC21C;&#xCC28;&#xC801; &#xC8FC;&#xBB38;&#xD55C; &#xC0BC;&#xD56D; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;, &#xC5B4;&#xB5A4; ATP &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD615;&#xC2DD;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC81C;&#xD488; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xC81C;&#xD488; &#xC800;&#xD574; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; deoxyadenosine &#xC21C;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;&#xACFC; ADP dissociating &#xC2B5;&#xAE30;&#xAC00; &#xC55E;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xC815;&#xB82C; &#xB41C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xB2E4;&#xC74C;.

Deoxyadenosine &#xB2C8; Mycoplasma &#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; &#xAE30;&#xC220;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;.

Resonancia de plasmones superficiales (SPR), tecnolog&#xED;a de detecci&#xF3;n se utiliz&#xF3; para investigar el mecanismo cin&#xE9;tico de la cinasa de desoxiadenosina de Mycoplasma mycoides spp. mycoides SC. En nuestro m&#xE9;todo experimental, la enzima se une a la superficie del sensor, los reactivos se inyectaron en la fase m&#xF3;vil, y la formaci&#xF3;n de producto-enzima complejo se midi&#xF3; utilizando el hecho de que la tasa de formaci&#xF3;n de producto excede a la de su disociaci&#xF3;n. El an&#xE1;lisis de pre-estado estacionario de la fosforilaci&#xF3;n de desoxiguanosina mostr&#xF3; la presencia de una fase de explosi&#xF3;n, lo cual es consistente con el producto de disociaci&#xF3;n ser un paso limitante. Actividad alta de la enzima inmovilizada se demostr&#xF3; mediante el an&#xE1;lisis de la mezcla de reacci&#xF3;n se eluy&#xF3; desde el chip y mediante la determinaci&#xF3;n de las constantes de Michaelis-Menten para aceptores fosfato varias (por ejemplo, desoxiadenosina) y donantes de fosfato (por ejemplo, el ATP) usando la detecci&#xF3;n SPR. Estos valores se encontraban en buen acuerdo con los reportados previamente [Wang, L. et al. (2001) Mol. Microbiol. 42, 1065-1073]. El patr&#xF3;n bisustrato tasa inicial obtenida era caracter&#xED;stico de un mecanismo cin&#xE9;tico secuencial. Debido a que en el m&#xE9;todo aplicado aqu&#xED; es el cambio de masa en la superficie que se controla, un nuevo enfoque matem&#xE1;tico para la interpretaci&#xF3;n de los experimentos de inhibici&#xF3;n de productos que se propuso. De acuerdo con este enfoque, los estudios de inhibici&#xF3;n del producto, apoyadas por experimentos de productos de uni&#xF3;n, se indica que el mecanismo de reacci&#xF3;n fue de Bi Bi tipo secuencial ordenado, que implica la formaci&#xF3;n de un complejo ternario, en el que el ATP y desoxiadenosina obligado secuencialmente, seguido por una transferencia de la grupo fosfato, y una liberaci&#xF3;n ordenada de los productos con disociaci&#xF3;n de ADP antes dAMP.

Mecanismo cin&#xE9;tico de la cinasa de desoxiadenosina de Mycoplasma determinada por la superficie Plasmon Resonance Technology

&#x98DF;&#x87F9;&#x7334;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x91CD;&#x7EC4;&#x53CD;&#x5BF9;&#x7279;&#x5E94;&#x6027;&#x8FC7;&#x654F;&#x75C7;&#x548C;&#x54EE;&#x5598;&#xFF0C;IgE &#x6D3E;&#x751F;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x7B7E;&#x514D;&#x8D39;&#x3001; &#x5B9E;&#x65F6;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x79EF;&#x6781;&#x5F62;&#x6210;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297; IgE &#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x662F;&#x8840;&#x6E05;&#x91C7;&#x6837;&#x5728;&#x591A;&#x4E2A;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x5728;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x603B;&#x7684;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x8FD0;&#x8F93;&#x9650;&#x5236;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6D53;&#x5EA6;&#x53D8;&#x5316;&#x4ECE;&#x7EA6; 0.4 &#x5230; 35 microg/ml &#x4E4B;&#x95F4;&#xFF0C;&#x7334;&#x5B50;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#x671F;&#x95F4;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x53EF;&#x786E;&#x5B9A;&#x7528;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x6297;&#x4F53;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7387;&#x53CA;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570;&#x3002;&#x660E;&#x663E;&#x5E73;&#x8861;&#x89E3;&#x79BB;&#x5E38;&#x6570;&#x5728;&#x514D;&#x75AB;&#x671F;&#x5185;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x7334;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x4E86; 6 &#x81F3; 50&#xFF0C;&#x7EC8;&#x6B62;&#x4E8E;&#x5927;&#x7EA6; 2 x 10(-9) &#x5230;&#x5927;&#x7EA6; 2 x 10(-11) M &#x52A8;&#x7269;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x503C;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x6210;&#x719F;&#x662F;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5E38;&#x91CF;&#x6240;&#x4F5C;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x90E8;&#x5206;&#x6807;&#x672C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x7528;&#x4E8E;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#x51FA;&#x4F18;&#x79C0;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF0C;&#x8FC7;&#x654F;&#x548C;&#x54EE;&#x5598;&#x7684;&#x65B0;&#x7684;&#x548C;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

&#x57FA;&#x4E8E;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x8840;&#x6E05;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x6297; IgE &#x5BF9;&#x8FC7;&#x654F;&#x75C7;&#x548C;&#x54EE;&#x5598;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

Antibody responses, induced in Cynomolgus monkey by recombinant IgE-derived immunotherapeutic protein against atopic allergies and asthma, were characterized using label-free, real-time protein interaction analysis. The effects of two different immunotherapeutic proteins were compared. Active concentrations of specific anti-IgE antibodies formed were determined in sera sampled at multiple time points, using conditions of total mass transport limitation that were proved to exist on the sensor surface. These concentrations varied from about 0.4 to 35 microg/ml among the monkeys and throughout the immunization period. Based on these concentrations, the rate and affinity constants for the binding of antibody populations to the antigen could be determined. The apparent equilibrium dissociation constant decreased during the immunization period, for all the monkeys, by a factor between 6 and 50, ending at values from approximately 2 x 10(-9) to approximately 2 x 10(-11) M among the animals. This affinity maturation was attributable to the changes in both rate constants, although the magnitude of the contribution of each constant depended partly on specimen, but primarily on the immunotherapeutic used. The immunotherapeutic proteins examined showed excellent immunogenic properties, providing the basis for a new and effective treatment for allergy and asthma.

Biosensor-based characterization of serum antibodies during development of an anti-IgE immunotherapeutic against allergy and asthma.

Les r&#xE9;ponses immunitaires, les induits dans singe cynomolgus par recombinaison IgE-prot&#xE9;ine d&#xE9;riv&#xE9;e immunoth&#xE9;rapeutique contre les allergies et l&#x26;#39;asthme, atopiques ont &#xE9;t&#xE9; caract&#xE9;ris&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;aide sans &#xE9;tiquette, analyse en temps r&#xE9;el des interactions prot&#xE9;ine. Les effets de deux prot&#xE9;ines diff&#xE9;rentes d&#x26;#39;immunoth&#xE9;rapie ont &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9;s. Concentrations actives de certains anticorps anti-IgE form&#xE9; ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;es dans des s&#xE9;rums pr&#xE9;lev&#xE9;s &#xE0; diff&#xE9;rents moments, en utilisant des conditions de limitation de la masse totale du transport qui ont &#xE9;t&#xE9; prouv&#xE9; qu&#x26;#39;il existe sur la surface du capteur. Ces concentrations varient d&#x26;#39;environ 0,4 &#xE0; 35 microg / ml chez les singes et tout au long de la p&#xE9;riode de vaccination. Sur la base de ces concentrations, les constantes de vitesse et de l&#x26;#39;affinit&#xE9; pour la liaison des populations d&#x26;#39;anticorps &#xE0; l&#x26;#39;antig&#xE8;ne peut &#xEA;tre d&#xE9;termin&#xE9;e. L&#x26;#39;&#xE9;quilibre apparent constante de dissociation diminu&#xE9; au cours de la p&#xE9;riode d&#x26;#39;immunisation, pour tous les singes, par un facteur compris entre 6 et 50, se terminant &#xE0; des valeurs d&#x26;#39;environ 2 x 10 (-9) &#xE0; environ 2 x 10 (-11) M parmi les animaux. Cette maturation d&#x26;#39;affinit&#xE9; est attribuable &#xE0; des changements dans les deux constantes de vitesse, bien que l&#x26;#39;ampleur de la contribution de chaque constante d&#xE9;pend en partie de l&#x26;#39;&#xE9;chantillon, mais surtout sur le immunoth&#xE9;rapeutique utilis&#xE9;. Les prot&#xE9;ines d&#x26;#39;immunoth&#xE9;rapie examin&#xE9;s pr&#xE9;sentaient d&#x26;#39;excellentes propri&#xE9;t&#xE9;s immunog&#xE8;nes, fournissant la base pour un nouveau traitement efficace pour les allergies et l&#x26;#39;asthme.

Biocapteur bas&#xE9; sur la caract&#xE9;risation des anticorps s&#xE9;riques au cours du d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;une immunoth&#xE9;rapie anti-IgE contre allergie et l&#x26;#39;asthme

Antik&ouml;rperantworten, induziert in Cynomolgus Affen durch rekombinante IgE abgeleitete immuntherapeutischen Protein gegen atopischen Allergien und Asthma, zeichneten sich mit Etikett-frei, Echtzeit-Interaktion Proteinanalytik. Die Wirkung von zwei verschiedenen immuntherapeutischen Proteine wurden verglichen. Aktive Konzentrationen von spezifischen Anti-IgE-Antik&ouml;rper gebildet wurden in Seren, die Stichprobe bei mehreren Zeitpunkten, mit Bedingungen insgesamt Massenverkehrsmitteln Verj&auml;hrungsfrist, die sich auf der Sensoroberfl&auml;che vorhanden als wurden ermittelt. Diese Konzentrationen reichten von &uuml;ber 0,4 bis 35 &micro;g/ml unter den Affen und w&auml;hrend der gesamten Immunisierung. Auf der Grundlage dieser Konzentrationen, konnte die Konstanten Rate und Affinit&auml;t f&uuml;r die Bindung der Bev&ouml;lkerung der Antik&ouml;rper an das Antigen ermittelt werden. Die scheinbare Gleichgewicht-Dissoziationskonstante verringerten sich zur Zeit der Impfung f&uuml;r alle die Affen, um einen Faktor zwischen 6 und 50, endet bei Werten von ca. 2 X 10(-9), ca. 2 X 10(-11) M unter den Tieren. Diese Affinit&auml;t Reifung zur&uuml;ckzuf&uuml;hren auf die Ver&auml;nderungen in beiden Geschwindigkeitskonstanten, obwohl das Ausma&szlig; des Beitrags der jede Konstante teilweise auf Probe, sondern in erster Linie auf den immuntherapeutischen verwendet abhing. Die immuntherapeutischen Proteine untersucht zeigte ausgezeichnete immunogene Eigenschaften, die die Grundlage f&uuml;r eine neue und wirksame Behandlung f&uuml;r Allergien und Asthma.

Biosensoren Charakterisierung der Serum-Antik&ouml;rper w&auml;hrend der Entwicklung des Anti-IgE immuntherapeutischen gegen Allergien und Asthma.

Risposte anticorpali, indotte nella scimmia Cynomolgus da ricombinante proteina immunotherapeutic derivata IgE contro atopica allergie e asma, sono state caratterizzate mediante analisi di interazione della proteina senza etichetta, in tempo reale. Sono stati confrontati gli effetti di due diverse proteine immunotherapeutic. Attivi concentrazioni di anticorpi anti-IgE specifiche formati sono stati determinati in sieri campionati a pi&ugrave; punti di tempo, utilizzando le condizioni di limitazione del trasporto di massa totale che sono state dimostrate per esistere sulla superficie del sensore. Queste concentrazioni varia da circa 0,4 a 35 microg/ml tra le scimmie e per tutto il periodo di immunizzazione. In base a queste concentrazioni, le costanti di tasso e affinit&agrave; per il legame delle popolazioni dell&#39;anticorpo per l&#39;antigene potrebbero essere determinate. La costante di dissociazione apparente equilibrio &egrave; diminuito durante il periodo di immunizzazione, per tutte le scimmie, di un fattore compreso tra 6 e 50, finendo a valori di circa 2 x 10(-9)-circa 2 x 10(-11) M tra gli animali. Questa maturazione di affinit&agrave; era attribuibile ai cambiamenti in entrambi costanti di velocit&agrave;, anche se l&#39;entit&agrave; del contributo di ogni costante dipendeva parzialmente sul campione, ma principalmente sul immunotherapeutic usato. Le proteine immunotherapeutic esaminata ha mostrato eccellenti propriet&agrave; immunogene, fornendo le basi per un nuovo ed efficacia trattamento per l&#39;allergia e l&#39;asma.

Caratterizzazione basati su biosensori di anticorpi sierici durante lo sviluppo di un anti-IgE immunotherapeutic contro allergie e asma.

&#x30A2;&#x30C8;&#x30D4;&#x30FC;&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3084;&#x5598;&#x606F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;IgE&#x6297;&#x4F53;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AB;&#x30CB;&#x30AF;&#x30A4;&#x30B6;&#x30EB;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x514D;&#x200B;&#x200B;&#x75AB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6297;IgE&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5168;&#x8CEA;&#x91CF;&#x8F38;&#x9001;&#x5236;&#x9650;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8840;&#x6E05;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30EB;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x3001;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x671F;&#x9593;&#x4E2D;35&#x304B;&#x3089;0.4&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306E;microg / ml&#x304B;&#x3089;&#x5909;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x5B9A;&#x6570;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x5E73;&#x8861;&#x89E3;&#x96E2;&#x5B9A;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x7D04;2&#xD7;10&#xFF08;-11&#xFF09;M&#x306B;&#x7D04;2&#xD7;10&#xFF08;-9&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5024;&#x3067;&#x7D42;&#x4E86;&#x3057;&#x3001;6&#x3068;50&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x63A5;&#x7A2E;&#x671F;&#x9593;&#x4E2D;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5404;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306F;&#x6A19;&#x672C;&#x4E0A;&#x3067;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x4E3B;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x6210;&#x719F;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x691C;&#x67FB;&#x514D;&#x75AB;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3084;&#x5598;&#x606F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3068;&#x5598;&#x606F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;IgE&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x6642;&#x306B;&#x8840;&#x6E05;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

Cynomolgus &#xC6D0;&#xC22D;&#xC774;&#xC5D0; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC544; &#xD1A0; &#xD53C; &#xC131; &#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30;&#xC640; &#xCC9C;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; ige&#xC758; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; immunotherapeutic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5; &#xD588;&#xB2E4; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xBB34;&#xB8CC;, &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; immunotherapeutic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xC815; &#xC548;&#xD2F0; IgE &#xD56D; &#xCCB4; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC13C;&#xC11C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC99D;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4; &#xCD1D; &#xB300;&#xB7C9; &#xC804;&#xC1A1; &#xC81C;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC138;&#xB77C;&#xC5D0; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB18D;&#xB3C4; 35 microg/ml &#xC6D0;&#xC22D;&#xC774; &#xB4E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; 0.4 &#xB300;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC778;&#xAD6C;&#xAC00; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC704;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xACB0;&#xC815; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xD3C9;&#xD615; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC218; &#xC694;&#xC18C; &#xC0AC;&#xC774; 6&#xACFC; 50, &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D; 2 x 10(-11) M &#xC57D; 2 x 10(-9)&#xC758; &#xAC12;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC6D0;&#xC22D;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xC0C1;&#xC218;&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC; &#xC9C4;&#xB3C4; &#xACAC;&#xBCF8;&#xC5D0; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; immunotherapeutic&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC131;&#xC219;&#xC774; &#xB450; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. Immunotherapeutic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30;&#xC640; &#xCC9C;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB41C; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; immunogenic &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xC13C;&#xC11C; &#xAE30;&#xBC18; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xD608; &#xCCAD; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC548;&#xD2F0;-IgE &#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30;&#xC640; &#xCC9C;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; immunotherapeutic&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;.

Las respuestas de anticuerpos, inducidas en el mono Cynomolgus por IgE recombinante derivado de prote&#xED;na de inmunoterapia contra la alergia at&#xF3;pica y el asma, se caracterizaron utilizando la etiqueta libre, en tiempo real, an&#xE1;lisis de la interacci&#xF3;n de prote&#xED;nas. Los efectos de dos prote&#xED;nas diferentes inmunoterap&#xE9;uticos se compararon. Las concentraciones de activos espec&#xED;ficos de anticuerpos anti-IgE formados fueron determinadas en muestras de suero en m&#xFA;ltiples momentos, con las condiciones de limitaci&#xF3;n total de transporte masivo que se demostr&#xF3; que existe en la superficie del sensor. Estas concentraciones variaron desde aproximadamente 0,4 a 35 microgramos / ml de entre los monos y en todo el per&#xED;odo de inmunizaci&#xF3;n. En base a estas concentraciones, las constantes de velocidad y afinidad para la uni&#xF3;n de las poblaciones de anticuerpos para el ant&#xED;geno puede ser determinada. La aparente constante de equilibrio de disociaci&#xF3;n disminuy&#xF3; durante el per&#xED;odo de inmunizaci&#xF3;n, para todos los monos, por un factor comprendido entre 6 y 50, terminando en valores de aproximadamente 2 x 10 (-9) a aproximadamente 2 x 10 (-11) M entre los animales. Esta maduraci&#xF3;n de la afinidad era atribuible a los cambios tanto en las constantes de velocidad, aunque la magnitud de la contribuci&#xF3;n de cada constante depend&#xED;a en parte de la muestra, pero principalmente en el inmunoterap&#xE9;utico utilizado. Las prote&#xED;nas inmunoterap&#xE9;uticos examinados mostraron excelentes propiedades inmunog&#xE9;nicas, proporcionando la base para un nuevo y efectivo tratamiento para la alergia y el asma.

Biosensor basado en la caracterizaci&#xF3;n de anticuerpos s&#xE9;ricos durante el desarrollo de un inmunoterap&#xE9;utico anti-IgE contra la alergia y el asma

&#x63A2;&#x7D22;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027;&#xFF0C;&#x6765;&#x81EA; 20 &#x4E2A;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684; 150 &#x540D;&#x53C2;&#x52A0;&#x8005;&#x88AB;&#x7ED9;&#x4E88;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6837;&#x54C1;&#xFF0C;&#x5E76;&#x88AB;&#x8981;&#x6C42;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9009;&#x62E9;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x662F;&#x9002;&#x5408;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x5E73;&#x53F0;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7531;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4E13;&#x4E1A;&#x77E5;&#x8BC6;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x7528;&#x6237;&#x3002;(50 KDa Fab &#x548C; 60 kDa &#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; S-&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176; [GST] &#x6297;&#x539F;) &#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x5F62;&#x6210;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x6240;&#x4EE5;&#xFF0C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8005;&#x9700;&#x8981;&#x4F18;&#x5316;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x53C2;&#x6570;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x914D;&#x4F53;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x548C;&#x518D;&#x751F;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x6D53;&#x5EA6;&#x548C;&#x6CE8;&#x5C04;/&#x89E3;&#x79BB;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x4E0E;&#x4F1A;&#x8005;&#x6536;&#x96C6;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x54CD;&#x5E94;&#x53EF;&#x80FD;&#x9002;&#x5408;&#x4EA7;&#x91CF;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#xFF0C;&#x8D28;&#x91CF;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x53EF;&#x52A0;&#x4EE5;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x4F18;&#x5316;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;&#x4E00;&#x65E6;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x79BB;&#x7FA4;&#x503C;&#x88AB;&#x79FB;&#x9664;&#xFF0C;&#x4EB2;&#x548C;&#x8DE8;&#x5176;&#x4F59;&#x5C0F;&#x7EC4;&#x7684;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8005;&#x662F; 620 &#x62A5;&#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x6807;&#x51C6;&#x504F;&#x5DEE;&#x7684; 980 &#x4E0B;&#x5348;&#x4E0B;&#x5348;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5F53;&#x8FD9;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x9002;&#x5F53;&#x5730;&#x6267;&#x884C;&#xFF0C;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x90FD;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E00;&#x81F4;&#xFF0C;&#x5E76;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x54EA;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x88AB;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x54EA;&#x4E9B;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x5168;&#x7403;&#x57FA;&#x51C6;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

To explore the variability in biosensor studies, 150 participants from 20 countries were given the same protein samples and asked to determine kinetic rate constants for the interaction. We chose a protein system that was amenable to analysis using different biosensor platforms as well as by users of different expertise levels. The two proteins (a 50-kDa Fab and a 60-kDa glutathione S-transferase [GST] antigen) form a relatively high-affinity complex, so participants needed to optimize several experimental parameters, including ligand immobilization and regeneration conditions as well as analyte concentrations and injection/dissociation times. Although most participants collected binding responses that could be fit to yield kinetic parameters, the quality of a few data sets could have been improved by optimizing the assay design. Once these outliers were removed, the average reported affinity across the remaining panel of participants was 620 pM with a standard deviation of 980 pM. These results demonstrate that when this biosensor assay was designed and executed appropriately, the reported rate constants were consistent, and independent of which protein was immobilized and which biosensor was used.

A global benchmark study using affinity-based biosensors.

Pour explorer la variabilit&#xE9; dans les &#xE9;tudes de biocapteurs, les 150 participants venus de 20 pays ont re&#xE7;u les &#xE9;chantillons de prot&#xE9;ines et m&#xEA;me demand&#xE9; pour d&#xE9;terminer les constantes cin&#xE9;tiques de l&#x26;#39;interaction. On choisit un syst&#xE8;me de prot&#xE9;ines qui est accessible &#xE0; l&#x26;#39;analyse en utilisant diff&#xE9;rentes plates-formes de biocapteurs ainsi que par les utilisateurs de niveaux diff&#xE9;rents d&#x26;#39;expertise. Les deux prot&#xE9;ines a Fab 50 kDa et de 60 kDa glutathion S-transf&#xE9;rase [TPS] antig&#xE8;ne) former une relativement forte affinit&#xE9; complexe, afin que les participants n&#xE9;cessaires pour optimiser plusieurs param&#xE8;tres, notamment d&#x26;#39;immobilisation exp&#xE9;rimentales ligand et des conditions de r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration ainsi que analyte concentrations et de l&#x26;#39;injection / la dissociation fois. Bien que la plupart des participants ont collect&#xE9; les r&#xE9;actions de liaison qui pourrait &#xEA;tre bon de donner des param&#xE8;tres cin&#xE9;tiques, la qualit&#xE9; d&#x26;#39;un des ensembles de donn&#xE9;es peu aurait pu &#xEA;tre am&#xE9;lior&#xE9; par l&#x26;#39;optimisation de la conception du test. Une fois ces valeurs aberrantes ont &#xE9;t&#xE9; retir&#xE9;s, la moyenne rapport&#xE9;e par affinit&#xE9; &#xE0; travers le panneau reste des participants &#xE9;tait de 620 heures, avec un &#xE9;cart-type de 980 pM. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que, lorsque ce test biocapteur a &#xE9;t&#xE9; con&#xE7;u et ex&#xE9;cut&#xE9; de mani&#xE8;re appropri&#xE9;e, les constantes de vitesse signal&#xE9;s correspondaient, et ind&#xE9;pendante de cette prot&#xE9;ine a &#xE9;t&#xE9; immobilis&#xE9; et qui biocapteur a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;.

Une &#xE9;tude de r&#xE9;f&#xE9;rence globale &#xE0; l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;affinit&#xE9; &#xE0; base de biocapteurs

Um die Variabilit&auml;t der Biosensor-Studien untersuchen, 150 Teilnehmer aus 20 L&auml;ndern erhielten die gleichen Proteinproben und gebeten, kinetischen Geschwindigkeitskonstanten f&uuml;r die Interaktion zu bestimmen. Wir w&auml;hlten eine Protein-System, die empf&auml;nglich Analyse mit verschiedenen Biosensor-Plattformen sowie durch unterschiedliche Know-how Erfahrungsstufen war. Die beiden Proteine (eine 50-kDa-Fab und ein 60-kDa-Glutathion-S-Transferase [GST]-Antigen) bilden ein relativ hoher Affinit&auml;t-komplexes, so musste, dass die Teilnehmer verschiedene experimentelle Parameter einschlie&szlig;lich Ligand Immobilisierung und Regeneration Bedingungen und Analyt-Konzentrationen sowie Injektion/Dissoziation Mal zu optimieren. Obwohl die meisten Teilnehmer verbindliche Antworten zusammengestellt, das k&ouml;nnte passen, kinetische Parameter zu erbringen, die Qualit&auml;t der wenigen Datens&auml;tzen verbessert worden durch die Optimierung des Assay-Design. Sobald diese Ausrei&szlig;er entfernt wurden, im Durchschnitt berichtet Affinit&auml;t &uuml;ber die verbleibenden Panel Teilnehmer wurde 620 pM mit einer Standardabweichung von 980 pM. Diese Ergebnisse zeigen, dass bei dieser Biosensor-Assay wurde entworfen und entsprechend ausgef&uuml;hrt, wurden die gemeldeten Geschwindigkeitskonstanten konsistente und unabh&auml;ngig von dem Protein immobilisiert wurde und welche Biosensor verwendet wurde.

Ein globaler Benchmark-Studie mit Affinit&auml;t-basierten Biosensoren.

Per esplorare la variabilit&agrave; negli studi di biosensori, 150 partecipanti provenienti da 20 paesi erano dati i campioni della proteina stessa e chiesto di determinare le costanti di velocit&agrave; cinetica per l&#39;interazione. Abbiamo scelto un sistema di proteine che era assoggettabile a analisi usando biosensori diverse piattaforme, come pure dagli utenti di livelli di competenza diversi. Le due proteine (un Fab 50-kDa e un antigene di 60 kDa glutatione S-transferasi [GST]) formano un complesso relativamente ad alta affinit&agrave;, cos&igrave; i partecipanti necessari per ottimizzare diversi parametri sperimentali, comprese le condizioni di immobilizzazione e rigenerazione ligando come concentrazioni di analita e tempi di iniezione/dissociazione. Anche se la maggior parte dei partecipanti raccolti risposte associazione che potrebbero essere adatta per produrre i parametri cinetici, la qualit&agrave; di alcuni insiemi di dati potrebbe sono stata migliorata ottimizzando il design di dosaggio. Una volta che questi valori erratici sono stati rimossi, la media segnalati affinit&agrave; attraverso il pannello rimanente dei partecipanti era 620 pM con una deviazione standard di 980 pM. Questi risultati dimostrano che quando questo dosaggio biosensore &egrave; stato progettato ed eseguito in modo appropriato, le costanti di velocit&agrave; segnalati erano coerenti e indipendenti di cui proteina &egrave; stata immobilizzata e quale biosensore &egrave; stato utilizzato.

Uno studio di benchmark globale usando biosensori basati su affinit&agrave;.

&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x5909;&#x52D5;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;20&#x30AB;&#x56FD;&#x304B;&#x3089;150&#x4EBA;&#x306E;&#x53C2;&#x52A0;&#x8005;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6C42;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5C02;&#x9580;&#x77E5;&#x8B58;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30E6;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x5F93;&#x9806;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7CFB;&#x3092;&#x9078;&#x3093;&#x3060;&#x3002; 2&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;50 kDa&#x306E;Fab&#x304A;&#x3088;&#x3073;60-kDa&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;S-&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;[GST]&#x6297;&#x539F;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3068;&#x518D;&#x751F;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x691C;&#x4F53;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x53C2;&#x52A0;&#x8005;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306B;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x6CE8;&#x5165;/&#x89E3;&#x96E2;&#x56DE;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x53C2;&#x52A0;&#x8005;&#x304C;&#x52D5;&#x614B;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5408;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x7D50;&#x5408;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x53CE;&#x96C6;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5916;&#x308C;&#x5024;&#x3092;&#x9664;&#x53BB;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x5E73;&#x5747;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x53C2;&#x52A0;&#x8005;&#x306E;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x9593;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306F;980 pM&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x504F;&#x5DEE;&#x306F;620 pM&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306B;&#x5B9F;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x3068;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x304C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C1;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x691C;&#x8A0E;

&#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xC13C;&#xC11C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD558; 20 &#xAC1C;&#xAD6D;&#xC5D0;&#xC11C; 150 &#xCC38;&#xAC00;&#xC790; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACAC;&#xBCF8;&#xC744; &#xBD80;&#xC5EC; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC694;&#xCCAD;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC758;&#xBB34;&#xAC00; &#xB2E4;&#xB978; &#xC804;&#xBB38; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xC13C;&#xC11C; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC120;&#xD0DD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (50-kDa &#xD339;&#xACFC; 60-kDa glutathione S-&#xC804;&#xC774; [GST] &#xD56D; &#xC6D0;) &#xCC38;&#xAC00;&#xC790; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; immobilization&#xC640; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC870;&#xAC74; &#xBD84;&#xC11D; &#xB18D;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC0AC;&#xCD9C;/&#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xADF8;&#xB798;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xCF64;&#xD50C;&#xB809;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xCC38;&#xAC00;&#xC790; &#xB4E4;&#xC740; &#xC218;&#xC9D1; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC751;&#xB2F5; &#xB418;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xB294; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC138;&#xD2B8;&#xC758; &#xD488;&#xC9C8; &#xC218; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xACC4;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC;. &#xD3C9;&#xADE0; &#xCC38;&#xAC00;&#xC790;&#xC758; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xD328;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; 620 &#xBCF4;&#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; outliers &#xC81C;&#xAC70; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC77C;&#xB2E8; 980&#xC758; &#xD45C;&#xC900; &#xD3B8;&#xCC28;&#xC640; &#xC624;&#xD6C4; &#xC624;&#xD6C4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xC13C;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xACC4;&#xC774; &#xACE0; &#xC801;&#xC808; &#xD558; &#xAC8C; &#xC2E4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;&#xACE0; &#xC77C;&#xAD00;&#xC131; &#xC788;&#xACE0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xC13C;&#xC11C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xBCA4;&#xCE58; &#xB9C8;&#xD06C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAE30;&#xBC18; biosensors&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

Para explorar la variabilidad en los estudios de biosensores, 150 participantes de 20 pa&#xED;ses se dieron las mismas muestras de prote&#xED;nas y pidi&#xF3; para determinar las constantes cin&#xE9;ticas de la interacci&#xF3;n. Se eligi&#xF3; un sistema de la prote&#xED;na que era susceptible de an&#xE1;lisis utilizando diferentes plataformas de biosensores, as&#xED; como por los usuarios de los niveles de conocimientos diferentes. Las dos prote&#xED;nas (una Fab 50-kDa y 60-kDa una glutation S-transferasa ant&#xED;geno [GST]) forman una relativamente alta afinidad complejo, por lo que los participantes necesarios para optimizar varios par&#xE1;metros experimentales, incluyendo la inmovilizaci&#xF3;n del ligando y condiciones de regeneraci&#xF3;n as&#xED; como analito concentraciones y la inyecci&#xF3;n / disociaci&#xF3;n de los tiempos. Aunque la mayor&#xED;a de los participantes recogen las respuestas de enlace que podr&#xED;a estar recuperado para obtener los par&#xE1;metros cin&#xE9;ticos, la calidad de unos pocos conjuntos de datos se podr&#xED;a haber mejorado mediante la optimizaci&#xF3;n del dise&#xF1;o del ensayo. Una vez que estos valores extremos fueron retirados, el promedio reportado afinidad a trav&#xE9;s del panel restante de los participantes fue de 620 horas, con una desviaci&#xF3;n est&#xE1;ndar de 980 pM. Estos resultados demuestran que cuando este ensayo biosensor fue dise&#xF1;ado y ejecutado adecuadamente, las constantes de velocidad reportados fueron consistentes, e independiente de la prote&#xED;na que se inmoviliz&#xF3; y que biosensor se utiliz&#xF3;.

Ewa Pol

GE Healthcare Bio-Sciences AB

The Importance of Correct Protein Concentration for Kinetics and Affinity Determination in Structure-function Analysis