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Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method

Transformation of plasmid DNA into E. coli using the heat shock method is a basic technique of molecular biology. It consists of inserting a foreign ...

University of California, Irvine (UCI)

&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x7518;&#x6CB9;&#x8C03;&#x89E3;&#x4EBA;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5BE1;&#x805A;&#x72B6;&#x6001;&#x65F6;&#x7531;&#x51B2;&#x6DE4;&#x540E; nondenaturing &#x6D17;&#x6DA4;&#x5242;&#x6EB6;&#x7684;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x68AF;&#x5EA6;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x57DF;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5185;&#x5728;&#x86CB;&#x767D; (MIP) &#x5BB6;&#x65CF;&#x86CB;&#x767D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x9F50;&#x805A;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6784;&#x9020;&#x86CB;&#x767D;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x5BF9;&#x5E94; AQPcic &#x53D6;&#x4EE3;&#x5728;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#x7684;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D; E &#xFF08;&#x5305;&#x62EC;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF; &#xFF08;TM&#xFF09; 5&#xFF09; &#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; C &#x7EC8;&#x7AEF; (&#x5305;&#x62EC; TM 6 &#x7684;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;) &#x7531;&#x7B49;&#x6548;&#x7684;&#x57DF;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x7518;&#x6CB9;&#x901A;&#x9053; aquaglyceroporin &#xFF08;GlpF&#xFF09; &#xFF08;&#x79F0;&#x4E3A; AGA &#x7684;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;AAG &#x548C;&#x805A;&#x96C6;&#xFF09;&#x3002;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7684; GlpF &#x4E5F;&#x662F;&#x6784;&#x9020; (&#x5D4C;&#x5408; GAG&#x3001; GGA &#x548C; GAA)&#x3002;&#x9898;&#x4E3A; cRNA &#x5BF9;&#x5E94;&#x6240;&#x6709;&#x6784;&#x9020;&#x88AB;&#x6CE8;&#x5165;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;AQPcic&#x3001; GlpF&#x3001; AAG&#x3001; &#x805A;&#x96C6;&#xFF0C;GAG &#x88AB;&#x9488;&#x5BF9;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x3002;&#x6C34;&#x6216;&#x7518;&#x6CB9;&#x819C;&#x6E17;&#x900F;&#x7387;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8868;&#x660E;&#x53EA;&#x6709; AAG &#x671B;&#x6708;&#x5C55;&#x51FA;&#x5BF9;&#x5E94;&#x6C34;&#x8FD0;&#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5BF9;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x7531; 2 %n-&#x8F9B;&#x57FA;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x82F7;&#x6EB6;&#x8868;&#x793A;&#x4EE5; tetrameric &#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x53EA;&#x6709; AQPcic &#x548C; AAG &#x8517;&#x7CD6;&#x6E10;&#x53D8;&#x901F;&#x5EA6;&#x6C89;&#x6DC0;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;GlpF&#x3001; GAG &#x548C; GAA &#x6C89;&#x79EF;&#x7269;&#x4E2D;&#x5355;&#x4F53;&#x7684;&#x7A97;&#x4F53;&#xFF0C;&#x800C;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E8C;&#x805A;&#x5355;&#x58F0;&#x9053;/GGA &#x548C;&#x805A;&#x96C6;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x5E26;&#x6765;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#xFF0C;&#x6309;&#x63ED;&#x4FDD;&#x9669;&#x8BA1;&#x5212;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x5185;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; GlpFs &#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x4EE5;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x8D70;&#x5411; nondenaturing &#x6D17;&#x6DA4;&#x5242;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7684;&#x53EF;&#x4EE5; GlpF (AAG &#x671B;&#x6708;&#xFF09; &#x7684;&#x7B49;&#x6548;&#x57DF;&#x6765;&#x53D6;&#x4EE3; AQPcic&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; TM 6 &#x7684;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x4E00;&#x534A;&#x7684; C &#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x800C;&#x65E0;&#x9700;&#x4FEE;&#x6539;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E0E;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x5355;&#x4F53;&#x7684; TM 1 TM 5 &#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4F53;&#x7684;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x57DF;&#x548C;&#x8DE8;&#x819C;&#x87BA;&#x65CB; 5 &#x548C; 6 &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5185;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF1A; &#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D;/&#x7518;&#x6CB9;&#x4E3B;&#x6301;&#x4EBA;&#x5D4C;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

We previously observed that aquaporins and glycerol facilitators exhibit different oligomeric states when studied by sedimentation on density gradients following nondenaturing detergent solubilization. To determine the domains of major intrinsic protein (MIP) family proteins involved in oligomerization, we constructed protein chimeras corresponding to the aquaporin AQPcic substituted in the loop E (including the proximal part of transmembrane domain (TM) 5) and/or the C-terminal part (including the distal part of TM 6) by the equivalent domain of the glycerol channel aquaglyceroporin (GlpF) (chimeras called AGA, AAG, and AGG). The analogous chimeras of GlpF were also constructed (chimeras GAG, GGA, and GAA). cRNA corresponding to all constructs were injected into Xenopus oocytes. AQPcic, GlpF, AAG, AGG, and GAG were targeted to plasma membranes. Water or glycerol membrane permeability measurements demonstrated that only the AAG chimera exhibited a channel function corresponding to water transport. Analysis of all proteins expressed either in oocytes or in yeast by velocity sedimentation on sucrose gradients following solubilization by 2% n-octyl glucoside indicated that only AQPcic and AAG exist in tetrameric forms. GlpF, GAG, and GAA sediment in a monomeric form, whereas GGA and AGG were found mono/dimeric. These data bring new evidence that, within the MIP family, aquaporins and GlpFs behave differently toward nondenaturing detergents. We demonstrate that the C-terminal part of AQPcic, including the distal half of TM 6, can be substituted by the equivalent domain of GlpF (AAG chimera) without modifying the transport specificity. Our results also suggest that interactions of TM 5 of one monomer with TM 1 of the adjacent monomer are crucial for aquaporin tetramer stability.

Role of C-terminal domain and transmembrane helices 5 and 6 in function and quaternary structure of major intrinsic proteins: analysis of aquaporin/glycerol facilitator chimeric proteins.

Pr&eacute;c&eacute;demment, nous avons observ&eacute; que les facilitateurs aquaporines et glyc&eacute;rol pr&eacute;sentent diff&eacute;rents &Eacute;tats oligom&eacute;riques lorsque &eacute;tudi&eacute;s par s&eacute;dimentation sur les gradients de densit&eacute; apr&egrave;s solubilisation de d&eacute;tergente non d&eacute;naturant. Pour d&eacute;terminer les domaines des prot&eacute;ines de la famille principale prot&eacute;ine intrins&egrave;que (MIP) impliqu&eacute;s dans l&#39;oligom&eacute;risation, nous avons construit des chim&egrave;res de prot&eacute;ine correspondant &agrave; l&#39;aquaporine AQPcic substitu&eacute; dans la boucle E (y compris la partie proximale du domaine transmembranaire (TM) 5) et/ou de la C-terminal partie (y compris la partie distale du TM 6) par le domaine d&#39;&eacute;quivalent de l&#39;aquaglyceroporin de canal de glyc&eacute;rol (G1pf) (chim&egrave;res appel&eacute;s AGAAAG et AGG). Les chim&egrave;res analogues de G1pf ont &eacute;galement &eacute;taient construits (chim&egrave;res GAG, GGA et GAA). cRNA correspondant &agrave; toutes les constructions ont &eacute;t&eacute; inject&eacute; dans des ovocytes de Xenopus. AQPcic, G1pf, AAG et AGG GAG &eacute;taient vis&eacute;s aux membranes plasmiques. Des mesures de perm&eacute;abilit&eacute; membranaire l&#39;eau ou de glyc&eacute;rol a d&eacute;montr&eacute; que seulement la chim&egrave;re AAG ont une fonction de canal correspondant au transport de l&#39;eau. Analyse de toutes les prot&eacute;ines exprim&eacute;es des ovocytes ou levure de s&eacute;dimentation vitesse sur gradients de sucrose suivante solubilisation par 2 % n-octyl glucoside a indiqu&eacute; que seule AQPcic et AAG existent sous formes t&eacute;tram&egrave;res. G1pf, GAG et GAA des s&eacute;diments sous forme de monom&egrave;re, alors que GGA et AGG mono/dim&egrave;re. Ces donn&eacute;es apportent de nouveaux &eacute;l&eacute;ments de preuve que, au sein de la famille de MIP, aquaporines et GlpFs se comportent diff&eacute;remment vers d&eacute;tergents non d&eacute;naturants. Nous d&eacute;montrons que la partie C-terminale de la AQPcic, dont la moiti&eacute; distale du TM 6, peut &ecirc;tre remplac&eacute;e par le domaine &eacute;quivalent de G1pf (chimera AAG) sans modifier la sp&eacute;cificit&eacute; du transport. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent &eacute;galement que les interactions de TM 5 d&#39;un monom&egrave;re avec 1 TM du monom&egrave;re adjacent sont cruciales pour la stabilit&eacute; de l&#39;aquaporine t&eacute;tram&egrave;re.

R&ocirc;le du domaine C-terminal et h&eacute;lices transmembranaires, 5 et 6 dans la structure quaternaire et de la fonction des prot&eacute;ines intrins&egrave;ques majeures : l&#39;analyse des prot&eacute;ines chim&eacute;riques de facilitateur aquaporine/glyc&eacute;rol.

Die Rolle der C-terminalen Dom&#xE4;ne und Transmembranhelices 5 und 6 in Funktion und Quart&#xE4;rstruktur von major intrinsic proteins: Analyse von Aquaporin / Glycerin-chim&#xE4;ren Proteinen.

Abbiamo precedentemente osservato che facilitatori acquaporine e glicerolo presentano diversi stati oligomerici quando studiati da sedimentazione su gradienti di densit&agrave; dopo solubilizzazione detergente nondenaturing. Per determinare i domini della famiglia proteine principali proteine intrinseche (MIP) coinvolti nella oligomerizzazione, abbiamo costruito chimere della proteina corrispondente per l&#39;Acquaporina AQPcic sostituito nel ciclo E (compresa la parte prossimale del dominio transmembrana (TM) 5) e/o il C-terminale parte (compresa la parte distale della TM 6) dal dominio dell&#39;equivalente del glicerolo canale aquaglyceroporin (GlpF) (chimere chiamati AGAAAG e AGG). Le chimere analoghe di GlpF furono anche costruiti (chimere GAG GGA e GAA). cRNA corrispondenti a tutti i costrutti sono stato iniettato in ovociti di Xenopus. AQPcic, GlpF, AAG, AGG e GAG sono stati mirati alla membrana plasmatica. Misure di permeabilit&agrave; di membrana acqua o glicerolo ha dimostrato che solo la chimera AAG esposto una funzione di canale corrispondente al trasporto di acqua. Analisi di tutte le proteine espresse ovociti o in lievito di sedimentazione velocit&agrave; sulle pendenze del saccarosio solubilizzazione seguito da 2% n-ottile glucoside indicato che solo AQPcic e AAG esiste in forma tetramerica. GlpF, GAG e GAA sedimento in forma monomerica, considerando che sono stati trovati mono/dimerica GGA e AGG. Questi dati portano nuove prove che, all&#39;interno della famiglia di MIP, acquaporine e GlpFs si comportano diversamente verso detergenti nondenaturing. Dimostriamo che la parte C-terminale del AQPcic, tra cui la met&agrave; distale del TM 6, pu&ograve; essere sostituita dal dominio dell&#39;equivalente di GlpF (chimera AAG) senza modificare la specificit&agrave; del trasporto. Anche i nostri risultati suggeriscono che le interazioni di TM 5 di un monomero con TM 1 del monomero adiacente sono cruciale per la stabilit&agrave; del tetramero acquaporine.

Ruolo del dominio C-terminale ed eliche transmembrane 5 e 6 in funzione e quaternario struttura di importanti proteine intrinseche: analisi delle proteine chimeric aquaporina/glicerolo facilitatore.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30D5;&#x30A1;&#x30B7;&#x30EA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5806;&#x7A4D;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x52FE;&#x914D;&#x306E;&#x6B21;&#x306E; nondenaturing &#x6D17;&#x5264;&#x53EF;&#x6EB6;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x52C9;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; &#xFF08;MIP&#xFF09; &#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x91CD;&#x5408;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B; AQPcic &#x7F6E;&#x63DB;&#x3067;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; &#x30A2;&#x30AF;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x69CB;&#x7BC9; E &#xFF08;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (TM) 5 &#x306E;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#xFF09; &#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F; &#xFF08;TM 6 &#x306E;&#x9060;&#x4F4D;&#x90E8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#xFF09; &#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; C &#x672B;&#x7AEF;&#x90E8;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; aquaglyceroporin (GlpF) (&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9; AGA &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3001;AAG &#x3068; AGG&#xFF09;&#x3002;GlpF &#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x3082;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; &#xFF08;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9; &#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;&#x3001;GGA&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; GAA) &#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x8981;&#x7D20;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B; cRNA &#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;AQPcic&#x3001;GlpF AAG&#x3001;AGG&#x3001;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x76EE;&#x6A19;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6C34;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x819C;&#x306E;&#x900F;&#x78C1;&#x7387;&#x6E2C;&#x5B9A; AAG &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x307F;&#x6C34;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5375;&#x5B50;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9175;&#x6BCD;&#x901F;&#x5EA6;&#x6C88;&#x964D;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x52FE;&#x914D;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E; AQPcic &#x3068; AAG 4 &#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x3067;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 2 %n-&#x30AA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x5316;&#x6B21;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3002;GlpF&#x3001;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; GAA &#x571F;&#x7802;&#x306F;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x3067; GGA &#x3068; AGG &#x30E2;&#x30CE;&#x30E9;&#x30EB;/&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x304C;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;MIP &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x5185;&#x30A2;&#x30AF;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; GlpFs nondenaturing &#x306E;&#x6D17;&#x5264;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x52D5;&#x4F5C;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x8F38;&#x9001;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x305B;&#x305A;&#x3001;TM 6 &#x306E;&#x9060;&#x4F4D;&#x534A;&#x5206;&#x3092;&#x542B;&#x3080; AQPcic &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x90E8; GlpF &#xFF08;AAG &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;) &#x306E;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EE3;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F; 1 &#x3064;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E; TM 5 TM 1 &#x96A3;&#x63A5;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3; 4 &#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068; 5 &#x3068; 6 &#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5185;&#x5728;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7D00;&#x5C64;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;: &#x30A2;&#x30AF;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30D5;&#x30A1;&#x30B7;&#x30EA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; aquaporins &#xBC0F; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; facilitators &#xB2E4;&#xB978; oligomeric &#xC0C1;&#xD0DC; nondenaturing &#xC138;&#xC81C; &#xAC00;&#xC6A9; &#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBC00;&#xB3C4; &#xAE30;&#xC6B8;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCE68;&#xC804; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80; &#xC804;&#xC2DC; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xC694; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MIP) &#xAC00;&#xC871; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; oligomerization, &#xAD00;&#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC74;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0;&#xC11C; AQPcic &#xB300;&#xCCB4; aquaporin &#xD558; &#xC804;&#xC790; (&#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (TM) 5&#xC758; &#xADFC; &#xC704; &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568;) &#xB610;&#xB294; C &#xB2E8;&#xC790; &#xBD80;&#xBD84; (TM 6&#xC758; &#xB9D0; &#xCD08; &#xBD80;&#xBD84; &#xD3EC;&#xD568;) &#xD574;&#xB2F9; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; &#xCC44;&#xB110; aquaglyceroporin (GlpF) (&#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xB77C;&#xB294; &#xC544;&#xAC00;&#xC758;AAG, &#xBC0F; AGG). Glpf&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xC0DD;&#xC131;&#xB41C; (&#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xAC1C; &#xADF8;, GGA, &#xBC0F; GAA) &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xAD6C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; cRNA Xenopus oocytes&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC785; &#xD588;&#xB2E4;. AQPcic, GlpF, AAG, AGG, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC1C; &#xADF8; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xD45C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBB3C; &#xC774;&#xB098; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; &#xB9C9; &#xD22C;&#xACFC;&#xC728; &#xCE21;&#xC815; AAG &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xC804;&#xC2DC; &#xBB3C; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. 2% N octyl glucoside&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xC74C; &#xAC00;&#xC6A9; &#xD654; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB9CC; AQPcic &#xBC0F; AAG tetrameric &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC790;&#xB2F9; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xC5D0; oocytes &#xB610;&#xB294; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xCE68; &#xAC15; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;. GlpF, &#xAC1C; &#xADF8;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; GAA &#xD1A0;&#xC0AC; monomeric &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xBC18;&#xBA74; GGA &#xBC0F; AGG &#xBAA8;&#xB178;/dimeric &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;, &#xC131;&#xB2A5; &#xCE21;&#xC815; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; aquaporins &#xBC0F; GlpFs &#xB2E4;&#xB974;&#xAC8C; &#xC791;&#xB3D9; nondenaturing &#xC138;&#xC81C;&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC99D;&#xAC70; &#xAC00;&#xC838;&#xC640;. TM 6&#xC758; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xC808;&#xBC18;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; Aqpcic&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBD80;&#xBD84; &#xC804;&#xC1A1; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xC218;&#xC815; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; GlpF (AAG &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;)&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD50;&#xCCB4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB610;&#xD55C; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xC758; TM 1 &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xC758; TM 5&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; aquaporin tetramer &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xD3EC;&#xD568; 5&#xC640; 6 &#xC8FC;&#xC694; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xBE44;&#xBC00;&#xC774; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;: aquaporin/&#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; &#xAE30;&#xD68D;&#xC790; chimeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;.

Anteriormente, observamos que los facilitadores aquaporins y glicerol exhiben diferentes Estados oligom&eacute;ricos cuando estudi&oacute; por sedimentaci&oacute;n en gradientes de densidad despu&eacute;s de solubilizaci&oacute;n de detergente nondenaturing. Para determinar los dominios de prote&iacute;nas familia principal prote&iacute;na intr&iacute;nseca (MIP) en Oligomerizaci&oacute;n, construimos quimeras de la prote&iacute;na correspondiente a la Acuaporina AQPcic sustitu&iacute;do en el lazo E (incluyendo la parte proximal del dominio transmembrana (TM) 5) y/o la terminal C parte (incluyendo la parte distal del TM 6) por el dominio equivalente de la aquaglyceroporin de canal de glicerol (GlpF) (quimeras llamados AGAAAG y AGG). Las quimeras an&aacute;logos de GlpF tambi&eacute;n fueron construidos (quimeras GAG, GGA y GAA). cRNA correspondiente a todas las construcciones fueron inyectada en ovocitos de Xenopus. AQPcic, GlpF, AAG, AGG y GAG fueron dirigidos a las membranas de plasma. Las mediciones de permeabilidad de membrana agua o glicerina demostraron que s&oacute;lo la quimera de la AAG exhibi&oacute; una funci&oacute;n de canal correspondiente a transporte de agua. An&aacute;lisis de todas las prote&iacute;nas expresadas en ovocitos o en levadura por sedimentaci&oacute;n de velocidad en gradientes de sacarosa siguiente solubilizaci&oacute;n por 2% n-octil gluc&oacute;sido indic&oacute; que s&oacute;lo AQPcic y AAG existen en formas tetram&eacute;rica. Sedimentos GlpF, GAG y GAA en forma monom&eacute;rica, mientras que encontraron mono/dim&eacute;rico el GGA y AGG. Estos datos aportan nuevas evidencias de que, dentro de la familia de MIP, aquaporins y GlpFs se comportan diferentemente hacia detergentes nondenaturing. Demostramos que la parte de C-terminal de AQPcic, incluyendo la mitad distal del TM 6, puede ser sustituida por el dominio equivalente de GlpF (quimera AAG) sin modificar la especificidad del transporte. Nuestros resultados tambi&eacute;n sugieren que las interacciones de 5 TM de un mon&oacute;mero con 1 TM del mon&oacute;mero adyacente son cruciales para la estabilidad del tetr&aacute;mero de Acuaporina.

Papel del dominio c-terminal y h&eacute;lices transmembrana 5 y 6 en funci&oacute;n y cuaternario de la estructura de prote&iacute;nas intr&iacute;nsecas: An&aacute;lisis de prote&iacute;nas quim&eacute;ricas de Acuaporina/glicerol facilitador.

&#x6C34;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x901A;&#x8FC7;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D; 1 (&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D; 1&#xFF09; &#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x901A;&#x9053;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x62DF;&#x5408;&#x5230; 3.7 A &#x51B3;&#x8BAE;&#x4E09;&#x7EF4;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5730;&#x56FE;&#x539F;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x5F20;&#x5730;&#x56FE;&#x662F;&#x7531;&#x5206;&#x6790;&#x56FE;&#x50CF;&#x548C;&#x8102;&#x8D28;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x6676;&#x4F53;&#x7684;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x5728;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5242;&#x7684;&#x9676;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#x4E2D;&#x4FDD;&#x7559;&#x7535;&#x5B50;&#x884D;&#x5C04;&#x56FE;&#x6837;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;&#x5355;&#x4F53;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5927;&#x5C0F;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#xFF0C;&#x5230;&#x5927;&#x7EA6; 4.0 + /-0.5 A &#x5BBD;&#x5B54;&#x9699;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x5927;&#x7EA6; 18 &#x5E76;&#x5F2F;&#x5230;&#x5927;&#x7EA6; 25 &#x5EA6;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5C06;&#x904D;&#x5386;&#x53CC;&#x5C42;&#x3002;&#x8FD9;&#x7A84;&#x5B54;&#x5BBD;&#x3001; &#x6F0F;&#x6597;&#x5F62;&#x5F00;&#x53E3;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x9762;&#x5E9E;&#xFF0C;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6982;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4E3B;&#x8981;&#x7531;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x6B8B;&#x7559;&#x7A7F;&#x63D2;&#x77ED;&#x7EF5;&#x5EF6;&#x7684;&#x6781;&#x6027;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6709;&#x5229;&#x4E8E;&#x6269;&#x6563;&#x9650;&#x5236;&#x6C34;&#x7684;&#x6D41;&#x91CF;&#x76F8;&#x5BF9;&#x60F0;&#x6027;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5728;&#x5F53;&#x524D;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x4E0D;&#x53EF;&#x89C1;&#xFF0C;3D &#x7ED3;&#x6784;&#x8868;&#x660E;&#x5047;&#x5B9A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x4E2D;&#x7684;&#x6C34;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x51B0;&#x4E2D;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x53CC;&#x5C42;&#x6C34;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5B54;&#x9699;&#x7684;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

The water-selective pathway through aquaporin 1 (AQP1) membrane channel has been visualized by fitting an atomic model to a 3.7 A resolution three-dimensional density map. This map was determined by analysing images and electron diffraction patterns of lipid-reconstituted two-dimensional crystals of AQP1 preserved in vitrified buffer in the absence of any additive. The aqueous pathway in a monomer is characterized by a size-selective, to approximately 4.0 +/- 0.5 A wide pore that spans a length of to approximately 18 and bends by to approximately 25 degrees as it traverses the bilayer. This narrow pore is connected by wide, funnel-shaped openings at the extracellular and cytoplasmic faces, and is outlined mostly by hydrophobic residues interspersed with short stretches of polar amino acids, which results in relatively inert pathway conducive to diffusion-limited water flow. Although not visible at the current resolution, the 3D structure suggests putative binding sites for water molecules in the size-selective pore.

The architecture of a water-selective pore in the lipid bilayer visualized by electron crystallography in vitreous ice.

La voie d&#39;eau-s&eacute;lective &agrave; travers l&#39;aquaporine 1 (AQP1) canal de membrane a &eacute;t&eacute; visualis&eacute;e en ajustant un mod&egrave;le atomique &agrave; un 3,7 A r&eacute;solution en trois dimensions densit&eacute; carte. Cette carte a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e par analyse d&#39;images et de patrons de diffraction des &eacute;lectrons de lipide-reconstitu&eacute;e des cristaux bidimensionnels de AQP1 conserv&eacute; dans un tampon vitrifi&eacute; en l&#39;absence de tout additif. La voie aqueuse dans un monom&egrave;re est caract&eacute;ris&eacute;e par une taille s&eacute;lective, &agrave; environ 4,0 +/-0,5 pore large de A qui s&#39;&eacute;tend sur une longueur d&#39;environ 18 et se penche par &agrave; environ 25 degr&eacute;s, comme elle traverse la bicouche. Ce pore &eacute;troit est reli&eacute; par des ouvertures larges, en forme d&#39;entonnoir &agrave; la face extracellulaire et cytoplasmique et est d&eacute;crite principalement par des r&eacute;sidus hydrophobes, entrecoup&eacute;s de courts tron&ccedil;ons d&#39;acides amin&eacute;s polaires, qui se traduit par une voie relativement inerte propice &agrave; l&#39;&eacute;coulement d&#39;eau de diffusion limit&eacute;e. Bien que non visible &agrave; la r&eacute;solution actuelle, la structure 3D sugg&egrave;re accepteurs putatif des mol&eacute;cules d&#39;eau dans le pore s&eacute;lectif.

L&#39;architecture d&#39;un pore eau s&eacute;lectif dans la bicouche lipidique visualis&eacute;e par cristallographie d&#39;&eacute;lectron en glace vitreuse.

Die Architektur eines Wasser-selektiven Pore in der Lipid-Doppelschicht visualisiert Elektronenkristallographie im Glask&#xF6;rper Eis.

Il sentiero dell&#39;acqua-selettivo attraverso acquaporina 1 (AQP1) canale di membrana &egrave; stato visualizzato montando un modello atomico di un 3,7 risoluzione tridimensionale densit&agrave; mappa. Questa mappa &egrave; stata determinata dall&#39;analisi delle immagini e modelli di diffrazione degli elettroni del lipido-ricostituito cristalli bi-dimensionali di AQP1 conservato nel buffer vetrificata in assenza di qualsiasi additivo. Il pathway acquoso in un monomero &egrave; caratterizzato da una dimensione-selettivo, a circa 4.0 + /-0,5 poro A vasta che si estende su una lunghezza di circa 18 e si piega di circa 25 gradi come esso attraversa il doppio strato. Questa stretta poro &egrave; collegato tramite aperture larghe, a forma di imbuto presso le facce extracellulare e citoplasmatiche ed &egrave; delineata principalmente da residui idrofobi intervallate da brevi tratti di amminoacidi polari, che si traduce nel percorso relativamente inerte favorevole alla portata d&#39;acqua limitata diffusione. Anche se non visibili alla risoluzione corrente, la struttura 3D suggerisce siti leganti putativo per molecole d&#39;acqua nel poro dimensionale selettivo.

L&#39;architettura di un poro acqua-selettivo nel doppio strato lipidico visualizzato da cristallografia elettrone nel ghiaccio vitreo.

&#x6C34;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F; 3.7 A &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3078;&#x306E;&#x539F;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5F53;&#x3066;&#x306F;&#x3081;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x819C;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30A2;&#x30AF;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3; 1 (AQP1) &#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3092;&#x8996;&#x899A;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x6790;&#x753B;&#x50CF;&#x3084;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x7269;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x30D3;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30C9; &#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x3067;&#x4FDD;&#x6301; AQP1 &#x8102;&#x8CEA;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x7D50;&#x6676;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x56DE;&#x6298;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x3001;&#x7D04; 4.0 &#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x7D04; 18 &#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x3001;2 &#x5C64;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3057;&#x3066;&#x7D04; 25 &#x5EA6;&#x306B;&#x66F2;&#x304C;&#x308B; 0.5 A &#x5E83;&#x3044;&#x9593;&#x9699;&#x306E; +/-&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x72ED;&#x3044;&#x30DD;&#x30A2;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x9762;&#x3067;&#x5E83;&#x3044;&#x3001;&#x6F0F;&#x6597;&#x72B6;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x90E8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;&#x6975;&#x6027;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x4F38;&#x5F35;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x9053;&#x62E1;&#x6563;&#x5F8B;&#x901F;&#x6C34;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x3092;&#x52A9;&#x9577;&#x304C;&#x70B9;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306F;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;3&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x7D30;&#x5B54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6C34;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6C34;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x7D30;&#x5B54;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x6C37;&#x3067;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x819C;&#x4E2D;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xBB3C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD1B5;&#xB85C; aquaporin 1 (AQP1)&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB9C9; &#xCC44;&#xB110; 3.7 A &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xBC00;&#xB3C4; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xB97C; &#xC6D0;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378; &#xD53C;&#xD305; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xCCA8;&#xAC00;&#xC81C;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#x786C; &#xBC84;&#xD37C;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874; &#xD558;&#xB294; aqp1&#xC758; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xACB0;&#xC815; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xD68C;&#xC808; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB178; &#xBA38;&#xC5D0; &#xC218;&#xC131; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD06C;&#xAE30; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;, &#xC57D; 0.5 A &#xB113;&#xC740; &#xACF5; &#xAE38;&#xC774; &#xC57D; 18 &#xC77C;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xD558;&#xB294; bilayer &#xD1B5;&#xACFC;&#xD560; &#xB54C; &#xC57D; 25&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xAD74;&#xC808; + 4.0 &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC881;&#xC740; &#xAE30; &#xACF5; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC5BC;&#xAD74; &#xB113;&#xC740;, &#xAE54;&#xB54C;&#xAE30; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xAD6C;&#xBA4D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xACE0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xD3F4;&#xB77C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xBED7; &#xAE30; interspersed &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xBD88;&#xD65C;&#xC131; &#xD1B5;&#xB85C; &#xBCF4;&#xAE09; &#xC81C;&#xD55C; &#xBB3C; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB418;&#xB294; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB41C;. &#xD604;&#xC7AC; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC9C0;&#xB9CC; 3D &#xAD6C;&#xC870; &#xC0C1; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBB3C; &#xBD84;&#xC790; &#xD06C;&#xAE30; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xAE30; &#xACF5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548;.

&#xC720;&#xB9AC; &#xC5BC;&#xC74C;&#xC5D0; &#xC804;&#xC790; &#xACB0;&#xC815;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xAC01; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer&#xC5D0; &#xBB3C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xAE30; &#xACF5; &#xAD6C;&#xC870;.

La v&iacute;a de agua selectiva a trav&eacute;s de Acuaporina 1 (AQP1) canal de membrana ha sido visualizado por ajustar un modelo at&oacute;mico a un 3,7 A resoluci&oacute;n tridimensional densidad mapa. Este mapa fue determinado por an&aacute;lisis de im&aacute;genes y patrones de difracci&oacute;n de electrones de cristales bidimensionales l&iacute;pido-reconstituido de AQP1 conservado en b&uacute;fer vitrificado en ausencia de cualquier aditivo. La v&iacute;a acuosa en un mon&oacute;mero se caracteriza por un tama&ntilde;o selectivo, a aproximadamente 4.0 + /-0.5 poro amplia A que se extiende por una longitud de aproximadamente 18 y se dobla por aproximadamente 25 grados como atraviesa la bicapa. Este poro estrecho est&aacute; conectado por aberturas ancha, en forma de embudo en la cara extracelular y citopl&aacute;smica y destaca sobre todo por residuos hidrof&oacute;bicos intercalados con tramos cortos de amino&aacute;cidos polares, que se traduce en relativamente inerte camino conducente a la corriente de difusi&oacute;n limitada. Aunque no es visible en la presente resoluci&oacute;n, la estructura 3D sugiere sitios de supuesta Uni&oacute;n para las mol&eacute;culas de agua en el selectivo de tama&ntilde;o de poro.

La arquitectura de un poro selectivo de agua en la bicapa lip&iacute;dica visualizado por Cristalograf&iacute;a de electr&oacute;n en hielo v&iacute;treo.

&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D; (AQP0) 0 &#x662F;&#x955C;&#x5934;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5185;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x5176;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8C03;&#x5236;&#x7684; ph &#x503C;&#x548C; Ca2 + &#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x5F17;&#x96F7;&#x6CFD; (&#x732B; Fr) &#x9F20;&#x6807;&#x7D2F;&#x8BA1;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684; AQP0 (AQP0-&#x4ECE;&#x5DE6;&#x5411;&#x53F3;) &#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x7684;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8C03;&#x67E5; AQP0 LTR &#x5E72;&#x6270;&#x6B63;&#x5E38;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; AQP0&#x3002;&#x9996;&#x5148;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x5EFA;&#x8868;&#x793A;&#x955C;&#x5934;&#x4E2D;&#x7684; AQP0 &#x548C; AQP0 LTR &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;AQP0 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x9632;&#x6B62;&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x548C;&#x955C;&#x5934;&#x7684;&#x900F;&#x660E;&#x5EA6;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86; AQP0 co-expressed &#x4E0E; AQP0 LTR &#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x3002;AQP0 LTR &#x4F4E;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684; AQP0&#xFF0C;&#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x6027;&#x548C;&#x9AD8;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x6D88;&#x9664;&#x5176;&#x9499;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E09;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x8D29;&#x5356; AQP0 &#x548C; AQP0-&#x4ECE;&#x5DE6;&#x5411;&#x53F3;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x4F4E;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E00;&#x7EA7;&#xFF0C;AQP0 LTR &#x8FC1;&#x79FB;&#x4E0E; AQP0 &#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x9AD8;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x79EF;&#x7D2F;&#x5728;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F66;&#x53A2;&#x3002;AQP0 LTR &#x5BF9;&#x955C;&#x5934;&#x53D1;&#x5C55;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x6709;&#x5BB3;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x7531;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x964D;&#x4F4E;&#x548C;&#x53D6;&#x6D88;&#x9499;&#x8C03;&#x8282;&#x7684; AQP0&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9499; AQP0 &#x6C34;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x7EF4;&#x6301;&#x6B63;&#x5E38;&#x955C;&#x5934;&#x7A33;&#x6001;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

AQP0 &#x4ECE;&#x5DE6;&#x5411;&#x53F3;&#x7684;&#x732B; Fr &#x9F20;&#x6807;&#x6539;&#x53D8;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; AQP0 &#x9499;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

Aquaporin 0 (AQP0) is the major intrinsic protein of the lens and its water permeability can be modulated by changes in pH and Ca2+. The Cataract Fraser (Cat Fr) mouse accumulates an aberrant AQP0 (AQP0-LTR) in sub-cellular compartments resulting in a congenital cataract. We investigated the interference of AQP0-LTR with normal function of AQP0 in three systems. First, we created a transgenic mouse expressing AQP0 and AQP0-LTR in the lens. Expression of AQP0 did not prevent the congenital cataract but improved the size and transparency of the lens. Second, we measured water permeability of AQP0 co-expressed with AQP0-LTR in Xenopus oocytes. A low expression level of AQP0-LTR decreased the water permeability of AQP0, and a high expression level eliminated its calcium regulation. Third, we studied trafficking of AQP0 and AQP0-LTR in transfected lens epithelial cells. At low expression level, AQP0-LTR migrated with AQP0 toward the cell membrane, but at high expression level, it accumulated in sub-cellular compartments. The deleterious effect of AQP0-LTR on lens development may be explained by lowering water permeability and abolishing calcium regulation of AQP0. This study provides the first evidence that calcium regulation of AQP0 water permeability may be crucial for maintaining normal lens homeostasis and development.

AQP0-LTR of the Cat Fr mouse alters water permeability and calcium regulation of wild type AQP0.

Aquaporine 0 (AQP0) est la prot&#xE9;ine majeure intrins&#xE8;que de la lentille et son perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau peut &#xEA;tre modul&#xE9;e par des changements de pH et de Ca 2 +. La cataracte Fraser (Cat Fr) accumule une souris AQP0 aberrante (AQP0-LTR) dans compartiments sub-cellulaires r&#xE9;sultant d&#x26;#39;une cataracte cong&#xE9;nitale. Nous avons &#xE9;tudi&#xE9; l&#x26;#39;interf&#xE9;rence de AQP0-LTR avec la fonction normale de AQP0 dans trois syst&#xE8;mes. Tout d&#x26;#39;abord, nous avons cr&#xE9;&#xE9; une souris transg&#xE9;nique exprimant AQP0 et AQP0-LTR dans la lentille. Expression de AQP0 n&#x26;#39;a pas emp&#xEA;ch&#xE9; la cataracte cong&#xE9;nitale, mais a am&#xE9;lior&#xE9; la taille et la transparence de la lentille. Deuxi&#xE8;mement, nous avons mesur&#xE9; la perm&#xE9;abilit&#xE9; de l&#x26;#39;eau de AQP0 co-exprim&#xE9; avec AQP0-LTR dans des ovocytes de Xenopus. Un niveau faible expression de AQP0-LTR diminu&#xE9; la perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau de AQP0, et un haut niveau d&#x26;#39;expression a &#xE9;limin&#xE9; son r&#xE9;gulation du calcium. Troisi&#xE8;mement, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; le trafic de AQP0 et AQP0-LTR dans les cellules transfect&#xE9;es de lentilles &#xE9;pith&#xE9;liales. Au niveau faible expression, AQP0-LTR migr&#xE9; avec AQP0 vers la membrane cellulaire, mais &#xE0; haut niveau d&#x26;#39;expression, elle a accumul&#xE9; en compartiments sub-cellulaires. L&#x26;#39;effet d&#xE9;l&#xE9;t&#xE8;re de AQP0-LTR sur le d&#xE9;veloppement lentille peut &#xEA;tre expliqu&#xE9; par l&#x26;#39;abaissement perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau et la suppression de la r&#xE9;gulation du calcium de AQP0. Cette &#xE9;tude fournit la premi&#xE8;re preuve que la r&#xE9;gulation du calcium de la perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau AQP0 peut &#xEA;tre cruciale pour le maintien de l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie objectif normal et le d&#xE9;veloppement.

AQP0-LTR de la perm&#xE9;abilit&#xE9; Cat Fr Souris eau Alters et la r&#xE9;gulation du calcium de type sauvage AQP0

Aquaporine 0 (AQP0) ist das gro&szlig;e systeminterne Protein des Objektivs und seine Wasserdurchl&auml;ssigkeit kann durch Ver&auml;nderungen im pH-Wert und Ca2 + moduliert werden. Die Katarakt Fraser (Cat-Fr)-Maus sammelt eine aberrante AQP0 (AQP0-LTR) in subzellulare Lader&auml;ume, wodurch eine kongenitale Katarakt. Wir haben die Einmischung der AQP0-LTR mit normaler Funktion der AQP0 in drei Systeme untersucht. Zuerst haben wir eine transgene Maus AQP0 und AQP0-LTR im Objektiv auszudr&uuml;cken. Ausdruck des AQP0 verhinderte nicht die angeborene Katarakt, sondern verbessert die Gr&ouml;&szlig;e und die Transparenz der Linse. Zweitens, wir gemessen Wasserdurchl&auml;ssigkeit der co-expressed mit AQP0-LTR in Xenopus Oocytes AQP0. Eine niedrige Ausdrucksebene der AQP0-LTR sank die Wasserdurchl&auml;ssigkeit der AQP0, und eine hohe Ausdrucksebene beseitigt die Kalzium-Verordnung. Drittens studierte wir Handel mit AQP0 und AQP0-LTR transfizierte Linse Epithelzellen. Ebene der geringe Expression AQP0-LTR migriert mit AQP0 in Richtung der Zellmembran, aber bei hohen Ausdrucksebene, es in subzellulare F&auml;cher angesammelt. Die sch&auml;dliche Wirkung von AQP0-LTR auf Objektiv-Entwicklung kann durch Senkung Wasserdurchl&auml;ssigkeit und Abschaffung Kalzium-Regulierung des AQP0 erkl&auml;rt werden. Diese Studie liefert die erste Beweise, dass Kalzium Verordnung AQP0 Wasserdurchl&auml;ssigkeit f&uuml;r die Aufrechterhaltung der normalen Linse Hom&ouml;ostase und Entwicklung entscheidend sein kann.

AQP0-LTR der Katze Fr Maus &auml;ndert Wasserdurchl&auml;ssigkeit und Kalzium Regulierung der Wildtyp AQP0.

Acquaporine 0 (AQP0) sono la principale proteina intrinseca della lente e la sua permeabilit&agrave; all&#39;acqua pu&ograve; essere modulata da cambiamenti di pH e Ca2 +. Il mouse di cataratta Fraser (Cat Fr) si accumula un aberrante AQP0 (AQP0-LTR) nel compartimento subcellulare risultante in una cataratta congenita. Abbiamo studiato l&#39;interferenza di AQP0-LTR con normale funzione di AQP0 in tre sistemi. In primo luogo, abbiamo creato un mouse transgenico che esprimono AQP0 e AQP0-LTR nella lente. Espressione di AQP0 non ha impedito la cataratta congenita, ma migliorato la dimensione e la trasparenza della lente. In secondo luogo, abbiamo misurato la permeabilit&agrave; all&#39;acqua di AQP0 co-expressed con AQP0-LTR in ovociti di Xenopus. Un livello basso espressione di AQP0-LTR diminuito la permeabilit&agrave; all&#39;acqua di AQP0, e un livello di alta espressione eliminato suo regolamento calcio. In terzo luogo, abbiamo studiato traffico di AQP0 e AQP0-LTR in cellule epiteliali lente transfected. A livello di espressione bassa, AQP0-LTR migrato con AQP0 verso la membrana cellulare, ma a livello di alta espressione, &egrave; accumulata in compartimenti subcellulare. L&#39;effetto deleterio di AQP0-LTR sullo sviluppo della lente pu&ograve; essere spiegato dall&#39;abbassamento permeabilit&agrave; all&#39;acqua e regolamento calcio abolizione del AQP0. Questo studio fornisce la prima evidenza che regolamento calcio di permeabilit&agrave; all&#39;acqua di AQP0 pu&ograve; essere cruciale per il mantenimento dello sviluppo e dell&#39;omeostasi normale lente.

AQP0-LTR del mouse Cat Fr altera la permeabilit&agrave; all&#39;acqua e calcio regolamento del wild type AQP0.

&#x30A2;&#x30AF;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;0&#xFF08;AQP0&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5185;&#x5728;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x306F;&#x3001;pH&#x3068;Ca2 +&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x30D5;&#x30EC;&#x30A4;&#x30B6;&#x30FC;&#xFF08;&#x732B;&#x795E;&#x7236;&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x7D30;&#x80DE;&#x533A;&#x753B;&#x306B;&#x7570;&#x5E38;AQP0&#xFF08;AQP0-LTR&#xFF09;&#x3092;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;3&#x3064;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;AQP0&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;AQP0-LTR&#x306E;&#x5E72;&#x6E09;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306B;AQP0&#x3068;AQP0-LTR&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AQP0&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3068;&#x900F;&#x660E;&#x6027;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;AQP0&#x306E;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x30A2;&#x30D5;&#x200B;&#x200B;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;AQP0-LTR&#x3068;&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AQP0-LTR&#x306E;&#x4F4E;&#x767A;&#x200B;&#x200B;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;AQP0&#x306E;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E09;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6C34;&#x6676;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;AQP0&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3084;AQP0-LTR&#x3092;&#x5B66;&#x3073;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F4E;&#x3044;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;AQP0-LTR&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;AQP0&#x3068;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x9AD8;&#x3044;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x958B;&#x767A;&#x306E;AQP0-LTR&#x306E;&#x6709;&#x5BB3;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x3092;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3055;&#x305B;&#x3001;AQP0&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x5EC3;&#x6B62;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;AQP0&#x306E;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3068;&#x767A;&#x5C55;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x732B;&#x795E;&#x7236;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x6C34;&#x306E;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x3068;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;AQP0&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;AQP0-LTR

Aquaporin 0 (AQP0)&#xB294; &#xB80C;&#xC988;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xBA70; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC758; pH &#xBC0F; Ca2 +&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xBC31; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xD504;&#xB808;&#xC774;&#xC800; (&#xACE0;&#xC591;&#xC774; Fr) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCD95;&#xC801; &#xD0C8; AQP0 (AQP0-LTR) sub-cellular &#xAD6C;&#xD68D; &#xC120; &#xCC9C; &#xC131; &#xBC31; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC5D0;. &#xC6B0;&#xB9AC; 3 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; aqp0&#xC758; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; AQP0 LTR &#xAC04;&#xC12D; &#xC870;&#xC0AC;. &#xCCAB;&#xC9F8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB80C;&#xC988;&#xC5D0; AQP0 &#xBC0F; AQP0 LTR&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Aqp0&#xC758; &#xC2DD; &#xC120; &#xCC9C; &#xC131; &#xBC31; &#xB0B4;&#xC7A5;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; &#xB80C;&#xC988;&#xC758; &#xD22C;&#xBA85;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xB458;&#xC9F8;, &#xC6B0;&#xB9AC; AQP0 AQP0 LTR&#xB85C; Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; co-expressed&#xC758; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xCE21;&#xC815;. AQP0 LTR &#xB0AE;&#xC740; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; AQP0&#xC758; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC744; &#xB192;&#xC740; &#xC2DD; &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xCE7C;&#xC298; &#xADDC;&#xC815;. &#xC14B;&#xC9F8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; AQP0 &#xBC0F; AQP0-LTR transfected &#xB80C;&#xC988; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBC00;&#xB9E4; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB0AE;&#xC740; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; aqp0&#xC640; AQP0 LTR &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB192;&#xC740; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900; sub-cellular &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xCD95;&#xC801;. &#xB80C;&#xC988; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; AQP0 LTR&#xC758; &#xD574;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB0AE;&#xCD94;&#xB294; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xBC0F; aqp0&#xC758; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xCE7C;&#xC298; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC124;&#xBA85; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; AQP0 &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC758; &#xCE7C;&#xC298; &#xADDC;&#xC815; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xACFC; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xB80C;&#xC988; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC720;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

AQP0-LTR &#xACE0;&#xC591;&#xC774; Fr &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC758; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xBC0F; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; aqp0&#xC758; &#xCE7C;&#xC298; &#xADDC;&#xC815; &#xBCC0;&#xACBD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Aquaporin 0 (AQP0) es la principal prote&#xED;na intr&#xED;nseca de la lente y su permeabilidad al agua puede ser modulada por cambios en el pH y Ca2 +. La catarata Fraser (Cat Fr) del rat&#xF3;n se acumula un aberrante AQP0 (AQP0-LTR) en el sub-compartimentos celulares que resultan en una catarata cong&#xE9;nita. Se investig&#xF3; la interferencia de AQP0-LTR con la funci&#xF3;n normal de AQP0 en tres sistemas. En primer lugar, hemos creado un rat&#xF3;n transg&#xE9;nico que expresa AQP0 y AQP0 LTR-en la lente. Expresi&#xF3;n de AQP0 no impidi&#xF3; que la catarata cong&#xE9;nita, pero mejor&#xF3; el tama&#xF1;o y la transparencia de la lente. En segundo lugar, se midi&#xF3; la permeabilidad al agua de AQP0 co-expresada con AQP0-LTR en oocitos de Xenopus. Un bajo nivel de expresi&#xF3;n de AQP0-LTR disminuy&#xF3; la permeabilidad al agua de AQP0, y un alto nivel de expresi&#xF3;n eliminado su regulaci&#xF3;n del calcio. En tercer lugar, hemos estudiado el tr&#xE1;fico de AQP0 y AQP0 LTR-en las c&#xE9;lulas epiteliales del cristalino transfectadas. Al bajo nivel de expresi&#xF3;n, AQP0-LTR migr&#xF3; con AQP0 hacia la membrana celular, pero al alto nivel de expresi&#xF3;n, se acumula en el sub-compartimientos celulares. El efecto nocivo de AQP0-LTR en el desarrollo de la lente se puede explicar mediante la reducci&#xF3;n de la permeabilidad al agua y la eliminaci&#xF3;n de la regulaci&#xF3;n del calcio de la AQP0. Este estudio proporciona la primera evidencia de que la regulaci&#xF3;n del calcio de la permeabilidad al agua AQP0 puede ser crucial para mantener la homeostasis de la lente y el desarrollo normales.

AQP0-LTR de la permeabilidad del gato P. El agua del rat&#xF3;n y altera la regulaci&#xF3;n del calcio de tipo salvaje AQP0

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x663E;&#x793A;&#x8FC7;&#x6C34;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x7684; AQP0&#xFF0C;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x955C;&#x5934;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x968F;&#x7740;&#x9178; ph &#x503C;&#x548C; His40 &#x662F;&#x9700;&#x8981; (N&eacute;meth-Cahalan&#x3001; &#x56FD;&#x6881;&#x3001; &#x548C;&#x7406;&#x8BBA;&#x5927;&#x5385;&#x3002;2000 &#x5E74; J.Biol.&#x5316;&#x5B66; 275:6777-6782 &#xFF1B;N&eacute;meth-Cahalan&#x3001; &#x56FD;&#x6881;&#x3001; K.&#x5C14;&#x66FC;&#x548C;&#x7406;&#x8BBA;&#x5927;&#x5385;&#x3002;2004.J.&#x5C06;&#x519B;&#x7A81;&#x53D8; 123:573-580)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5BF9;&#x6C34;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; AQP0 &#x8C03;&#x67E5;&#x950C; &#xFF08;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x8FC7;&#x6E21;&#x91D1;&#x5C5E;&#xFF09; &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x950C;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3002;&#x950C; &#xFF08;1 &#x6BEB;&#x7C73;&#xFF09; AQP0 &#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x4E24;&#x500D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x963B;&#x6B62;&#x4EFB;&#x4F55;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x9178;&#x6027; ph &#x503C;&#x3002;&#x950C;&#x5BF9;&#x5E76;&#x65E0;&#x5F71;&#x54CD;&#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x7684;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D; 1&#x3001; AQP4 &#x6216; MIPfun &#xFF08;&#x4ECE; killifish AQP0&#xFF09;&#xFF0C;&#x6216;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5916;&#x90E8;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x4E0E;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x548C; MIPfun &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x954D;&#xFF0C;&#x53EF;&#x662F;&#x4E0D;&#x94DC;&#xFF0C;AQP0 &#x6C34;&#x6E17;&#x950C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x540C;&#x6837;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x7528;&#x9002;&#x5408;&#x7684;&#x950C;&#x6548;&#x5E94;&#x5BF9;&#x5C71;&#x65B9;&#x7A0B;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x4F7F;&#x5927;&#x4E8E;&#x4E09;&#x4E2A;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x591A;&#x4E2A;&#x950C;&#x79BB;&#x5B50;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x52A0;&#x5F3A;&#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x7CFB;&#x6570;&#x3002;His40 &#x548C; His122 &#x662F;&#x900F;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x950C;&#x8C03;&#x5236;&#x6C34;&#x6027; AQP0&#xFF0C;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x950C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x5236;&#x7EA6;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x7387;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x662F; coinjected &#x7684;&#x950C;&#x4E0D;&#x654F;&#x611F;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x548C;&#x5355;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x533A;&#x5206;&#x5355;&#x4F53;&#x5B8C;&#x5168;&#x5E9F;&#x9664;&#x950C;&#x8C03;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; AQP0 &#x7684;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x4F9D;&#x4ECE;&#x7528;&#x4E8E;&#x950C;&#x8C03;&#x5236;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x5355;&#x5143;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8FD8;&#x63D0;&#x4F9B;&#x836F;&#x7406;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x64CD;&#x7EB5;&#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x548C;&#x900F;&#x660E;&#x5EA6;&#x7684;&#x955C;&#x5934;&#x3002;

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5408;&#x4F5C;&#x7684;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x950C;&#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D; 0 &#x804C;&#x80FD;&#x3002;

We previously showed that the water permeability of AQP0, the water channel of the lens, increases with acid pH and that His40 is required (NÃ©meth-Cahalan, K.L., and J.E. Hall. 2000. J. Biol. Chem. 275:6777-6782; NÃ©meth-Cahalan, K.L., K. Kalman, and J.E. Hall. 2004. J. Gen. Physiol. 123:573-580). We have now investigated the effect of zinc (and other transition metals) on the water permeability of AQP0 expressed in Xenopus oocytes and determined the amino acid residues that facilitate zinc modulation. Zinc (1 mM) increased AQP0 water permeability by a factor of two and prevented any additional increase induced by acid pH. Zinc had no effect on water permeability of AQP1, AQP4 or MIPfun (AQP0 from killifish), or on mutants of AQP1 and MIPfun with added external histidines. Nickel, but not copper, had the same effect on AQP0 water permeability as zinc. A fit of the concentration dependence of the zinc effect to the Hill equation gives a coefficient greater than three, suggesting that binding of more than one zinc ion is necessary to enhance water permeability. His40 and His122 are necessary for zinc modulation of AQP0 water permeability, implying structural constraints for zinc binding and functional modulation. The change in water permeability was highly sensitive to a coinjected zinc-insensitive mutant and a single insensitive monomer completely abolished zinc modulation. Our results suggest a model in which positive cooperativity among subunits of the AQP0 tetramer is required for zinc modulation, implying that the tetramer is the functional unit. The results also offer the possibility of a pharmacological approach to manipulate the water permeability and transparency of the lens.

Zinc modulation of water permeability reveals that aquaporin 0 functions as a cooperative tetramer.

On pr&#xE9;c&#xE9;demment a montr&#xE9; que la perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau de AQP0, le canal d&#x26;#39;eau de la lentille, augmente avec un pH acide et qui est n&#xE9;cessaire His40 (N&#xE9;meth-Cahalan, KL, et JE Hall. 2000. Biol. Chem. 275:6777-6782 ;.. N&#xE9;meth-Cahalan, KL, K. Kalman, et JE Hall 2004 J. Gen Physiol 123:573-580).. Nous avons maintenant &#xE9;tudi&#xE9; l&#x26;#39;effet du zinc (et autres m&#xE9;taux de transition) sur la perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau de AQP0 exprim&#xE9; dans des ovocytes de Xenopus et de d&#xE9;terminer les r&#xE9;sidus d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s qui facilitent la modulation de zinc. Zinc (1 mM) a augment&#xE9; AQP0 perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau par un facteur de deux et a emp&#xEA;ch&#xE9; toute augmentation suppl&#xE9;mentaire induite par le pH acide. Zinc n&#x26;#39;a eu aucun effet sur la perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau de AQP1, AQP4 ou MIPfun (AQP0 de killifish), ou sur des mutants de AQP1 et MIPfun avec ajout&#xE9; histidines externes. Cuivre nickel&#xE9;, mais pas, a eu le m&#xEA;me effet sur AQP0 perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau que le zinc. Un ajustement de la d&#xE9;pendance &#xE0; la concentration de l&#x26;#39;effet de zinc &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;quation de Hill donne un coefficient sup&#xE9;rieur &#xE0; trois, indiquant que la liaison de plus d&#x26;#39;un ion zinc est n&#xE9;cessaire pour augmenter la perm&#xE9;abilit&#xE9; de l&#x26;#39;eau. His40 et His122 sont n&#xE9;cessaires pour la modulation de zinc de AQP0 perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau, ce qui implique des contraintes structurelles pour la modulation obligatoire et fonctionnelle de zinc. Le changement de perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau &#xE9;tait tr&#xE8;s sensible &#xE0; un coinjected zinc insensible mutant et d&#x26;#39;un monom&#xE8;re unique insensible compl&#xE8;tement aboli la modulation de zinc. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent un mod&#xE8;le dans lequel une coop&#xE9;rativit&#xE9; positive entre les sous-unit&#xE9;s de la t&#xE9;tram&#xE8;re AQP0 est n&#xE9;cessaire pour la modulation de zinc, ce qui implique que le t&#xE9;tram&#xE8;re est l&#x26;#39;unit&#xE9; fonctionnelle. Les r&#xE9;sultats offrent &#xE9;galement la possibilit&#xE9; d&#x26;#39;une approche pharmacologique pour manipuler la perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau et la transparence de la lentille.

Modulation de zinc de la perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau r&#xE9;v&#xE8;le que 0 Aquaporin fonctionne comme un t&#xE9;tram&#xE8;re coop&#xE9;rative

Zuvor haben wir gezeigt, dass die Wasserdurchl&auml;ssigkeit der AQP0, der Wasserkanal des Objektivs, mit sauren pH-Wert erh&ouml;ht und His40 erforderlich (N&eacute;meth-Cahalan, k.l. und j.e. Hall. 2000. J. Biol. Chem.-275:6777-6782; N&eacute;meth-Cahalan, k.l., K. Kalman und j.e. Hall. 2004. J. gen. Physiol.-123:573-580). Wir haben jetzt untersucht die Wirkung von Zink (und andere &Uuml;bergangsmetalle) auf die Wasserdurchl&auml;ssigkeit der AQP0 ausgedr&uuml;ckt in Xenopus Oocytes und bestimmt die Aminos&auml;ure-R&uuml;ckst&auml;nde, die Zink-Modulation zu erleichtern. Zink (1 mM) AQP0 Wasserdurchl&auml;ssigkeit um den Faktor zwei erh&ouml;ht und verhindert jegliche zus&auml;tzliche Erh&ouml;hung induziert durch sauren pH-Wert. Zink hatte keine Auswirkung auf die Wasserdurchl&auml;ssigkeit von AQP1, AQP4 oder MIPfun (AQP0 aus Prachtk&auml;rpfling), oder auf Mutanten von AQP1 und MIPfun mit zus&auml;tzlichen externen Histidin. Vernickeltes, aber nicht Kupfer, hatte die gleiche Wirkung auf AQP0 Wasserdurchl&auml;ssigkeit als Zink. Einem Anfall von der Konzentration Abh&auml;ngigkeit der Zink-Effekt auf die Hill-Gleichung gibt ein Koeffizient gr&ouml;&szlig;er als drei, darauf hindeutet, da&szlig; Bindung von mehr als einem Zink-Ion Wasserdurchl&auml;ssigkeit zu verbessern ist. His40 und His122 sind f&uuml;r Zink Modulation AQP0 Wasserdurchl&auml;ssigkeit, impliziert strukturellen Zw&auml;nge f&uuml;r Zink-Bindung und funktionelle Modulation. Die Ver&auml;nderung der Wasserdurchl&auml;ssigkeit war sehr empfindlich auf coinjected Zink-unempfindliche Mutanten und einem einzigen unempfindlich Monomer abgeschafft Zink-Modulation. Unsere Ergebnisse legen nahe, ein Modell, in dem positive Kooperativit&auml;t zwischen den Untereinheiten des AQP0-Tetramer erforderlich f&uuml;r Zink-Modulation ist, was bedeutet, dass das Tetramer die funktionale Einheit bildet. Die Ergebnisse bieten auch die M&ouml;glichkeit, einen pharmakologischen Ansatz, die Wasserdurchl&auml;ssigkeit zu manipulieren und Transparenz der Linse.

Zink-Modulation der Wasserdurchl&auml;ssigkeit enth&uuml;llt, dass Aquaporine 0 als eine kooperative Tetramer fungiert.

Abbiamo precedentemente dimostrato che la permeabilit&agrave; all&#39;acqua di AQP0, il canale d&#39;acqua della lente, aumenta con pH acido e che His40 &egrave; richiesto (N&eacute;meth-Cahalan, K.L. e J.E. Hall. 2000. J Biol Chem 275:6777-6782; N&eacute;meth-Cahalan, K.L., K. Kalman e J.E. Hall. Pneumologia Gen. 2004. J. 123:573-580). Ora abbiamo studiato l&#39;effetto di zinco (e di altri metalli di transizione) sulla permeabilit&agrave; all&#39;acqua di AQP0 espressa in ovociti di Xenopus e determinato i residui dell&#39;amminoacido che facilitano la modulazione di zinco. Zinco (1 mM) permeabilit&agrave; all&#39;acqua di AQP0 &egrave; aumentato di un fattore due e ha impedito qualsiasi ulteriore aumento indotto dal pH acido. Zinco ha avuto alcun effetto sulla permeabilit&agrave; all&#39;acqua della AQP1, AQP4 o MIPfun (AQP0 da killifish), o su mutanti di AQP1 e MIPfun con aggiunta histidines esterno. Nichel, ma non di rame, aveva lo stesso effetto sulla permeabilit&agrave; all&#39;acqua AQP0 come lo zinco. Una misura della dipendenza di concentrazione dell&#39;effetto zinco all&#39;equazione di Hill d&agrave; un coefficiente superiore a tre, suggerendo che l&#39;associazione di pi&ugrave; di uno ione zinco &egrave; necessario per migliorare la permeabilit&agrave; all&#39;acqua. His40 e His122 sono necessarie per la modulazione dello zinco di AQP0 permeabilit&agrave; all&#39;acqua, che implica vincoli strutturali per l&#39;associazione di zinco e modulazione funzionale. Il cambiamento nella permeabilit&agrave; all&#39;acqua era altamente sensibile a un mutante coinjected zinco-insensibile e un singolo monomero insensibile completamente abolita modulazione di zinco. I nostri risultati suggeriscono un modello in cui &egrave; richiesto per la modulazione di zinco, che implica che il tetramero &egrave; l&#39;unit&agrave; funzionale cooperativit&agrave; positiva tra le subunit&agrave; del tetramero AQP0. I risultati offrono anche la possibilit&agrave; di un approccio farmacologico per manipolare la permeabilit&agrave; all&#39;acqua e la trasparenza della lente.

Zinco modulazione della permeabilit&agrave; all&#39;acqua rivela che aquaporina 0 funziona come un tetramero cooperativo.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;AQP0&#x306E;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x6C34;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;&#x9178;&#x6027;pH&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;His40&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#xFF08;&#x30CD;&#x30E1;&#x30C8;-Cahalan&#x3001;KL&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;JE&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x8981;&#x6C42;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;2000&#x5E74;&#x3002;J.&#x8BB8;&#x6587;&#x732E;&#x3002;275:6777-6782 &#x3011;&#x3002;&#x30CD;&#x30E1;&#x30C8;-Cahalan&#x3001;KL&#x3001;K.&#x30AB;&#x30EB;&#x30DE;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;JE&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;2004 J.&#x5927;&#x5C06;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;123:573-580&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;AQP0&#x306E;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306B;&#x4E9C;&#x925B;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#xFF08;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x91D1;&#x5C5E;&#xFF09;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3001;&#x4E9C;&#x925B;&#x5909;&#x8ABF;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E9C;&#x925B;&#xFF08;1 mm&#xFF09;&#x306F;2&#x3064;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;AQP0&#x306E;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x9178;&#x6027;pH&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x9632;&#x3044;&#x3060;&#x3002;&#x4E9C;&#x925B;&#x306F;&#x3001;AQP1&#x3001;AQP4&#x307E;&#x305F;&#x306F;MIPfun&#xFF08;&#x30E1;&#x30C0;&#x30AB;&#x304B;&#x3089;AQP0&#xFF09;&#x306E;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3001;&#x3068;AQP1&#x3068;MIPfun&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x304C;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30CB;&#x30C3;&#x30B1;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x9285;&#x3001;&#x4E9C;&#x925B;&#x306A;&#x3069;&#x306E;AQP0&#x306E;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30D2;&#x30EB;&#x306E;&#x5F0F;&#x306B;&#x4E9C;&#x925B;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x4E9C;&#x925B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;3&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x4FC2;&#x6570;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002; His40&#x3068;His122&#x304C;&#x4E9C;&#x925B;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306A;&#x5236;&#x7D04;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3059;&#x308B;&#x3001;AQP0&#x306E;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x4E9C;&#x925B;&#x5909;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;co&#x200B;&#x200B;injected&#x4E9C;&#x925B;&#x3068;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x5EC3;&#x6B62;&#x4E9C;&#x925B;&#x5909;&#x8ABF;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x304C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5358;&#x4F4D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3059;&#x308B;&#x3001;AQP0&#x306E;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x9593;&#x306E;&#x6B63;&#x306E;&#x5354;&#x540C;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x4E9C;&#x925B;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8981;&#x6C42;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x3068;&#x900F;&#x660E;&#x6027;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x900F;&#x6C34;&#x306E;&#x4E9C;&#x925B;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x5354;&#x8ABF;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;0&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

AQP0, &#xB80C;&#xC988;&#xC758; &#xC218;&#xB85C; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xC0B0; &#xC131; ph &#xC99D;&#xAC00; his40&#xC740; &#xD544;&#xC218; (N&eacute;meth Cahalan, K.L., &#xBC0F; J.E. &#xD640; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF8;. 2000. &#xC81C;&#xC774; Biol. &#xD654;&#xD559; 275:6777-6782; N&eacute;meth Cahalan, K.L., K. &#xCE7C;&#xB9CC; J.E. &#xD640;. 2004. &#xC81C;&#xC774; &#xC911;&#xC7A5; &#xB144; 123:573-580). &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xC81C; Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; aqp0&#xC758; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC5D0; &#xC544;&#xC5F0; (&#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC804;&#xC774; &#xAE08;&#xC18D;)&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC544;&#xC5F0; &#xBCC0;&#xC870;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xC5F0; (1 mM) 2 &#xBC30; AQP0 &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC0B0; &#xC131; Ph&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xCD94;&#xAC00;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC00; &#xB9C9;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4; AQP1, AQP4 &#xB610;&#xB294; Mipfun&#xC758; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; (&#xC1A1;&#xC0AC;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; AQP0), &#xB610;&#xB294; &#xCD94;&#xAC00; &#xB41C; &#xC678;&#xBD80; &#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518;&#xACFC; aqp1&#xC640; Mipfun&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;. &#xB2C8;&#xCF08;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xAD6C;&#xB9AC;, &#xC544;&#xC5F0;&#xC73C;&#xB85C; AQP0 &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD790; &#xBC29;&#xC815;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC544;&#xC5F0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874;&#xC758; &#xC801;&#xD569; 3, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC544;&#xC5F0; &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xAC15;&#xD654; &#xD544;&#xC694;&#xB294; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070; &#xACC4;&#xC218;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xC5F0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC81C;&#xC57D;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; His40 &#xBC0F; his122&#xB97C; AQP0 &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC758; &#xC544;&#xC5F0; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; coinjected &#xC544;&#xC5F0;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xACE0; &#xB2E8;&#xC77C;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4; &#xC544;&#xC5F0; &#xBCC0;&#xC870;&#xB97C; &#xC644;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xD3D0;&#xC9C0;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; &#xBAA8;&#xB378; AQP0 tetramer subunits &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; cooperativity&#xB294; &#xC544;&#xC5F0; &#xBCC0;&#xC870;, &#xC554;&#xC2DC;&#xB294; tetramer &#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;. &#xACB0;&#xACFC; &#xB610;&#xD55C; &#xB80C;&#xC988;&#xC758; &#xD22C;&#xBA85;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC870;&#xC791; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xC57D;&#xB9AC;&#xD559; &#xC811;&#xADFC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC758; &#xC544;&#xC5F0; &#xBCC0;&#xC870; &#xADF8; aquaporin 0 &#xD611;&#xB825; tetramer&#xB85C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Anteriormente puso de manifiesto que la permeabilidad al agua de AQP0, el canal de agua de la lente, aumenta con el pH &#xE1;cido y His40 que se requiere (N&#xE9;meth-Cahalan, KL, y Hall JE. De 2000. J. Biol.. Chem. 275:6777-6782 ;.. N&#xE9;meth-Cahalan, KL, Kalman K. y Hall JE J. Gen. Physiol 2004 123:573-580).. Ahora hemos investigado el efecto de zinc (y otros metales de transici&#xF3;n) en la permeabilidad al agua de AQP0 expres&#xF3; en oocitos de Xenopus y se determinaron los residuos de amino&#xE1;cidos que facilitan la modulaci&#xF3;n de zinc. El zinc (1 mM) aument&#xF3; AQP0 permeabilidad al agua por un factor de dos e impidi&#xF3; cualquier aumento adicional inducida por el pH &#xE1;cido. El zinc no tuvo efecto sobre la permeabilidad al agua de AQP1, AQP4 o MIPfun (AQP0 de killis), o en los mutantes de AQP1 y MIPfun con a&#xF1;adido histidinas externos. Cobre, n&#xED;quel, pero no tuvo el mismo efecto sobre la permeabilidad al agua AQP0 como el zinc. Un ajuste de la dependencia de la concentraci&#xF3;n del efecto de zinc a la ecuaci&#xF3;n de Hill da un coeficiente mayor que tres, lo que sugiere que la uni&#xF3;n de iones de zinc m&#xE1;s de una es necesaria para aumentar la permeabilidad al agua. His40 y His122 son necesarios para la modulaci&#xF3;n de zinc de la permeabilidad al agua AQP0, lo que implica limitaciones estructurales para la modulaci&#xF3;n de zinc vinculante y funcional. El cambio en la permeabilidad al agua era muy sensible a una coinjected zinc insensible mutante y un mon&#xF3;mero insensible completamente abolido modulaci&#xF3;n de zinc. Nuestros resultados sugieren un modelo en el que se requiere cooperatividad positiva entre las subunidades del tetr&#xE1;mero AQP0 para la modulaci&#xF3;n de zinc, lo que implica que el tetr&#xE1;mero es la unidad funcional. Los resultados tambi&#xE9;n ofrecen la posibilidad de un enfoque farmacol&#xF3;gico para manipular la permeabilidad al agua y la transparencia de la lente.

Modulaci&#xF3;n de zinc de la permeabilidad del agua revela que acuaporina 0 Funciones como un tetr&#xE1;mero Cooperativa

&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x7684; AQP0 (P(f)) &#x968F;&#x7740;&#x4E2D;&#x53BB;&#x9664;&#x5916;&#x90E8;&#x9499;&#xFF0C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; AQP0 &#x7684; C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x9499; (CaM) &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8C03;&#x67E5;&#x5BF9; P(f) &#x4ECB;&#x5BFC;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7ECF;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728; C &#x603B;&#x7AD9;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3001; &#x51F8;&#x8F6E;&#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;AQP0 P(f) &#x9499;&#x8C03;&#x8282;&#x4F53;&#x73B0;&#x56DB;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x8868;&#x578B;&#xFF1A; &#x7EC4; 1&#x3001; &#x4E0E;&#x5916;&#x90E8;&#x7ECF; &#xFF08;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3001; S229N&#x3001; R233A&#x3001; S235A&#x3001; S235K&#x3001; K238A&#x3001; R241E&#xFF09; &#xFF1B; &#x53D6;&#x6D88;&#x540E;&#x9AD8; P(f)&#x7EC4; 2&#xFF0C;&#x9AD8; P(f) &#x5728;&#x9AD8;&#x67B6; (5 mm) &#x4E0E;&#x5916;&#x90E8;&#x7ECF; &#xFF08;S235D &#x548C; R241A&#xFF09; &#xFF1B;&#x4E0E;&#x9AD8; P(f) &#x7EC4; 3 &#x548C;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ECF;&#x89C4;&#x7BA1; &#xFF08;S229D&#x3001; S231N&#x3001; S231D&#x3001; S235N &#x548C; S235N/I236S&#xFF09; &#xFF1B;&#x548C;&#x7EC4; 4&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4F4E; P(f) &#x548C;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ECF;&#x89C4;&#x4F8B; &#xFF08;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;S229D/S235D &#x548C; S235N/I236S&#xFF09;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x5185;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x662F;&#x5426;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8868;&#x578B;&#xFF0C;&#x5982;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; AQP0 &#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x4E0B; calmidazolium&#xFF0C;&#x51F8;&#x8F6E;&#x6291;&#x5236;&#x5242; S235D &#x663E;&#x793A;&#x9AD8; P(f) &#x548C;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ECF;&#x89C4;&#x4F8B;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; S235D &#x4ECD;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x51F8;&#x8F6E;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;S229D &#x663E;&#x793A;&#x62DB;&#x8058;&#x51F8;&#x8F6E;&#xFF0C;&#x8DCC;&#x5E45;&#x6697;&#x793A; S229D &#x65E0;&#x6CD5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x51F8;&#x8F6E;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x51F8;&#x8F6E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6291;&#x5236;&#x5242; AQP0 P(f) &#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x662F;&#x5904;&#x4E8E;&#x4F4E;&#x4F4D;&#x7684; P(f) &#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5173;&#x8054;&#x548C;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x662F;&#x5177;&#x6709;&#x9AD8; P(f) &#x72B6;&#x6001;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4E0D;&#x6070;&#x5F53;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6216;&#x9499;/CaM &#x89C4;&#x4F8B;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x4F7F; P(f) &#x66F4;&#x6539;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;

&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x786E;&#x5B9A;&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC; Ca2 + &#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x6C34;&#x6E17;&#x900F;&#x7684; AQP0&#x3002;

In Xenopus oocytes, the water permeability of AQP0 (P(f)) increases with removal of external calcium, an effect that is mediated by cytoplasmic calmodulin (CaM) bound to the C terminus of AQP0. To investigate the effects of serine phosphorylation on CaM-mediated Ca(2+) regulation of P(f), we tested the effects of kinase activation, CaM inhibition, and a series of mutations in the C terminus CaM binding site. Calcium regulation of AQP0 P(f) manifests four distinct phenotypes: Group 1, with high P(f) upon removal of external Ca(2+) (wild-type, S229N, R233A, S235A, S235K, K238A, and R241E); Group 2, with high P(f) in elevated (5 mm) external Ca(2+) (S235D and R241A); Group 3, with high P(f) and no Ca(2+) regulation (S229D, S231N, S231D, S235N, and S235N/I236S); and Group 4, with low P(f) and no Ca(2+) regulation (protein kinase A and protein kinase C activators, S229D/S235D and S235N/I236S). Within each group, we tested whether CaM binding mediates the phenotype, as shown previously for wild-type AQP0. In the presence of calmidazolium, a CaM inhibitor, S235D showed high P(f) and no Ca(2+) regulation, suggesting that S235D still binds CaM. Contrarily, S229D showed a decrease in recruitment of CaM, suggesting that S229D is unable to bind CaM. Taken together, our results suggest a model in which CaM acts as an inhibitor of AQP0 P(f). CaM binding is associated with a low P(f) state, and a lack of CaM binding is associated with a high P(f) state. Pathological conditions of inappropriate phosphorylation or calcium/CaM regulation could induce P(f) changes contributing to the development of a cataract.

Phosphorylation determines the calmodulin-mediated Ca2+ response and water permeability of AQP0.

Dans les ovocytes de Xenopus, la perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau de AQP0 (P (f)) augmente avec l&#x26;#39;&#xE9;limination du calcium externe, un effet qui est m&#xE9;di&#xE9;e par cytoplasmique calmoduline (CaM) li&#xE9; &#xE0; la terminale C de AQP0. Pour &#xE9;tudier les effets de phosphorylation de la s&#xE9;rine sur la CaM-Ca m&#xE9;diation (2 +) la r&#xE9;glementation de P (f), nous avons test&#xE9; les effets de l&#x26;#39;activation kinase, l&#x26;#39;inhibition de la CaM, et une s&#xE9;rie de mutations dans le site terminus CaM C contraignant. La r&#xE9;gulation du calcium de AQP0 P (f) se manifeste quatre ph&#xE9;notypes distincts: Groupe 1, avec haute P (f) lors du retrait de Ca externe (2 +) (de type sauvage, S229N, R233A, S235A, S235K, K238A, et R241E); Groupe 2, avec haute P (f) dans &#xE9;lev&#xE9;e (5 mm) ext&#xE9;rieure Ca (2 +) (S235D et R241A); groupe 3, &#xE0; forte P (f) et exempt de Ca (2 +) de r&#xE9;gulation (S229D, S231N, S231D , S235N, et S235N/I236S) et le Groupe 4, avec une faible P (f) et pas de Ca (2 +) r&#xE8;glement (prot&#xE9;ine kinase A et la prot&#xE9;ine kinase C activateurs, S229D/S235D et S235N/I236S). Dans chaque groupe, nous avons test&#xE9; si la m&#xE9;diation CaM contraignantes du ph&#xE9;notype, comme indiqu&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment de type sauvage AQP0. En pr&#xE9;sence de calmidazolium, un inhibiteur de CaM, S235D ont enregistr&#xE9; une forte P (f) et pas de Ca (2 +) la r&#xE9;glementation, ce qui sugg&#xE8;re que S235D lie encore CaM. Au contraire, S229D a montr&#xE9; une diminution du recrutement de la CaM, ce qui sugg&#xE8;re que S229D est incapable de se lier CaM. Pris dans leur ensemble, nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent un mod&#xE8;le dans lequel la CaM agit comme un inhibiteur de la AQP0 P (f). CaM liaison est associ&#xE9;e &#xE0; un faible P (f) l&#x26;#39;&#xE9;tat, et un manque de CaM liaison est associ&#xE9;e &#xE0; une haute P (f) de l&#x26;#39;&#xC9;tat. Conditions pathologiques de la phosphorylation inappropri&#xE9;e ou de calcium / CaM r&#xE9;glementation pourrait induire P (f) les changements qui contribuent au d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;une cataracte.

D&#xE9;termine la phosphorylation m&#xE9;di&#xE9;e par la calmoduline Ca 2 + et la r&#xE9;ponse de la perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;eau AQP0

In Xenopus Oocytes, die Wasserdurchl&auml;ssigkeit der AQP0 (P(f)) nimmt mit der Entfernung von externen Kalzium, ein Effekt, der durch zellplasmatisches Calmodulin (CaM) bis zum Endpunkt C AQP0 gebunden vermittelt wird. Um die Auswirkungen der Serin-Phosphorylierung &uuml;ber CaM-vermittelte Ca(2+) Regulierung der P(f) zu untersuchen, haben wir die Auswirkungen der Kinase-Aktivierung, CaM-Hemmung und eine Reihe von Mutationen in der C-Terminus-CaM-Bindungsstelle getestet. Kalzium-Regulierung der AQP0 P(f) manifestiert sich vier unterschiedliche Ph&auml;notypen: Gruppe 1, mit hoher P(f) nach der Entfernung von externen Ca(2+) (Wildtyp, S229N, R233A, S235A, S235K, K238A und R241E); Gruppe 2, mit hohen P(f) in erh&ouml;hten (5 mm) externe Ca(2+) (S235D und R241A); Gruppe 3, mit hoher P(f) und ohne Ca(2+)-Verordnung (S229D, S231N, S231D, S235N und S235N/I236S); und Gruppe 4, mit niedrigem P(f) und keine Ca(2+)-Verordnung (Protein Kinase A und Protein-Kinase C-Aktivatoren, S229D/S235D und S235N/I236S). Innerhalb jeder Gruppe haben wir getestet, ob CaM Bindung der Ph&auml;notyp vermittelt wie zuvor f&uuml;r Wildtyp AQP0 gezeigt. In Anwesenheit von Calmidazolium, ein CaM-Hemmer, zeigte S235D hohe P(f) und keine Ca(2+) Regelung, was darauf hindeutet, dass S235D noch CaM bindet. Im Gegensatz dazu zeigte S229D eine Abnahme der Rekrutierung von CaM, was darauf hindeutet, dass S229D nicht CaM binden kann. Zusammengenommen deuten unsere Ergebnisse ein Modells in dem CaM als Inhibitor der AQP0 P(f) handeln. CaM-Bindung ist verbunden mit einem niedrigen P(f) Zustand und mangelnde CaM Bindung ist verbunden mit einem hohen P(f)-Zustand. Pathologische Bedingungen unangemessen Phosphorylierung oder Kalzium/CaM Verordnung k&ouml;nnte P(f) Ver&auml;nderungen, die zur Entwicklung einer Katarakt f&uuml;hren.

Phosphorylierung bestimmt die Calmodulin-vermittelte Ca2 + Antwort und Wasserdurchl&auml;ssigkeit der AQP0.

In Xenopus oocytes, la permeabilit&agrave; all&#39;acqua di AQP0 (P(f)) aumenta con la rimozione di calcio esterno, un effetto che &egrave; mediato da citoplasmatica calmodulina (CaM) associato al C terminale di AQP0. Per studiare gli effetti della fosforilazione della serina su CaM-mediata Ca(2+) regolamento di P(f), abbiamo testato gli effetti di attivazione della chinasi, inibizione di CaM e una serie di mutazioni nel sito di legame di C terminus CaM. Regolamento calcio di AQP0 P(f) si manifesta quattro fenotipi distinti: gruppo 1, con alta P(f) dopo l&#39;espianto del Ca(2+) esterno (wild-type, S229N, R233A, S235A, S235K, K238A e R241E); Gruppo 2, con alta P(f) in sopraelevata (5 mm) Ca(2+) esterno (S235D e R241A); Gruppo 3, con P(f) alta e nessun regolamento di Ca(2+) (S229D, S231N, S231D, S235N e S235N/I236S); e gruppo 4, con P(f) basso e nessun regolamento di Ca(2+) (proteina chinasi A e Attivanti di proteina chinasi C, S229D/S235D e S235N/I236S). All&#39;interno di ogni gruppo, abbiamo testato se associazione CaM da intermediario il fenotipo, come illustrato in precedenza per il selvaggio-tipo AQP0. In presenza di calmidazolium, un inibitore della CaM, S235D ha mostrato ad alta P(f) e nessun regolamento di Ca(2+), suggerendo che S235D si lega ancora CaM. Al contrario, S229D ha mostrato una diminuzione nell&#39;assunzione di CaM, suggerendo che S229D &egrave; in grado di associare la CaM. Presi insieme, i nostri risultati suggeriscono un modello in cui CaM agisce come un inibitore della AQP0 P(f). L&#39;associazione CaM &egrave; associata con un basso stato di P(f), e una mancanza di associazione CaM &egrave; associata con un alto stato di P(f). Condizioni patologiche del regolamento fosforilazione o calcio/CaM inappropriata potrebbero indurre i cambiamenti P(f) che contribuiscono allo sviluppo di una cataratta.

Fosforilazione determina la calmodulina-mediata Ca2 + acqua e risposta permeabilit&agrave; delle AQP0.

&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;AQP0&#xFF08;P&#xFF08;F&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3001;AQP0&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;CaM&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;&#x3067;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; P&#x306E;CAM&#x5A92;&#x4ECB;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x898F;&#x5236;&#xFF08;F&#xFF09;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;CAM&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;CaM&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#xFF08;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3001;S229N&#x3001;R233A&#x3001;S235A&#x3001;S235K&#x3001;K238A&#x3001;&#x53CA;&#x3073;R241E&#xFF09;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;P&#xFF08;f&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;1; AQP0 P&#xFF08;f&#xFF09;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306F;&#x3001;4&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x9AD8;P&#xFF08;f&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x898F;&#x5236;&#xFF08;S229D&#x3001;S231N&#x3001;S231D&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;3&#x3068;&#x3001;&#x4E0A;&#x6607;&#xFF08;5 mm&#xFF09;&#x3092;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;S235D&#x3068;R241A&#xFF09;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;P&#xFF08;f&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;2&#x3001; &#x3001;S235N&#x3001;&#x3068;S235N/I236S&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;4&#x3001;&#x4F4E;P&#xFF08;f&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x898F;&#x5236;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;S229D/S235D&#x3068;S235N/I236S&#xFF09;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;AQP0&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x524D;&#x8FF0;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x5404;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306E;CaM&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x3002; calmidazolium&#x3001;CAM&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;S235D&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;P&#xFF08;f&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x898F;&#x5236;&#x3001;S235D&#x306F;&#x307E;&#x3060;CAM&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;S229D&#x306F;&#x3001;S229D&#x306F;&#x3001;CaM&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;CAM&#x306E;&#x63A1;&#x7528;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;CAM&#x304C;AQP0 P&#xFF08;f&#xFF09;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; CaM&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;P&#xFF08;f&#xFF09;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;CaM&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;P&#xFF08;f&#xFF09;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0D;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x3084;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;/ CaM&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x75C5;&#x7684;&#x72B6;&#x614B;&#x306F;&#x3001;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;P&#xFF08;f&#xFF09;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;Ca2 +&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;AQP0&#x306E;&#x6C34;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

Xenopus oocytes, aqp0&#xC758; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; (P(f)) &#xC678;&#xBD80; &#xCE7C;&#xC298;, &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; calmodulin (&#xCEA0;) aqp0&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC99D;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. P(f)&#xC758; Ca(2+) &#xCEA0; &#xC911;&#xC7AC; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; C &#xB9D0;&#xB2E8; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xCEA0; &#xC800;&#xD574; &#xBC0F; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. AQP0 p(f)&#xC758; &#xCE7C;&#xC298; &#xADDC;&#xC81C; &#xBA85;&#xB2E8; 4 &#xAC00;&#xC9C0; &#xACE0;&#xAE30;: &#xADF8;&#xB8F9; 1 &#xAC1C;, &#xC678;&#xBD80; Ca(2+) (&#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785;, S229N, R233A, S235A, S235K, K238A, &#xBC0F; R241E);&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB192;&#xC740; P(f) &#xADF8;&#xB8F9; 2, &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C; &#xAD8C;&#xD55C; (5mm) &#xB192;&#xC740; P(f) &#xC678;&#xBD80; Ca(2+) (S235D &#xBC0F; R241A); &#xADF8;&#xB8F9; 3&#xC740; &#xB192;&#xC740; p(f)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBC0F; &#xC544;&#xB2C8; Ca(2+) &#xADDC;&#xC815; (S229D, S231N, S231D, S235N, &#xBC0F; S235N/I236S); &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB0AE;&#xC740; P(f) &#xBC0F; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; Ca(2+) &#xADDC;&#xC81C; (&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &#xD65C;&#xC131; &#xC81C;, S229D/S235D &#xBC0F; S235N/I236S)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xADF8;&#xB8F9; 4. &#xAC01; &#xADF8;&#xB8F9; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC911;&#xC7AC; phenotype, &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; aqp0&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xAC83; &#xCC98;&#xB7FC;. Calmidazolium, &#xCEA0; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC874;&#xC7AC; S235D &#xBCF4;&#xC5EC; &#xB192;&#xC740; P(f) &#xBC0F; Ca(2+) &#xADDC;&#xC815; &#xC5C6;&#xC74C; S235D &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548;. &#xC778;&#xC9C0;, s229d&#xB294; S229D &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC81C;&#xC548; &#xCEA0;, &#xCC44;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xCEA0; AQP0 p(f)&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xC11C; &#xC5ED;&#xD560; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xAD8C;&#xD574; &#xB4DC;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB0AE;&#xC740; P(f) &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xBA70; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD80;&#xC871;&#xC740; &#xB192;&#xC740; P(f) &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828;. &#xBD80;&#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB610;&#xB294; &#xCE7C;&#xC298;/&#xCEA0; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC758; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xAC74; &#xC218;&#xB294; &#xBC31; &#xB0B4;&#xC7A5;&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; P(f) &#xBCC0;&#xACBD; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; calmodulin &#xC911;&#xC7AC; Ca2 + &#xC751;&#xB2F5; &#xBC0F; &#xBB3C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; aqp0&#xC758; &#xACB0;&#xC815;.

En los ovocitos de Xenopus, la permeabilidad al agua de AQP0 (P (f)) aumenta con la eliminaci&#xF3;n del calcio externo, un efecto que est&#xE1; mediado por citoplasm&#xE1;tica calmodulina (CaM), vinculado a la terminal C del AQP0. Para investigar los efectos de la fosforilaci&#xF3;n de la serina en el CAM-mediada por Ca (2 +) la regulaci&#xF3;n de P (f), hemos probado los efectos de la activaci&#xF3;n de la cinasa, inhibici&#xF3;n de la CAM, y una serie de mutaciones en el sitio de la terminal C de uni&#xF3;n a CaM. La regulaci&#xF3;n del calcio de la AQP0 P (f) se manifiesta cuatro fenotipos diferentes: grupo 1, con alto contenido de P (f) a la eliminaci&#xF3;n de exteriores de Ca (2 +) (de tipo silvestre, S229N, R233A, S235A, S235K, K238A, y R241E); Grupo 2, con alto contenido de P (f) en elevada (5 mm) exteriores de Ca (2 +) (S235D y el R241A), Grupo 3, con alto contenido de P (f) y Ca no (2 +) El Reglamento (S229D, S231N, S231D , S235N, y S235N/I236S), y Grupo 4, con bajos niveles de P (f) y Ca no (2 +) El Reglamento (prote&#xED;na quinasa A y activadores de la prote&#xED;na quinasa C, S229D/S235D y S235N/I236S). Dentro de cada grupo, hemos probado si media la uni&#xF3;n a CaM el fenotipo, como se muestra anteriormente para la de tipo salvaje AQP0. En presencia de calmidazolium, un inhibidor de la CAM, S235D mostraron alto contenido de P (f) y Ca sin (2 +) la regulaci&#xF3;n, lo que sugiere que todav&#xED;a S235D une CaM. Por el contrario, S229D mostr&#xF3; una disminuci&#xF3;n en la contrataci&#xF3;n de la CAM, lo que sugiere que S229D es incapaz de obligar a CaM. En conjunto, nuestros resultados sugieren un modelo en el cual la CaM act&#xFA;a como un inhibidor de la AQP0 P (f). CaM uni&#xF3;n est&#xE1; asociado con un bajo contenido de P (f) del estado, y una falta de uni&#xF3;n a CaM se asocia con una alta P (f) del estado. Las condiciones patol&#xF3;gicas de la fosforilaci&#xF3;n inapropiado o calcio / CaM la regulaci&#xF3;n podr&#xED;a inducir P (f) los cambios que contribuyen al desarrollo de una catarata.

Determina la fosforilaci&#xF3;n mediada por calmodulina Ca2 + y Respuesta permeabilidad al agua de AQP0

AQP0&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x79F0;&#x4E3A; MIP26&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x955C;&#x5934;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6C34;&#x8FD0;&#x8F93;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x8584;&#x7684;&#x8DEF;&#x53E3;&#xFF0C;&#x6709;&#x591A;&#x4E2A;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x548C;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x955C;&#x5934;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5305;&#x542B;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A; Aqp0 &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5305;&#x542B;&#x4E24;&#x4E2A;&#xFF0C;Aqp0a &#x548C; Aqp0b&#xFF0C;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x5355;&#x591A;&#x4E2A;&#x804C;&#x80FD;&#x53EF;&#x5206;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x8981;&#x5229;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x91CD;&#x590D;&#x548C;&#x5206;&#x6B67;&#x7167;&#x4EAE; AQP0 &#x5728;&#x955C;&#x5934;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x91CD;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x86CB;&#x767D; 0s &#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x900F;&#x660E;&#x5EA6;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x955C;&#x5934;&#x6240;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x3002;

AQP0, formerly known as MIP26, likely has multiple separate functions in the mammalian lens, including water transport, formation of thin junctions, and interactions with other lens components. Although mammalian genomes contain only one Aqp0 gene, the zebrafish genome contains two, Aqp0a and Aqp0b, and the putative multiple functions of the single mammalian protein may be divided between these two genes. The purpose of this study was to exploit this gene duplication and divergence to illuminate the multiple functions of AQP0 in the lens.

Two distinct aquaporin 0s required for development and transparency of the zebrafish lens.

AQP0, anciennement connu sous le nom MIP26, a probablement de multiples fonctions distinctes dans la lentille de mammif&#xE8;res, y compris le transport de l&#x26;#39;eau, formation de jonctions fines, et les interactions avec d&#x26;#39;autres composants de lentilles. Bien que les g&#xE9;nomes de mammif&#xE8;res ne contiennent qu&#x26;#39;un seul Aqp0 g&#xE8;ne, le g&#xE9;nome du poisson z&#xE8;bre contient deux, et Aqp0a Aqp0b, et les fonctions putatives multiples de la prot&#xE9;ine seule mammif&#xE8;res peuvent &#xEA;tre partag&#xE9;es entre ces deux g&#xE8;nes. Le but de cette &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;exploiter cette duplication de g&#xE8;nes et de divergence pour &#xE9;clairer les multiples fonctions de AQP0 dans la lentille.

Deux distincts 0s Aquaporin requis pour le d&#xE9;veloppement et la transparence de la lentille poisson-z&#xE8;bre

AQP0, fr&uuml;her bekannt als MIP26, wahrscheinlich hat mehrere getrennte Funktionen in der S&auml;ugetier-Linse, einschlie&szlig;lich Wassertransport, Bildung von d&uuml;nnen Kreuzungen und Interaktionen mit anderen Objektiv Komponenten. Obwohl S&auml;ugetier-Genome nur ein Aqp0 gen enthalten, das Zebrafish Genom enth&auml;lt zwei, Aqp0a und Aqp0b, und die vermeintliche mehrere Funktionen von den einzelnen S&auml;ugetierprotein zwischen diesen beiden Genen aufgeteilt werden k&ouml;nnen. Der Zweck dieser Studie war es, nutzen diese Genduplikation und Divergenz, die vielf&auml;ltigen Funktionen der AQP0 im Objektiv zu beleuchten.

Zwei verschiedene Aquaporine 0s f&uuml;r Entwicklung und Transparenz der Zebrafisch Linse erforderlich.

AQP0, precedentemente noto come MIP26, probabilmente ha pi&ugrave; funzioni separate nella lente dei mammiferi, compreso il trasporto dell&#39;acqua, formazione di giunzioni sottili, e le interazioni con altri componenti dell&#39;obiettivo. Sebbene i genomi dei mammiferi contengono un solo gene Aqp0, il genoma di zebrafish contiene due, Aqp0a e Aqp0b e le presunte funzioni multiple della singola proteina dei mammiferi possono essere suddiviso tra questi due geni. Lo scopo di questo studio era quello di sfruttare questa duplicazione genica e divergenza per illuminare le funzioni multiple di AQP0 la lente.

Due distinte aquaporina 0s necessaria per lo sviluppo e la trasparenza della lente zebrafish.

&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;MIP26&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;AQP0&#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x6C34;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3001;&#x200B;&#x200B;&#x8584;&#x3044;&#x63A5;&#x5408;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x5185;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x304C;1&#x3064;&#x3057;&#x304B;AQP0&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x306F;2&#x3064;&#x3001;Aqp0a&#x3068;Aqp0b&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;2&#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9593;&#x3067;&#x5206;&#x5272;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;AQP0&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7167;&#x3089;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x3068;&#x76F8;&#x9055;&#x6027;&#x3092;&#x60AA;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x900F;&#x660E;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;0

AQP0, MIP26, &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC774;&#xC804;&#xC758; &#xBB3C; &#xC804;&#xC1A1;, &#xC587;&#xC740; &#xC811;&#xD569;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB80C;&#xC988;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0C1;&#xD638; &#xB80C;&#xC988; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; Aqp0 &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xBE44;&#xB85D; zebrafish &#xAC8C;&#xB188; &#xD3EC;&#xD568; 2, Aqp0a &#xBC0F; Aqp0b, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC0C1;&#xC774; &#xB450; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xB098;&#xB20C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xC801;&#xC740;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xBC1C;&#xC0B0; &#xB80C;&#xC988;&#xC5D0; aqp0&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBC1D;&#xD788;&#xB294; &#xB370; &#xC774;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; aquaporin 0s zebrafish &#xB80C;&#xC988;&#xC758; &#xD22C;&#xBA85;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD544;&#xC694;.

AQP0, anteriormente conocido como MIP26, es probable que tenga m&#xFA;ltiples funciones distintas en el lente de los mam&#xED;feros, incluido el transporte de agua, formaci&#xF3;n de uniones delgadas, y las interacciones con los componentes de otra lente. Aunque los genomas de mam&#xED;feros contienen s&#xF3;lo un gen AQP0, el pez cebra genoma contiene dos, Aqp0a y Aqp0b, y las funciones putativo m&#xFA;ltiples de la prote&#xED;na de mam&#xED;fero solo puede dividirse entre estos dos genes. El prop&#xF3;sito de este estudio fue el de explotar esta duplicaci&#xF3;n de genes y de divergencia para iluminar las m&#xFA;ltiples funciones de AQP0 en la lente.

Alexandrine Froger

Department of Physiology and Biophysics

University of California, Irvine (UCI)

Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method