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SDS-PAGE/Immunoblot Detection of A&beta; Multimers in Human Cortical Tissue Homogenates using Antigen-Epitope Retrieval

The anomalous folding and polymerization of the &beta;-amyloid (A&beta;) peptide is thought to initiate the neurodegenerative cascade in Alzheimer's ...

New York University School of Medicine

&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x5339;&#x5179;&#x5821;&#x590D;&#x5408; B &#xFF08;PIB&#xFF09; &#x662F;&#x82EF;&#x5E76;&#x567B;&#x5511;&#x6210;&#x50CF;&#x901A;&#x5E38;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x3001; &#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3001; &#x548C;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6BD4;&#x5BF9;&#x8111; &beta;-&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837; (Abeta) &#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x4EE3;&#x7406;&#x3002;&#x9664; 10 &#x4E0B;&#x5348;&#x79D1;&#x76EE;&#x68C0;&#x67E5;&#x5C38;&#x4F53;&#x7684;&#x961F;&#x5217;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E00;&#x4F8B;&#x7279;&#x53D1;&#x6027;&#x3001; &#x7EC8;&#x672B;&#x671F;&#x91CD; Abeta &#x6C89;&#x79EF;&#x4E0E;&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x75C5;&#x5C1A;&#x672A;&#x5927;&#x5E45;&#x51CF;&#x5C11;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x76AE;&#x5C42;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5300;&#x6D46; (3) H-PIB &#x7684;&#x548C;&#x65E0;&#x56FA;&#x5B9A; cryosections&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5316;&#x5B66;&#x3001; &#x7535;&#x955C;&#x3001; &#x9176;&#x8054;&#x514D;&#x75AB;&#x5438;&#x9644;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x3001; &#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x3001; &#x8FDB;&#x884C;&#x8D28;&#x8C31; TOF &#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x3001; &#x4F53;&#x5916; (3) H PIB &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x653E;&#x5C04;&#x81EA;&#x663E;&#x5F71; H PIB &#xFF08;3&#xFF09; &#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x76AE;&#x8D28;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6837;&#x672C;&#x3002;PIB &#x8010;&#x706B;&#x6750;&#x6599;&#x4E3B;&#x9898;&#x4E3A; AD &#x75C5;&#x7406;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B66;&#x7B26;&#x5408;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4EF6;&#x4E8B;&#x7684;&#x76AE;&#x5C42;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6240;&#x8F7D;&#x66F4;&#x591A;&#x8840;&#x7BA1; &beta;-&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x53D8;&#x6027;&#x3001; &#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x7684; Abeta40 &#x548C; Abeta42&#xFF0C;&#x548C; Abeta40:Abeta42 &#x6BD4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4ECE;&#x4E5D;&#x4E2A;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5E7F;&#x544A;&#x6848;&#x4EF6;&#x8F83;&#x9AD8;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8111; Abeta &#x4ECE; PIB &#x8010;&#x706B;&#x6750;&#x6599;&#x4E3B;&#x9898;&#x663E;&#x793A;&#x5F02;&#x5E38;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x4F4E;&#x548C;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x91CD;&#x91CF; Abeta &#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E0D;&#x540C;&#x56FE;&#x6848;&#x7684; N-&#x548C; C-&#x672B;&#x671F;&#x622A;&#x65AD; Abeta &#x80BD;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x548C;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x76AE;&#x5C42;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x75C5;&#x4EBA;&#x8F7D;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;-E3/4 &#x6742;&#x5408;&#x6027;&#xFF0C;&#x548C;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x4E0D;&#x5DF2;&#x77E5; AD &#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; &beta;-&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; presenilin1 &#x6216; presenilin2&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; PIB &#x53EF;&#x80FD;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8BC6;&#x522B;&#x591A;&#x6001;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; multimeric Abeta &#x5728;&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x75C5;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; PIB &#x8010;&#x706B;&#x6750;&#x6599;&#x4F8B; AD &#x4E00;&#x822C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4E2D;&#x7684;&#x6D41;&#x884C;&#x4ECD;&#x6709;&#x5F85;&#x786E;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5728;&#x672C;&#x4F8B;&#x4E2D; AD &#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x532E;&#x4E4F;&#x544A;&#x8BEB;&#xFF0C;&#x6700;&#x5C0F;&#x7684; PIB &#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x75F4;&#x5446;&#x75C7;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x6B63;&#x7535;&#x5B50;&#x53D1;&#x5C04;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x603B;&#x662F;&#x6392;&#x9664;&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x578B; Abeta &#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;

&#x7F3A;&#x9677;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x5339;&#x5179;&#x5821;&#x590D;&#x5408; B &#x5728;&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x75C5;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x3002;

Radiolabeled Pittsburgh compound B (PIB) is a benzothiazole imaging agent that usually binds with high affinity, specificity, and stoichiometry to cerebral beta-amyloid (Abeta) in patients with Alzheimer's disease. Among a cohort of ten AD subjects examined postmortem, we describe a case of idiopathic, end-stage Alzheimer's disease with heavy Abeta deposition yet substantially diminished high-affinity binding of (3)H-PIB to cortical homogenates and unfixed cryosections. Cortical tissue samples were analyzed by immunohistochemistry, electron microscopy, ELISA, immunoblotting, MALDI-TOF mass spectrometry, in vitro (3)H-PIB binding and (3)H-PIB autoradiography. The PIB-refractory subject met the histopathological criteria for AD. However, cortical tissue from this case contained more vascular beta-amyloidosis, higher levels of insoluble Abeta40 and Abeta42, and a higher ratio of Abeta40:Abeta42 than did tissue from the nine comparison AD cases. Furthermore, cerebral Abeta from the PIB-refractory subject displayed an unusual distribution of low- and high-molecular weight Abeta oligomers, as well as a distinct pattern of N- and C-terminally truncated Abeta peptides in both the soluble and insoluble cortical extracts. Genetically, the patient was apolipoprotein-E3/4 heterozygous, and exhibited no known AD-associated mutations in the genes for the beta-amyloid precursor protein, presenilin1 or presenilin2. Our findings suggest that PIB may differentially recognize polymorphic forms of multimeric Abeta in humans with Alzheimer's disease. In addition, while the prevalence of PIB-refractory cases in the general AD population remains to be determined, the paucity of high-affinity binding sites in this AD case cautions that minimal PIB retention in positron-emission tomography scans of demented patients may not always rule out the presence of Alzheimer-type Abeta pathology.

Deficient high-affinity binding of Pittsburgh compound B in a case of Alzheimer's disease.

Radiomarqu&#xE9; compos&#xE9; Pittsburgh B (PIB) est un agent d&#x26;#39;imagerie benzothiazole qui lie habituellement avec une forte affinit&#xE9;, la sp&#xE9;cificit&#xE9;, et la stoechiom&#xE9;trie de la b&#xEA;ta-amylo&#xEF;de c&#xE9;r&#xE9;brale (Abeta) chez les patients atteints de la maladie d&#x26;#39;Alzheimer. Parmi une cohorte de dix sujets examin&#xE9;s post-mortem AD, nous d&#xE9;crivons un cas de maladie idiopathique, en phase terminale d&#x26;#39;Alzheimer avec Abeta d&#xE9;p&#xF4;t lourde encore sensiblement diminu&#xE9;e de haute affinit&#xE9; de liaison de (3) H-PIB &#xE0; homog&#xE9;nats corticaux et cryosections non fix&#xE9;es. Des &#xE9;chantillons de tissus corticaux ont &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;s par immunohistochimie, microscopie &#xE9;lectronique, ELISA, immunoblot, MALDI-TOF spectrom&#xE9;trie de masse, in vitro (3) H-PIB de liaison et (3) H-PIB autoradiographie. Le sujet PIB r&#xE9;fractaire rencontr&#xE9; les crit&#xE8;res histopathologiques de la MA. Toutefois, le tissu cortical de cette affaire contenait plus de b&#xEA;ta-amylo&#xEF;de vasculaire, des niveaux plus &#xE9;lev&#xE9;s de Abeta40 insoluble et Abeta42, et un ratio plus &#xE9;lev&#xE9; de Abeta40: Abeta42 que fait le tissu des neuf cas de MA de comparaison. En outre, Abeta c&#xE9;r&#xE9;brale du sujet PIB r&#xE9;fractaire affich&#xE9; une distribution inhabituelle de faible et de haut poids mol&#xE9;culaire des oligom&#xE8;res Abeta poids, ainsi que d&#x26;#39;un motif distinct de N-et C-terminale tronqu&#xE9;e peptides Abeta dans les deux extraits les solubles et insolubles corticales. G&#xE9;n&#xE9;tiquement, le patient &#xE9;tait apolipoprot&#xE9;ine E3 / 4 h&#xE9;t&#xE9;rozygote, et ne pr&#xE9;sentait aucune connus AD-associ&#xE9;s mutations dans les g&#xE8;nes de la prot&#xE9;ine pr&#xE9;curseur b&#xEA;ta-amylo&#xEF;de, ou presenilin1 presenilin2. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que FRP peut diff&#xE9;rentielle de reconna&#xEE;tre les formes polymorphes de Abeta multim&#xE9;rique chez les humains atteints de la maladie d&#x26;#39;Alzheimer. En outre, alors que la pr&#xE9;valence du PIB r&#xE9;fractaires cas dans la population g&#xE9;n&#xE9;rale AD reste &#xE0; d&#xE9;terminer, la raret&#xE9; de haute affinit&#xE9; des sites de liaison dans ce cas AD met en garde que la r&#xE9;tention minimale PIB en tomographie par &#xE9;mission de positrons de patients atteints de d&#xE9;mence ne peut pas toujours exclure la pr&#xE9;sence de la maladie d&#x26;#39;Alzheimer de type Abeta pathologie.

D&#xE9;ficiente &#xE0; haute affinit&#xE9; du compos&#xE9; B de Pittsburgh dans un cas de maladie d&#x26;#39;Alzheimer

Radioaktive Pittsburgh compound B (PIB) ist ein Benzothiazol imaging-Agent, der in der Regel mit hoher Affinit&auml;t, Spezifit&auml;t und St&ouml;chiometrie zu zerebralen Beta-Amyloid (Abeta) bei Patienten mit Alzheimer-Krankheit bindet. Unter einer Kohorte von 22 Themen abschlie&szlig;ende Analyse gepr&uuml;ft, wir beschreiben einen Fall von idiopathischer, Endstadium der Alzheimer-Krankheit mit schweren Abeta-Abscheidung noch erheblich vermindert hoher Affinit&auml;t Binden von (3) H-PIB, kortikale Homogenates und unfixierten Cryosections. Kortikale Gewebeproben wurden durch Immunhistochemie, Elektronenmikroskopie, ELISA, Immunoblotting, MALDI-TOF-Massenspektrometrie, in-vitro-(3) H-PIB-Bindung und (3) H-PIB-Autoradiographie analysiert. PIB-resistentem Gegenstand traf die histopathologischen Kriterien f&uuml;r AD. Kortikalen Gewebe aus diesem Fall enthielt jedoch weitere vaskul&auml;re Beta-Amyloidose, h&ouml;here unl&ouml;sliche Abeta40 und Abeta42, und einen h&ouml;heren Anteil von Abeta40:Abeta42 als Gewebe aus den neun Vergleich AD-F&auml;llen Tat. Dar&uuml;ber hinaus zerebrale Abeta aus PIB-resistentem Gegenstand angezeigt eine ungew&ouml;hnliche Verteilung von niedrig und hochmolekularer Gewicht Abeta Oligomeren, als auch ein bestimmtes Muster von N - und C-unheilbar abgeschnitten Abeta-Peptide in der l&ouml;slichen und unl&ouml;slichen kortikale extrahiert. Genetisch, der Patient war Apolipoprotein-E3/4 heterozygote und ausgestellten nicht AD-assoziierten Mutationen in den Genen f&uuml;r die Beta-Amyloid-Vorl&auml;uferprotein, presenilin1 oder presenilin2 bekannt. Unsere Einsch&auml;tzungen zufolge PIB differentiell polymorphe Formen von Abeta werden bei Menschen mit Alzheimer-Krankheit erkennen kann. Zus&auml;tzlich w&auml;hrend die Pr&auml;valenz der PIB-resistentem F&auml;lle in der Allgemeinbev&ouml;lkerung AD bleibt bestimmt werden, der Mangel an hoher Affinit&auml;t Bindungsstellen in diesem Fall AD warnt, dass minimale PIB-Aufbewahrung in k&ouml;nnen Positronen-Emissions-Tomographie Scans von Demenz-Patienten nicht immer das Vorhandensein von Alzheimer-Typ Abeta Pathologie ausschlie&szlig;en.

Mangelhafte hoher Affinit&auml;t Binden von Pittsburgh compound B im Fall der Alzheimer-Krankheit.

Radiomarcato Pittsburgh compound B (PIB) &egrave; un benzothiazole imaging agent che solitamente si lega con alta affinit&agrave; e specificit&agrave; stechiometria di beta-amiloide (Abeta) cerebrale nei pazienti con malattia di Alzheimer. Tra una coorte di 22 soggetti esaminati postmortem, descriviamo un caso di idiopatica, stadio terminale della malattia di Alzheimer con pesanti Abeta deposizione ancora sostanzialmente diminuito legame ad alta affinit&agrave; di (3) H-PIB a omogeneati corticale e slegato cryosections. Immunoistochimica, microscopia elettronica, ELISA, immunoblotting, spettrometria di massa MALDI-TOF, associazione di H-PIB (3) in vitro e autoradiografia H-PIB (3) sono stati analizzati campioni di tessuto corticale. Il soggetto PIB-refrattario ha incontrato i criteri istopatologici per annuncio. Tuttavia, il tessuto corticale da questo caso contenuti pi&ugrave; beta-amiloidosi vascolare, livelli pi&ugrave; elevati di Abeta40 insolubile e Abeta42 e un pi&ugrave; alto rapporto di Abeta40:Abeta42 che ha tessuto dai casi nove confronto AD. Inoltre, Abeta cerebrale dal soggetto PIB-refrattario visualizzata una distribuzione insolita degli oligomeri di Abeta peso molecolari a basso e alto, cos&igrave; come un distinto pattern di N - e C-terminale troncato peptidi Abeta in entrambi il solubile e insolubile corticale estratti. Geneticamente, la paziente era apolipoproteina-E3/4 eterozigoti e non esposto noto AD associati alle mutazioni dei geni per la proteina precursore della beta-amiloide, presenilin1 o presenilin2. I nostri risultati suggeriscono che il PIB differenzialmente pu&ograve; riconoscere forme polimorfiche di multimerica Abeta in esseri umani con il morbo di Alzheimer. Inoltre, mentre la prevalenza di casi di PIB-refrattario nella popolazione generale AD rimane essere determinato, la scarsit&agrave; di siti di legame ad alta affinit&agrave; in questo caso AD avverte che minima ritenzione PIB in scansioni di tomografia ad emissione di positroni di pazienti dementi possono non sempre esclude la presenza di patologia di Alzheimer-tipo Abeta.

Legame ad alta affinit&agrave; carente di Pittsburgh compound B in caso di malattia di Alzheimer.

&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6A19;&#x8B58;&#x30D4;&#x30C3;&#x30C4;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B0;&#x5316;&#x5408;&#x7269;B&#xFF08;PIB&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#xFF08;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x3B2;&#xFF09;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C4;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x8133;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3001;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;&#x30C1;&#x30A2;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x9020;&#x5F71;&#x5264;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6B7B;&#x5F8C;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;10&#x306E;AD&#x306E;&#x88AB;&#x9A13;&#x8005;&#x306E;&#x30B3;&#x30DB;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x91CD;&#x3044;&#x5B89;&#x90E8;&#x7530;&#x5806;&#x7A4D;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30DB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30CD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x4E0D;&#x5B9A;&#x51CD;&#x7D50;&#x5207;&#x7247;&#xFF08;3&#xFF09;H-PIB&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3001;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3067;&#x7279;&#x767A;&#x6027;&#x3001;&#x672B;&#x671F;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C4;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x75C5;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;in vitro&#xFF08;3&#xFF09;H-PIB&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#xFF08;3&#xFF09;H-PIB&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B8;&#x30AA;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3001;MALDI-TOF&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CD5;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;ELISA&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002; PIB-&#x96E3;&#x6CBB;&#x6027;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306F;AD&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x7D44;&#x7E54;&#x5B66;&#x7684;&#x57FA;&#x6E96;&#x3092;&#x6E80;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; 9&#x6BD4;&#x8F03;AD&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x7D44;&#x7E54;&#x3088;&#x308A;&#x3082;Abeta42&#xFF1A;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x7D44;&#x7E54;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x75C7;&#x3001;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;Abe&#x200B;&#x200B;ta40&#x3068;Abeta42&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Abeta40&#x306E;&#x6BD4;&#x7387;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;PIB-&#x8010;&#x706B;&#x88AB;&#x5199;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8133;&#x5B89;&#x90E8;&#x7530;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x5B89;&#x90E8;&#x7530;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x73CD;&#x3057;&#x3044;&#x5206;&#x5E03;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x5225;&#x500B;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;N&#x672B;&#x7AEF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x76AE;&#x8CEA;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x3067;&#x5B89;&#x90E8;&#x7530;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x60A3;&#x8005;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;E3 / 4&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x63A5;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;presenilin1&#x307E;&#x305F;&#x306F;presenilin2&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x306F;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;AD&#x95A2;&#x9023;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4ECA;&#x56DE;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;PIB&#x306F;&#x3001;&#x5DEE;&#x52D5;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C4;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x75C5;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x591A;&#x91CF;&#x5B89;&#x90E8;&#x7530;&#x306E;&#x591A;&#x5F62;&#x4F53;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5E38;&#x306B;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;AD&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E;PIB-&#x96E3;&#x6CBB;&#x6027;&#x306E;&#x75C7;&#x4F8B;&#x306E;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;AD&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306F;&#x3001;&#x8A8D;&#x77E5;&#x75C7;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x30DD;&#x30B8;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x6700;&#x4F4E;&#x9650;&#x306E;PIB&#x4FDD;&#x6301;&#x306B;&#x6CE8;&#x610F;&#x3092;&#x4FC3;&#x3057;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C4;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x578B;&#x5B89;&#x90E8;&#x7530;&#x75C5;&#x7406;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x9664;&#x5916;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x30A2;&#x30EB;&#x30C4;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x75C5;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x30D4;&#x30C3;&#x30C4;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B0;&#x5316;&#x5408;&#x7269;B&#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;

&#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xB41C; &#xD53C;&#xCE20;&#xBC84;&#xADF8; &#xBCF5;&#xD569; B (PIB) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;, &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;, &#xB300;&#xB1CC; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC544; &#xBC00; &#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; (Abeta) &#xC54C; &#xCE20; &#xD558;&#xC774; &#xBA38; &#xBCD1;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0; &#xAC8C; stoichiometry&#xC640; benzothiazole &#xC774;&#xB2E4;. 10 &#xAD11;&#xACE0; &#xC8FC;&#xC81C; &#xC0AC;&#xD6C4; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC758; &#xCF54; &#xD638;&#xD2B8;, &#xC911; &#xD2B9; &#xBC1C;&#xC131;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC124;&#xBA85;, &#xB9D0;&#xAE30; &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; Abeta &#xC99D; &#xCC29;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C; &#xCE20; &#xD558;&#xC774; &#xBA38; &#xBCD1; &#xC544;&#xC9C1; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8; homogenates &#xC218; (3) H PIB&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCE5C; &#xD654;&#xB825; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; cryosections&#xB97C; &#xB5BC;&#xC5B4;&#xB0B8;. &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0D8;&#xD50C; &#xAE30;&#xC220;, &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;, ELISA, immunoblotting, TOF MALDI &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;, &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; (3) H PIB &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; (3) H PIB autoradiography &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. PIB &#xB2E4;&#xB8E8;&#xAE30; &#xD798;&#xB4E0; &#xC8FC;&#xC81C; &#xAD11;&#xACE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; histopathological &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xC0AC;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xD3EC;&#xD568; &#xB354; &#xD608;&#xAD00; &#xBCA0;&#xD0C0; amyloidosis, &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; abeta40&#xC640; Abeta42, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; 9 &#xAC1C;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xAD11;&#xACE0; &#xC0AC;&#xB840;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC9C1; &#xD55C; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; abeta40:abeta42&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBE44;&#xC728;. &#xB610;&#xD55C;, PIB &#xB2E4;&#xB8E8;&#xAE30; &#xD798;&#xB4E0; &#xC8FC;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xB1CC; Abeta &#xB0AE;&#xC740; &#xBC0F; &#xB192;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xBB34;&#xAC8C; Abeta &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB85C; &#xC11C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xC758; N-&#xC640; C-&#xB9D0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB450; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; Abeta &#xC798;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; &#xCD94;&#xCD9C;. &#xC720;&#xC804;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD658;&#xC790;&#xB294; apolipoprotein-e 3/4 heterozygous, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC804;&#xC870; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC544; &#xBC00; &#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, presenilin1 &#xB610;&#xB294; presenilin2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAD11;&#xACE0; &#xAD00;&#xB828;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC; &#xAC74;&#xC758; PIB &#xCC28;&#xB3D9; Alzheimer&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xACFC; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; multimeric Abeta&#xC758; &#xB2E4;&#xD615; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, PIB-&#xB0B4; &#xD654;&#xBB3C;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC77C;&#xBC18; &#xAD11;&#xACE0; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC720; &#xBCD1; &#xC728; &#xACB0;&#xC815;,&#xC774; &#xAD11;&#xACE0;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB192;&#xC740; &#xCE5C; &#xD654;&#xB825; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC8FC;&#xC758;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; PIB &#xBCF4;&#xC874; &#xADF8; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xBBF8;&#xCE5C; &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC591;&#xC804;&#xC790; &#xBC29;&#xCD9C; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD56D;&#xC0C1; &#xBC30;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; Alzheimer &#xD615; Abeta &#xBCD1; &#xB9AC;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;.

&#xC54C; &#xCE20; &#xD558;&#xC774; &#xBA38; &#xBCD1;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xB294; &#xD53C;&#xCE20;&#xBC84;&#xADF8; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; B&#xC758; &#xACB0;&#xD54D; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;.

Radiomarcado Compuesto Pittsburgh B (PIB) es un agente de imagen benzotiazol que por lo general se une con gran afinidad y especificidad, y la estequiometr&#xED;a de amiloide cerebral (Abeta) en pacientes con enfermedad de Alzheimer. Entre un grupo de diez sujetos AD examinados post-mortem, se describe el caso de la enfermedad idiop&#xE1;tica, en fase terminal de Alzheimer con gran deposici&#xF3;n de Abeta pero sustancialmente disminuida de alta afinidad de uni&#xF3;n de H (3)-PIB de homogeneizados corticales y cryosections no fijadas. Muestras de tejidos corticales fueron analizados mediante t&#xE9;cnicas de inmunohistoqu&#xED;mica, microscop&#xED;a electr&#xF3;nica, ELISA, inmunotransferencia, MALDI-TOF espectrometr&#xED;a de masas, in vitro (3) H-PIB vinculante y (3) H-PIB autorradiograf&#xED;a. El tema PIB-refractaria cumplieron con los criterios histopatol&#xF3;gicos para la EA. Sin embargo, el tejido cortical de este caso conten&#xED;a m&#xE1;s beta-vascular, la amiloidosis, un mayor nivel de insolubles Abeta40 y Abeta42, y una mayor proporci&#xF3;n de Abeta40: Abeta42 que hizo de tejido de los nueve casos de EA de comparaci&#xF3;n. Adem&#xE1;s, Abeta cerebral del sujeto BIP-refractario muestra una distribuci&#xF3;n inusual de bajo y alto peso molecular olig&#xF3;meros Abeta, as&#xED; como un patr&#xF3;n distinto de N-y C-terminal truncado p&#xE9;ptidos Abeta tanto en los extractos corticales solubles e insolubles. Gen&#xE9;ticamente, la paciente fue la apolipoprote&#xED;na-E3 / 4 heterocigotos, y no mostraron conocidos asociados AD-mutaciones en los genes de la prote&#xED;na precursora de beta-amiloide, o presenilin1 presenilin2. Nuestros hallazgos sugieren que la diferencial de PIB pueden reconocer formas polim&#xF3;rficas de Abeta multim&#xE9;rica en los seres humanos con enfermedad de Alzheimer. Adem&#xE1;s, mientras que la prevalencia de PIB-refractarios casos en la poblaci&#xF3;n general de AD que queda por determinar, la escasez de sitios de alta afinidad de uni&#xF3;n en este caso AD advierte que la retenci&#xF3;n m&#xED;nima en el PIB de la tomograf&#xED;a por emisi&#xF3;n de positrones de los pacientes con demencia puede no ser siempre descartar la presencia de la enfermedad de Alzheimer de tipo Abeta patolog&#xED;a.

Jorge A. Ghiso

Department of Pathology

New York University School of Medicine

SDS-PAGE/Immunoblot Detection of Aβ Multimers in Human Cortical Tissue Homogenates using Antigen-Epitope Retrieval

Jorge A. Ghiso

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Pathology

New York University School of Medicine

SDS-PAGE/Immunoblot Detection of Aβ Multimers in Human Cortical Tissue Homogenates using Antigen-Epitope Retrieval

Department of Pathology