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Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

The in vitro expression and electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T) ...

University of Waterloo

&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 kDa &#x5BB6;&#x5EAD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5206;&#x5B50;&#x4F34;&#x4FA3;&#x5728;&#x8F7B;&#x58F0;&#x5E76;&#x5F3A;&#x8C03;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6784;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458; 70 (hsc70) &#x5BF9; chaperoning &#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8F7B;&#x58F0;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x800C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x7684;&#x7A97;&#x4F53; &#xFF08;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70) &#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5141;&#x8BB8;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EE5;&#x5E94;&#x4ED8;&#x6025;&#x6027;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x4FAE;&#x8FB1;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x673A;&#x68B0;&#x3002;&#x5728;&#x9C7C;&#x3001; hsc70 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x4E0D;&#x592A;&#x6E05;&#x695A;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x7F3A;&#x4E4F; hsc70 &#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x9C7C;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE;&#x4E0E;&#x5FAE;&#x5206;&#x79BB;&#x5FC3;&#x3001; ATP &#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x4EB2;&#x548C;&#x5C42;&#x6790;&#x548C;&#x7535;&#x6D17;&#x8131;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E09;&#x6B65;&#x7EAF;&#x5316;&#x534F;&#x8BAE;&#x7684;&#x9CDF;&#x9C7C;&#x809D;&#x51C0;&#x5316;&#x5747;&#x5300;&#x6027;&#x7684; hsc70&#x3002;&#x591A;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x9CDF;&#x9C7C; hsc70 &#x5728;&#x5154;&#x4E2D;&#x751F;&#x6210;&#x4E0E;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684;&#x9CDF;&#x9C7C; hsc70 &#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x7EAF;&#x5316;&#x91CD;&#x7EC4;&#x725B; hsc70 &#x90FD;&#x5F3A;&#x70C8; cross-reacted&#x3002;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x5370;&#x8FF9;&#x7684;&#x53CC;&#x5411;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8679;&#x9CDF;&#x9C7C; hsc70 &#x7684;&#x7B49;&#x7535;&#x70B9;&#x66F4;&#x9178;&#x6027;&#x8F83;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5728;&#x809D;&#x3001; &#x5FC3;&#x3001; &#x9CC3;&#x548C;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7684;&#x8F7B;&#x58F0;&#x8679;&#x9CDF;&#x9C7C; hsc70 &#x5185;&#x5BB9;&#x3002;&#x9CDF;&#x9C7C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x539F;&#x4EE3;&#x57F9;&#x517B;&#x53D7;&#x70ED;&#x51B2;&#x51FB; &#xFF08;1 h + 15 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#xFF09;&#xFF0C;&#x6216;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x4EFB;&#x4E00; CuSO(4) &#xFF08;24 &#x5C0F;&#x65F6; 200 microM&#xFF09;&#xFF0C;CdCl(2) &#xFF08;24 &#x5C0F;&#x65F6; 10 microM&#xFF09; &#x6216; NaAsO(2) &#xFF08;&#x4E3A; 1 h 50 microM&#xFF09; &#x5BFC;&#x81F4;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x79EF;&#x7D2F; 24 h &#x671F;&#x95F4;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;hsc70 &#x5185;&#x5BB9;&#x663E;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D8;&#x5316;&#x6216;&#x8005;&#x6697;&#x793A;&#x8BE5; hsc70 &#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x6216;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x66B4;&#x9732;&#x4E0D;&#x8C03;&#x5236;&#x800C;&#x6210;&#x9CDF;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E9A;&#x81F4;&#x6B7B;&#x6025;&#x6027;&#x5E94;&#x6FC0;&#x6E90;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x751F;&#x6210;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x8679;&#x9CDF;&#x9C7C; hsc70 &#x7684;&#x591A;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6297;&#x4F53;&#x5C06;&#x5141;&#x8BB8;&#x7279;&#x6027;&#x7684; hsc70 &#x9C7C;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x6784;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 (HSC70) &#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x8679;&#x9CDF;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF1A; &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x548C;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x63A5;&#x89E6;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The 70-kDa family of heat shock proteins plays an important role as molecular chaperones in unstressed and stressed cells. The constitutive member of the 70 family (hsc70) is crucial for the chaperoning function of unstressed cells, whereas the inducible form (hsp70) is important for allowing cells to cope with acute stressor insult, especially those affecting the protein machinery. In fish, the role of hsc70 in the cellular stress response process is less clear primarily because of the lack of a fish-specific antibody for hsc70 detection. In this study, we purified hsc70 to homogeneity from trout liver using a three-step purification protocol with differential centrifugation, ATP-agarose affinity chromatography and electroelution. Polyclonal antibodies to trout hsc70 generated in rabbits cross-reacted strongly with both purified trout hsc70 protein and also purified recombinant bovine hsc70. Two-dimensional electrophoresis followed by Western blotting confirmed that the isoelectric point of rainbow trout hsc70 was more acidic than hsp70. Using this antibody, we detected hsc70 content in the liver, heart, gill and skeletal muscle of unstressed rainbow trout. Primary cultures of trout hepatocytes subjected to a heat shock (+15 degrees C for 1 h) or exposed to either CuSO(4) (200 microM for 24 h), CdCl(2) (10 microM for 24 h) or NaAsO(2) (50 microM for 1 h) resulted in higher hsp70 accumulation over a 24-h period. However, hsc70 content showed no change with either heat shock or heavy metal exposure suggesting that hsc70 is not modulated by sublethal acute stressors in trout hepatocytes. Taken together, we have for the first time generated polyclonal antibodies specific to rainbow trout hsc70 and this antibody will allow for the characterization of the role of hsc70 in the cellular stress response process in fish.

Constitutive heat shock protein 70 (HSC70) expression in rainbow trout hepatocytes: effect of heat shock and heavy metal exposure.

La famille de 70 kDa de prot&eacute;ines de choc thermique joue un r&ocirc;le important comme chaperonnes dans les cellules non stress&eacute;es et stress&eacute;s. Le membre constitutif de la famille 70 (hsc70) est crucial pour la fonction chaperonnage des cellules non stress&eacute;es, tandis que la forme inductible (hsp70) est importante pour permettre aux cellules d&#39;affronter insulte agent stressant, en particulier celles qui touchent la machinerie prot&eacute;ique. Chez les poissons, le r&ocirc;le de hsc70 dans le processus de r&eacute;ponse cellulaire au stress est moins clair, principalement en raison de l&#39;absence d&#39;un anticorps sp&eacute;cifique du poisson pour la d&eacute;tection de hsc70. Dans cette &eacute;tude, nous avons purifi&eacute; hsc70 jusqu&#39;&agrave; homog&eacute;n&eacute;it&eacute; du foie de la truite &agrave; l&#39;aide d&#39;un protocole de purification triple avec centrifugation diff&eacute;rentielle, chromatographie d&#39;affinit&eacute; d&#39;agarose de l&#39;ATP et point. Des anticorps polyclonaux de truite hsc70 g&eacute;n&eacute;r&eacute;e chez le lapin r&eacute;agissent fortement avec la prot&eacute;ine hsc70 purifi&eacute;e de la truite et de hsc70 bovine recombinante purifi&eacute;e. &Eacute;lectrophor&egrave;se bidimensionnelle suivie par transfert Western a confirm&eacute; que le point iso&eacute;lectrique de la truite arc-en-ciel hsc70 &eacute;tait plus acide que hsp70. &Agrave; l&#39;aide de cet anticorps, nous avons d&eacute;tect&eacute; hsc70 contenu dans le foie, coeur, gill et le muscle squelettique de la truite arc-en-ciel non accentu&eacute;. Les cultures primaires d&#39;h&eacute;patocytes de truite soumis &agrave; un choc thermique (+ 15 degr&eacute;s C pendant 1 h) ou expos&eacute;s &agrave; un CuSO(4) (200 microM pendant 24 h), CdCl(2) (10 microM pendant 24 h) ou NaAsO(2) (50 microM pendant 1 h) une accumulation de hsp70 plus &eacute;lev&eacute;e sur une p&eacute;riode de 24 h. Toutefois, hsc70 contenu a montr&eacute; aucun changement &agrave; l&#39;exposition du choc ou de m&eacute;taux lourds ni chaleur, sugg&eacute;rant que hsc70 n&#39;est pas modul&eacute;e par subl&eacute;tales stress aigus dans les h&eacute;patocytes de truite. Ensemble, nous avons pour la premi&egrave;re fois g&eacute;n&eacute;r&eacute;s des anticorps polyclonaux sp&eacute;cifiques pour la truite arc-en-ciel hsc70 et cet anticorps permettra pour la caract&eacute;risation du r&ocirc;le de hsc70 dans le processus de r&eacute;ponse cellulaire au stress chez les poissons.

Expression (HSC70) 70 des prot&eacute;ines dans les h&eacute;patocytes de truite arc-en-ciel de choc thermique constitutive : effet de l&#39;exposition &agrave; la chaleur choc et du heavy metal.

Konstituierende Hitzeschock-Protein 70 (Hsc70) Expression in Hepatozyten Regenbogenforelle: Effekt von Hitzeschock-und Schwermetallbelastungen.

La famiglia di 70 kDa di proteine di scossa di calore gioca un ruolo importante chaperoni molecolari come nelle cellule atone e stressate. Il membro costitutivo della famiglia 70 (hsc70) &egrave; cruciale per la funzione sorveglianti delle cellule non accentate, mentre la forma inducibile (hsp70) &egrave; importante per consentire le cellule per far fronte con insulto acuto stressor, specialmente quelli che interessano il macchinario della proteina. In pesci, il ruolo di hsc70 nel processo di risposta stress cellulare &egrave; meno chiaro principalmente a causa della mancanza di un anticorpo specifico del pesce per il rilevamento di hsc70. In questo studio, abbiamo purificato hsc70 per omogeneit&agrave; dal fegato trota utilizzando un protocollo di purificazione three-step con centrifugazione differenziale, cromatografia di affinit&agrave; dell&#39;agarosi ATP ed electroelution. Anticorpi policlonali anti-trota hsc70 generato nei conigli cross-reacted fortemente con sia purificato trota hsc70 proteina anche hsc70 bovina ricombinante purificato. L&#39;elettroforesi bidimensionale, seguita da Western blotting ha confermato che il punto isoelettrico della trota iridea hsc70 &egrave; pi&ugrave; acido hsp70. Utilizzando questo anticorpo, abbiamo rilevato hsc70 contenuto nel fegato, cuore, gill e nel muscolo scheletrico di trota iridea atona. Colture primarie di epatociti di trota sottoposto ad uno shock termico (+ 15 gradi C per 1 h) o esposti ad entrambi CuSO(4) (200 microM per 24 h), CdCl(2) (10 microM per 24 h) o NaAsO(2) (50 microM per 1 h) ha portato maggiore accumulo di hsp70 in un periodo di 24 ore. Tuttavia, hsc70 contenuto mostrato nessun cambiamento con o esposizione al calore shock o heavy metal suggerendo che hsc70 non &egrave; modulato da subletali stress acuto in epatociti di trota. Presi insieme, abbiamo per la prima volta generati anticorpi policlonali specifici per la trota iridea hsc70 e questo anticorpo permetter&agrave; per la caratterizzazione del ruolo di hsc70 nel processo di risposta stress cellulare nei pesci.

Costitutiva heat shock 70 espressione (HSC70) della proteina in epatociti di trota iridea: effetto di shock e metallo pesante esposizione al calore.

&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 70 kDa &#x5BB6;&#x65CF;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x5B50;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x5F37;&#x52E2;&#x30FB; &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; (hsp70) &#x306F;&#x7279;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x6025;&#x6027;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x4FAE;&#x8FB1;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9; 70 &#x5BB6;&#x65CF; (hsc70) &#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F; unstressed &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F15;&#x7387;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9B5A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; hsc70 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x9B5A;&#x7279;&#x7570;&#x6297;&#x4F53; hsc70 &#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x6211;&#x3005; &#x306F; hsc70 &#x540C;&#x8CEA;&#x6027;&#x306B;&#x5DEE;&#x52D5;&#x9060;&#x5FC3;&#x5206;&#x96E2;&#x3001;ATP agarose &#x306E;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB; &#x30C6;&#x30A3;&#x30FC; &#x30FB; &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3001;electroelution &#x3068; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x6D44;&#x5316;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30CB;&#x30B8;&#x30DE;&#x30B9;&#x809D;&#x81D3;&#x304B;&#x3089;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x751F;&#x6210;&#x30DE;&#x30B9; hsc70 &#x306B;&#x5F37;&#x304F;&#x7CBE;&#x88FD;&#x30DE;&#x30B9; hsc70 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A6;&#x30B7; hsc70 &#x3092;&#x307E;&#x305F;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x897F;&#x90E8;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x304C;&#x4ED8;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066; 2&#x6B21;&#x5143;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x30CB;&#x30B8;&#x30DE;&#x30B9; hsc70 &#x306E;&#x7B49;&#x96FB;&#x70B9;&#x3088;&#x308A; hsp70 &#x3088;&#x308A;&#x9178;&#x6027;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; hsc70 &#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x306E;&#x809D;&#x81D3;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x3001;&#x30AE;&#x30EB;&#x3068; unstressed &#x30CB;&#x30B8;&#x30DE;&#x30B9;&#x306E;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A6;&#x30C8;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF; &#xFF08;+15 &#x2103; &#x3067; 1 &#x6642;&#x9593;&#xFF09; &#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B; CuSO(4) &#x306B;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x308B; (24 h 200 microM) CdCl(2) (24 h 10 microM) &#x307E;&#x305F;&#x306F; NaAsO(2) (1 h 50 microM&#xFF09; 24 h &#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x9AD8;&#x3044; hsp70 &#x84C4;&#x7A4D;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5897;&#x53CE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x5909;&#x66F4;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x305D;&#x306E; hsc70 &#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x71B1;&#x885D;&#x6483;&#x3084;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x66B4;&#x9732;&#x30DE;&#x30B9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x81F4;&#x6B7B;&#x6025;&#x6027;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x308B; hsc70 &#x542B;&#x91CF;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x30CB;&#x30B8;&#x30DE;&#x30B9; hsc70 &#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x904E;&#x7A0B;&#x9B5A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; hsc70 &#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x69CB;&#x6210;&#x306E;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 70 (HSC70) &#x5F0F;&#x30CB;&#x30B8;&#x30DE;&#x30B9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;: &#x71B1;&#x885D;&#x6483;&#x3068;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x66B4;&#x9732;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3002;

&#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; 70 kDa &#xAC00;&#xC871; &#xAC15;&#xC138; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xC790; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC591;&#xC2DD; (hsp70) &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xD2B9;&#xD788; &#xAE09;&#xC131; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xC695;&#xC5D0; &#xB300;&#xCC98; &#xD558;&#xB294; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC18;&#xBA74; 70 &#xAC00;&#xC871; (hsc70)&#xC758; &#xC81C;&#xC815; &#xBA64;&#xBC84; &#xAC15;&#xC138; &#xC140;&#xC758; chaperoning &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;, hsc70 &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC751;&#xB2F5; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; hsc70&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xB35C; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC1A1;&#xC5B4; &#xAC04; 3 &#xB2E8;&#xACC4; &#xC815;&#xD654; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCC28;&#xB4F1; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xBD84;&#xB9AC;, ATP agarose &#xCE5C;&#xD654;&#xC131; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xC640; electroelution&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131;&#xC744; hsc70&#xC744; &#xC815;&#xD654;. Polyclonal &#xD56D; &#xCCB4; &#xC1A1;&#xC5B4; hsc70 &#xD1A0;&#xB07C;&#xB294; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xBAA8;&#xB450; &#xC815;&#xD654; &#xC1A1;&#xC5B4; hsc70 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC18C; hsc70 cross-reacted. 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xC11C; &#xBD80; blotting &#xBB34;&#xC9C0;&#xAC1C; &#xC1A1;&#xC5B4; hsc70 isoelectric point&#xB294; hsp70 &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC0B0; &#xC131; &#xD655;&#xC778;. &#xC774; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC04;, &#xC2EC;&#xC7A5;, &#xAE38;, &#xBB34;&#xC9C0;&#xAC1C; &#xC1A1;&#xC5B4; &#xAC15;&#xC138;&#xC758; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; hsc70 &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC1A1;&#xC5B4; hepatocytes&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBB38;&#xD654; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; (1 &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; 15&#xB3C4; C)&#xB97C; &#xBC1B;&#xAC8C; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xC5B4;&#xB290; Cuso(4)&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; (24h 200 microM), CdCl(2) (24 &#xC2DC;&#xAC04; 10 microM) &#xB610;&#xB294; NaAsO(2) 24 h &#xB3D9;&#xC548; &#xB192;&#xC740; hsp70 &#xCD95;&#xC801; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; (1 &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; 50 microM). &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, hsc70 &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; hsc70 &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB610;&#xB294; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xB178;&#xCD9C;&#xB3C4; &#xC544;&#xBB34; &#xBCC0;&#xD654;&#xAC00; &#xC5C6;&#xB294; &#xC1A1;&#xC5B4; hepatocytes sublethal &#xAE09;&#xC131; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBB34;&#xC9C0;&#xAC1C; &#xC1A1;&#xC5B4; hsc70&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC0DD;&#xC131;&#xB41C; polyclonal &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC0F; &#xD56D;&#xC774; &#xCCB4;&#xAC00; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xB300;&#xC751; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; hsc70&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xC81C;&#xC815; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 70 &#xC2DD; (HSC70) &#xBB34;&#xC9C0;&#xAC1C; &#xC1A1;&#xC5B4; hepatocytes&#xC5D0;: &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xBC0F; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xB178;&#xCD9C;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

La familia de 70 kDa de heat shock proteins desempe&ntilde;a un papel importante como moleculares chaperones en c&eacute;lulas tensionados y unstressed. El miembro constituyente de la familia 70 (hsc70) es crucial para la funci&oacute;n ataviada de c&eacute;lulas unstressed, considerando la forma inducible (hsp70) es importante para permitir que las c&eacute;lulas hacer frente a insulto estresor agudo, especialmente aquellos que afectan a la maquinaria de la prote&iacute;na. En los peces, el papel de hsc70 en el proceso de la respuesta de estr&eacute;s celular es menos claro sobre todo debido a la falta de un anticuerpo espec&iacute;fico de pescado para la detecci&oacute;n de hsc70. En este estudio, hemos purificado hsc70 a homogeneidad de h&iacute;gado de trucha con un protocolo de purificaci&oacute;n de tres pasos de centrifugaci&oacute;n diferencial, cromatograf&iacute;a de afinidad de ATP-agarosa y electroeluci&oacute;n. Anticuerpos policlonales para trucha hsc70 generado en conejos induc&iacute;an fuertemente con trucha purificada hsc70 prote&iacute;na y tambi&eacute;n hsc70 bovina recombinante purificada. Electroforesis bidimensional seguida por Western Blot confirm&oacute; que el punto isoel&eacute;ctrico de trucha arco iris hsc70 era m&aacute;s &aacute;cido que la hsp70. Usando este anticuerpo, detectamos hsc70 contenido en el h&iacute;gado, coraz&oacute;n, gill y m&uacute;sculo esquel&eacute;tico de unstressed trucha arco iris. Cultivos primarios de hepatocitos de trucha sometidos a un choque t&eacute;rmico (+ 15 grados C durante 1 hora) o expuestos a cualquiera de los dos CuSO(4) (200 microM por 24 h), CdCl(2) (10 microM por 24 h) o NaAsO(2) (50 microM por 1 h) dio lugar a la mayor acumulaci&oacute;n de hsp70 en un per&iacute;odo de 24 horas. Sin embargo, el contenido de hsc70 mostr&oacute; ning&uacute;n cambio con cualquier exposici&oacute;n de choque o metal pesado de calor sugiriendo hsc70 no es modulada por subletales estr&eacute;s agudos en hepatocitos de trucha. Tomados en conjunto, tenemos por primera vez generados anticuerpos policlonales espec&iacute;ficos de trucha arco iris hsc70 y este anticuerpo permitir&aacute; la caracterizaci&oacute;n del papel de hsc70 en el proceso de la respuesta de estr&eacute;s celular en peces.

Expresi&oacute;n de 70 (HSC70) de la prote&iacute;na en los hepatocitos de trucha arco iris de choque de calor constitutiva: efecto de la exposici&oacute;n de calor choque y heavy metal.

&#x9AD8;&#x67B6;&#x7684;&#x76AE;&#x8D28;&#x9187;&#x6C34;&#x5E73;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 (&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70) &#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x610F;&#x4E49;&#x88AB;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4F7F;&#x7528;&#x8679;&#x9CDF;&#x9C7C; (&#x8679;&#x9CDF;&#xFF09; &#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x539F;&#x4EE3;&#x57F9;&#x517B;&#x3002;&#x9CDF;&#x9C7C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x76AE;&#x8D28;&#x9187;&#x3001; &#x786C;&#x9AA8;&#x9C7C;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x56DE;&#x5E94;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B; &#xFF08;1 h + 15 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#xFF09; &#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x79EF;&#x7D2F; 24 h &#x6062;&#x590D;&#x540C;&#x671F;&#x5927;&#x5E45;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;[(35) S] &#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x8109;&#x51B2;&#x5927;&#x901A;&#x7EB3;&#x5165;&#x7814;&#x7A76;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76AE;&#x8D28;&#x9187;&#x6C34;&#x5E73;&#x5F71;&#x54CD;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x51CF;&#x5C11;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x5408;&#x6210;&#x5E76;&#x4E0D;&#x589E;&#x5F3A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x89E3;&#x3002;&#x76AE;&#x8D28;&#x9187;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E5F;&#x5927;&#x5927;&#x4E0B;&#x964D;&#x9CDF;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GR) &#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6B64;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0B;&#x8C03;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;lactacystin &#x548C; MG-132&#xFF0C;&#x76AE;&#x8D28;&#x9187;&#x7684;&#x6697;&#x793A;&#x5728; GR &#x4E0B;&#x8C03;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x5927;&#x5E45;&#x4FEE;&#x6539;&#x6CA1;&#x6709;&#x76AE;&#x8D28;&#x9187;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B58;&#x5728;&#x70ED;&#x9707;&#x60CA;&#x9CDF;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76AE;&#x8D28;&#x9187;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0B;&#x7684;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x5347;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x54CD;&#x5E94;&#x673A;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC; GR &#x9000;&#x5316;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x76AE;&#x8D28;&#x9187;&#x3002;

&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x9CDF;&#x9C7C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x54CD;&#x5E94;&#x6D89;&#x53CA;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x3002;

The physiological implication of elevated cortisol levels on cellular heat-shock protein 70 (hsp70) response was examined using primary cultures of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) hepatocytes. Trout hepatocytes treated with cortisol, the predominant glucocorticoid in teleosts, responded to the heat shock (+15 degrees C for 1 h) with a significant drop in hsp70 accumulation over a 24-h recovery period. [(35)S]methionine incorporation and pulse-chase studies confirmed that this cortisol impact was due to decreased hsp70 synthesis and not enhanced protein breakdown. Cortisol also significantly decreased glucocorticoid receptor (GR) expression in trout hepatocytes. This receptor downregulation was inhibited by the proteasomal inhibitors, lactacystin and MG-132, implying a role for the proteasome in GR downregulation by cortisol. Inhibiting the proteasome did not significantly modify heat-induced hsp70 accumulation in the absence of cortisol but significantly elevated hsp70 expression in the presence of cortisol in heat-shocked trout hepatocytes. Taken together, our results suggest proteasome-mediated GR degradation as a mechanism for the attenuation of hsp70 response by cortisol in heat-shocked hepatocytes.

Glucocorticoid-mediated attenuation of the hsp70 response in trout hepatocytes involves the proteasome.

Les cons&eacute;quences physiologiques des niveaux &eacute;lev&eacute;s de cortisol sur la r&eacute;ponse de choc thermique cellulaire prot&eacute;ine 70 (hsp70) a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e en utilisant des cultures primaires d&#39;h&eacute;patocytes de truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss). Les h&eacute;patocytes de truite traitement avec du cortisol, le glucocortico&iuml;de pr&eacute;dominante chez les t&eacute;l&eacute;ost&eacute;ens, r&eacute;pondu au choc thermique (+ 15 degr&eacute;s C pendant 1 h) avec une baisse significative des hsp70 accumulation sur une p&eacute;riode de 24 h de r&eacute;cup&eacute;ration. [(35) S] m&eacute;thionine incorporation et pulse-chase &eacute;tudes confirment que cet impact de cortisol &eacute;tait due &agrave; une diminution de hsp70 synth&egrave;se et pas am&eacute;lior&eacute; de d&eacute;gradation des prot&eacute;ines. Cortisol a &eacute;galement consid&eacute;rablement diminu&eacute; expression des r&eacute;cepteurs (GR) de glucocortico&iuml;des dans les h&eacute;patocytes de truite. Cette diminution de l&#39;expression du r&eacute;cepteur est inhib&eacute;e par les inhibiteurs PROTEASOME, lactacystin et MG-132, ce qui implique un r&ocirc;le pour le prot&eacute;asome dans la diminution de ressources g&eacute;n&eacute;tiques de cortisol. Inhibiteur du prot&eacute;asome n&#39;a pas significativement modifi&eacute; accumulation hsp70 induite par la chaleur en l&#39;absence de cortisol, mais significativement &eacute;lev&eacute;e hsp70 expression en pr&eacute;sence de cortisol dans les h&eacute;patocytes de truite soumis au choc thermique. Pris ensemble, nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent la d&eacute;gradation GR induite par le prot&eacute;asome comme un m&eacute;canisme pour l&#39;att&eacute;nuation de la r&eacute;ponse hsp70 de cortisol dans les h&eacute;patocytes soumis au choc thermique.

Att&eacute;nuation induite par les glucocortico&iuml;des de la r&eacute;ponse de hsp70 dans les h&eacute;patocytes de truite implique le prot&eacute;asome.

Glucocorticoid-vermittelte Abschw&#xE4;chung des Hsp70-Antwort in der Forellen-Hepatozyten beinhaltet die Proteasom.

L&#39;implicazione fisiologica dei livelli di cortisolo elevati sulla risposta di cellulare heat-shock protein 70 (hsp70) &egrave; stato esaminato mediante colture primarie di epatociti di trota iridea (Oncorhynchus mykiss). Epatociti trota trattati con cortisolo, i glucocorticoidi predominanti in teleostei, ha risposto allo shock termico (+ 15 gradi C per 1 h) con un calo significativo accumulo di hsp70 in un periodo di recupero 24-h. [(35) S] metionina incorporazione e impulso-chase studi hanno confermato che questo impatto di cortisolo &egrave; dovuto alla sintesi di hsp70 &egrave; diminuito e non aumentato catabolismo proteico. Cortisolo anche significativamente diminuita espressione del recettore (GR) di glucocorticoidi in epatociti di trota. Questa recettore downregulation era inibita da inibitori di proteosomale, lactacystin e MG-132, implicando un ruolo per il proteasoma in GR downregulation di cortisolo. Inibendo il proteasoma non ha fatto modificare hsp70 heat-induced accumulo in assenza di cortisolo ma espressione hsp70 significativamente elevati in presenza di cortisolo in epatociti di calore-scioccato trota significativamente. Presi insieme, i nostri risultati suggeriscono proteasoma-mediato degradazione GR come un meccanismo per l&#39;attenuazione della risposta hsp70 di cortisolo in calore-scioccato epatociti.

Glucocorticoide-mediata attenuazione della risposta hsp70 in epatociti trota coinvolge il proteasoma.

&#x9AD8;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 70 (hsp70) &#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x610F;&#x7FA9; &#xFF08;&#x30CB;&#x30B8;&#x30DE;&#x30B9;&#xFF09; &#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A6;&#x30C8;&#x809D;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF; &#xFF08;+15 &#x2103; &#x3067; 1 &#x6642;&#x9593;&#xFF09; 24 h &#x56DE;&#x5FA9;&#x671F;&#x9593;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066; hsp70 &#x84C4;&#x7A4D;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3068;&#x7B54;&#x3048;&#x305F;&#x9B5A;&#x985E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x512A;&#x52E2;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x6CBB;&#x7642;&#x3002;[(35) S] &#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x5B9A;&#x6B3E;&#x53CA;&#x3073;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x306E;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30BE;&#x30EB;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x6E1B;&#x5C11; hsp70 &#x5408;&#x6210;&#x969C;&#x5BB3;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30B9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7CD6;&#x8CEA;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;GR&#xFF09; &#x5F0F;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068; MG-132 &#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; GR &#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x307B;&#x306E;&#x3081;&#x304B;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x963B;&#x5BB3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607; hsp70 &#x5F0F;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30B9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x71B1;&#x8A98;&#x8D77; hsp70 &#x84C4;&#x7A4D;&#x4E0D;&#x5728;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B; GR &#x52A3;&#x5316;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066; hsp70 &#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x306E;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x6E1B;&#x8870; hsp70 &#x5FDC;&#x7B54;&#x30DE;&#x30B9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4F34;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC138;&#xD3EC; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 70 (hsp70) &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xCF54; &#xD2F0; &#xC194; &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xC758;&#xBBF8;&#xB294; &#xBB34;&#xC9C0;&#xAC1C; &#xC1A1;&#xC5B4; (Oncorhynchus mykiss) hepatocytes&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBB38;&#xD654;&#xAD8C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCF54; &#xD2F0; &#xC194;, teleosts, 24 h &#xBCF5;&#xAD6C; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; hsp70 &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xB4DC;&#xB86D;&#xC640; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; (+ 15&#xB3C4; C h 1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;) &#xB300;&#xC751;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB41C; glucocorticoid &#xC1A1;&#xC5B4; hepatocytes &#xCDE8;&#xAE09;. [(35) S]&#xC774; &#xCF54; &#xD2F0; &#xC194; &#xC601;&#xD5A5; &#xAC10;&#xC18C; hsp70 &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xD560; &#xC608;&#xC815; &#xC774;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xD574;&#xB97C; &#xAC15;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC; &#xBC95;&#xC778; &#xBC0F; &#xD384;&#xC2A4; &#xCCB4;&#xC774;&#xC2A4; &#xD559;&#xBB38;&#xC740; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCF54; &#xD2F0; &#xC194; &#xB610;&#xD55C; &#xD06C;&#xAC8C; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GR) &#xC2DD; &#xC1A1;&#xC5B4; hepatocytes&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18C;. &#xC774; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; downregulation proteasomal &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;, lactacystin &#xBC0F; &#xBC00;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB7A8;-132, &#xCF54; &#xD2F0; &#xC194;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; GR downregulation&#xC5D0; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC5B5;&#xC81C; &#xCF54; &#xD2F0; &#xC194; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xB192;&#xC740; hsp70 &#xC2DD; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xC1A1;&#xC5B4; hepatocytes&#xC5D0; &#xCF54; &#xD2F0; &#xC194;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB204;&#xC801; &#xB41C; &#xC5F4;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; hsp70 &#xD06C;&#xAC8C; &#xC218;&#xC815; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; hepatocytes&#xC5D0; &#xCF54; &#xD2F0; &#xC194;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; hsp70 &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xAC10;&#xC1C4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; GR &#xC800;&#xD558; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC1A1;&#xC5B4; hepatocytes&#xC758; hsp70 &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xAC10;&#xC1C4; glucocorticoid &#xC911;&#xC7AC;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La implicaci&oacute;n fisiol&oacute;gica de los niveles elevados de cortisol en 70 (hsp70) respuesta a shock t&eacute;rmico celular prote&iacute;na fue examinada usando cultivos primarios de hepatocitos de trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss). Hepatocitos de trucha tratan de cortisol, los glucocorticoides predominante en tele&oacute;steos, respondido al choque t&eacute;rmico (+ 15 grados C durante 1 hora) con una baja significativa en la acumulaci&oacute;n de hsp70 en un per&iacute;odo de recuperaci&oacute;n de 24 horas. [(35) S] metionina incorporaci&oacute;n y pulso-persiga estudios confirmaron que este impacto de cortisol fue debido a la disminuci&oacute;n de hsp70 s&iacute;ntesis y mejorado no degradaci&oacute;n de la prote&iacute;na. Cortisol disminuy&oacute; tambi&eacute;n significativamente la expresi&oacute;n del receptor (GR) de glucocorticoides en los hepatocitos de trucha. Este receptor downregulation fue inhibida por los inhibidores proteasomal, lactacystin y MG-132, lo que implica un papel para el proteasoma en GR downregulation de cortisol. Inhibidor del proteasoma no significativamente modific&oacute; acumulaci&oacute;n de hsp70 provocado por el calor en la ausencia de cortisol pero hsp70 significativamente elevada expresi&oacute;n en presencia de cortisol en los hepatocitos de trucha de calor-dio una sacudida el&eacute;ctrica. Tomados en conjunto, nuestros resultados sugieren degradaci&oacute;n mediada por proteasoma GR como un mecanismo para la atenuaci&oacute;n de la respuesta de hsp70 de cortisol en los hepatocitos de calor-dio una sacudida el&eacute;ctrica.

Glucocorticoides-mediada la atenuaci&oacute;n de la respuesta de hsp70 en hepatocitos de trucha implica el proteasoma.

&#x673A;&#x5236;&#x57FA;&#x7840;&#x94DC;&#x809D;&#x635F;&#x4F24;&#x539F;&#x4EE3;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x5F69;&#x8679;&#x9CDF;&#x9C7C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FDD;&#x6301;&#x5728;&#x8328; 15 &#x5A92;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;CuSO4 &#x6CBB;&#x7597; &#xFF08;0&#x3001; 25&#x3001; 50&#x3001; 100 &#x548C; 200 microM&#xFF09; &#x5BFC;&#x81F4;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x62AC;&#x9AD8;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 (&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70) &#x8868;&#x8FBE;&#x5728; 24 &#x548C; 48 h &#x540E;&#x3002;&#x800C;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x66DD;&#x5149; (48 h) &#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x4E73;&#x9178;&#x8131;&#x6C22;&#x9176; (LDH) &#x6CC4;&#x6F0F;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x6838;&#x67D3;&#x8272;&#x548C; DNA &#x788E;&#x7247;&#x8868;&#x660E;&#x6709;&#x94DC; (200 microM CuSO4) &#x5BF9;&#x809D;&#x635F;&#x4F24;&#x5728; 24 h&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x7EF4;&#x751F;&#x7D20; C &#xFF08;1 mM&#xFF09;&#xFF0C;&#x6E05;&#x9664;&#x81EA;&#x7531;&#x57FA;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x6B64;&#x94DC;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x6697;&#x793A;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x7269;&#x79CD;&#x4E2D;&#x94DC;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5E73;&#x884C;&#x6291;&#x5236;&#x6216;&#x8005;&#x4E73;&#x9178;&#x8131;&#x6C22;&#x9176;&#x6E17;&#x6F0F;&#x6216;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x6307;&#x51FA;&#x4E0E;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E24;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x94DC;&#x7684;&#x7EF4;&#x751F;&#x7D20; C&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x94DC;&#x66B4;&#x9732; (24 h) &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E0D;&#x80FD;&#x88C5;&#x5165;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x6807;&#x51C6;&#x5316;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B; &#xFF08;1 h + 15 &#x5EA6; C&#xFF09;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x5B58;&#x5728;&#x7EF4;&#x751F;&#x7D20; C.&#x4E00;&#x8D77;&#x54CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x809D;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x94DC;&#x5305;&#x62EC;&#x635F;&#x5BB3;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x54CD;&#x5E94;&#x968F;&#x540E;&#x5E94;&#x6FC0;&#x6E90;&#x548C;/&#x6216;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x4FDD;&#x62A4;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4ECE; proteotoxicity &#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

&#x94DC;&#x5BF9;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x8679;&#x9CDF;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The mechanism underlying copper hepatotoxicity was investigated in primary cultures of rainbow trout hepatocytes maintained in Leibovitz-15 media. CuSO4 treatment (0, 25, 50, 100 and 200 microM) resulted in a dose-dependent elevation in heat shock protein 70 (hsp70) expression at 24 and 48 h post-exposure. There was no effect of copper (200 microM CuSO4) on hepatotoxicity at 24 h, whereas longer exposures (48 h) resulted in increased lactate dehydrogenase (LDH) leakage and apoptosis, demonstrated by fluorescence nuclear staining and DNA fragmentation. Vitamin C (1 mM), a free radical scavenger, inhibited this copper-induced apoptosis implying a role for reactive oxygen species in copper toxicity. However, no parallel inhibition of either LDH leakage or hsp70 protein expression was observed with vitamin C suggesting that at least two independent mechanisms are involved in the cellular response to copper. Also, copper exposed (24 h) cells were unable to mount an hsp70 response to a standardized heat shock (+15 degrees C for 1 h), even in the presence of vitamin C. Together, these results suggest that hepatotoxicity of copper includes impairment of hsp70 response to subsequent stressors and/or signals, which is crucial for protecting cells from proteotoxicity.

Copper impact on heat shock protein 70 expression and apoptosis in rainbow trout hepatocytes.

L&#39;h&eacute;patotoxicit&eacute; de cuivre sous-jacente de m&eacute;canisme a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e dans des cultures primaires d&#39;h&eacute;patocytes de truite arc-en-ciel maintenus en milieu Leibovitz-15. Traitement de CuSO4 (0, 25, 50, 100 et 200 microM) a entra&icirc;n&eacute; une augmentation dose-d&eacute;pendante dans expression de choc thermique prot&eacute;ine 70 (hsp70) &agrave; 24 et 48 h apr&egrave;s l&#39;exposition. Il y a eu aucun effet de cuivre (CuSO4 de 200 microM) sur l&#39;h&eacute;patotoxicit&eacute; apr&egrave;s 24 h, consid&eacute;rant que des expositions plus longues (48 h) conduit &agrave; la fuite d&#39;une augmentation de lactate d&eacute;shydrog&eacute;nase (LDH) et l&#39;apoptose, d&eacute;montr&eacute;e par la coloration nucl&eacute;aire de fluorescence et de la fragmentation de l&#39;ADN. Vitamine C (1 mM), un pi&eacute;geur de radicaux libres, inhibe cette apoptose induite par le cuivre ce qui implique un r&ocirc;le pour les esp&egrave;ces r&eacute;actives de l&#39;oxyg&egrave;ne dans la toxicit&eacute; du cuivre. Toutefois, aucune inhibition parall&egrave;le d&#39;expression de prot&eacute;ine de fuite ou hsp70 soit LDH a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e avec la vitamine C, ce qui laisse supposer qu&#39;au moins deux m&eacute;canismes ind&eacute;pendants sont impliqu&eacute;s dans la r&eacute;ponse cellulaire au cuivre. Aussi, cuivre expos&eacute;es (24 h) des cellules ont &eacute;t&eacute; incapables de mettre en place une r&eacute;ponse hsp70 &agrave; un choc de chaleur normalis&eacute;s (+ 15 degr&eacute;s C pendant 1 h), m&ecirc;me en pr&eacute;sence de vitamine C. ensemble, ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que l&#39;h&eacute;patotoxicit&eacute; du cuivre comprend l&#39;alt&eacute;ration de hsp70 r&eacute;ponse aux facteurs de stress suivants et/ou de signaux, ce qui est crucial pour la protection des cellules de prot&eacute;otoxicit&eacute;.

Cuivre effet sur l&#39;expression de 70 de prot&eacute;ine du choc thermique et l&#39;apoptose dans les h&eacute;patocytes de truite arc-en-ciel.

Kupfer Auswirkungen auf Hitzeschockprotein 70 Expression und Apoptose in Hepatozyten Regenbogenforelle.

L&#39;epatotossicit&agrave; di rame sottostante meccanismo &egrave; stato studiato in colture primarie di epatociti di trota iridea mantenuti in media Leibovitz-15. Trattamento di CuSO4 (0, 25, 50, 100 e 200 microM) ha provocato un&#39;elevazione dose-dipendente in heat shock 70 (hsp70) espressione della proteina a 24 e 48 h post-esposizione. C&#39;&egrave; stato alcun effetto di rame (CuSO4 200 microM) su epatotossicit&agrave; a 24 h, considerando che le esposizioni pi&ugrave; lunghe (48 h) ha provocato perdita aumentata lattato deidrogenasi (LDH) e apoptosi, dimostrato dalla colorazione nucleare di fluorescenza e di frammentazione del DNA. Vitamina C (1 mM), uno scavenger di radicali liberi, inibisce questo apoptosi indotta dal rame che implica un ruolo per le specie reattive dell&#39;ossigeno in rame tossicit&agrave;. Tuttavia, &egrave; stata osservata nessuna parallela inibizione di entrambi espressione della proteina di perdite o hsp70 LDH con vitamina C, suggerendo che almeno due meccanismi indipendenti sono coinvolti nella risposta cellulare al rame. Inoltre, le cellule rame esposto (24 h) erano in grado di montare una risposta hsp70 ad uno shock termico standardizzato (+ 15 gradi C per 1 h), anche in presenza di vitamina C. Together, questi risultati suggeriscono che epatotossicit&agrave; di rame comprende compromissione della risposta hsp70 successivi fattori di stress e/o segnali, che &egrave; fondamentale per proteggere le cellule da proteotoxicity.

Rame impatto sull&#39;espressione di proteine heat shock 70 e apoptosi in epatociti di trota iridea.

&#x30EA;&#x30FC;&#x30DC;&#x30D3;&#x30C3;&#x30C4; 15 &#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x3067;&#x7DAD;&#x6301;&#x30CB;&#x30B8;&#x30DE;&#x30B9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x57FA;&#x76E4;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x9285;&#x306E;&#x809D;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;CuSO4 &#x6CBB;&#x7642; (0&#x3001;25&#x3001;50&#x3001;100 &#x3068; 200 &#x306E; microM&#xFF09; &#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 70 (hsp70) &#x5F0F;&#x3067; 24 &#x304A;&#x3088;&#x3073; 48 h &#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x306E;&#x7528;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x4E0A;&#x6607;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9577;&#x3044;&#x9732;&#x5149; &#xFF08;48 h&#xFF09; &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x4E73;&#x9178;&#x8131;&#x6C34;&#x7D20;&#x9175;&#x7D20; (LDH) &#x306E;&#x6F0F;&#x6D29;&#x3068;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;, &#x86CD;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x6027;&#x304C;&#x6838;&#x3068; DNA &#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;24 h &#x3067;&#x809D;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x9285; (CuSO4 200 microM) &#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30D3;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3; C (1 mM) &#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B8;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3; &#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3067;&#x9285;&#x306E;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3053;&#x306E;&#x9285;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30D3;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3; c &#x306E;&#x9285;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 2 &#x3064;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x4E26;&#x5217;&#x963B;&#x5BB3;&#x3069;&#x3061;&#x3089; LDH &#x6F0F;&#x308C;&#x3084; hsp70 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;.&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x9285;&#x306E;&#x9732;&#x51FA; (24 h) &#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x6A19;&#x6E96;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF; &#xFF08;+15 &#x2103; &#x3067; 1 &#x6642;&#x9593;&#xFF09;&#x3001;&#x30D3;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3; c. &#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3082;&#x3001;hsp70 &#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x63D0;&#x6848;&#x305D;&#x306E;&#x809D;&#x6BD2;&#x6027;&#x9285;&#x306E;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F; proteotoxicity &#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x5927;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E; hsp70 &#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x6E1B;&#x640D;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 70 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30CB;&#x30B8;&#x30DE;&#x30B9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9285;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3002;

&#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xB9AC; hepatotoxicity &#xBB34;&#xC9C0;&#xAC1C; &#xC1A1;&#xC5B4; hepatocytes Leibovitz 15 &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBB38;&#xD654; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. CuSO4 &#xCE58;&#xB8CC; (0, 25, 50, 100 &#xBC0F; 200 microM) &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 70 (hsp70) &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; 24 &#xBC0F; 48 h post-exposure&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC758;&#xC874; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xAE34; &#xB178;&#xCD9C; (48 h) &#xACB0;&#xACFC; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC816; &#xC0B0; &#xD6A8;&#xC18C; (LDH) &#xB204;&#xC124; &#xBC0F; apoptosis, &#xD615;&#xAD11; &#xD575; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC774; &#xC9C0; &#xACE0; DNA &#xD30C;&#xD3B8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; 24 h &#xC99D;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xB9AC; (CuSO4 200 microM) &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xD0C0;&#xBBFC; C (1mm), &#xC790;&#xC720; &#xB798; &#xB514; &#xCE7C; &#xC2A4;&#xCE90;&#xBE48;&#xC800; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xBC18;&#xC751; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xB73B;&#xC774; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC720;&#xB3C4; apoptosis&#xB97C; &#xC800;&#xD574;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC5B4;&#xB290; LDH &#xB204;&#xC124; &#xB610;&#xB294; hsp70 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xC758; &#xBCD1;&#xB82C; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBE44;&#xD0C0;&#xBBFC; C&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xB178;&#xCD9C;&#xB41C; (24 &#xC2DC;&#xAC04;) &#xC140; &#xBE44;&#xD0C0;&#xBBFC; C. &#xD568;&#xAED8; &#xC874;&#xC7AC;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC900;&#xD654; &#xB41C; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; (1 &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; 15&#xB3C4; C), hsp70 &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD0D1;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xAD6C;&#xB9AC;&#xC758; &#xADF8; &#xC99D;&#xC0C1; &#xD3EC;&#xD568; &#xD6C4;&#xC18D; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xB610;&#xB294; proteotoxicity&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; hsp70 &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xC7A5;&#xC560;.

&#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 70 &#xC2DD; &#xBC0F; &#xBB34;&#xC9C0;&#xAC1C; &#xC1A1;&#xC5B4; hepatocytes&#xC5D0; apoptosis&#xC5D0; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC601;&#xD5A5;.

La hepatotoxicidad cobre subyacente mecanismo fue investigada en cultivos primarios de hepatocitos de truchas arco iris mantenidos en medios Leibovitz-15. Tratamiento de CuSO4 (0, 25, 50, 100 y 200 microM) dio lugar a una elevaci&oacute;n de dose-dependent en expresi&oacute;n de 70 (hsp70) en 24 y 48 h postexposici&oacute;n de calor en la prote&iacute;na de las descargas. No hubo ning&uacute;n efecto de cobre (200 microM CuSO4) sobre hepatotoxicidad a las 24 h, mientras que exposiciones prolongadas (48 h) dio lugar a la salida de aumento lactato deshidrogenasa (LDH) y apoptosis, demostrado por la coloraci&oacute;n nuclear de fluorescencia y fragmentaci&oacute;n del ADN. Vitamina C (1 mM), un limpiador del radical libre, inhibe esta apoptosis inducida por cobre, lo que implica un papel de especies reactivas del ox&iacute;geno en la toxicidad de cobre. Sin embargo, no se observ&oacute; ninguna inhibici&oacute;n paralela de cualquier expresi&oacute;n de prote&iacute;na de fugas o hsp70 LDH con vitamina C, lo que sugiere que al menos dos mecanismos independientes est&aacute;n involucrados en la respuesta celular a cobre. Adem&aacute;s, las c&eacute;lulas expuestas cobre (24 h) fueron incapaces de montar una respuesta hsp70 a un choque de calor estandarizada (+ 15 grados C durante 1 hora), incluso en presencia de vitamina C. juntos, estos resultados sugieren que la hepatotoxicidad de cobre incluye deterioro de hsp70 respuesta a estresores posteriores o se&ntilde;ales, que es crucial para proteger las c&eacute;lulas de proteotoxicity.

Cobre impacto en expresi&oacute;n 70 de la prote&iacute;na de choque t&eacute;rmico y apoptosis en los hepatocitos de trucha arco iris.

&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x771F;&#x6838;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x8D77;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50; 5A &#x7684;&#x4F5C;&#x7528; &#xFF08;eIF5A&#xFF09; &#x5728;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x690E;&#x677F; cribrosa (LC)&#x3002;

EIF5A &#x690E;&#x677F; cribrosa &#x7EC6;&#x80DE;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x4ECB;&#x5BFC;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

To determine the role of eukaryotic translation initiation factor 5A (eIF5A) in TNF-alpha-induced apoptosis of lamina cribrosa (LC) cells.

Role of eIF5A in TNF-alpha-mediated apoptosis of lamina cribrosa cells.

Pour d&eacute;terminer le r&ocirc;le de la traduction eucaryote initiation factor 5 a (eIF5A) dans l&#39;apoptose induite par le TNF-alpha, des cellules de lamina cribrosa (LC).

R&ocirc;le d&#39;eIF5A dans l&#39;apoptose induite par la TNF-alpha des cellules de lamina cribrosa.

Die Rolle der eIF5A in TNF-alpha-vermittelte Apoptose von Lamina cribrosa-Zellen.

Per determinare il ruolo della traduzione negli eucarioti iniziazione fattore 5A (eIF5A) nell&#39;apoptosi indotta da TNF-alfa di cellule di lamina cribrosa (LC).

Ruolo di eIF5A nell&#39;apoptosi TNF-alpha-mediata delle cellule di lamina cribrosa.

&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x7FFB;&#x8A33;&#x958B;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50; 5 a &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B; (eIF5A) &#x30E9;&#x30DF;&#x30CA;&#x7BE9; (LC) &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092; TNF &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3067;&#x3002;

TNF &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30E9;&#x30DF;&#x30CA;&#x7BE9;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; eIF5A &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xC9C4; &#xD575; &#xBC88;&#xC5ED; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC778;&#xC790; 5a&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; (eIF5A) lamina cribrosa (LC) &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; TNF &#xC54C;&#xD30C; &#xC720;&#xB3C4; apoptosis&#xC5D0;.

Lamina cribrosa &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; TNF-&#xC54C;&#xD30C; &#xC911;&#xC7AC; apoptosis&#xC5D0; Eif5a&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

Para determinar el papel de la traducci&oacute;n en eucariotas iniciaci&oacute;n factor 5A (eIF5A) en la apoptosis inducida por TNF-alfa de c&eacute;lulas de lamina cribrosa (LC).

Adrienne N. Boone

Department of Biology

University of Waterloo

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

Adrienne N. Boone

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Biology

University of Waterloo

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

Department of Biology