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Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

Purdue University

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Neuronal growth cones are motile sensory structures at the tip of axons, transducing guidance information into directional movements towards target cells. The morphology and dynamics of neuronal growth cones have been well characterized with optical techniques; however, very little quantitative information is available on the three-dimensional structure and mechanical properties of distinct subregions. In the present study, we imaged the large Aplysia growth cones after chemical fixation with the atomic force microscope (AFM) and directly compared our data with images acquired by light microscopy methods. Constant force imaging in contact mode in combination with force-distant measurements revealed an average height of 200 nm for the peripheral (P) domain, 800 nm for the transition (T) zone, and 1200 nm for the central (C) domain, respectively. The AFM images show that the filopodial F-actin bundles are stiffer than surrounding F-actin networks. Enlarged filopodia tips are 60 nm higher than the corresponding shafts. Measurements of the mechanical properties of the specific growth cone regions with the AFM revealed that the T zone is stiffer than the P and the C domain. Direct comparison of AFM and optical data acquired by differential interference contrast and fluorescence microscopy revealed a good correlation between these imaging methods. However, the AFM provides height and volume information at higher resolution than fluorescence methods frequently used to estimate the volume of cellular compartments. These findings suggest that AFM measurements on live growth cones will provide a quantitative understanding of how proteins can move between different growth cone regions.

High-resolution analysis of neuronal growth cone morphology by comparative atomic force and optical microscopy.

C&#xF4;nes de croissance neuronaux sont mobiles structures sensorielles &#xE0; la pointe des axones, la transduction des informations de guidage dans les mouvements directionnels vers les cellules cibles. La morphologie et la dynamique des c&#xF4;nes de croissance neuronaux ont &#xE9;t&#xE9; bien caract&#xE9;ris&#xE9;s avec des techniques optiques, mais tr&#xE8;s peu d&#x26;#39;informations quantitatives sont disponibles sur la structure en trois dimensions et les propri&#xE9;t&#xE9;s m&#xE9;caniques des sous-r&#xE9;gions distinctes. Dans la pr&#xE9;sente &#xE9;tude, nous avons imag&#xE9; des grands c&#xF4;nes de croissance chez l&#x26;#39;aplysie apr&#xE8;s fixation chimique avec le microscope &#xE0; force atomique (AFM) et directement compar&#xE9; nos donn&#xE9;es avec des images acquises par des m&#xE9;thodes de microscopie optique. Imagerie &#xE0; force constante en mode contact en combinaison avec une force-distance mesures r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une hauteur moyenne de 200 nm pour le p&#xE9;riph&#xE9;rique (P) de domaine, &#xE0; 800 nm pour la transition (T), des zones et 1200 nm pour la centrale (C), respectivement de domaine . Les images AFM montrent que les filopodial F-actine faisceaux sont plus rigides que environnante F-actine r&#xE9;seaux. Agrandies conseils filopodes sont 60 nm plus &#xE9;lev&#xE9; que les arbres correspondants. La mesure des propri&#xE9;t&#xE9;s m&#xE9;caniques des r&#xE9;gions sp&#xE9;cifiques de c&#xF4;ne de croissance avec l&#x26;#39;AFM r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que la zone T est plus rigide que le P et le domaine C. La comparaison directe de l&#x26;#39;AFM et les donn&#xE9;es optiques acquises par contraste d&#x26;#39;interf&#xE9;rence diff&#xE9;rentiel et la microscopie &#xE0; fluorescence a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une bonne corr&#xE9;lation entre ces m&#xE9;thodes d&#x26;#39;imagerie. Toutefois, l&#x26;#39;AFM fournit des informations hauteur et le volume &#xE0; plus haute r&#xE9;solution que les m&#xE9;thodes de fluorescence fr&#xE9;quemment utilis&#xE9;es pour estimer le volume des compartiments cellulaires. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que les mesures AFM sur des c&#xF4;nes de croissance en direct offrira une compr&#xE9;hension quantitative de la fa&#xE7;on dont les prot&#xE9;ines peuvent se d&#xE9;placer entre les diff&#xE9;rentes r&#xE9;gions c&#xF4;ne de croissance.

Haute r&#xE9;solution analyse de la morphologie du c&#xF4;ne de croissance neuronale par force atomique et la microscopie optique comparative

Neuronale Wachstum Zapfen sind st&auml;bchenf&ouml;rmiges sensorische Strukturen an der Spitze der Axone, transducing Anleitung Informationen in gerichtete Bewegungen in Richtung der Zielzellen. Morphologie und Dynamik der neuronale Wachstum Kegel waren gut mit optischen Techniken gepr&auml;gt; sehr wenig quantitative Informationen ist jedoch auf die dreidimensionale Struktur und mechanischen Eigenschaften der unterschiedlichen Teilregionen verf&uuml;gbar. In der vorliegenden Studie abgebildet wir die gro&szlig;en Aplysia Wachstum Zapfen nach chemischen Fixierung mit dem Rasterkraftmikroskop (AFM) und direkt unsere Daten mit Bildern von Lichtmikroskopie Methoden erworben gegen&uuml;ber. Konstante Kraft Bildgebung in Kontakt-Modus in Kombination mit Kraft-fernen Messungen ergab eine durchschnittliche H&ouml;he von 200 nm f&uuml;r die peripheren (P) Dom&auml;ne, 800 nm f&uuml;r die &Uuml;bergangszone (T) und 1200 nm f&uuml;r die zentrale Dom&auml;ne (C), beziehungsweise. Die AFM-Bilder zeigen, dass die Filopodial-F-Actin-B&uuml;ndel steifer als die umgebenden F-Actin-Netzwerke. Erweiterten Filopodium Tipps sind 60 nm h&ouml;her als die entsprechenden Sch&auml;chte. Messungen der mechanischen Eigenschaften von den spezifischen Wachstumsregionen der Kegel mit der AFM ergab, dass die T-Zone steifer als die P und C-Dom&auml;ne ist. Direkter Vergleich von AFM und optische Daten erworben durch differenzielle Interferenz-Kontrast und Fluoreszenz-Mikroskopie ergab eine gute Korrelation zwischen diesen bildgebenden Verfahren. Allerdings bietet die AFM H&ouml;he und Volumen Informationen mit h&ouml;herer Aufl&ouml;sung als Fluoreszenz-Methoden, die h&auml;ufig verwendet, um das Volumen der zellularen F&auml;chern zu sch&auml;tzen. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass AFM-Messungen am Leben Wachstum Zapfen g&auml;ben ein quantitatives Verst&auml;ndnis von, wie Proteine zwischen verschiedenen Wachstumsregionen Kegel bewegen k&ouml;nnen.

Hochaufl&ouml;sende Analyse der neuronalen Wachstums Kegel Morphologie durch vergleichende Rasterkraft und optische Mikroskopie.

Coni di crescita neuronale sono motili strutture sensoriali all&#39;estremit&agrave; degli assoni, transducing informazioni per l&#39;orientamento in movimenti direzionali verso le cellule bersaglio. La morfologia e la dinamica dei coni di crescita neuronale &egrave; stati ben caratterizzati con tecniche ottiche; Tuttavia, molto poco informazioni quantitative sono disponibile sulla struttura tridimensionale e le propriet&agrave; meccaniche delle sottoregioni distinti. Nel presente studio, abbiamo fotografato i grandi coni di crescita Aplysia dopo fissazione chimica con il microscopio a forza atomica (AFM) e direttamente confrontato i nostri dati con immagini acquisite da metodi di microscopia chiara. Forza costante imaging in modalit&agrave; contatto in combinazione con le misurazioni di forza lontane ha rivelato un&#39;altezza media di 200 nm per il dominio periferico (P), 800 nm per la zona di transizione (T) e 1200 nm per il dominio centrale (C), rispettivamente. Le immagini AFM mostrano che i fasci di F-actina filopodial sono pi&ugrave; rigidi rispetto circostanti reti di F-actina. Consigli filopodia allargata sono 60 nm superiore gli alberi corrispondenti. Le misurazioni delle propriet&agrave; meccaniche delle regioni cono specifico di crescita con l&#39;AFM ha rivelato che la zona T &egrave; pi&ugrave; rigida di P e il dominio C. Confronto diretto di AFM e ottici dei dati acquisiti da microscopia di fluorescenza e contrasto di interferenza differenziale ha rivelato una buona correlazione tra questi metodi di imaging. Tuttavia, l&#39;AFM fornisce informazioni di altezza e volume con risoluzione superiore rispetto ai metodi fluorescenza frequentemente utilizzato per stimare il volume dei compartimenti cellulari. Questi risultati suggeriscono che le misure AFM sui coni di crescita diretta fornir&agrave; una comprensione quantitativa della come proteine possono muoversi tra regioni cono di crescita diversi.

Analisi ad alta risoluzione della morfologia di cono di crescita neuronale comparativa forza atomica e microscopia ottica.

&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x306B;&#x6848;&#x5185;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x4F1D;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x306B;&#x904B;&#x52D5;&#x611F;&#x899A;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x5B66;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x60C5;&#x5831;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;AFM&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5316;&#x5B66;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5F8C;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30A2;&#x30E1;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B7;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x3092;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3057;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x753B;&#x50CF;&#x3068;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30B9;&#x9060;&#x9694;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x3001;&#x63A5;&#x89E6;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x4E00;&#x5B9A;&#x306E;&#x529B;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x5468;&#x8FBA;&#xFF08;P&#xFF09;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9077;&#x79FB;&#xFF08;T&#xFF09;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;800 nm&#x306E;&#x3001;&#x4E2D;&#x592E;&#xFF08;C&#xFF09;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;1200 nm&#x306E;200 nm&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x9AD8;&#x3055;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AFM&#x753B;&#x50CF;&#x306F;filopodial F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x675F;&#x304C;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x5DFB;&#x304F;&#x3088;&#x308A;&#x525B;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x62E1;&#x5927;&#x7CF8;&#x72B6;&#x4EEE;&#x8DB3;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30E3;&#x30D5;&#x30C8;&#x3088;&#x308A;60nm&#x3067;&#x9AD8;&#x304F;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; AFM&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;T&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;P&#x3068;C&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3088;&#x308A;&#x525B;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AFM&#x3068;&#x5FAE;&#x5206;&#x5E72;&#x6E09;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x53D6;&#x5F97;&#x3057;&#x305F;&#x5149;&#x5B66;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x64AE;&#x50CF;&#x6CD5;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x826F;&#x597D;&#x306A;&#x76F8;&#x95A2;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;AFM&#x306F;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x533A;&#x753B;&#x306E;&#x4F53;&#x7A4D;&#x3092;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x6CD5;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3067;&#x306E;&#x9AD8;&#x3055;&#x3068;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x4E0A;&#x3067;&#x306E;AFM&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x5225;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x9818;&#x57DF;&#x9593;&#x3092;&#x79FB;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

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&#xC2E0;&#xACBD; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC740; &#xCD95; &#xC0AD;, &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC29;&#xD5A5; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; transducing&#xC758; &#xB05D;&#xC5D0; &#xBA54;&#xAD6C;&#xBBF8; &#xAC10;&#xAC01; &#xAD6C;&#xC870;. &#xAD11;&#xD559; &#xAE30;&#xC220;;&#xAC00; &#xB418;&#xC5B4; &#xC798; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD615;&#xD0DC; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC544;&#xC8FC; &#xC791;&#xC740; &#xC591;&#xC801; &#xC815;&#xBCF4;&#xB294; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xAD6C;&#xC5ED;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (AFM)&#xACFC; &#xC9C1;&#xC811; &#xD654;&#xD559; &#xACE0;&#xC815;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xD68D;&#xB4DD; &#xD55C; &#xD6C4; &#xD070; Aplysia &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xBA87; &#xAD70;&#xB370;. &#xD3EC;&#xC2A4; &#xBA3C; &#xCE21;&#xC815; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB85C; &#xC77C;&#xC815; &#xD798; &#xC601;&#xC0C1; &#xACF5;&#xAC1C; 200&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xB192;&#xC774; &#xC8FC;&#xBCC0; (P) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, 800 nm &#xBC0F; 1200 nm &#xC911;&#xC2EC; (C) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xD658; (T) &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC01;&#xAC01;. AFM &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD45C;&#xC2DC; filopodial F &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC88;&#xB4E4;&#xC740; F &#xB9D0;&#xB77C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBEE3; &#xBEE3; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD655;&#xB300; filopodia &#xD301;&#xC740; 60 nm &#xD574;&#xB2F9; &#xC0E4;&#xD504;&#xD2B8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB192;&#xC740;. AFM&#xACFC; &#xD2B9;&#xC815; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xCE21;&#xC815; T &#xC874; P&#xC640; C &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC5C4;&#xACA9;&#xD55C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. AFM&#xACFC; &#xCC28;&#xB3D9; &#xAC04;&#xC12D; &#xCF58;&#xD2B8;&#xB77C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC640; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCDE8;&#xB4DD; &#xD558;&#xB294; &#xAD11;&#xD559; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xBE44;&#xAD50; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC29;&#xBC95; &#xC0AC;&#xC774; &#xC88B;&#xC740; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, AFM &#xC790;&#xC8FC; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xBCFC;&#xB968;&#xC744; &#xCD94;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD615;&#xAD11; &#xBC29;&#xBC95; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC774; &#xBCFC;&#xB968; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC740; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC758; AFM &#xCE21;&#xC815; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E4;&#xB978; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xCD94; &#xC601;&#xC5ED; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC774;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E0;&#xACBD; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xD615;&#xD0DC; &#xBE44;&#xAD50; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xBC0F; &#xAD11;&#xD559; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC758; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC11D;.

Conos de crecimiento neuronales son m&#xF3;viles estructuras sensoriales en la punta de los axones, transducir informaci&#xF3;n de gu&#xED;a en movimientos direccionales hacia las c&#xE9;lulas diana. La morfolog&#xED;a y la din&#xE1;mica de los conos de crecimiento neuronal han sido bien caracterizadas con t&#xE9;cnicas &#xF3;pticas, sin embargo, muy poca informaci&#xF3;n cuantitativa est&#xE1; disponible en la estructura tridimensional y las propiedades mec&#xE1;nicas de las subregiones distintas. En el presente estudio, hemos fotografiado los conos Aplysia un gran crecimiento despu&#xE9;s de la fijaci&#xF3;n qu&#xED;mica con el microscopio de fuerza at&#xF3;mica (AFM) y comparar directamente los datos con im&#xE1;genes obtenidas por m&#xE9;todos de microscop&#xED;a de luz. Imagen de fuerza constante en el modo de contacto, en combinaci&#xF3;n con la fuerza distantes mediciones revelaron una altura promedio de 200 nm para el perif&#xE9;rico (P) de dominio, a 800 nm para la transici&#xF3;n (T), y zona de 1200 nm para la central (C) de dominio, respectivamente . Las im&#xE1;genes de AFM muestran que los filopodial F-actina paquetes son m&#xE1;s r&#xED;gidos que rodea la F-actina redes. Agrandamiento de consejos filopodios son de 60 nm m&#xE1;s altos que los ejes correspondientes. Las mediciones de las propiedades mec&#xE1;nicas de las regiones espec&#xED;ficas del cono de crecimiento con el AFM revel&#xF3; que la zona T es m&#xE1;s r&#xED;gido que el P y el dominio C. La comparaci&#xF3;n directa de la AFM y los datos &#xF3;pticos adquiridos por contraste de interferencia diferencial y microscop&#xED;a de fluorescencia revel&#xF3; una buena correlaci&#xF3;n entre estos m&#xE9;todos de imagen. Sin embargo, el AFM proporciona informaci&#xF3;n sobre la altura y el volumen en una resoluci&#xF3;n m&#xE1;s alta que los m&#xE9;todos de fluorescencia con frecuencia utilizados para estimar el volumen de los compartimentos celulares. Estos hallazgos sugieren que las mediciones de AFM en los conos de crecimiento en directo proporcionar&#xE1; una comprensi&#xF3;n cuantitativa de c&#xF3;mo las prote&#xED;nas se pueden mover entre las diferentes regiones del cono de crecimiento.

An&#xE1;lisis de alta resoluci&#xF3;n de la morfolog&#xED;a neuronal cono de crecimiento por la fuerza comparativa At&#xF3;mica y Microscop&#xED;a &#xD3;ptica

&#x671F;&#x95F4;&#x7C98;&#x9644;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x6307;&#x5BFC;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x63A5;&#x53D7;&#x4E3B;&#x8981;&#x91CD;&#x6392;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x662F;&#x5426;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x6269;&#x5C55;&#x5230;&#x7C98;&#x9644;&#x7AD9;&#x70B9;&#x52A0;&#x53F7;&#x7ED3;&#x675F;&#x805A;&#x5408;&#x548C;/&#x6216;&#x6613;&#x4F4D;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x7531;&#x4E8E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x6216;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x9075;&#x5FAA;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6591;&#x70B9;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x76F4;&#x63A5;&#x91CF;&#x5316;&#x6D77;&#x5154;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x52A8;&#x6001;&#xFF0C;&#x5F53;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8F6C;&#x5411;&#x73E0;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50; apCAM &#x6D82;&#x5C42;&#x3002;&#x5728;&#x7C98;&#x8FDE;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x671F;&#x95F4;&#x52A8;&#x6001;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x5916;&#x56F4;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F18;&#x5148;&#x63A2;&#x7D22; apCAM &#x73E0;&#x524D;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x9006;&#x884C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x6D41;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x6709;&#x805A;&#x5408;&#x7387;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#xFF0C;&#x4F46;&#x82B1;&#x66F4;&#x5C11;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x4E2D;&#x7531;&#x4E8E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6D41;&#x4ECE;&#x89E3;&#x8026;&#x9006;&#x884C;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x63A2;&#x7D22;&#x7C98;&#x9644;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x82B1;&#x66F4;&#x5C11;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5728;&#x89E3;&#x805A;&#x3002;&#x5728;&#x7A0D;&#x540E;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x7275;&#x5F15;&#x90E8;&#x961F;&#x7684;&#x7EC4;&#x5EFA;&#x3001; &#x4E2D;&#x5FC3;&#x57DF;&#x8FDB;&#x5C55;&#x548C;&#x5916;&#x56F4;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6D41;&#x91CF;&#x8870;&#x51CF;&#x548C; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x95F4;&#x9699;&#x3002;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x5728;&#x8FC7;&#x6E21;&#x533A;&#x548C;&#x4E2D;&#x592E;&#x57DF;&#xFF0C;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x671D;&#x7C98;&#x9644;&#x7AD9;&#x70B9;&#x5728;&#x97F3;&#x4E50;&#x4F1A;&#x4E0E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5F27;&#x5F62;&#x548C;&#x6346;&#x7ED1;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;&#x6307;&#x5BFC;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x548C;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x91CD;&#x6392;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x7531;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8C03;&#x8282;&#x6839;&#x636E;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x5730;&#x533A;&#x5FAE;&#x7BA1;-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x8FD0;&#x52A8;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x63A7;&#x5236;&#x52A0;&#x7AEF;&#x805A;&#x5408;&#x901F;&#x7387;&#x3002;

&#x5FAE;&#x7BA1;&#x52A8;&#x6001;&#x7C98;&#x9644;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x6307;&#x5BFC;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

During adhesion-mediated neuronal growth cone guidance microtubules undergo major rearrangements. However, it is unknown whether microtubules extend to adhesion sites because of changes in plus-end polymerization and/or translocation dynamics, because of changes in actin-microtubule interactions, or because they follow the reorganization of the actin cytoskeleton. Here, we used fluorescent speckle microscopy to directly quantify microtubule and actin dynamics in Aplysia growth cones as they turn towards beads coated with the cell adhesion molecule apCAM. During the initial phase of adhesion formation, dynamic microtubules in the peripheral domain preferentially explore apCAM-beads prior to changes in growth cone morphology and retrograde actin flow. Interestingly, these early microtubules have unchanged polymerization rates but spend less time in retrograde translocation due to uncoupling from actin flow. Furthermore, microtubules exploring the adhesion site spend less time in depolymerization. During the later phase of traction force generation, the central domain advances and more microtubules in the peripheral domain extend because of attenuation of actin flow and clearance of F-actin structures. Microtubules in the transition zone and central domain, however, translocate towards the adhesion site in concert with actin arcs and bundles, respectively. We conclude that adhesion molecules guide neuronal growth cones and underlying microtubule rearrangements largely by differentially regulating microtubule-actin coupling and actin movements according to growth cone region and not by controlling plus-end polymerization rates.

Quantitative analysis of microtubule dynamics during adhesion-mediated growth cone guidance.

Au cours de l&#x26;#39;adh&#xE9;rence m&#xE9;di&#xE9;e par neuronales microtubules du c&#xF4;ne de croissance d&#x26;#39;orientation soumis &#xE0; des r&#xE9;arrangements majeurs. Toutefois, on ignore si les microtubules s&#x26;#39;&#xE9;tendent vers des sites d&#x26;#39;adh&#xE9;sion en raison de changements dans Plus la fin de la polym&#xE9;risation et / ou la dynamique de translocation, en raison de changements dans l&#x26;#39;actine-microtubules interactions, ou parce qu&#x26;#39;ils suivent la r&#xE9;organisation du cytosquelette d&#x26;#39;actine. Ici, nous avons utilis&#xE9; la microscopie fluorescente chatoiement de quantifier directement des microtubules et dynamique de l&#x26;#39;actine dans les c&#xF4;nes de croissance chez l&#x26;#39;aplysie comme ils se tournent vers des perles recouvertes de la mol&#xE9;cule d&#x26;#39;adh&#xE9;sion cellulaire APCAM. Au cours de la phase initiale de la formation d&#x26;#39;adh&#xE9;rences, les microtubules dynamiques dans le domaine p&#xE9;riph&#xE9;rique de pr&#xE9;f&#xE9;rence explorer APCAM-billes pr&#xE9;alablement &#xE0; toute modification de la morphologie du c&#xF4;ne de croissance et les flux d&#x26;#39;actine r&#xE9;trograde. Fait int&#xE9;ressant, ces microtubules ont des taux de polym&#xE9;risation d&#xE9;but inchang&#xE9;s mais passent moins de temps dans la translocation r&#xE9;trograde due au d&#xE9;couplage de l&#x26;#39;&#xE9;coulement d&#x26;#39;actine. En outre, les microtubules explorer le site d&#x26;#39;adh&#xE9;rence passer moins de temps dans la d&#xE9;polym&#xE9;risation. Au cours de la phase ult&#xE9;rieure de la production d&#x26;#39;une force de traction, les progr&#xE8;s de domaine centraux et plus de microtubules dans le domaine p&#xE9;riph&#xE9;rique s&#x26;#39;&#xE9;tend en raison de l&#x26;#39;att&#xE9;nuation des flux de l&#x26;#39;actine et la clairance de la F-actine structures. Les microtubules dans la zone de transition et le domaine central, cependant, la translocation vers le site d&#x26;#39;adh&#xE9;rence, de concert avec des arcs d&#x26;#39;actine et faisceaux, respectivement. Nous concluons que les mol&#xE9;cules d&#x26;#39;adh&#xE9;sion guider c&#xF4;nes de croissance neuronaux sous-jacents et des r&#xE9;arrangements des microtubules en grande partie par la r&#xE9;gulation diff&#xE9;rentielle des microtubules-actine mouvements de couplage et de l&#x26;#39;actine selon la r&#xE9;gion du c&#xF4;ne de croissance et non pas en contr&#xF4;lant les taux de polym&#xE9;risation en plus de gamme.

Analyse quantitative des cours de la dynamique des microtubules adh&#xE9;rence m&#xE9;di&#xE9;e orientation c&#xF4;ne de croissance

W&auml;hrend Adh&auml;sion-vermittelte neuronale Wachstum unterziehen Kegel Anleitung Mikrotubuli gro&szlig;e Umlagerungen. Es ist jedoch unbekannt, ob Mikrotubuli zu Adh&auml;sion Seiten aufgrund von &Auml;nderungen im Plus-End Polymerisation und/oder Translokation Dynamik, aufgrund von &Auml;nderungen an Aktin-Microtubule Interaktionen, erweitern, oder weil sie die Reorganisation des Aktin-Zytoskeletts folgen. Hier haben wir fluoreszierende Speckle-Mikroskopie um Microtubule und Actin Dynamik in Aplysia Wachstum Zapfen direkt zu quantifizieren, Richtung Perlen mit der Zelle Adh&auml;sion Molek&uuml;l ApCAM beschichtet umzubl&auml;ttern. W&auml;hrend der Anfangsphase der Adh&auml;sion-Formation, dynamische Mikrotubuli im peripheren Bereich erforschen vorzugsweise ApCAM-Perlen vor &Auml;nderungen der Wachstum Kegel Morphologie und retrograde Actin flie&szlig;en. Interessanterweise diese fr&uuml;hen Mikrotubuli Polymerisation Preise unver&auml;ndert haben aber weniger Zeit f&uuml;r retrograde Translokation durch Abkopplung von Aktin flie&szlig;en. Dar&uuml;ber hinaus Zeit Mikrotubuli, die Erforschung der Adh&auml;sion-Website weniger in Depolymerisation. W&auml;hrend der sp&auml;teren Phase der Traktion Streitkr&auml;fteaufwuchs, die zentrale Dom&auml;ne Fortschritte und weitere Mikrotubuli im peripheren Bereich wegen der D&auml;mpfung von Aktin-Str&ouml;mung und Abfertigung von F-Actin-Strukturen zu erweitern. Mikrotubuli in der &Uuml;bergangszone und zentrale Dom&auml;ne, akkumulieren jedoch gegen&uuml;ber der Adh&auml;sion-Website im Konzert mit Aktin-B&ouml;gen und Bundles. Wir schlie&szlig;en die Adh&auml;sionsmolek&uuml;le neuronale Wachstum Zapfen und zugrunde liegenden Microtubule Umlagerungen weitgehend durch die differentiell Regelung Microtubule-Actin-Kupplung und Actin-Bewegungen nach Wachstumsregion Kegel und nicht durch die Kontrolle der Plus-End Polymerisation Preise.

Quantitative Analyse von Microtubule Dynamik w&auml;hrend Adh&auml;sion-vermittelte Wachstum Kegel Anleitung.

Durante la crescita neuronale mediata adesione microtubuli orientamento cono subiscono riarrangiamenti maggiori. Tuttavia, non si sa se microtubuli estendono ai siti di adesione a causa di cambiamenti nella polimerizzazione plus-fine e/o dinamiche di traslocazione, a causa di cambiamenti nelle interazioni del microtubule-actina, o perch&eacute; seguire la riorganizzazione del citoscheletro di actina. Qui, abbiamo utilizzato la microscopia di fluorescenza speckle quantificare direttamente ai microtubuli e actina dinamiche nei coni di crescita Aplysia come girano verso perline rivestite con il apCAM molecola di adesione cellulare. Durante la fase iniziale della formazione di aderenze, dinamici dei microtubuli nel dominio periferico esplorare preferenzialmente apCAM-perline prima di cambiamenti nella morfologia di cono di crescita e retrograda actina flusso. Curiosamente, questi primi microtubuli sono invariati tassi di polimerizzazione ma trascorrono meno tempo in traslocazione retrograda dovuto disgiungere dal flusso di actina. Inoltre, microtubuli esplorando il sito adesione spendono meno tempo a depolimerizzazione. Durante la successiva fase di trazione forza di generazione, il dominio centrale avanza e pi&ugrave; microtubuli nel dominio periferico estendono a causa di attenuazione del flusso di actina e la bonifica delle strutture di F-actina. Microtubuli nella zona di transizione e dominio centrale, tuttavia, traslocano nel verso il sito di adesione in concerto con gli archi dell&#39;actina e pacchi, rispettivamente. Concludiamo che molecole di adesione guidano coni di crescita neuronale e riarrangiamenti microtubule sottostante in gran parte regolando differenzialmente movimenti di attacco e actina microtubule-actina secondo la regione del cono di crescita e non controllando tariffe plus-fine polimerizzazione.

Analisi quantitativa della dinamica dei microtubuli durante la guida cono di crescita di adesione-mediata.

&#x9593;&#x306B;&#x63A5;&#x7740;&#x4ECB;&#x5728;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x304C;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x304C;&#x539F;&#x56E0;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; - &#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x3001;&#x7406;&#x7531;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x91CD;&#x5408;&#x53CA;&#x3073;/&#x53C8;&#x306F;&#x8EE2;&#x306E;&#x529B;&#x5B66;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x63A5;&#x7740;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x200B;&#x200B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x3092;&#x30D5;&#x30A9;&#x30ED;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x706F;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x5206;&#x5B50;apCAM&#x3067;&#x88AB;&#x8986;&#x3057;&#x305F;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5;&#x30A2;&#x30E1;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B7;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x30B9;&#x30DA;&#x30C3;&#x30AF;&#x3002;&#x7652;&#x7740;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x3001;&#x5468;&#x8FBA;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x304C;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x9006;&#x884C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x6D41;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x5148;&#x7ACB;&#x3063;&#x3066;apCAM&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3092;&#x63A2;&#x308B;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306F;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x91CD;&#x5408;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x304B;&#x3089;&#x8131;&#x5171;&#x5F79;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x3067;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x8CBB;&#x3084;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x63A5;&#x7740;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3059;&#x308B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306F;&#x8131;&#x91CD;&#x5408;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x8CBB;&#x3084;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x727D;&#x5F15;&#x529B;&#x767A;&#x751F;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5468;&#x8FBA;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4E2D;&#x592E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x3068;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x3068;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79FB;&#x884C;&#x5E2F;&#x3068;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AF;&#x3068;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x63A5;&#x7740;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x5DEE;&#x52D5;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x7AEF;&#x91CD;&#x5408;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x63A5;&#x7740;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x6642;&#x306B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;

&#xC2E0;&#xACBD; &#xC131;&#xC7A5; &#xC811;&#xCC29; &#xC911;&#xC7AC; &#xB3D9;&#xC548; &#xCF58; &#xC9C0;&#xB3C4; microtubules &#xC8FC;&#xC694; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xBC1B; &#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; microtubules &#xB9D0;&#xB77C; microtubule &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xCD5C;&#xC885; &#xC911; &#xD569; &#xB610;&#xB294; &#xC804; &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC811;&#xCC29; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xD655;&#xC7A5; &#xC5EC;&#xBD80; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xAC1C;&#xD3B8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xD615;&#xAD11; &#xC5BC;&#xB8E9; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBD84;&#xC790; apCAM &#xCF54;&#xD305; &#xAD6C;&#xC2AC; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC28;&#xB840; &#xB300;&#xB85C; microtubule Aplysia &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xC9C1;&#xC811; &#xACC4;&#xB7C9;. &#xC811;&#xCC29; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC801; microtubules &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xD615;&#xD0DC;&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xBCC0;&#xD654; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; apCAM-&#xBE44;&#xC988; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD750;&#xB984;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCD08;&#xAE30; microtubules &#xC911; &#xD569; &#xB960;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC804; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC801;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xBCF4;&#xB0B4;&#xACE0;. &#xB610;&#xD55C;, microtubules &#xC811;&#xCC29; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD0D0;&#xD5D8; depolymerization&#xC5D0; &#xC801;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xBCF4;&#xB0B4;&#xACE0;. &#xD2B8;&#xB799; &#xC158;&#xC758; &#xB098;&#xC911; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC138;&#xB300;&#xB97C; &#xAC15;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC911;&#xC559; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC774;&#xB3D9; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; microtubules &#xB9D0;&#xB77C; &#xD750;&#xB984;&#xC758; &#xAC10;&#xC1C4;&#xC640; F &#xB9D0;&#xB77C; &#xAD6C;&#xC870;&#xCCB4;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC804;&#xD658; &#xC601;&#xC5ED; &#xBC0F; &#xC911;&#xC559; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; microtubules &#xAC01;&#xAC01; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD638; &#xBC0F; &#xBC88;&#xB4E4;, &#xD568;&#xAED8; &#xC811;&#xCC29; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC131;&#xC7A5; &#xCF58; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; microtubule &#xB9D0;&#xB77C; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1;&#xACFC; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xC5EC; &#xD06C;&#xAC8C;&#xACFC; &#xD558;&#xC9C0; &#xD50C;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC5D4;&#xB4DC; &#xC911; &#xD569; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBD84;&#xC790; &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8; microtubule &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4;&#xC740; &#xACB0;&#xB860;.

&#xC811;&#xCC29; &#xC911;&#xC7AC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC9C0;&#xB3C4; microtubule &#xC5ED;&#xD559;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;.

Durante la adhesi&#xF3;n mediada neuronales crecimiento microt&#xFA;bulos orientaci&#xF3;n de cono experimentar reordenamientos importantes. Sin embargo, se desconoce si los microt&#xFA;bulos se extienden a sitios de adhesi&#xF3;n debido a cambios en m&#xE1;s de fin de polimerizaci&#xF3;n y / o la din&#xE1;mica de la translocaci&#xF3;n, debido a los cambios en las interacciones de los microt&#xFA;bulos-actina, o porque siguen la reorganizaci&#xF3;n del citoesqueleto de actina. En este caso, se utiliz&#xF3; la microscop&#xED;a fluorescente de speckle para cuantificar directamente la din&#xE1;mica de los microt&#xFA;bulos y la actina en los conos de crecimiento Aplysia que se vuelven hacia perlas recubiertas con el APCAM mol&#xE9;cula de adhesi&#xF3;n celular. Durante la fase inicial de la formaci&#xF3;n de adherencias, los microt&#xFA;bulos din&#xE1;micos en el dominio perif&#xE9;rica preferentemente explorar APCAM-bolas antes de cambios en la morfolog&#xED;a de crecimiento cono y el flujo retr&#xF3;grado de actina. Curiosamente, estos microt&#xFA;bulos primeros tienen las tasas sin cambios de polimerizaci&#xF3;n, pero que pasan menos tiempo en la translocaci&#xF3;n retr&#xF3;grada debido a la disociaci&#xF3;n del flujo de actina. Por otra parte, los microt&#xFA;bulos explorar el sitio de adherencia pasar menos tiempo en la despolimerizaci&#xF3;n. Durante la fase posterior de generaci&#xF3;n de fuerza de tracci&#xF3;n, los avances de dominio centrales y m&#xE1;s microt&#xFA;bulos en el &#xE1;mbito perif&#xE9;rico se extienden debido a la atenuaci&#xF3;n del flujo de la actina y la limpieza de las estructuras de F-actina. Los microt&#xFA;bulos en la zona de transici&#xF3;n y el dominio central, sin embargo, trasladar hacia el sitio de adherencia en concierto con arcos y haces de actina, respectivamente. Llegamos a la conclusi&#xF3;n de que las mol&#xE9;culas de adhesi&#xF3;n guiar a los conos de crecimiento neuronal y reorganizaci&#xF3;n de microt&#xFA;bulos subyacentes en gran parte por la regulaci&#xF3;n diferencial de actina microt&#xFA;bulos movimientos de acoplamiento de la actina y la funci&#xF3;n de la regi&#xF3;n cono de crecimiento y no por el control de m&#xE1;s de gama velocidades de polimerizaci&#xF3;n.

An&#xE1;lisis cuantitativo de la din&#xE1;mica de los microt&#xFA;bulos durante la gu&#xED;a de adherencia mediada por el crecimiento del cono

IgCAMs &#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x52A8;&#x529B;&#x548C;&#x6307;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x5982;&#x4F55; IgCAM &#x53D7;&#x4F53;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x91CD;&#x5851;&#x3002;&#x4EE5;&#x5F80;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x5730;&#x65B9;&#x805A;&#x7C7B;&#x548C;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x7684; apCAM&#xFF0C;&#x6D77;&#x5154;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x4F7F; Src &#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x517B;&#x6B96;&#x6D77;&#x5154;&#x888B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7684; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x5408;&#x5916;&#x56F4;&#x7684;&#x57DF;&#x4E2D;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x60F3;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x662F;&#x5426; Src &#x6FC0;&#x9176;&#x57FA;&#x677F;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x8C03;&#x8282;&#x76AE;&#x5C42;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F; Src &#x6D3B;&#x6027;&#x4E0E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5927;&#x4F1A;&#x671F;&#x95F4; apCAM &#x4ECB;&#x5BFC;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x6307;&#x5BFC;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x514B;&#x9686;&#x6D77;&#x5154;&#x76AE;&#x5C42;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x5B83;&#x662F;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x4E30;&#x5BCC;&#x3002;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7EC4;&#x5316;&#x67D3;&#x8272;&#x663E;&#x793A;&#x76AE;&#x5C42;&#x4E0E; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5728; filopodial &#x5305;&#x4E2D;&#x548C;&#x5E72;&#x9884;&#x7684;&#x524D;&#x6CBF;&#x5F3A;&#x5171;&#x7684;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x6444;&#x52A8;&#x8868;&#x793A;&#x76AE;&#x5C42;&#x5206;&#x5E03;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x79EF;&#x6781; Src colocalized &#x4E0E;&#x76AE;&#x5C42;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5927;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x524D;&#x7F18;&#x548C;&#x4F8B;&#x8BC1;&#x7684;&#x63D0;&#x793A;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#xFF0C;&#x76AE;&#x5C42;&#xFF0C;&#x50CF; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x6307;&#x5BFC; apCAM &#x7C98;&#x9644;&#x7F51;&#x7AD9;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x76AE;&#x5C42;&#x662F;&#x8C03;&#x89E3;&#x5458;&#x7684; IgCAM &#x89E6;&#x53D1;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5927;&#x4F1A;&#x53C2;&#x4E0E;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x52A8;&#x529B;&#x548C;&#x6307;&#x5BFC;&#x3002;

&#x76AE;&#x5C42;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D; filopodial &#x4E0E; colocalizes &#x548C; IgCAM &#x7C98;&#x9644;&#x5730;&#x76D8;&#x5728;&#x6D77;&#x5154;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7D2F;&#x79EF;&#x3002;

Both IgCAMs and the actin cytoskeleton play critical roles in neuronal growth cone motility and guidance. However, it is unclear how IgCAM receptors transduce signals from the plasma membrane to induce actin remodeling. Previous studies have shown that local clustering and immobilization of apCAM, the Aplysia homolog of NCAM, induces Src kinase activity and F-actin polymerization in the peripheral domain of cultured Aplysia bag cell growth cones. Therefore, we wanted to test whether the Src kinase substrate and actin regulator cortactin could be a molecular link between Src activity and actin assembly during apCAM-mediated growth cone guidance. Here, we cloned Aplysia cortactin and showed that it is abundant in the nervous system. Immunostaining of growth cones revealed a strong colocalization of cortactin with F-actin in filopodial bundles and at the leading edge of lamellipodia. Perturbation of the cytoskeleton indicated that cortactin distribution largely depends on actin filaments. Furthermore, active Src colocalized with cortactin in regions of actin assembly, including leading edge and filopodia tips. Finally, we observed that cortactin, like F-actin, localizes to apCAM adhesion sites mediating growth cone guidance. Altogether, these data suggest that cortactin is a mediator of IgCAM-triggered actin assembly involved in growth cone motility and guidance.

Cortactin colocalizes with filopodial actin and accumulates at IgCAM adhesion sites in Aplysia growth cones.

Les deux IgCAMs et le cytosquelette d&#x26;#39;actine jouent un r&#xF4;le crucial dans la motilit&#xE9; du c&#xF4;ne de croissance neuronale et d&#x26;#39;orientation. Toutefois, il n&#x26;#39;est pas clair comment les r&#xE9;cepteurs IgCAM transduire des signaux de la membrane plasmique pour induire remodelage de l&#x26;#39;actine. Des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures ont montr&#xE9; que le regroupement local et l&#x26;#39;immobilisation de APCAM, l&#x26;#39;homologue de l&#x26;#39;aplysie NCAM, induit l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase Src et F-polym&#xE9;risation de l&#x26;#39;actine dans le domaine de la culture p&#xE9;riph&#xE9;rique c&#xF4;nes de croissance chez l&#x26;#39;aplysie sac de cellules. Par cons&#xE9;quent, nous avons voulu tester si le substrat de kinase Src et cortactine r&#xE9;gulateur de l&#x26;#39;actine pourrait &#xEA;tre un lien mol&#xE9;culaire entre l&#x26;#39;activit&#xE9; de Src et l&#x26;#39;assemblage d&#x26;#39;actine au cours APCAM m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;orientation des c&#xF4;nes de croissance. Ici, nous avons clon&#xE9; l&#x26;#39;aplysie cortactine et a montr&#xE9; qu&#x26;#39;il est abondante dans le syst&#xE8;me nerveux. Immunomarquage des c&#xF4;nes de croissance a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une colocalisation forte de la cortactine avec F-actine en faisceaux filopodial et &#xE0; la fine pointe de lamellipodes. Perturbation du cytosquelette a indiqu&#xE9; que la distribution cortactine d&#xE9;pend en grande partie des filaments d&#x26;#39;actine. En outre, active Src colocalis&#xE9;s avec cortactine dans les r&#xE9;gions de l&#x26;#39;assemblage d&#x26;#39;actine, y compris de pointe et des conseils filopodes. Enfin, nous avons observ&#xE9; que cortactine, comme F-actine, se localise dans APCAM sites d&#x26;#39;adh&#xE9;sion de m&#xE9;diation d&#x26;#39;orientation des c&#xF4;nes de croissance. Au total, ces donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que cortactine est un m&#xE9;diateur de IgCAM d&#xE9;clench&#xE9;e par assemblage d&#x26;#39;actine impliqu&#xE9;s dans la motilit&#xE9; du c&#xF4;ne de croissance et d&#x26;#39;orientation.

Cortactine co-localise avec l&#x26;#39;actine Filopodial et s&#x26;#39;accumulent dans les Adh&#xE9;rence IgCAM dans les c&#xF4;nes de croissance chez l&#x26;#39;aplysie

Sowohl IgCAMs als auch das Aktin-Zytoskelett spielen wichtige Rollen in neuronale Wachstum Kegel Motilit&auml;t und Anleitung. Es ist jedoch unklar, wie die IgCAM Rezeptoren Signale von der Plasmamembran Aktin Umbau veranlassen zur&uuml;ckwirken. Fr&uuml;here Studien zeigten, dass lokale clustering und Immobilisierung von ApCAM, der Aplysia Homolog von NCAM, induziert Src-Kinase-Aktivit&auml;t und F-Actin Polymerisierung im peripheren Bereich des kultivierten Aplysia Tasche Zelle Wachstum Zapfen. Daher wollten wir testen, ob die Src Kinase Substrat und Actin Regler Cortactin eine molekulare Verbindung zwischen Src-Aktivit&auml;t und Aktin-Assembly w&auml;hrend der ApCAM-vermittelte Wachstum Kegel Anleitung sein k&ouml;nnte. Hier wir Aplysia Cortactin geklont und zeigte, dass es reichlich im Nervensystem ist. Immunf&auml;rbung von Wachstum Kegel ergab eine starke Kolokalisation von Cortactin mit F-Actin in Filopodial b&uuml;ndeln und an die Spitze der Lamellipodium. St&ouml;rung des Zytoskeletts zeigten, dass Cortactin Verteilung von Aktin-Filamenten weitgehend abh&auml;ngig ist. Dar&uuml;ber hinaus colocalized aktive Src mit Cortactin in Regionen der Aktin-Assembly, einschlie&szlig;lich Vorderkante und Filopodium Tipps. Schlie&szlig;lich beobachten wir, dass Cortactin, wie F-Actin, ApCAM Adh&auml;sion Websites Vermittlung Wachstum Kegel F&uuml;hrung lokalisiert. Insgesamt deuten diese Daten, dass Cortactin ein Vermittler von IgCAM ausgel&ouml;ste Aktin Versammlung Wachstum Kegel Motilit&auml;t und Anleitung beteiligt.

Cortactin colocalizes mit Filopodial-Aktin und sammelt IgCAM Adh&auml;sion Standorten in Aplysia Wachstum Zapfen.

Sia IgCAMs e il citoscheletro di actina svolgono un ruolo critico nella guida e crescita neuronale cono motilit&agrave;. Tuttavia, non &egrave; chiaro come IgCAM recettori trasducono segnali dalla membrana del plasma per indurre il rimodellamento dell&#39;actina. Studi precedenti hanno mostrato che cluster locali e l&#39;immobilizzazione della apCAM, l&#39;omologo di Aplysia di NCAM, induce l&#39;attivit&agrave; della chinasi Src e F-actina polimerizzazione nel dominio periferico dei coni di crescita di cellule di borsa Aplysia colte. Pertanto, abbiamo voluto verificare se la Src chinasi substrato e actina regolatore cortactin potrebbe essere un legame molecolare tra attivit&agrave; Src e assemblaggio dell&#39;actina durante la guida di cono di crescita apCAM-mediata. Qui, abbiamo clonato Aplysia cortactin e ha mostrato che &egrave; abbondante nel sistema nervoso. Immunocolorazione dei coni di crescita hanno rivelato una forte presenza di cortactin con F-actina in fasci di filopodial e all&#39;avanguardia di lamellipodia. Perturbazione del citoscheletro indicato che cortactin distribuzione dipende in gran parte da filamenti di actina. Inoltre, attivo Src colocalized con cortactin nelle regioni dell&#39;Assemblea dell&#39;actina, compresi suggerimenti filopodia e leading edge. Infine, abbiamo osservato che cortactin, come F-actina, localizza ai siti di adesione apCAM mediazione orientamento cono di crescita. Complessivamente, questi dati suggeriscono che cortactin &egrave; un mediatore di assemblaggio dell&#39;actina innescato IgCAM coinvolto nella guida e crescita cono motilit&agrave;.

Cortactin colocalizza con filopodial actina e si accumula in siti di adesione IgCAM nei coni di crescita di Aplysia.

IgCAMs&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x6027;&#x3068;&#x6307;&#x5C0E;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;IgCAM&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x4F1D;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;apCAM&#x3001;NCAM&#x306E;&#x30A2;&#x30E1;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B7;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x57F9;&#x990A;&#x30A2;&#x30E1;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B7;&#x30D0;&#x30C3;&#x30B0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x5468;&#x8FBA;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Src&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x91CD;&#x5408;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Src&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;cortactin&#x304C;apCAM&#x5A92;&#x4ECB;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x6642;&#x306B;Src&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x9593;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30E1;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B7;cortactin&#x3092;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x3067;&#x306F;&#x3001;filopodial&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x8449;&#x72B6;&#x4EEE;&#x8DB3;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x3067;cortactin&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;cortactin&#x5206;&#x5E03;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;Src&#x306F;&#x6700;&#x5148;&#x7AEF;&#x3068;&#x7CF8;&#x72B6;&#x4EEE;&#x8DB3;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;cortactin&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;cortactin&#x306F;&#x3001;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x63A5;&#x7740;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;apCAM&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;cortactin&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x6027;&#x3084;&#x6307;&#x5C0E;&#x306B;&#x95A2;&#x308F;&#x308B;IgCAM&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

Cortactin&#x306F;Filopodial&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x30A2;&#x30E1;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B7;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;IgCAM&#x63A5;&#x7740;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3059;&#x308B;

Igcams&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xC2E0;&#xACBD; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83; &#xC544;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBD84;&#xBA85; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; IgCAM &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; transduce &#xB9D0;&#xB77C; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC720;&#xB3C4; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638;. &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB85C;&#xCEEC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1; &#xBC0F; apCAM, &#xBCF4;&#xC548;, Aplysia &#xCCB4; immobilization Src &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; Aplysia &#xAC00;&#xBC29; &#xC140; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC758; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; F-&#xB9D0;&#xB77C; &#xD569; &#xC720;&#xB3C4; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Src &#xB2C8; &#xAE30;&#xD310; &#xBC0F; &#xB9D0;&#xB77C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; cortactin Src &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; apCAM &#xC911;&#xC7AC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xB9C1;&#xD06C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC2F6; &#xC5C8; &#xC5B4; &#xC694;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Aplysia cortactin &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C;&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC758; Immunostaining F &#xB9D0;&#xB77C; filopodial &#xBC88;&#xB4E4; &#xBC0F; lamellipodia&#xC758; &#xCCA8;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; cortactin&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; colocalization&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC12D; &#xB3D9; &#xB41C; cytoskeleton&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC; cortactin &#xBC30;&#xD3EC; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD65C;&#xC131; Src &#xB9D0;&#xB77C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;, &#xCCA8;&#xB2E8; filopodia &#xD301; &#xB4F1;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; cortactin&#xC640; colocalized. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30; F &#xB9D0;&#xB77C; &#xCC98;&#xB7FC; &#xADF8; cortactin apCAM &#xC811;&#xCC29; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC9C0;&#xCE68;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; localizes. &#xBAA8;&#xB450;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; cortactin IgCAM &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;&#xC758; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cortactin filopodial &#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; colocalizes &#xBC0F; IgCAM &#xC811;&#xCC29; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; Aplysia &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD95;&#xC801;.

Ambos IgCAMs y el citoesqueleto de actina desempe&#xF1;an un papel cr&#xED;tico en la motilidad cono de crecimiento neuronal y la orientaci&#xF3;n. Sin embargo, no est&#xE1; claro c&#xF3;mo los receptores IgCAM transducci&#xF3;n de se&#xF1;ales desde la membrana plasm&#xE1;tica para inducir la remodelaci&#xF3;n de la actina. Estudios anteriores han demostrado que la agrupaci&#xF3;n local y la inmovilizaci&#xF3;n de APCAM, el hom&#xF3;logo de NCAM Aplysia, induce la actividad de quinasa Src y polimerizaci&#xF3;n F-actina en el dominio perif&#xE9;rica de conos cultivadas bolsa Aplysia crecimiento de las c&#xE9;lulas. Por lo tanto, quisimos comprobar si el sustrato de quinasa Src y cortactin regulador de la actina podr&#xED;a ser un v&#xED;nculo molecular entre la actividad de Src y montaje de actina durante APCAM mediada por la orientaci&#xF3;n cono de crecimiento. En este caso, hemos clonado Aplysia cortactin y demostr&#xF3; que es abundante en el sistema nervioso. La inmunotinci&#xF3;n de los conos de crecimiento mostr&#xF3; una fuerte colocalizaci&#xF3;n de cortactin con F-actina en haces filopodial y en el borde de ataque de lamellipodia. La perturbaci&#xF3;n del citoesqueleto indica que la distribuci&#xF3;n de cortactin depende en gran medida los filamentos de actina. Adem&#xE1;s, activa Src colocalized con cortactin en las regiones de reuni&#xF3;n, incluyendo la actina borde de ataque y consejos filopodios. Por &#xFA;ltimo, se observ&#xF3; que cortactin, al igual que la F-actina, se localiza en APCAM sitios de adhesi&#xF3;n que median orientaci&#xF3;n cono de crecimiento. En conjunto, estos datos sugieren que cortactin es un mediador de IgCAM activada por la Asamblea de actina participan en la motilidad cono de crecimiento y orientaci&#xF3;n.

Cortactin colocalizes con la actina filopodial y se acumula en sitios de adhesi&#xF3;n IgCAM en los conos de crecimiento Aplysia

&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x662F;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x672B;&#x5C3E;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x6307;&#x5BFC;&#x4FE1;&#x606F;&#x8F6C;&#x6362;&#x4E3A;&#x5B9A;&#x5411;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x80FD;&#x52A8;&#x6027;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x4E2D;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4F46;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5730;&#x5F62;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x548C;&#x529B;&#x5B66;&#x6027;&#x80FD;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x533A;&#x57DF;&#x4E0B;&#x7684;&#x751F;&#x6D3B;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7814;&#x7A76; P &#x57DF;&#x3001; T &#x533A;&#x548C; C &#x57DF;&#x7684;&#x6D3B;&#x6D77;&#x5154;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x8BA1;&#x7B97;&#x4ECE;&#x63A5;&#x89E6;&#x6A21;&#x5F0F;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x56FE;&#x50CF;&#x662F; 183 + /-33&#x3001; + / 274 &#x548C; + /-164 1322&#x5E74;-690 nm&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x90FD;&#x7B26;&#x5408;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x6765;&#x81EA;&#x751F;&#x6D3B;&#x548C;&#x63A5;&#x89E6;&#x6A21;&#x5F0F;&#x56FE;&#x50CF;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x3002;&#x7EB3;&#x7C73;&#x538B;&#x75D5;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8868;&#x660E; C &#x57DF;&#x548C; T &#x533A;&#x539A;&#x9053;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5F39;&#x6027;&#x6A21;&#x91CF;&#x4ECB;&#x4E4E; 3 7 &#x548C; 7 23 kPa&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5F39;&#x6027;&#x6A21;&#x91CF;&#x7684; P &#x57DF;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x662F; 10-40 &#x5343;&#x5E15;&#x3002;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x56FE;&#x50CF;&#x7684; P &#x57DF;&#x8868;&#x660E;&#x5176;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x5F39;&#x6027;&#x6A21;&#x91CF;&#x7ED3;&#x679C;&#x4ECE;&#x5E72;&#x9884;&#x4E2D;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#x5BC6;&#x7F51;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x675F;&#x7684;&#x4F8B;&#x8BC1;&#x3002;P &#x548C; T &#x7684;&#x57DF;&#x589E;&#x52A0;&#x673A;&#x68B0;&#x521A;&#x5EA6;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x652F;&#x6301;&#x548C;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x8F6C;&#x5411;&#x671F;&#x95F4;&#x53D1;&#x5C55;&#x8D77;&#x6765;&#x7684;&#x5F20;&#x529B;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x3002;

&#x5730;&#x5F62;&#x548C;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x751F;&#x6D3B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Neuronal growth cones are motile structures located at the end of axons that translate extracellular guidance information into directional movements. Despite the important role of growth cones in neuronal development and regeneration, relatively little is known about the topography and mechanical properties of distinct subcellular growth cone regions under live conditions. In this study, we used the AFM to study the P domain, T zone, and C domain of live Aplysia growth cones. The average height of these regions was calculated from contact mode AFM images to be 183 +/- 33, 690 +/- 274, and 1322 +/- 164 nm, respectively. These findings are consistent with data derived from dynamic mode images of live and contact mode images of fixed growth cones. Nano-indentation measurements indicate that the elastic moduli of the C domain and T zone ruffling region ranged between 3-7 and 7-23 kPa, respectively. The range of the measured elastic modulus of the P domain was 10-40 kPa. High resolution images of the P domain suggest its relatively high elastic modulus results from a dense meshwork of actin filaments in lamellipodia and from actin bundles in the filopodia. The increased mechanical stiffness of the P and T domains is likely important to support and transduce tension that develops during growth cone steering.

Topography and nanomechanics of live neuronal growth cones analyzed by atomic force microscopy.

C&#xF4;nes de croissance neuronaux sont mobiles structures situ&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; des axones qui se traduisent par des informations de guidage extracellulaire dans les mouvements directionnels. Malgr&#xE9; le r&#xF4;le important des c&#xF4;nes de croissance dans le d&#xE9;veloppement neuronal et la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration, on sait relativement peu sur la topographie et les propri&#xE9;t&#xE9;s m&#xE9;caniques de diff&#xE9;rentes r&#xE9;gions subcellulaires c&#xF4;ne de croissance dans des conditions vivantes. Dans cette &#xE9;tude, nous avons utilis&#xE9; l&#x26;#39;AFM pour &#xE9;tudier le domaine P, zone T, et le domaine C de vivants c&#xF4;nes de croissance chez l&#x26;#39;aplysie. La hauteur moyenne de ces r&#xE9;gions a &#xE9;t&#xE9; calcul&#xE9;e &#xE0; partir d&#x26;#39;images en mode de contact AFM &#xE0; 183 + / - 33, 690 + / - 274, et 1322 + / - 164 nm, respectivement. Ces r&#xE9;sultats sont coh&#xE9;rents avec les donn&#xE9;es d&#xE9;riv&#xE9;es d&#x26;#39;images en mode dynamique de vivre et de communiquer avec des images en mode de c&#xF4;nes de croissance fixes. Nano-indentation mesures indiquent que le module d&#x26;#39;&#xE9;lasticit&#xE9; du domaine C et T la zone fron&#xE7;age r&#xE9;gion se situait entre 3-7 et 7-23 kPa, respectivement. La gamme du module mesur&#xE9; &#xE9;lastiques du domaine P &#xE9;tait de 10 &#xE0; 40 kPa. Des images haute r&#xE9;solution du domaine P sugg&#xE8;rent ses r&#xE9;sultats relativement &#xE9;lev&#xE9;s module &#xE9;lastique &#xE0; partir d&#x26;#39;un maillage dense de filaments d&#x26;#39;actine dans lamellipodes et &#xE0; partir de faisceaux d&#x26;#39;actine dans la filopodes. La rigidit&#xE9; m&#xE9;canique accrue des domaines P et T est probablement important de soutenir et de transduire la tension qui se d&#xE9;veloppe au cours de direction du c&#xF4;ne de croissance.

Topographie et Nanom&#xE9;canique de c&#xF4;nes de croissance neuronaux en direct analys&#xE9;s par microscopie &#xE0; force atomique

Neuronale Wachstum Zapfen sind bewegliche Strukturen am Ende der Axone, die extrazellul&auml;re Anleitung Informationen in gerichtete Bewegungen zu &uuml;bersetzen. Trotz der wichtigen Rolle der Wachstum Zapfen in neuronalen Entwicklung und Regeneration relativ wenig ist bekannt &uuml;ber die Topographie und mechanische Eigenschaften der unterschiedlichen subzellulare Kegel Wachstumsregionen unter live-Bedingungen. In dieser Studie haben wir die AFM um P Dom&auml;ne, T-Zone und C Dom&auml;ne der live Aplysia Wachstum Zapfen zu studieren. Die durchschnittliche H&ouml;he dieser Regionen wurde berechnet von Kontakt-Modus AFM Bilder 183 +/-33, 690 +/-274 und 1322 +/-164 nm, beziehungsweise. Diese Ergebnisse stehen im Einklang mit Daten aus dynamischen Modus Bilder live und Kontakt-Modus Bilder von festen Wachstum Kegeln abgeleitet. Nano-Einzug Messungen zeigen, dass die elastischen Moduli der Dom&auml;ne C und T-Zone halten muss Gebiet zwischen 3-7 und 7-23 kPa, bzw. reichten. Das gemessene Elastizit&auml;tsmodul der P-Dom&auml;ne war 10-40 kPa. Hochaufl&ouml;sende Bilder der Dom&auml;ne P deuten seine relativ hoher Elastizit&auml;tsmodul-Ergebnisse aus einem dichten Netzwerk von Aktin-Filamenten in Lamellipodium und von Actin-B&uuml;ndel in die Filopodium. Die erh&ouml;hte mechanische Steifigkeit der Dom&auml;nen P und T ist wahrscheinlich wichtig zu unterst&uuml;tzen und die Spannung, die w&auml;hrend Wachstum Kegel Lenkung entwickelt zur&uuml;ckwirken.

Topographie und Nanomechanics von Leben neuronale Wachstum Zapfen von Rasterkraftmikroskopie analysiert.

Coni di crescita neuronale sono strutture motili che si trova alla fine di assoni che traducono le informazioni per l&#39;orientamento extracellulare in movimenti direzionali. Nonostante il ruolo importante dei coni di crescita nello sviluppo neuronale e rigenerazione, relativamente poco si sa circa la topografia e propriet&agrave; meccaniche delle regioni cono crescita sottocellulari distinti sotto vivono condizioni. In questo studio, abbiamo utilizzato l&#39;AFM per studiare il dominio P, zona T e C dominio dei coni di crescita Aplysia dal vivo. L&#39;altezza media di queste regioni &egrave; stato calcolato da immagini AFM modalit&agrave; di contatto per essere 183 + 33, 690 + 274 e 1322 + 164 nm, rispettivamente. Questi risultati sono coerenti con i dati derivati da immagini modalit&agrave; dinamica di immagini modalit&agrave; diretta e contatto dei coni di crescita fisso. Misurazioni di nano-indentazione indicano che i moduli elastici del dominio C e T zona scompigliava regione variavano tra 3-7 e 7-23 kPa, rispettivamente. La gamma del modulo elastico misurato del dominio P era 10-40 kPa. Immagini ad alta risoluzione del dominio P suggeriscono i risultati relativamente elevato modulo elastico da un denso reticolo di filamenti di actina in lamellipodia e da fasci di actina nel filopodia. La maggiore rigidit&agrave; meccanica dei domini di P e T &egrave; probabilmente importante per sostenere e trasdurre la tensione che si sviluppa durante la crescita cono dello sterzo.

Topografia e la nanomeccanica di vive coni di crescita neuronale analizzati tramite microscopia a forza atomica.

&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306F;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x306B;&#x5916;&#x306E;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x5909;&#x63DB;&#x3057;&#x305F;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x767A;&#x9054;&#x3068;&#x518D;&#x751F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x5730;&#x5F62;&#x3068;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;P&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;T&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30A2;&#x30E1;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B7;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;C&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;AFM&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x8EAB;&#x9577;&#x304C;183&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;AFM&#x50CF;&#x304B;&#x3089;&#x7B97;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;+ /  -  33&#x3001;690 + /  -  274&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;1322 + /  -  164 nm&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x4F4F;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x56FA;&#x5B9A;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x753B;&#x50CF;&#x3092;&#x3054;&#x9023;&#x7D61;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x753B;&#x50CF;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30CA;&#x30CE;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306B;&#x306F;&#x3001;C&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;T&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x6CE2;&#x6253;&#x3061;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x5F3E;&#x6027;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;3-7&#x3068;7&#x304B;&#x3089;23 kPa&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; P&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5F3E;&#x6027;&#x7387;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306F;10&#x304B;&#x3089;40 kPa&#x306E;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002; P&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x753B;&#x50CF;&#x306F;&#x3001;&#x8449;&#x72B6;&#x4EEE;&#x8DB3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5BC6;&#x306A;&#x7DB2;&#x76EE;&#x69CB;&#x9020;&#x304B;&#x3089;&#x7CF8;&#x72B6;&#x4EEE;&#x8DB3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x675F;&#x304B;&#x3089;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x9AD8;&#x3044;&#x5F3E;&#x6027;&#x7387;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; P&#x3068;T&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x525B;&#x6027;&#x304C;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x7DCA;&#x5F35;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x4F1D;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x795E;&#x7D4C;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x5730;&#x5F62;&#x3068;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30AF;&#x30B9;

&#xC2E0;&#xACBD; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xC815;&#xBCF4; &#xBC29;&#xD5A5; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658; &#xD558;&#xB294; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC758; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xC9C0;&#xD615;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; subcellular &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xCD94; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC870;&#xAC74;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; P &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, T &#xC874;, C &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; Aplysia &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; AFM&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xB192;&#xC774; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xBAA8;&#xB4DC; AFM &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC218; 33, 274, 1322 164 + + /-690 + 183&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACC4;&#xC0B0; &#xB41C; nm, &#xAC01;&#xAC01;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACE0;&#xC815;&#xB41C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB098;&#xB178; &#xB4E4;&#xC5EC;&#xC4F0;&#xAE30; &#xCE21;&#xC815; &#xD45C;&#xC2DC; C &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBB3C;&#xACB0;&#xC774; T &#xC874;&#xC758; &#xC2E0;&#xCD95;&#xC131; moduli &#xAC01;&#xAC01; 3-7, 7-23 &#xC778;&#xBBFC;&#xAD70; &#xC0AC;&#xC774; ranged. P &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xD0C4;&#xC131; &#xACC4;&#xC218; &#xBC94;&#xC704;&#xB294; 10-40 kPa. P &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB294; filopodia&#xC5D0; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC88;&#xB4E4; &#xBC0F; lamellipodia&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC758; &#xC870;&#xBC00;&#xD55C; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xD0C4;&#xC131; &#xACC4;&#xC218; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. P&#xC640; T &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xAC15;&#xC131; &#xB192;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xACFC; transduce &#xC131;&#xC7A5; &#xCF58; &#xC870; &#xD0C0; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xAE34;&#xC7A5; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC9C0;&#xD615;&#xACFC;&#xC758; nanomechanics &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;.

Los conos de crecimiento neuronales son estructuras m&#xF3;viles situadas en el extremo de los axones que se traducen en informaci&#xF3;n de gu&#xED;a extracelular en los movimientos direccionales. A pesar de la importante funci&#xF3;n de los conos de crecimiento en el desarrollo neuronal y la regeneraci&#xF3;n, se sabe relativamente poco sobre la topograf&#xED;a y las propiedades mec&#xE1;nicas de las distintas regiones subcelulares cono de crecimiento en estado activo. En este estudio, hemos utilizado el AFM para estudiar el dominio de P, la zona T, y el dominio C de los conos de crecimiento vivo Aplysia. La altura media de estas regiones se calcul&#xF3; a partir de contacto de modo im&#xE1;genes de AFM a ser 183 + / - 33, 690 + / - 274, y 1322 + / - 164 nm, respectivamente. Estos hallazgos son consistentes con los datos derivados de las im&#xE1;genes en modo din&#xE1;mico de vivir y ponerse en contacto con las im&#xE1;genes en modo de los conos de crecimiento fijos. Indentaci&#xF3;n nano-mediciones indican que los m&#xF3;dulos de elasticidad del dominio C y T regi&#xF3;n zona fruncido vari&#xF3; entre 3-7 y 7-23 kPa, respectivamente. La gama de los m&#xF3;dulo medido el&#xE1;sticas del dominio P fue 10-40 kPa. Im&#xE1;genes de alta resoluci&#xF3;n del dominio P sugieren que sus resultados el&#xE1;stico relativamente alto m&#xF3;dulo de una densa malla de filamentos de actina en lamellipodia y de haces de actina en la filopodios. El aumento de la rigidez mec&#xE1;nica de los dominios de P y T es probable importante para apoyar y transducci&#xF3;n de la tensi&#xF3;n que se desarrolla durante la direcci&#xF3;n del crecimiento del cono.

La topograf&#xED;a y la nanomec&#xE1;nica de los conos de crecimiento neuronal en vivo analizada por microscop&#xED;a de fuerza at&#xF3;mica

&#x7532;&#x662F;&#x8D1F;&#x8D23;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x52A8;&#x7269;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x7403;&#x5F62;&#xFF0C;&#x5C01;&#x88C5;&#x3001; &#x79EF;&#x6781;&#x610F;&#x4E49;&#xFF0C;&#x5355;&#x94FE; RNA &#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x5DE5;&#x5177;&#x4F7F;&#x7528;&#x5FAE;&#x91CF;&#x6CE8;&#x5C04;&#x9884;&#x5185;&#x6838;&#xFF0C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5DF2;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x7684;&#x5927;&#x4F1A;&#x548C;&#x8F9B;&#x5FB7;&#x6BD5;&#x65AF;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x7532;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x840C;&#x82BD;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x8FDB;&#x884C;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x8868;&#x793A;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x6CE8;&#x5C04;&#x7684;&#x8F9B;&#x5FB7;&#x6BD5;&#x65AF;&#x75C5;&#x6BD2; nucleocapsids &#x51C0;&#x5316;&#x4ECE;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x8F9B;&#x5FB7;&#x6BD5;&#x65AF;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5305;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6837;&#x9897;&#x7C92;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x6240;&#x793A; nucleocapsids &#x7EC4;&#x88C5;&#x4F53;&#x5916;&#x6A21;&#x4EFF;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5B64;&#x7ACB;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5C06;&#x88AB;&#x7EB3;&#x5165;&#x5C01;&#x88C5; virions &#x540E;&#x6CE8;&#x5C04;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5141;&#x8BB8;&#x53D1;&#x82BD;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x6B63;&#x5B97;&#x611F;&#x67D3;&#x7532;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5E73;&#x53F0;&#x7814;&#x7A76;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x548C;&#x840C;&#x82BD;&#x4E3B;&#x673A;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;

&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x9897;&#x7C92;&#x7269;&#x9884;&#x7684;&#x767B;&#x6838;&#x8863;&#x58F3;&#x6838;&#x82AF;&#x7684;&#x6551;&#x62A4;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;

Alphaviruses are small, spherical, enveloped, positive-sense, single-stranded, RNA viruses responsible for considerable human and animal disease. Using microinjection of preassembled cores as a tool, a system has been established to study the assembly and budding process of Sindbis virus, the type member of the alphaviruses. We demonstrate the release of infectious virus-like particles from cells expressing Sindbis virus envelope glycoproteins following microinjection of Sindbis virus nucleocapsids purified from the cytoplasm of infected cells. Furthermore, it is shown that nucleocapsids assembled in vitro mimic those isolated in the cytoplasm of infected cells with respect to their ability to be incorporated into enveloped virions following microinjection. This system allows for the study of the alphavirus budding process independent of an authentic infection and provides a platform to study viral and host requirements for budding.

Rescue of infectious particles from preassembled alphavirus nucleocapsid cores.

Alphavirus sont petites, sph&#xE9;rique, envelopp&#xE9;, de sens positif, les simples brins, des virus &#xE0; ARN responsables de humaine consid&#xE9;rable et la maladie animale. Utilisation de la micro-injection de noyaux pr&#xE9;-assembl&#xE9;s comme un outil, un syst&#xE8;me a &#xE9;t&#xE9; mis en place pour &#xE9;tudier l&#x26;#39;assemblage et le processus de bourgeonnement du virus de Sindbis, le membre type des alphavirus. Nous d&#xE9;montrons la lib&#xE9;ration des maladies infectieuses virus-like particles &#xE0; partir de cellules exprimant les glycoprot&#xE9;ines d&#x26;#39;enveloppe du virus Sindbis apr&#xE8;s injection de nucl&#xE9;ocapsides du virus Sindbis purifi&#xE9;s &#xE0; partir du cytoplasme des cellules infect&#xE9;es. En outre, il est d&#xE9;montr&#xE9; que nucl&#xE9;ocapsides assembl&#xE9;es in vitro imiter ceux qui sont isol&#xE9;s dans le cytoplasme des cellules infect&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;gard de leur capacit&#xE9; &#xE0; &#xEA;tre incorpor&#xE9;s dans les virions envelopp&#xE9;s apr&#xE8;s injection. Ce syst&#xE8;me permet pour l&#x26;#39;&#xE9;tude du processus de bourgeonnement alphavirus ind&#xE9;pendante d&#x26;#39;une infection authentique et fournit une plate-forme pour &#xE9;tudier les besoins virales et d&#x26;#39;accueil pour en herbe.

Sauvetage de particules infectieuses de Alphavirus pr&#xE9;mont&#xE9; nucl&#xE9;ocapside Cores

Alphaviruses sind kleine, kugelf&ouml;rmige, umh&uuml;llten, positiv-Sinn, einzeln-angeschwemmte, RNA-Viren verantwortlich f&uuml;r erhebliche Krankheit von Mensch und Tier. Microinjection der vormontierte Kerne als Werkzeug verwendet wird, hat ein System eingerichtet, um die Assembly und die angehenden Prozess des Sindbis-Virus, der Typ Mitglied der Alphaviruses zu studieren. Wir demonstrieren die Freisetzung von infekti&ouml;sen Virus-&auml;hnliche Partikel aus Zellen auszudr&uuml;cken Sindbis Virus Umschlag Glykoproteine folgende Microinjection der Sindbis Virus Nucleocapsids von Zytoplasma der infizierten Zellen gereinigt. Dar&uuml;ber hinaus ist nachgewiesen, dass Nucleocapsids in-vitro-Nach&auml;ffer montiert, die im Zytoplasma der infizierten Zellen im Hinblick auf ihre F&auml;higkeit zum Einbau in umh&uuml;llten Virionen nach Mikroinjektion isoliert. Dieses System erm&ouml;glicht das Studium der angehenden Prozess unabh&auml;ngig von einer authentischen Infektion Alphavirus und bietet eine Plattform zur Studie virale und Host-Anforderungen f&uuml;r angehende.

Rettung von infekti&ouml;sen Partikeln aus vormontierte Alphavirus Nukleokapsid-Kernen.

Alphaviruses sono piccoli, sferici, avvolto, senso positivo, single-stranded, virus a RNA responsabile di considerevole malattia umana e animale. Mediante Microiniezione di core premontati come uno strumento, &egrave; stato istituito un sistema per studiare l&#39;assembly e il processo in erba di Sindbis virus, il membro del tipo della alphaviruses. Dimostriamo il rilascio di particelle virus-simili infettive da cellule che esprimono delle glicoproteine busta di virus Sindbis seguenti microinjection di nucleocapsidi virus Sindbis purificato dal citoplasma delle cellule infette. Inoltre, &egrave; dimostrato che nucleocapsidi assemblati in vitro mimic quelli isolati nel citoplasma delle cellule infette rispetto alla loro capacit&agrave; di essere incorporato in virioni avvolto dopo la microiniezione. Questo sistema permette per lo studio dell&#39;alphavirus indipendente dal processo di un&#39;infezione autentica che germoglia e fornisce una piattaforma di studio virale e requisiti host per gemmazione.

Salvataggio di particelle infettive da nuclei nucleocapside alphavirus preassemblati.

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Alphaviruses&#xB294; &#xC791;&#xACE0;, &#xAD6C;&#xD615;, &#xC5D4;&#xBC8C;&#xB85C;&#xD504;&#xB41C; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xC9C0;, &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;. Preassembled &#xCF54;&#xC5B4;&#xC758; microinjection &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; Sindbis &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB294; alphaviruses&#xC758; &#xD615;&#xC2DD; &#xBA64;&#xBC84;&#xB294; &#xC2F9; &#xD2B8;&#xB294; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xC124;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Sindbis &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBD09;&#xD22C; glycoproteins &#xB2E4;&#xC74C; microinjection Sindbis &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; nucleocapsids&#xC758; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xD654;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC19;&#xC740; &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, nucleocapsids &#xC870;&#xB9BD; &#xCCB4; &#xC678; &#xBAA8;&#xBC29; &#xADF8; &#xC5D4;&#xBC8C;&#xB85C;&#xD504;&#xB41C; virions microinjection &#xB2E4;&#xC74C;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xACFC; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xBCF8;&#xACA9;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; alphavirus&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xC9C4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Preassembled alphavirus nucleocapsid &#xCF54;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;.

Alfavirus son peque&#xF1;os, esf&#xE9;ricos, envuelto, de sentido positivo, de una sola hebra de ARN, los virus responsables de la humana considerable y enfermedades de los animales. Uso de la microinyecci&#xF3;n de n&#xFA;cleos prefabricados como una herramienta, el sistema ha sido creado para estudiar el montaje y proceso de gemaci&#xF3;n del virus Sindbis, el miembro del tipo de los alfavirus. Se demuestra la liberaci&#xF3;n de virus infecciosos como part&#xED;culas de c&#xE9;lulas que expresan Sindbis glicoprote&#xED;nas de la envoltura del virus despu&#xE9;s de la microinyecci&#xF3;n de nucleoc&#xE1;psidas virus de Sindbis purificados desde el citoplasma de las c&#xE9;lulas infectadas. Adem&#xE1;s, se muestra que nucleoc&#xE1;psidas ensamblados in vitro son similares a los aislados en el citoplasma de las c&#xE9;lulas infectadas con respecto a su capacidad para ser incorporados en viriones envueltos despu&#xE9;s de microinyecci&#xF3;n. Este sistema permite el estudio del proceso en ciernes alfavirus independiente de una infecci&#xF3;n aut&#xE9;ntica y proporciona una plataforma para estudiar las necesidades virales y del hu&#xE9;sped para ciernes.

Aih Cheun Lee

Department of Biological Sciences

Purdue University

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Aih Cheun Lee

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Purdue University

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Department of Biological Sciences